RESUMO

SUMRIO

INTRODUO Os mecanismos de epigenetica foi determinado a pouco tempo em comparao com as de polimorfismo genticos e mutao gnica. Esse mecanismo de epigenetica foi definido como regulador gnico, sendo, o mesmo que controla toda a mobilidade de expresso genica e a produo protica expressa por determinada clula. Como grande protagonista dessa cincia temos um cientista o qual foi bastante, ridicularizado na sua historia, porem nunca esquecido pois suas idias mesmo sendo democratizadas como insana, perpetua idias evolucionistas brilhantes j no pensada s por seu parceiro cientificoCharles Robert Darwin o qual consegui destaque ao publicar seu livro de 1859, "A Origem das Espcies" (do original, em ingls, OntheOriginofSpeciesbyMeansof Natural Selection, or The PreservationofFavouredRaces in theStruggle for Life ), ele introduziu a ideia de evoluo a partir de um ancestral comum, por meio de seleo natural (1836: A LETTER). Esta se tornou a explicao cientfica dominante para a diversidade de espcies na natureza. Darwin temia publicar a teoria de forma incompleta considerando o fato de que as suas ideias sobre evoluo poderiam ser altamente controversas e de fato apesar dos esforos dados por Darwin sua te oria acabou sendo aceita, porem incompleta para os modelos atuais. Mais agora a pea chave para a determinao baseia-se nas idias de Jean-Baptiste Pierre Antoine de Monet, mais conhecido comoJean-Baptiste de Lamarck nao to simples como ele havia pr -suposto como as teorias de a tendncia dos seres para um melhoramento constante rumo perfeio, e, do uso e desuso que conjugada com a transmisso dos caracteres adquiridos provoca desvios na linha evolutiva. A expresso epigentica surgiu em 1940 -1942 atravs dos estudos realizados pelo cientista Conrad Waddington, que definiu epigentica como sendo um estudo do processo pelo qual o gentipo dava origem ao fentipo (in Noviket al., 2002). Atualmente conota -se a epigentica como sendo o estudo das mudanas nas expresses dos genes que so hereditrias atravs das mitoses ou meioses e que no envolvem uma mudana simbololicano stios de seqncia do DNA, ou seja, uma mutao ( Wu and Morris,2001 in Novik). Mecanismos de epigenetica: A mudana da expresso dos genes pode dar -se por diversos mecanismos, sem alterar as seqnciasnucleotdicas originais do DNA. 1 - metilao de citosinas nas ilhas CpGlocalizadas na regio promotorade vrios genes.

2 - acetilao ps-translacional ou metilao de lisinas na regio N -terminal da histona, que influencia a cobertura da cromatina. 3 - produo de micro-RNAs no codificantes envolvidos na modulao da expresso gnica. O genoma humano responde dinamicame nte ao modelo de vida e modificaes comportamentais da espcie. Podem ser citados condies tais como: stress, alimentao, exposio a diferentes toxinas e tantos outros fatores os quais podem desencadear em uma ativao ou inibio dos stios genicos mobilizando um bloqueio ou liberao dos interceptores que regulam a nossa expresso gnica. Esses processos dependero da conformao da cromatina atravs da acetilao das histonas, por exemplo, fazendo com que as protenas transcricionais fiquem impedidas de acessar o contedo do DNA. Outro fenmeno epigentico, que bastante estudado, a metilao. A metilao nada mais do que o acrscimo de um agrupamento metil no carbono 5 das citosinas do DNA. Nos mamferos ,existem ilhas na regio promotora do gene que repetem a seqncianucleotdica Citosina Guaninaessas seqncias foram batizadas de ilhas CpG. Entretanto, em alguns invertebrados como em Drosophilamelanogasterpor exemplo, encontramos ao invs de ilhas CpG, ilhas CpA. O fenmeno de metilao das citosinas do DNA do organismo resulta em um impedimento fsico propriamente dito, que impede que a RNA polimerase junto com seus fatores transcricionaispromovam-se pela fita de DNA, por conseguinte, no se tem a produo de uma fita de RNA mensageiro. No momento em que h a fecundao as informaes epigenmicas paternas e maternas passam a fazer parte de um sistema nico e novo de um indivduo: ento questona-sea informao epigenmica existente em cada clula do jovem embrio idntica a qual padro de epigenetico materno, paterno ou totalemente reprogramada ?Como esses padres so herdados? Como se diferenciam no decorrer do desenvolvimento e crescimento desse novo organismo? A resposta para uma destasquestes relativamente simples, pois com o passar do tempo e aps as sucessivas divises celulares do embrio o mesmo ir diferenciar uma clula da outra , silenciando alguns determinados genes e fazendo a ativao de outros, de acordo com a localizao estrutural e funo de cada clula em questo. Mecanismos epigenticos, como:metilao do DNA, a acetilao e outras modificaes a niveldas histonas, e os RNA de interferncia (iRNAs), modelam a regulao dos genes e a sua inativao sendo artefatos poderosos da atividade dos genes, da transcrio do RNA e da homeostasia protica(Armandola,2004).

Um exemplo de grande influncia ambiental sobre colorao abdminal de Drosophilamelanogaster. Essa colorao pode ser influenciada pela altitude e temperatura em que os organismos se encontram. Outro exemplo interessante o padro de metilao diferenciada entre machos e fmeas de Drosophilawillistoni, que pode estar ligado a compensao de dose, algo semelhante ao que ocorre em mamferos, onde as fmeas tm um dos cromossomos X silenciados. A epigentica est envolvida nos estudos de todas as mudanas reversveis e herdveis no genoma funcional, at mesmo a fatores ambientais que podem mudar a maneira como os genes so expressos, ponto que alguns podem vir associar a idia lamarckista, pois j pode-sedemonstrar que processos de metilao a nvel de DNA e histonas, e acetilaoes de histonas podem ser transmitidos aos descendentes atravs dos gametas maternos e paternos. A transmisso de marcas epigenticas pode transpassar geraes, isso quer dizer que caractersticas adquiridas por influncia ambiental (desde comportamental at mesmo alimentar, por exemplo) podem ser legadas geraes futuras de um dado organismo. Porm, para que isso possa ocorrer, faz-se necessrio uma no reprogramao constante das linhasCpG dascelulas germinativas. Quando as clulas germinativas comeam o seu desenvolvimento e proliferao nos rgos sexuais dos mamferos, o genoma dessas clulas germinativas primordiais reprogramado, ou seja, os padres que acompanhavam os gametas so apagados sendo desmetilada , para logo em seguida ser remetilado de forma especfica de acordo com o sexo, isso ocorre durante a determinao gonadal do sexo (Anway, M.D. 2005). Entretanto, podem existir fatores am bientais que iro influenciar a reprogramao genmicas dessas clulas germinativas, promovendo dessa maneira a manuteno da metilao, que ser transmissvel de gerao em gerao,sendo atravs de padres de transmisso materna ou paterna (Rakyan V. K.,2003). Essa resistncia ocasionar traos epigenticos que resistem desmetilao durante a gametognese, podendo ser transmitidas como uma memria do estado epigentico que existia nos progenitores. Um dos grande problemas da gentica de clonagem e justamente a eleminaao dos padres de metiao existentes durante as primeiras fases da embriogenese, o que ocasiona na replica dos padres do animal clonado. Um setor de grande estudo o do processo de gametognese masculino e feminino que tem alta influencia na transferncias de padres epigeneticos. Sabe-se que h a reprogramao genmica durante a formao

dosgametas, ocorrendo tambm aps fertilizao do ovulo, porem quando esses padres seguem padres de um dos antecedentes, o gene em questo sofre o processo de imprintinggenmico que um processo normal, no qual genes especficos so modificados, seguindo um padro (materno ou paterno), durante a gametognese. Esse processo de imprinting parental um fenmeno gentico no qual so expressos somente por um alelo , enquanto o outro metilado, durante a gametognes.

O imprintinggenomico comea nos gametas masculinos e femininos e os padres de metilaao trazidos com eles, so mantidos nas clulas somticas pluripotentes durante o processo da embriogenese ate a depois da formao total do embrio. Esses padres podem ser resetados durante qualquer momento da embriogenese perdendo ai os traos adiquiridos, criando novos padres de codificao nas clulas que foram re setadas. Em algumas variedadesroedoresconstatou -se queconstantes demetilao do DNA e os genes hereditveisme tilados (epialelos), no so apagadosno processo da gametognese e tam pouco apagada durante o incio da embriognese, sugerindo umapossivelmetilao do DNA sendo uma marca transferivel.No somente a metilao do DNA com esse potencial, como tambmpossiveis combinaes demetilao do DNA com modificaes das histonas e RNA no codificador (ncRna).(Rakyan e Beck, 2006).O ncRNA tambm um possivel fenmeno da memria epigenticaherdvel, pois possvel encontrar a presena de vestgios de RNA nos gametas masculinos, fator esse que favorece a integridade da hiptese de que heranas epigenticas podem ser transmitidas para geraes decendentes.

2 OBJETIVOS 2.1 Objetivos Gerais

Avaliar o padroeshereditrios de conformao do genoma e sua expresso ocasionada por interferncias do meio como: temperatura, presso, alimentao, situaes induzivas a liberaes endcrina de mediadores qumicos. 2.2 Objetivos Especficos Avaliar ospadres da metilao de DNA e sua relao em transferncia entre geraes decendentes, em animais eucariontes,camundongos chamados agouti , utilizando o testede seqenciamento com bissulfito. Avaliar e verificar as sequencias de padres sexo especficos, verificando a ocorrncia ou no da conservao, utilizando o mtodo de MSREs (methylation sensitiverestrictionendonucleases). 3 JUSTIFICATIVA 4 PROCEDIMENTOS METODOLGICOS O desenvolvimento deste trabalho ser baseado em uma metodologia experimental, fundamentado em informaes j publicadas por diferentes autores, incluindo referncias consagradas, artigos, anais de eventos entre outras fontes visando anlise e discusso dos relatos obtidos experimentalmente. Assim, ser baseado em uma pesquisa experimental descritiva, baseada em um estudo de padres os quais alteram as informaes epigeneticas e formas de transmisso gnica atravez de geraes. 4.1 Delineamento Experiment al, Animais e Ambiente de Experimentao Camundongos agouti (machos e fmeas), pesando aproximadamente200 g, sero mantidos em gaiolas de polietileno com tampa de ao inox, forradas, contendo cinco (5) animais, rao granulada variada e gua sero oferecidas. A temperatura ser mantida ambiente de aproximadamente 20 e 25 C, intensidade de rudos e umadade relativa sero mantidos a nveis e o mais estvel possvel, tero racionamento de luz contralado de aproximadamente 12 horas por dia. 4.2 Agentes Qumicos

5 CRONOGRAMA

Set 20 11 Levantamento Bibliogrfico Delineamento Experimental Coleta de Dados Tabulao dos Dados Anlise dos Resultados Discusso/Conclus o Relatrio Final

Ou t 20 11

No v 20 11

Fe v 20 12

Mar/A br 2012

Jun 20 12

Jul 20 12

Ag o 20 12

Set 20 12

Ou t 20 12

No v 20 12

Criaao de rgos: Como todos os organismos tem o mesmo padro DNA a nica diferena q eh toda diferena e de que se o rim tem padro diferente de metilaao do que o olho Entao ai pensamos e se colocarmos os padres de metilaao do rim em clulas pluripotentes ser que ele virara um rgo como o rim?

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