Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Suport de curs
Sintezele prebiotice
În trecutul geologic, când Pământul s-a răcit, la suprafaţa sa s-a format o
atmosferă, un înveliş de gaze, care s-a dispus în jurul materiei solide. În timpul
răcirii, apa eliberată de pe suprafaţa fierbinte sub formă de vapori, s-a
condensat, formând, prin ploi torenţiale care au durat milioane de ani, oceanele.
Probabil că atmosfera primitivă nu conţinea deloc sau conţinea foarte puţin
oxigen; oxigenul existent astăzi în atmosferă şi de care depinde întreaga viaţă
actuală, a fost probabil produs de organismele fotosintetice care s-au dezvoltat,
mult mai târziu.
Compoziţia atmosferei terestre primitive este o problemă de o foarte mare
importanţă. Până acum 10-15 ani exista convingerea că atmosfera primitivă era
foarte puternic reducătoare. Dacă gazele s-au eliberat de pe suprafaţa fierbinte a
crustei terestre înainte ca fierul metalic să se fi separat de crusta terestră, atunci
atmosfera ar fi trebuit să fie puternic reducătoare, conţinând cantităţi mari de H2,
CH4 (metan), NH3, precum şi CO (monoxid de carbon). Dacă însă doar o
cantitate mică de fier metalic a rămas la suprafaţă pentru a reacţiona cu aceste
gaze, atunci atmosfera primitivă trebuie să fi fost formată din CO2, puţin CO şi,
şi mai puţin, CH4 şi NH3. Majoritatea opiniilor actuale pledează pentru
2
caracterul neutru al atmosferei primitive. Oricum, hidrogenul sulfurat a fost
prezent în ambele cazuri. Sursele principale de energie care au putut produce
modificările chimice ale gazelor atmosferice (sau ale gazelor dizolvate în apă),
au fost radiaţiile solare şi descărcările electrice. Nu trebuie neglijat nici rolul
activităţii vulcanice, intensă în acele timpuri. O importanţă deosebită se acordă
în ultimul timp lifturilor oceanice, acestea fiind considerate ca principalele
situsuri ale sintezei prebiotice a moleculelor organice. Existau abundent în
aceste regiuni, sulfurile, fosforul şi catalizatorii minerali, iar NH3 şi CH4 s-au
putut forma mult mai probabil la acest nivel, ceea ce a asigurat atomii necesari
sintezelor organice precum şi energia necesară declanşării reacţiilor chimice.
3
Prezenţa acestor substanţe organice în mediile extraterestre sugerează că
elementele de bază pentru moleculele organice cu importanţă biologică, sunt
larg răspândite în natură şi s-au putut forma pe pământ acum câteva miliarde de
ani pe cale nebiologică. Pentru că în acea perioadă nu exista oxigen liber şi nici
metabolism celular, aceste molecule organice erau foarte stabile. Ca urmare, în
oceane s-a putut acumula o cantitate considerabilă de reactanţi organici. „Supa
organică” descrisă de Haldane şi Oparin a existat deci cu certitudine.
4
Astăzi exista un larg consens privind importanţa ARN în evoluţia
timpurie a vieţii, deşi este încă greu de înţeles cum s-a făcut conexiunea dintre
secvenţa bazelor azotate ale ARN şi secvenţa de aminoacizi din structura
proteinelor.
Sinteza polinucleotidelor
Primii polimeri s-au putut forma pe mai multe căi, de exemplu, prin
încălzirea compuşilor organici uscaţi în prezenţa acţiunii catalitice a
polifosfaţilor anorganici aflaţi în concentraţii mari. Produşii unor asemenea
reacţii simulate în eprubetă sunt reprezentaţi de polimeri de diferite lungimi şi
cu o secvenţă întâmplătoare, polimeri la care aminoacizii sau nucleotidele se
dispun în poziţii diferite în funcţie de şansă.
Un polimer odată format este capabil să influenţeze formarea unui alt
polimer. În particular, polinucleotidele sunt capabile să determine secvenţa de
nucleotide a unor noi polimeri, acţionând ca matriţă pentru reacţiile de
polimerizare. De exemplu, un polimer format dintr-un singur tip de nucleotide
(acidul poliuridilic sau poliU), poate servi ca matriţă, pentru sinteza unui al
doilea polimer, format dintr-un alt tip de nucleotide (acidul poliadenilic sau
poliA). Aceasta copiere este determinată de faptul că un polimer se leagă
preferenţial de un altul. Prin alinierea subunităţilor necesare pentru poliA de-a
lungul suprafeţei polimerului poliU, acesta din urmă determină formarea
polimerului de poliA.
Împerecherea specifică între nucleotidele perechi a jucat probabil, un rol
crucial în originea vieţii. Să considerăm, de exemplu, un poli-nucleotid cum este
ARN, format dintr-un şir de patru nucleotide reprezentate de bazele uracil (U),
adenină (A), citozină (C) şi guanină (G). Datorită complementarităţii dintre A şi
U, şi respectiv între G şi C, atunci când o moleculă de ARN este adăugată peste
o mixtură de nucleotide activate în condiţiile care favorizează polimerizarea, se
produc noi molecule de ARN în care secvenţa de nucleotide este
5
complementară celei dintâi. Aceasta însemnă că moleculele noi nu sunt similare
cu cele care au constituit matriţa, ci la fiecare A corespunde U etc. Astfel,
secvenţa nucleotidelor din molecula de ARN de origine (matriţa), care conţine o
informaţie, este reprodusă într-un lanţ complementar nou format. În a doua
rundă de copiere, cu lanţul complementar ca matriţă, se restaurează secvenţa
iniţială.
Asemenea mecanisme de copiere complementară sunt foarte simple şi
reprezintă esenţa proceselor de transfer al informaţiei în sistemele biologice.
Informaţia genetică conţinută în fiecare celulă este codificată într-o secvenţă de
nucleotide şi această informaţie este transmisă (moştenită) de la o generaţie la
alta pe baza interacţiilor de complementaritate dintre baze.
Formarea rapidă a polinucleotidelor în eprubetă necesită însă, prezenţa
unor catalizatori proteici specifici, enzime, care nu au putut fi prezente în mediul
prebiotic al oceanului primar, lotuşi, au putut fi prezenţi alţi catalizatori, cum ar
fi mineralele sau ionii de metale, ce-i drept mai puţin eficienţi, aceasta
necesitând un timp mai îndelungat de reacţie. Dar, cum timp a fost destul (este
vorba de sute de milioane de ani), iar sursa de precursori, de nucleotide reactive
era abundentă, este posibil ca sistemele de replicare lentă a polinucleotidelor să
se fi stabilizat în condiţiile prebiotice ale pământului.
6
ARN suferă un fel de selecţie naturală, astfel că unele secvenţe favorabile pot
predomina în funcţie de anumite condiţii date.
Un polinucleotid cum este molecula de ARN, are, ca urmare a acestui
fapt, două caracteristici importante: (1) ea poartă o informaţie codificată în
secvenţa de nucleotide care este transmisă prin procesul de replicare; (2) ea are
o structură tridimensională unică, ceea ce determină modul în care va funcţiona
şi va răspunde la condiţiile externe. Aceste două însuşiri, una informaţională şi
una funcţională, reprezintă cele două condiţii esenţiale necesare desfăşurării
evoluţiei.
Secvenţa de nucleotide a unui ARN este analoagă cu informaţia ereditară,
genotipul unui organism; structura tridimensională este analoagă cu fenotipul,
adică expresia informaţiei ereditare asupra căreia operează selecţia naturală.
7
cu G în poziţie centrală. Astfel, codificarea primitivă ar fi putut fi mai simplă,
specificând aminoacizii hidrofili, respectiv hidrofobi.
O altă proprietate a codului genetic constă în faptul că, pentru codificare,
cele mai importante baze azotate ale unui triplet sunt primele două; cei 64 de
codoni codifică doar 20 de aminoacizi în aşa fel încât mai mulţi codoni
corespund unui singur aminoacid. Aceşti codoni au ca şi caracter comun
primele două nucleotide, cea de-a treia fiind componenta variabilă. Probabil,
aparatul de translaţie originar a utilizat, doar primele două baze dintr-un codon.
Nu există teorii plauzibile care să explice care codoni ar fi fost adoptaţi
iniţial. Se presupune că la început, moleculele de ARN oligomeric produs
neenzimatic, ar fi fost cel mai probabil formate dintr-o alternanţă de baze
purinice şi pirimidinice. Aceasta a generat codoni de tipul purină-pirimidină-
purină şi respectiv, pirimidină-purină-pirimidină. Codonii cu pirimidinele ca
bază centrală, codifică aminoacizii mai hidrofobi, iar cei cu purinele în poziţie
centrală codifică aminoacizii hidrofili. Astfel, ribopolimerii alternativi au putut
codifica peptide parţial ordonate. Asemenea peptide alternante, formate din
lizină şi valină se agregă în structuri sub forma de pachete β cu o faţă hidrofobă
şi una hidrofilă (unele proteine actuale simple cum este fibroina, au o asemenea
structură).
Speculaţiile ca cele de mai sus nu pot, bineînţeles, să explice clar cum a
putut să apară procesul de translaţie, dar pot să sugereze că apariţia unor
proteine doar cu puţin mai ordonate în structură, a constituit un enorm avantaj
selectiv.
Membranele lipidice
Apariţia mecanismelor de sinteză a proteinelor şi controlul acestei sinteze
prin acizii nucleici a constituit fără dubii, unul din momentele cruciale care au
determinat formarea primelor celule. Un alt moment este reprezentat de apariţia
unei membrane delimitante externe. Dacă o variantă de ARN a devenit capabilă
să determine sinteza unei enzime cu calităţi superioare, capabilă să asigure
replicarea cu înaltă eficienţă a acestui ARN, aceasta nu ar fi putut contribui
selectiv la perpetuarea acestei variante în competiţia cu celelalte. Selecţia
moleculelor de ARN în ceea ce priveşte calitatea proteinelor pe care le codifică,
s-a putut face doar în situaţia în care cele două categorii de molecule ar fi fost
8
izolate într-un compartiment separat de celelalte molecule din mediu.
Compartimentarea a putut fi realizată prin apariţia membranelor lipidice.
Membranele plasmatice actuale sunt formate din fosfolipide şi proteine. La
microscopul electronic, aceste membrane apar trilaminate datorită împachetării
şi dispoziţiei particulare a lipidelor în bistrat. Membranele artificiale, care se
prepară uşor în eprubetă din aceleaşi componente, prin agitarea fosfolipidelor în
apă, au acelaşi aspect. În condiţii corespunzătoare, membranele artificiale
formează vezicule cu diametrul de 1-10 µm. Cu toate că aceste vezicule sunt
inerte, ca baloanele de săpun, este uşor sa ne imaginăm că prin încorporarea
unei populaţii distincte de molecule, ele pot forma unităţi spaţiale izolate, care
au posibilitatea unei evoluţii independente de alte vezicule.
S-a postulat că prima celulă a apărut în momentul în care moleculele
fosfolipidice din „supa organică” a oceanului primar s-au asamblat spontan în
asemenea structuri membranare care au inclus o mixtură de proteine şi ARN, cu
proprietăţi replicative. Doar incluse într-un spaţiu delimitat de o membrană,
moleculele de ARN au putut să evolueze nu doar pe baza structurii lor proprii,
ci şi în funcţie de proteinele pe care erau capabile să le producă.
9
Evoluţia celulelor de la procariote la eucariote
Cele mai simple celule actuale sunt celulele procariote. Una din etapele
dramatice ale evoluţiei celulei a avut loc acum aproximativ 1,5 miliarde de ani
şi ea a constat din tranziţia de la formele celulare mici, cu o structură internă
relativ simplă, celule numite procariote şi care cuprind cele mai variate tipuri de
bacterii, la celule mari, substanţial mai complexe, numite eucariote, care există
astăzi la animalele superioare şi la plante.
Bacteriile sunt cele mai simple organisme existente în mediul natural
actual. Ele sunt celule sferice sau alungite, având câţiva µm mărime. Frecvent
prezintă un înveliş protector numit perete celular sau capsulă sub care se află
membrana plasmatică. Membrana înconjoară un singur compartiment
citoplasmatic în care se află ADN, ARN, proteine şi molecule mici. Citoplasma
apare la microscopul electronic ca o matrice relativ omogenă. În condiţii de
viaţă optime, o celulă bacteriană se divide odată la 20 de minute. Capacitatea de
diviziune rapidă permite adaptarea promptă a populaţiilor bacteriene la
schimbările din mediul ambiant. Astfel, în condiţii de laborator, bacteriile pot
suferi mutaţii spontane şi selecţie naturală în ceea ce priveşte utilizarea
diferitelor surse nutritive. În natură, bacteriile trăiesc într-o varietate enormă de
nişe ecologice, aceasta corespunzând unei mari varietăţi biochimice. Există
specii de bacterii care pot utiliza ca sursa de hrană, virtual orice tip de molecule
organice: zaharuri, aminoacizi, grăsimi, hidrocarburi, polipeptide, polizaharide.
Altele sunt capabile să obţină carbonul direct din CO2, iar azotul din N2. În
ciuda simplităţii lor structurale, bacteriile sunt cele mai vechi organisme de pe
pământ şi încă mai constituie cel mai abundent tip de celule.
Cum au evoluat reacţiile metabolice la aceste celule primitive? Reacţiile
care au loc în celulele bacteriene sunt catalizate de sute de enzime care
funcţionează în „reacţii în lanţ”, astfel că produsul unei reacţii devine substratul
următoarei. La origini, când viaţa a apărut pe pământ, asemenea reacţii
metabolice probabil că nu erau necesare. Celulele au putut supravieţui pe baza
moleculelor existente în mediul lor reprezentat de „supa prebiotică”. Când
aceste resurse naturale s-au epuizat, celulele care au „descoperit” cel mai mare
număr de enzime necesare biosintezelor organice, au câştigat un serios avantaj
evolutiv. În acest fel, conţinutul în enzime al unei celule a crescut continuu,
generând căile metabolice complexe de astăzi.
O poziţie centrală în metabolismul tuturor celulelor îl ocupă reacţiile care
implică glucidele fosforilate, dintre care cea mai frecventă este secvenţa de
reacţii numită glicoliza. Prin acest lanţ de reacţii, glucoza este degradată în lipsa
oxigenului, anaerob. Cea mai veche cale metabolică trebuia să fie anaerobă
deoarece nu exista oxigen în atmosfera primară. Glicoliza există practic în orice
celulă vie şi duce la formarea ATP, compus utilizat de toate celulele ca sursă de
energie chimică cea mai la îndemână. La această serie de reacţii plasate central
în cadrul metabolismului, sunt conectate sute de alte reacţii chimice. Unele
10
dintre acestea sunt responsabile pentru sinteza moleculelor mici, altele sunt
utilizate, în serie, pentru sinteza polimerilor mari specifici. Alte reacţii sunt
utilizate pentru degradarea moleculelor complexe folosite ca substanţe nutritive.
Un avantaj evolutiv extraordinar l-a constituit dobândirea capacităţii
celulelor primitive de a folosi ca sursă nutritivă directă, CO2 şi N2 din atmosfera
primordială a pământului. Dar, cu toate că sunt foarte abundenţi, CO2 şi N2 sunt
foarte stabili. Aceasta înseamnă că, pentru conversia lor în molecule organice,
este necesară multă energie.
În cazul CO2, mecanismul care a rezolvat aceasta problemă a fost
fotosinteza, în care energia solară captată, determină transformarea CO2 în
compuşi organici. În acest proces, prin fotoliza apei se eliberează O2, care astfel
a început să se acumuleze în atmosferă, ajungând astăzi să reprezinte 21% din
total.
Deoarece O2 este un compus foarte reactiv, care poate reacţiona cu
majoritatea constituenţilor citoplasmatici, la început a fost probabil toxic pentru
organismele celulare primitive, cum se întâmplă astăzi cu bacteriile anaerobe.
Totuşi, această reactivitate constituie o sursă de energie chimică, iar acest fapt a
fost exploatat de celule în cursul evoluţiei. Astfel, prin utilizarea oxigenului,
celulele au devenit capabile să oxideze mult mai complet moleculele nutritive.
De exemplu, în prezenţa oxigenului, glucoza poate fi degradată complet, până la
CO2 şi H2O, pe când în absenţa lui, glucoza este descompusă doar până la acid
lactic sau etanol, care sunt produşii finali ai glicolizei anaerobe. Oxidarea
aerobă a moleculelor nutritive este cunoscută sub denumirea de respiraţie.
Celulele eucariote
Ce s-a întâmplat cu organismele anaerobe după ce oxigenul s-a acumulat
în atmosferă? Într-un mediu bogat în oxigen, pe care nu-1 puteau utiliza, ele s-
au aflat într-un sever dezavantaj. Unele din aceste celule au supravieţuit totuşi;
ori au dobândit capacitatea de a respira (de a utiliza oxigenul), ori s-au retras în
nişe ecologice în care oxigenul era absolut absent în care şi-au continuat modul
de viaţă anaerob.
Se presupune ca a mai existat un al treilea grup de celule anaerobe care au
descoperit o strategie mult mai ingenioasă de a supravieţui şi care a avut mari
implicaţii pentru dezvoltarea ulterioară a vieţii. Aceste celule anaerobe au intrat
în asociere intimă cu un tip celular aerob, trăind cu acestea în simbioză. Aceasta
este cea mai plauzibilă explicaţie pentru originea celulelor actuale de tip
eucariot.
Prin definiţie, şi în contrast cu celulele procariote, eucariotele au un
nucleu care conţine aproape tot ADN-ul celular, învelit fiind de o membrană
dublă. În citoplasmă au loc majoritatea reacţiilor metabolice şi tot aici se pot
distinge o serie de organite celulare. Cu totul deosebite sunt mitocondriile.
Acestea sunt învelite de o membrană dublă şi au o compoziţie chimică diferită
de a nucleului. Se presupune că mitocondriile sunt de origine bacteriană.
11
Mitocondriile prezintă o serie de similarităţi cu celulele procariote: au o
mărime şi aspect similar cu al bacteriilor, conţin ADN de tip bacterian, se divid
prin diviziune binară, ca bacteriile.
Prin cercetarea celulei eucariote s-a demonstrat că respiraţia oxidativă se
desfăşoară doar în mitocondriile acestora. Fără mitocondrii, celulele animale
devin celule anaerobe, putând folosi ca sursă de energie doar procesul ineficient
şi primitiv al glicolizei.
Unele bacterii actuale sunt aerobe, deci respiră, iar mecanismul prin care
fac aceasta este identic cu acela al mitocondriilor.
Se presupune că celulele eucariote sunt descendenţii unor celule anaerobe
primitive, care au supravieţuit într-o lume care a devenit bogată în oxigen,
pentru că au încorporat în interiorul lor o specie de bacterii aerobe. În loc de a le
digera, ele le-au protejat, intrând în simbioză, folosindu-se astfel de capacitatea
acestor bacterii aerobe de a consuma oxigen pentru a produce energie.
Bineînţeles că nu se poate demonstra astăzi în mod absolut exact cum s-a
produs acest fenomen.
Celulele eucariote au un volum mult mai mare decât celulele procariote
(în jur de 1000 de ori mai mare), conţinând în mod proporţional, o cantitate mai
mare de material celular; de exemplu, o celulă umană conţine de 800 de ori mai
mult ADN decât o bacterie. Dar acest volum mare creează probleme! Deoarece
materialele folosite pentru reacţiile biosintetice care au loc în interiorul celulei
trebuiesc, în ultimă instanţă, să străbată membrana plasmatică şi deoarece, în
plus, membrana însăşi este sediul multor reacţii importante, creşterea volumului
celular impune şi creşterea suprafeţei celulare. Dar aceasta este o problemă de
geometrie deoarece o creştere în volum, la cub, determină o creştere a suprafeţei
la pătrat. Aceasta pare să fie cauza datorită căreia celula eucariotă, pentru a-şi
asigura o suprafaţă corespunzătoare volumului său, şi-a suplimentat aria
suprafeţei prin invaginaţii şi prelungiri, precum şi prin elemente membranare
intracitoplasmatice.
Aceasta explică probabil, reţeaua complexă de membrane interne care
constituie o caracteristică de bază a celulei eucariote.
Membranele învelesc nucleul şi mitocondriile. Ele formează un sistem
labirintic numit reticul endoplasmic la nivelul căruia se sintetizează lipidele şi
proteinele membranare precum si materialul destinat exportului celular.
Membranele formează de asemenea saci turtiţi care intră în constituţia
aparatului Golgi care este implicat în sinteza şi transportul variatelor molecule
organice. Membranele mărginesc lizozomii în care sunt depozitate enzime
necesare pentru digestia intracelulară fiind prevenită astfel acţiunea lor
distructivă asupra acizilor nucleici şi a proteinelor celulare proprii. În acelaşi
mod, membranele mărginesc peroxizomii în care are loc degradarea peroxizilor
toxici. Toate aceste structuri mărginite de membrane corespund unor
compartimente interne distincte din interiorul citoplasmei. Într-o celulă animală
tipică, aceste compartimente ocupă cel puţin jumătate din volumul celular.
12
Restul citoplasmei, care include întotdeauna alte organite neînvelite de
membrane, este denumit în mod uzual cu termenul de citosol.
Toate structurile membranare de mai sus se află în interiorul celulei. Cum
pot ele rezolva problema pusă cu privire la asigurarea suprafeţei
corespunzătoare volumului ei? Răspunsul depinde de interschimbul dintre
compartimentele membranare interne şi membrana care mărgineşte exteriorul
celulei. Aceasta se realizează prin endocitoză şi exocitoză, procese unice la
celula eucariotă. Prin aceste procese, de intrare şi ieşire a materialelor din şi
dinspre celulă către mediul în care ea se află, în care sunt implicate
compartimentele membranare intracelulare, se realizează creşterea suprafeţei
efective a celulei, suprafaţă necesară schimburilor de materie cu mediul extern.
13
CELULA
MEMBRANA CELULARĂ
Organizarea ultrastructurală şi moleculară a membranei celulare
Membrana este dispusă la limita de separare cu mediul ambiant,
delimitând conţinutul celular (citoplasmă şi nucleul) de mediul extracelular.
Fiind foarte subţire (de ordinul nanometrilor) la microscopul optic
membrana celulară apare doar ca o interferenţă între mediul intracelular şi
extracelular; este vizibilă la microscopul electronic. În alcătuirea membranei
celulare se disting trei părţi componente:
- plasmalema - membrana propriu-zisă;
- glicolema (glicocalixul) - învelişul dulce al celulei;
- citoscheletul membranar.
Plasmalema. Examinată în microscopia electronică la o rezoluţie mică, de
aproximativ 10.000 x, apare ca o linie unică electronodensă; la o mărire de peste
100.000 x, apare cu structură caracteristică trilaminară. Structura trilaminară a
membranei plasmatice poate fi observată pe electronofotografii. Se disting cele
două straturi electronodense care în conformitate cu modelul de organizare
moleculară „în mozaic fluid” a lui Singer şi Nicolson, corespund grupărilor
polare, hidrofile ale bistratului lipidic şi proteinelor periferice. Cele două
straturi electronodense sunt separate de un strat electronoclar dat de grupările
hidrofobe (radicalii de acizi graşi) ale bistratului lipidic. Din loc în loc stratul
electronoclar este traversat de punţi electronodense ce reprezintă proteinele
transmembranare. În conceptul lui Robertson aceasta reprezintă plasmalema sau
membrana propriu-zisă, având o grosime de 7,5 nm (2 nm straturile
electronodense şi 3,5 nm stratul electronoclar). Este considerată membrana
etalon sau unitatea de membrană („unit membrane”) şi reprezintă structura de
bază a membranelor biologice (citomembrane) care delimitează diferitele
compartimente celulare. Membrana propriu-zisă este însoţită pe faţa externă de
glicolema (glicocalix), iar pe faţa citoplasmatică, de citoscheletul membranar.
14
Glicolema, parte integrantă a membranei celulare, este constituită din
lanţuri oligozaharidice, care stabilesc legături indisolubile cu proteinele şi
lipidele membranare formând glicoproteine şi glicolipide. Lanţurile
oligozaharidice sunt formate din molecule de monozaharide reprezentate de
hexoze (galactoză, manoză, fucoză, glucoză) şi hexozamine (N-
acetilgalactozamina, N-acetilglucozamina, acidul sialic).
Ultrastructural, glicolema apare ca un strat filamentos, pufos; filamentele
având grosimi şi lungimi diferite (2-5 nm grosime, până la 50 nm lungime).
Filamentele simple sau ramificate, sunt dispuse perpendicular pe suprafaţa
plasmalemei. La majoritatea tipurilor celulare nu se poate stabili o delimitare
precisă între componentele glicolemei şi componentele matricei extracelulare
(glicoproteine, proteoglicani) cu care interacţionează.
Glicolema, prezentă la toate celulele, are o grosime variabilă în raport cu
specia şi tipul celular. Este bine reprezentată la celulele endoteliilor vasculare,
la ovocite, la enterocite.
Glicolema asigură un micromediu pentru celulă. Fiind o structură cu
caracter slab acid, are afinitate pentru diferiţi cationi (Na+ K+ Ca++) implicaţi în
diferite funcţii membranare. Conţine numeroşi şi variaţi receptori cu rol în
adezivitatea celulară, permeabilitatea selectivă, imunitate.
Citoscheletul membranar este alcătuit din proteine extrinseci ca:
spectrina, ankirina, citokeratina, α-actinina, miozina, trompomiozina, proteine
filamentoase care formează reţele fibrilare, cu rol în stabilizarea infrastructurilor
membranare. Asigură rezistenţă, elasticitate şi supleţe membranei celulare. Se
continuă cu ectoplasma - zona periferică a citoplasmei lipsită de organite,
implicată în mişcările locale ale suprafeţei celulare.
15
- transportori specifici pentru anumiţi metaboliţi ca: aminoacizi,
monozaharide, asigurând transportul activ al acestora împotriva gradientului de
concentraţie.
Transportul activ şi pompele ionice funcţionează cu energie provenită
prin hidroliza ATP-ului, sub acţiunea ATP-azei. ATP-aza de transport este o
enzimă comună tuturor membranelor celulare, dar concentraţia ei variază cu
tipul celular; se află în concentraţie foarte mare la celulele specializate în
transportul activ (ex. nefrocite, enterocite). Pompele de ioni reglează volumul
celular, controlează homeostazia şi menţin potenţialul membranar de repaus,
caz în care membrana celulară este încărcată pozitiv pe faţa externă şi negativ
pe faţa internă.
Integrarea populaţiilor celulare în activitatea întregului organism, precum
şi funcţia de apărare o organismului sunt posibile deoarece membrana celulară
prezintă la nivelul învelişului glucidic de suprafaţă molecule specifice cu funcţie
de receptori membranari (receptori celulari de suprafaţă sau situsuri
complementare de legătură sterică). Receptorii membranari sunt diferiţi în
funcţie de tipul celular. Ei au capacitatea de a fi contactaţi de alte molecule din
mediul extracelular, care au complementaritate sterică, numite în termeni
generali mesageri sau liganzi.
Receptorii membranari pot fi clasificaţi în:
a) receptori pentru molecule tip ligand de natură exogenă între care se
pot menţiona: microorganisme (virusuri, bacterii), toxine, antigene non-self,
droguri, etc;
b) receptori pentru molecule tip ligand de natură endogenă cum sunt de
exemplu: antigene-self, hormoni, neurotrasmiţători, imunoglobuline, factori
mitogeni, etc.
Receptorii membranari interacţionează cu diferiţi liganzi endogeni sau
exogeni, consideraţi mesageri de ordinul I. La nivelul plasmalemei receptorul
activat de ligand interacţionează cu sistemele enzimatice care generează în
citosol mesageri de ordinul II, de regulă AMP-ciclic (adenozinmonofosfat
ciclic).
Cel de al doilea mesager, respectiv AMP-ciclic, declanşează un lanţ de
reacţii care provoacă în final răspunsul specific al celulei la mesagerul de
ordinul I.
Mulţi receptori împreună cu liganzii lor sunt înglobaţi în citoplasmă prin
endocitoză-endocitoză mediată de receptori.
Receptorii membranari izolaţi şi studiaţi până în prezent sunt
glicoproteine cu greutate moleculară mare.
În raport cu specificul funcţional al fiecărui tip celular, membrana
prezintă variate diferenţieri adaptative, care alcătuiesc în ansamblu configuraţia
externă a celulei. Cele mai comune sunt diferenţierile membranei implicate în
stabilirea joncţiunilor intercelulare care pot fi variate ca tip morfofuncţional
cum sunt: joncţiunile de adezivitate, joncţiunile strânse impermeabile
16
(occludens) şi joncţiunile comunicante (gap sau nexus). La celulele
suprasolicitate mecanic (epidermă, epiteliul gingival, miocardocite lucrătoare)
joncţiunile de adezivitate sunt reprezentate de diferite tipuri de desmozomi.
La celulele specializate pentru funcţiile de absorbţie (enterocite,
nefrocite) sau pentru recepţia unor stimuli (epiteliile senzoriale), membrana
împreună cu ectoplasma diferenţiază microvili şi stereocili (cili ficşi),
diferenţieri care măresc considerabil suprafaţa de relaţie a celulei cu mediul
extracelular.
La celulele care se deplasează liber în mediul fluid (leucocite, macrofage,
spermii) membrana este angajată în pseudopode, văluri ondulante, cili mobili
(kinocili). Kinocili există şi la unele celule fixe (celulele ciliate ale epiteliului
respirator) care deplasează la nivelul suprafeţei ciliate un fluid conţinând
diferite particule (poluanţi atmosferici).
La numeroase tipuri celulare membrana întreţine relaţii cu mediul
extracelular prin endocitoză şi exocitoză, procese implicate în funcţiile de
nutriţie, de apărare, transport transcelular, de eliberare a produselor secretate.
17
Dispozitivele joncţionale de adezivitate. Asigură aderarea mecanică a
celulelor; cuprind toate tipurile de desmozomi:
- desmozomi tip pată („spot”) sau macula adherens;
- desmozomi tip centură sau zonula adherens (sinonime: joncţiunea
intermediară, terminal bar);
- hemidesmozomi;
(gr. desmozom = corp de legătură).
Desmozomii tip pată, prezintă organizarea ultrastructurală cea mai
complexă şi sunt consideraţi ca prototip de organizare a desmozomilor. Ei se
prezintă sub forma unor arii mici, ovale sau circulare, plasate la acelaşi nivel în
membranele celulelor alăturate. La nivelul acestor arii, membranele celulelor
adiacente sunt dispuse paralel la o distanţă constanta de 25-30 nm. Spaţiul
intercelular este ocupat de o matrice filamentoasă slab electronodensă bisectată
de o lamă cu densitate electronică mare, alcătuită din desmocolină. La acelaşi
nivel pe faţa citoplasmatică a plasmalemei, citoscheletul membranar formează o
placă de ataşare, alcătuită din proteine speciale desmoplachine, cu densitate
electronică mare. În aceste plăci de ataşare electronodense se ancorează
filamente de citokeratină (tonofilamente) şi microfilamente de actină. Filamente
scurte - linkeri - fac legătura între tonofilamente şi lama centrală
electronodensă, străbătând spaţiul intercelular, plasmalema şi plăcile ataşate ei.
Desmozomii tip centură, numeroşi în ţesutul miocardic sau la unele tipuri
de epitelii, formează un brâu mai mult sau mai puţin continuu în zonele de
solicitare mecanică a celulelor.
În cazul enterocitelor se prezintă ca o bandă care înconjură celula la polul
apical. Aceasta se află în relaţie cu o bandă similară, situată la acelaşi nivel în
celula adiacentă. Pe faţa citoplasmatică a membranei celulare se găsesc
aglomerate proteine ca: miozina, tripomiozina, α-actinina, vinculina. La nivelul
acestor benzi se insera filamentele citoscheletale din celula respectivă.
Hemidesmozomii au aceeaşi structură cu desmozomii „în pată” dar sunt
reduşi la jumătate. Ei leagă plasmalema bazală a celulelor epiteliale de
componentele membranei bazale, aşa cum se poate observa în
electronofotografia, ce reprezintă un mic fragment din polul bazal al unei
keratinocite din stratul bazai al epidermei.
Numărul, mărimea şi complexitatea structurală a joncţiunilor celulare de
adezivitate sunt direct proporţionale cu intensitatea forţelor de forfecare sau de
tracţiune care se exercită asupra unor ţesuturi. Aceste joncţiuni sunt mai
numeroase în epidermă, în epiteliul mucoasei bucale şi esofagiene, în miocardul
contracţii.
Dispozitivele joncţionale de ocluziune (sinonime: zonula occludens;
joncţiunea impermeabilă; joncţiunea îngustă; tight jonction). Leagă celulele
între ele şi asigură totodată etanşeizarea spaţiilor intercelulare. Sunt
caracteristice epiteliilor adaptate funcţiei de absorbţie, resorbţie, tranzit
18
transcelular (ex. enterocite, nefrocite), unde formează un brâu continuu la polul
luminai al celulelor.
La nivelul joncţiunii înguste, plasmalemele celulelor adiacente sunt foarte
apropiate, spaţiul intercelular este redus (2,5 nm). Organizarea lor
ultrastructurală este vizibilă numai la măriri de peste 100.000 x. Date mai exacte
au fost obţinute în preparate criofracturate, unde joncţiunea îngustă apare ca
şiruri de particule dispuse paralei alcătuind o structură în formă de centură
(brâu), care înconjură complet polul luminai al fiecărei celule în parte.
Joncţiunea îngustă este constituită din proteine transmembranare specifice,
dispuse la acelaşi nivel în plasmalemele celulelor adiacente. Aceste proteine
traversează spaţiul intercelular îngust şi stabilesc contacte directe cu simetricele
lor, aşa încât legătura dintre cele două celule poate fi comparată cu dinţii unui
fermoar.
Stabilitatea joncţiunilor se datorează interacţiunii proteinelor
transmembranare cu filamentele de actină şi citokeratină (componente ale
matricei citoplasmatice).
Joncţiunile înguste pot fi asociate cu alte tipuri de joncţiuni formând
complexe joncţionale în care joncţiunile se succed astfel: joncţiunea îngusta,
joncţiunea intermediară, joncţiunea comunicantă, desmozom (ultimele două
joncţiuni nu se menţin obligatoriu în această ordine).
Dispozitivele joncţionale comunicante (sinonime: gap, nexus) sunt
joncţiuni strânse (înguste) cu o largă răspândire în ţesuturile animale.
Ele asigură adezivitatea celulară şi permit circulaţia moleculelor mici de
la o celulă la alta, realizând fie cuplarea metabolică de mare importanţă în
embriogeneză, fie cuplarea electrică ca în cazul miocardului pentru
sincronizarea instantanee a contracţiei miocardocitelor.
Joncţiunile comunicante se prezintă sub forma unor arii mici distribuite
pe suprafaţa plasmalemelelor celulelor adiacente. Proteinele transmembranare
formează conexoni, structuri cu aspect tubular. Conexonii leagă direct interiorul
celulelor printr-un canal hidrofil continuu. O joncţiune comunicantă poate
conţine câteva sute de conexoni organizaţi în grupuri mici în sistem hexagonal.
Prin conexoni se face legătură directă între celulele adiacente.
În TEM conexonii apar ca particule intramembranare, pe feţele de clivaj
ale membranelor celulare. Spaţiile intercelulare dintre conexoni numite „gap-
uri” sau nexus sunt foarte înguste (2-4 nm), ele totuşi permit circulaţia unor
molecule din lichidul interstiţial.
19
Indiferent de mecanismul prin care se realizează, procesul de endocitoză
poate fi implicat în funcţia de nutriţie a celulei, în tranzitul unor substanţe prin
celulă, în stocarea intracelulară a unor substanţe de rezervă, în purificarea
mediului extracelular; în apărarea organismului.
Pinocitoza
Se întâlneşte la unele tipuri celulare şi reprezintă calea prin care celulele
înglobează picături de lichid tisular. Înglobarea lichidului se face în mici
depresiuni veziculare (de 2,5-50 nm) pe care le formează membrana celulară
spre interiorul celulei, numite caveole de pinocitoză. Pinocitoza este vizibilă
numai electronomicroscopic (fig. 22, 24, 25). Procesul de pinocitoză poate fi
mediat de receptori membranari specifici şi se realizează într-o secvenţă ce
presupune mai multe faze:
- alăturarea particulelor la suprafaţa membranei celulare, fază mediată de
receptori;
- formarea unei invaginări în dreptul particulei şi constituirea unei
caveole de pinocitoză, care conţine picătura de lichid tisular cu particulele ce
urmează a fi înglobate;
- detaşarea de plasmalemă a caveolei de pinocitoză şi înglobarea ei în
ectoplasmă, după care plasmalemă se reface.
La pinocitoza mediată de receptori, caveolele şi pinozomii au la suprafaţă
clatrină - proteină specifică pentru veziculele acoperite sau „coated pits”.
Aceste vezicule prezintă pe suprafaţa lor mici spinişori.
La anumite tipuri de celule pinocitoza se realizează şi prin alte modalităţi:
- prin invaginări tubulare care se strangulează succesiv formând şiruri de
pinozomi;
- prin expansiuni lamelare unice care se apropie de suprafaţa membranei
celulare, fuzionează cu aceasta, formând de asemenea pinozomi;
- prin expansiuni lamelare duble, care fuzionează median prin
extremităţile libere, rezultatul final fiind acelaşi, formarea pinozomilor.
În cazul în care pinocitoză deserveşte funcţiile de: nutriţie, apărare,
purificarea mediului extracelular ambiant, pinozomii fuzionează cu lizozomii
primari, formând vacuole digestive sau pinolizomi.
Materialul înglobat în acestea va fi supus unui proces de digestie
enzimatică intracelulară sub acţiunea hidrolazelor lizozomale.
La celulele specializate la funcţia de tranzit transcelular (la celulele
endoteliului capilar de ex.) pinozomii ce se formează la un pol, se deplasează în
flux continuu spre polul opus. Conţinutul pinozomilor este eliminat printr-un
proces de pinocitoză inversă (exocitoză), fie în ţesuturi prin polul bazai, fie în
sânge prin polul luminal.
Exocitoza reprezintă procesul de externare în mediul extracelular a
conţinutului unor vezicule. Acesta poate fi de natură endogenă - ex. conţinutul
veziculelor golgiene sau exogenă - substanţe aflate în tranzit transcelular.
20
Fagocitoza
Constituie o cale prin care celulele înglobează din mediul extracelular
particule solide de dimensiuni diferite. Este specifică, mediată de receptori
membranari şi nespecifică. în raport cu mărimea particulelor înglobate, celulele
capabile de fagocitoza se clasifică în microfage (ex. granulocitele neutrofile) şi
macrofage.
Înglobarea se face cu ajutorul pseudopodelor, mantiilor sau vălurilor pe
care le formează membrana celulară finalizându-se cu formarea unui fagozom.
După fuzionarea lui cu lizozomii primari şi formarea unui fagolizom (vacuolă
digestivă), conţinutul va fi degradat total sau parţial de hidrolazele acide.
Ca şi pinocitoză, fagocitoza este un proces complex care se desfăşoară în
trei etape succesive: ataşarea, înglobarea, digestia.
Microvilii
Sunt prelungiri digitiforme ale membranei celulare de la polul apical.
În axul microvilului se află un fascicul de microfilamente de actină
solidarizate între ele şi de plasmalemă prin polipeptide ca: fimbrina, vilina,
calmodulina, tropomiozina. Fasciculul de microfilamente reprezentând
citoscheletul microvilului se fixează apical într-un material electronodens, iar
bazal se ancorează în trama terminală, o reţea filamentoasă aflată la limita
joncţiunii microvilului cu polul luminal al celulei. Axul citoscheletic asigură
forma şi rezistenţa microvilului.
Microvilii se prezintă sub diferite forme în funcţie de tipul celulei şi
constituie criterii pentru identificarea acestora. Astfel, microvilii enterocitului,
care formează „bordura striată” vizibilă în microscopia optică, sunt
echidistanţi, de aceeaşi grosime şi lungime, iar citoscheletul lor este bine
reprezentat. Microvilii nefrocitului din segmentul proximal al tubului urinifer,
ce formează „bordura în perie”, sunt mai lungi decât la enterocite, nu au toţi de
aceeaşi lungime, iar citoscheletul axial este mai redus şi de aceea apar uşor
ondulaţii.
La plexurile coroide ventriculare microvilii sunt pedunculaţi, iar la
celulele solitare (limfocite B, limfocite T, monocite, macrofage, celule tumorale
ascitice) microvilii sunt de diferite lungimi şi forme.
21
Stereocilii
Sunt microvili foarte lungi, simpli sau ramificaţi, având citoscheletul
asemănător cu al microvililor. Ei nu conţin ansambluri de microtubuli aşa cum
conţin cilii şi flagelii. La microscopul optic se aseamănă cu cilii fiind
consideraţi cili ficşi.
Labirintul bazal
Este o diferenţiere a membranei celulare de la polul bazai al celulelor
implicate în funcţia de reabsorbţie, cum sunt de ex. nefrocitele din segmentul
proximal şi distal al tubului urinifer.
Labirintul bazal se prezintă sub forma unor invaginări digitiforme sau
lamelare ale membranei celulare de la polul bazai. Acestea pătrund adânc în
citoplasmă celulelor, compartimentând-o în coloane care conţin numeroase
mitocondrii - organite ce furnizează energia necesară transportului activ prin
membrana celulară.
CITOPLASMA
Citoplasma reprezintă conţinutul celulei cuprins între membrana celulară
şi nucleu, constituind cu acestea o unitate morfofuncţională indestructibilă.
Citoplasmă este alcătuită din matricea citoplasmatică (citoplasmă fundamentală
sau hialoplasma), în care sunt dispersate organitele citoplasmatice delimitate
sau nu de citomembrane (endomembrane) şi diferite incluziuni (glicogen, lipide,
pigmenţi, granule de secreţie).
Organitele citoplasmatice delimitate de citomembrane cum sunt: reticulul
endoplasmic, complexul Golgi, mitocondriile, lizozomii, peroxizomii, la care se
adaugă veziculele de transport, compartimentează abundent citoplasmă. Fiecare
22
compartiment, corespunzător unui anume organit este delimitat de o
citomembrana cu organizarea moleculară tip „membrana uint”, dar cu o
compoziţie biochimică proprie. Astfel citomembranele diferitelor
compartimente (organite) creează şi menţin anumite gradiente chimice şi
electrochimice, care asigură buna desfăşurare a funcţiilor celulare.
Compartimentele citoplasmatice, fiecare cu matrice proprie, se află într-o
permanentă interrelaţie, riguros controlată la nivel celular.
Matricea citoplasmatică
Reprezintă partea nestructurată a citoplasmei, care la rândul ei cuprinde
două componente:
- citosolul - componenta fluidă, formată din apă, electroliţi, molecule
organice mici, proteine solubile;
- citoscheletul - componenta solidă, constituită din proteine simple şi
complexe care formează ansambluri macromoleculare de susţinere. Ele
alcătuiesc structuri ca: microtubuli, filamente intermediare, microfilamente, ce
se comportă asemenea unui schelet (schelet celular).
1. Microtubulii sunt structuri cilindrice, tubulare, lungi şi subţiri (câţiva
µm lungime şi 25 nm grosime). Sunt alcătuiţi din 13 protofilamente cu traiect
helicoidal. Fiecare protofilament este format din heterodimeri de tubulină α şi β.
2. Filamentele intermediare sunt structuri fibrilare lungi şi subţiri (10 nm
grosime) grupate în fascicule. Ele rezultă din polimerizarea unor proteine
specifice în raport cu tipul celular, având caracteristici biochimice şi
imunologice diferite. în funcţie de aceste caracteristici se cunosc mai multe
tipuri de filamente intermediare:
- filamente de citokeratină - prezente în celulele epiteliale de origine în
special ectodermică, unde formează tonofilamente;
- filamente de vimentină - au traiect sinuos; sunt prezente în celulele de
origine mezodermică, unde sunt asociate cu filamente specifice tipului celular.
- filamente de scheletină sau desmină - prezente în celulele musculare.
- neurofilamentele - prezente în neuroni
- gliofilamentele - caracteristice celulelor gliale.
3. Microfilamentele sunt filamente subţiri (6 nm grosime) constituite din
F actină (actină filamentoasă, polimerizată din G-actină-actină monomerică).
Microfilamentele de actină formează fascicule ordonate, ce se ancorează pe faţa
citoplasmatică a membranei celulare în zone cu sau tară diferenţieri speciale,
unde se află de regulă şi vinculina. Microfilamentele de actină pot să
interacţioneze cu filamente scurte de miozină, alcătuind unităţi motorii variate
ca mărime şi conformaţie.
Elementele citoscheletale sunt mai abundente în zona periferică a
citoplasmei, ectoplasma, care este mai densă şi lipsită de organite
citoplasmatice. Ele sunt implicate în specializările celulare de suprafaţă ca
microvili, stereocili cu rol în mărirea suprafeţei celulare sau cili, flageli
23
(organite permanente de mişcare), membrane ondulante, pseudopode, filipode
(organite temporare de. mişcare) - cu rol în motilitatea celulară.
Cele două componente ale matricei citoplasmatice - citosolul şi
citoscheletul - se află în interdependenţă, într-un echilibru dinamic, cu schimb
permanent de molecule proteice. În strânsă interrelaţie, citosolul şi citoscheletul
conferă hialoplasmei aspectul de gel fluid - când dominant este citosolul, sau
gel consistent - când dominant este citoscheletul.
ORGANITELE CITOPLASMATICE
Organitele citoplasmatice reprezintă diferenţierile structurale ale
citoplasmei, specializate pentru îndeplinirea anumitor funcţii celulare. Din punct
de vedere structural ele se pot grupa în două categorii:
a) Organitele citoplasmatice delimitate de membrane (endomembrane
sau citomembrane) cum sunt: reticulul endoplasmatic neted (REN), reticulul
endoplasmatic granular (REG) sau ergastoplasma, complexul Golgi, veziculele
de transfer, mitocondriile, lizozomii, corpusculii multiveziculoşi, corpusculii
denşi, peroxizomii. Aceste organite subîmpart citoplasma în compartimente cu
matrice proprie alcătuind sistemul endomembranar. Endomembranele fiecărui
compartiment constituie suportul structural al enzimelor ce intervin în buna
desfăşurare a diferitelor funcţii celulare;
b) Organitele citoplasmatice fără membrane cum sunt: polizomii liberi şi
ataşaţi la reticulul endoplasmic, centriolii, corpusculii bazali, cilii, flagelii, etc.
24
2) reticulul endoplasmic granular (rugos) - REG(RER);
3) elementele tranziţionale (veziculele de transport) dispuse la graniţa
dintre RE şi complexul Golgi;
4) cisterna perinucleară; compartimente relativ constante.
Mai rar întâlnite sunt:
5) cisternele fenestrate (annulatae lemellae) şi
6) cisternele subplasmalemale.
Indiferent de varietate şi gradul de dezvoltare, compartimentele comunică
între ele.
25
formaţie). Ergastoplasma a fost observată în celulele glandulare exocrine, iar
prezenţa sa a fost corelată cu activitatea de sinteză a unor produşi specifici de
natură proteică secretaţi de aceste celule. Ea conferă bazofilie celulelor.
În microscopia optică ergastoplasma se prezintă sub forme diferite:
- de lame paralele sau lame concentrice (parazomi) dispuse la polul bazal
al celulelor seroase pancreatice acinare, sau ale glandelor salivare;
- de corpusculii rotunjiţi (corpusculii Berg) în hepatocite;
- de corpusculii colţuroşi (corpusculii Nissl sau tigroizi) în neuroni.
Există o strânsă corelaţie între aspectul şi reacţia tinctorială a
ergastoplasmei şi starea funcţională a celulei. În suprasolicitări funcţionale sau
în stări patologice ergastoplasma poate să dispară, fenomen numit cromatoliză,
observat la celulele nervoase.
Sub aspect ultrastructural REG este un compartiment al RE caracterizat
prin asocierea sa cu ribozomii sub formă de polizomi ataşaţi pe faţa externă a
cisternelor RE. Datorită ribozomilor ataşaţi la reticul, ergastoplasma conferă
bazofilie citoplasmei. REG reprezintă acea parte a sistemului endomembrar în
care predomină componentele cisternale aplatizate, grupate în pachete şi
interconectate prin canalicule subţiri. Spaţiile intracisternale sunt de dimensiuni
variabile; când sunt foarte înguste membranele RE apar strâns apropiate, când
sunt largi conţin un material floculent, de densitate electronică diferită. Acest
material reprezintă produsul de sinteză de natură polipeptidică elaborat de
ribozomi, injectat şi segregat intracisternal, cum apare de exemplu la
plasmocite, unde cisternele REG, foarte numeroase şi largi, conţin un material
granulo-filamentos cu densitate electronică redusă.
Reticulul endoplasmatic granular (rugos) se găseşte aproape în toate
tipurile de celule; prezintă însă mari variaţii cantitative în raport cu tipul celular
şi starea funcţională a celulelor. Este foarte bine reprezentat în:
- celulele glandulare implicate în sinteza de proteine de secreţie („de
export”) cum sunt celulele pancreatice exocrine (34% din volumul citoplasmei
este reprezentat de REG), celulele seroase ale glandelor salivare, celulele
glandulare tiroidiene, hipofizare, celulele neurosecretoare hipotalamice, etc.
- celulele producătoare de proteine serice cum sunt hepatocitele,
plasmocitele;
- celulele de tip conjunctiv care produc componenţii materiei conjunctive
intercelulare, (tropocolagen, elastină şi alţi componenţi matriciali) cum sunt:
fibroblastele, condroblastele, osteoblastele.
REG ca şi REN sunt structuri dinamice şi labile. Abundenţa sau
reducerea lor oferă indicii cu privire la activitatea de elaborare a unor produşi în
care sunt implicate aceste organite. în cazul REG, ataşarea polizomilor la
cisternele RE este un proces tranzitoriu, dar obligatoriu în cursul sintezei
diferitelor proteine. Când procesul de sinteză a încetat, polizomii se detaşează
de cisternele RE.
26
Ergastoplasma poate fi observată la microscopul optic pe secţiuni prin
pancreas de mamifer, colorate cu hemalaun-eozină sau cu verde de metil-
pironină.
Celulele glandulare ale pancreasului exocrin sunt organizate în acini
glandulari de formă ovalară. Celulele acinare au formă piramidală cu vârful
rotunjit. Ele prezintă un pol bazal larg, unde începe elaborarea produsului de
secreţie la nivelul REG şi un pol luminai (apical) îngust, unde produsul de
secreţie este eliminat prin exocitoză în lumenul acinului. În acinii secţionaţi
transversal celulele glandulare au contur triunghiular. În porţiunea bazală a
celulei se află nucleul veziculos, cu 1-2 nucleoli şi ergastoplasma sub formă de
lamele paralele, orientate perpendicular pe polul bazal. Uneori lamelele de
ergastoplasma se orientează concentric constituind mici corpusculi, numiţi
parazomi. Ergastoplasma sub formă de lamele paralele, cât şi sub formă de
parazomi se colorează în roşu cu pironină sau în violet cu hemalaunul la fel ca
şi nucleul. În polul luminal se observă mici granule de secreţie ca o pulbere fină,
ce se colorează în roz luminos cu eozină (celula are dublă afinitate tinctorială;
pol bazal-bazofil, pol apical-acidofil).
Ultrastructura ergastoplasmei sub formă de lamele paralele şi de lamele
concentrice poate fi examinată şi pe electronofotografii ce reprezintă fragmente
din polul bazai al unei celule pancreatice exocrine de mamifer, unde REG se
prezintă sub formă de cisterne aplatizate cu spaţiul intracisternal redus, asociate
în pachete (stive). Pe faţa externă a membranelor RE se disting numeroşi
poliribozomi ataşaţi.
În celulele nervoase (neuroni) ergastoplasma prezintă un aspect cu totul
particular. Ea apare sub forma unor aglomerări dense, puternic bazofile, cu
contur neregulat, cunoscute sub numele de substanţă cromatofilă, corpusculi
Nissl sau corpusculi tigrozi. Corpusculii Nissl reprezintă aglomerări dense de
REG, separate prin fascicule de neurofibrile, care străbat corpul celular pe
diferite direcţii, în raport cu polii de emergenţă ai prelungirilor neuronale. Pe
preparatele histologice pot fi evidenţiaţi cu albastru de metilen.
Aspectul, localizarea şi cantitatea de ergastoplasmă (corpusculi Nissl)
variază în raport cu vârsta, starea funcţională a neuronului şi cu tipul
morfofuncţional al acesteia. La neuronii motori ergastoplasmă este mult mai
abundentă, aşa cum vom observa la neuronii somatomotori mari α din coarnele
anterioare ale măduvei spinării în neuroni, corpusculii Nissl populează toată
citoplasmă pericarionului, pătrunzând şi în polurile de emergenţă ale dendritelor
(rădăcina dendritelor), dar nu şi în conul de emergenţă al axonului.
Cisterna perinucleară formează învelişul nuclear (membrana nucleară
dublă) ce delimitează conţinutul nucleului în interfază, când nucleul constituie
un compartiment celular distinct, separat de restul citoplasmei. Cisterna
perinucleară este vizibilă numai pe electronofotografii şi este formată din
membrana nucleară internă şi membrana nucleară externă, care delimitează
spaţiul intracisternal sau perinuclear.
27
Complexul Golgi (CG)
Este un compartiment celular şi respectiv un organit citoplasmatic prezent
în majoritatea celulelor, fiind situat între RE şi plasmalemă.
În microscopia optică CG, evidenţiat prin impregnare cu azotat de argint
sau cu tetraoxid de osmiu (OsO4), apare fie sub formă de elemente izolate,
numite golgiozomi sau dictiozomi (corpusculi desprinşi din reţea; gr. diktyos =
reţea, soma = corp). În raport cu tipul celular, dictiozomii sunt de formă ovalară,
discoidală sau lenticulară.
La microscopul optic complexul Golgi poate fi examinat în neuronii din
ganglionii spinali de la un mamifer. Preparatele microscopice sunt obţinute cu
tehnica Kolacev-Nasonov prin impregnare cu OsO4. La nivelul
citomembranelor golgiene de natură lipoproteică, OsO4 este redus în dioxid de
osmiu OsO2 de culoare neagră care se depune pe suprafaţa lor şi astfel unităţile
golgiene (dictiozomii) apar colorate în negru.
În ganglionii spinali, care conţin neuroni pseudounipolari de talie mică,
mijlocie şi mare, complexul Golgi se prezintă diferit: sub formă de reţea
perinucleară în neuronii mici, sub formă de dictiozomi cu dispunere
perinucleară în neuronii mijlocii sau dictiozomii dispersaţi în toată citoplasmă,
în neuronii mari.
Dictiozomii din neuronii ganglionilor spinali au formă lenticulară
convex-concavă şi prezintă două zone diferit colorate-cromofilă şi cromofobă,
care se pot distinge prin examinarea atentă cu obiectivul de imersie (90 x).
Zona cromofilă, convexă, intens colorată în negru, corespunde stivei de
cisterne, unde densitatea de citomembrane (respectiv de structuri lipoproteice)
este mai mare şi prin urmare la acest nivel se va reduce mai puternic OsO4 în
OsO2 de culoarea neagră.
Zona cromofobă, slab colorată, dispusă în concavitatea zonei cromofile,
corespunde zonei ocupate de macrovezicule, distanţate între ele, nivel la care
OsO4 redus va fi în cantitate mai mică.
În microscopia electronică, dictiozomii apar alcătuiţi din stive de cisterne
aplatizate asociate cu micro- şi macrovezicule; toate aceste componente având
citomembrane cu suprafaţa netedă. În celulele glandulare exocrine, dictiozomii
în număr variabil sunt situaţi supranuclear. Fiecare dictiozom este format dintr-
un număr de 3-10 (număr constant pentru acelaşi tip celular) cisterne discoidale,
aplatizate în partea centrală şi uşor dilatate la periferie. Fiecare cisternă poate
avea un diametru de 0,5 µm fiind pe alocuri fenestrată. Stiva de cisterne
prezintă o faţă cis, convexă (faţa proximală sau imatură sau polul formator) şi o
faţă trans, concavă (faţa distală sau matură, sau polul de maturare). Pe faţa cis,
cisternele interacţionează cu elementele tranziţionale desprinse din REG. Între
cisternele tranziţionale ale REG şi polul formator ca şi în jurul circumferinţei
cisternelor golgiene se află un număr variabil de microvezicule cu conţinut
electronoclar. Pe faţă trans cisternele sunt mai dilatate şi conţin un material
28
filamentos cu densitate electrică medie. Această faţă se află în relaţie cu
macrovezicule (în număr variabil), mai mult sau mai puţin dilatate de produsele
de secreţie, aflate în diferite stări de condensare, având de aceea
electronodensitate diferită. Macroveziculele (vacuolele golgiene) provin prin
fragmentarea cisternelor de pe faţa trans.
La nivelul CG au fost identificate enzime ca: fosfataza alcalină,
adenozintrifosfataza (ATP-aza); 5-nucleotidaza; tiamin pirofosfataza (TPP-
aza); nicotindinucleotid fosfata (NDP-aza); glucoziltransferaza şi galactozil-
transferaza, ultimele două fiind considerate enzime marker.
Complexul Golgi constituie un compartiment de transfer, de prelucrare
(modificare), de concentrare (condensare) şi de împachetare a unor proteine
specifice: enzime, mucus, hormoni, coloid, neurosecreţie, glicoproteine
membranare şi matriceale a căror sinteză a fost iniţiată la nivelul ribozomilor
ataşaţi la RE. în tranzitul prin CG proteinele sunt modificate prin proteoliză
parţială şi glicozilare sau sulfatare terminală. Pe faţa trans, prin fragmentarea
cisternelor dilatate, se realizează împachetarea produsului de secreţie (aflat într-
o anumită fază de concentrare) în vezicule, care prin fuzionare vor forma
vacuole sau granule de secreţie. Concentrarea şi remanierea suplimentară a
produsului de secreţie poate continua şi după detaşarea vacuolelor de pe faţa
trans a dictiozomului.
Concentrarea conţinutului se realizează prin formarea de agregate sau
complexe moleculare, concomitent cu eliminarea pasivă a apei din vacuole în
citosol. Concentrarea produselor de secreţie şi formarea de granule secretorii
este caracteristică pentru acele celule glandulare care depozitează produsul de
secreţie intracelular. Aceasta le dă posibilitatea să-l elibereze în bloc prin
stimularea lor de către hormoni sau neurotransmiţători.
Lizozomii
Sunt organite cu funcţie litică; ei determină catabolismul produşilor
biologici prin hidroliză. Sunt prezenţi în toate tipurile de celule şi sunt foarte
numeroşi în celulele capabile de fagocitoză (granulocite, monocite, macrofage,
etc); lipsesc din hematiile mature.
Lizozomii pot fi observaţi pe electronofotografii sub forma unor
corpusculi ovoizi (0,2-0,5 µm) cu un conţinut fin granular, electonodens,
delimitat de o endomembrană sau pe secţiuni la microscopul optic, evidenţiaţi
prin tehnici histochimice pentru enzimele marker.
În lizozomi au fost identificate peste 50 de enzime, capabile sa
hidrolizeze compuşii biologici în mediul slab acid (pH.5), numite generic
hidrolaze acide.
Dintre enzimele lizozomale menţionăm:
- RN-aza şi DN-aza acidă (pentru ARN şi ADN);
- proteaze acide, catepsine, fosfoproteinfosfataze, colagenaze (pentru
diferite proteine);
29
- glucozidază, galactozidază, manozidază, fucozidază, N-acetilglucoza-
minidază, sialidază, hialuronidază, glucuronidază (pentru hexoze, hexozamine,
glicoproteine, glicolipide);
- lipaze acide, fosfolipaze, ceraminidază, sfingomielinază (pentru lipide);
- arilsulfatază, sulfaminidază (pentru sulfoesteri);
- esteraze, fosfataza acidă (pentru fosfosteri).
Enzimele marker pentru identificare lizozomilor pe fracţii celulare, sunt
fosfataza acidă, catepsina C, N-acetilglicozaminidaza, iar pentru secţiuni sunt
fosfataza acidă, arilrsulfataza.
Datorită heterogenitaţii enzimatice, lizozomii au capacitatea să
hidrolizeze o gamă variată de substanţe ca: acizi nucleici, aminoacizi, proteine
simple şi complexe, glicoproteine, fosfoproteine, lipoproteine, proteoglicani,
glicozaminoglicani, glicolipide, acizi graşi, etc.
În celule lizozomii prezintă o latenţă şi o stabilitate enzimatică; enzimele
delimitate de endomembrane acţionează numai pe produşii biologici care se
ataşează şi pătrund în interiorul lizozomilor.
Lizozomii se clasifică în: lizozomi primari, lizozomi secundari şi terţiari
care în ansamblu formează sistemul lizozomal.
Lizozomii primari (granule de depozitare) sunt corpusculi mici, cu
conţinut enzimatic sintetizat la nivelul RER, prelucrat şi împachetat la nivelul
complexului Golgi în vezicule distincte ca în cazul granulaţiilor azurofile din
leucocite.
Lizozomii secundari (fig 41) reprezintă rezultatul asocierii lizozomilor
primari cu diferiţi produşi endo - sau exocelulari, fiind la rândul lor de mai
multe feluri:
- heterofagozomii (vacuole digestive) ce se formează după endocitoza
(fagocitoza sau pinocitoza) unui produs exogen şi rezultă prin asocierea
fagozomului cu lizozomii primari. Pot fi examinaţi la microscopul optic în
celulele Kupffer, la nivelul ficatului, printr-o metodă de coloraţie intravitală cu
carmin litinat, albastru sau roşu tripan.
- autofagozomii (vacuole autofagice, citolizomi sau citosegrozomi) sunt
de dimensiuni mai mari (0,6-1,8 µm) şi conţin părţi din celulă cu organite
citoplasmatice alterate sau îmbătrânite (REN, RER, mitocondrii, granule de
secreţie), care vor fi supuse procesului de digestie enzimatică.
Lizozomii secundari dau reacţie pozitivă pentru fosfatază acidă, ca şi
lizozomii primari; pot fi evidenţiaţi pe cale histochimică.
- corpii reziduali consideraţi tot o formă de lizozomi secundari (după unii
lizozomi terţiari), rezultă din heterofagozomi sau au-tofagozomi în cazul în care
digestia enzimatică nu este completă. Corpii reziduali sunt de dimensiuni
diferite şi sunt mai numeroşi în celulele îmbătrânite (de ex. granulele de
lipofucsină sau pigmentul galben de uzură din neuronii şi miocardocitele
indivizilor în vârstă). Corpii reziduali au numeroase implicaţii patologice; în
absenţa unor enzime lizozomale, datorată unor cauze genetice, în celule, se
30
acumulează cantităţi mari de corpi reziduali, care în final duc la distrugerea
celulelor respective.
Lizozomii sunt implicaţi în diferite procese de digestie enzimatică şi
anume:
- heterofagia - digestia enzimatică a produşilor exogeni (străini celulei);
- autofagia - digestia locală a unor organite alterate; permite degajarea
hialoplasmei de infrastructurile alterate, uzate morfofuncţional;
- crinofagia - o formă particulară de autofagie caracteristică celulelor
glandulare, cu rol în distrugerea excesului de secreţie;
- autoliza - proces de digestie generalizată care afectează întreaga celulă;
în acest caz lizozomii eliberează simultan hidrolazele acide în citosol, acţionând
asupra întregului conţinut celular.
Pe aceste căi lizozomii intervin în numeroase procese biologice;
- de apărare a organismului, în procese patologice;
- de distrugere a celulelor traumatizante, senescente sau a matricei
extracelulare;
- de distrugere a unor primordii embrionare, cu viaţă temporară;
- de remaniere a unei părţi din celulă, sau a materiei extracelulare; de
regenerare.
Peroxizomii
Sunt corpusculi mici asemănători cu lizozomii primari (0,5 µm). Prezintă
un conţinut fin granular sub formă de reţea sau cristaloid. Conţin enzime ca:
uratoxidază, peroxidază, catalază-enzima marker, implicate în metabolismul
H2O2 (peroxidul de hidrogen). Uratoxidază împreună cu alte enzime intervin în
formarea H2O2, iar catalaza descompune H2O2 care este toxic pentru celule.
Mitocondriile
Reprezintă compartimentul celular unde are loc conversia energiei. Sunt
prezente în toate celulele cu respiraţie aerobă. Numărul lor variază de la un tip
celular la altul, dar este relativ constant în cadrul aceluiaşi tip. Sunt foarte
numeroase în celule musculare şi celulele epiteliilor glandulare. Astfel, în
miocardocitele ventriculare, mitocondriile ocupă 35% din volumul citoplasmei,
în celulele parietale ale glandelor fundice - 27% din volumul citoplasmei, în
hepatocite 15-20%.
Totalitatea mitocondriilor dintr-o celulă constituie condriomul.
Forma şi dimensiunile mitocondriilor variază în raport cu tipul celular,
dar şi cu starea funcţională a celulei, cu modificarea pH sau a echilibrului
osmotic. La microscopul optic apar cu structură omogenă, sub formă de granule,
bastonaşe, filamente, de unde şi denumirea lor de mitocondrii (gr. mitos
-filament, chondrion - granulă). Frecvent mitocondriile au dimensiuni cuprinse
între 0,2-0,7 µm grosime şi 1-7µ lungime sau mai mult. În hepatocite
mitocondriile sunt mici, elipsoidale (0,5/3µm.); în nefrocitele din tubul contort
31
proximal şi distal, în celulele pancreatice acinare, în fibrele musculare striate,
mitocondriile sunt alungite sau filamentoase.
Mitocondriile sunt organite cu o structură foarte labilă, care se alterează
uşor, de aceea fixarea trebuie făcută în fixatorii etiologici care conţin tetraoxid
de osmiu (ac. osmic) şi bicromat de potasiu pentru microscopia optică, iar
pentru microscopia electronică în fixatori ce conţin glutaraldehidă şi tetraoxid
de osmiu, tamponaţi la pH fiziologic.
Pentru examenul mitocondriilor în microscopia optică se recomandă
secţiuni prin ficat, rinichi, muşchi striat prelucrate după tehnici citologice
(fixare în lichid Benoit, Champy) - colorare hematoxilină ferică, caz în care
mitocondriile apar colorate în negru sau cu fucsina Altmann, colorate în roşu,
fie tehnici citochimice (pentru evidenţierea enzimelor marker citocromoxidaza,
succinat dehidrogenaza). Mitocondriile pot fi evidenţiate şi prin coloraţii vitale
(pe celule vii) cu verde Janus.
În hepatocite, mitocondriile apar sub formă de granule negre dispersate în
toată citoplasmă; în nefrocitele din tubul contort proximal şi distal al
nefromului, mitocondriile sunt alungite, dispuse mai ales la polul bazal al
celulelor.
Ultrastructura mitocondriei va fi exemplificată pe electronofotografii.
Indiferent de formă mitocondriile au aceeaşi organizare ultrastructurală.
Ele sunt alcătuite dintr-o membrană mitocondrială externă, netedă şi o
membrană mitocondrială internă, care trimite spre interiorul mitocondriei
prelungiri lamelare sau tubulare numite creste mitocondriale. Membranele
mitocondriale delimitează două compartimente distincte:
- un compartiment mitocondrial extern - cuprins între membrana
mitocondrială externă şi cea internă; compartiment îngust, cu densitate
electronică redusă, care se prelungeşte şi în axul crestelor mitocondriale;
- un compartiment mitocondrial intern mai larg, delimitat de membrana
mitocondrială internă; el conţine matricea mitocondrială cu densitate
electronică diferită în raport cu tipul celular şi starea funcţională a celulei.
Matricea conţine ADN şi ribozomi mitocondriali, precum şi granule cu
densitatea electronică mare - depozite de Ca2+ - mitocondriile fiind implicate în
captarea şi cedarea calciului ionic în cursul unor procese biologice ca:
exocitoza, transmiterea sinoptică a impulsului nervos, contracţia musculară,
etc.
Crestele mitocondriale, septate sau tubulare cu dimensiuni variate,
măresc considerabil suprafaţa membranei mitocondriale interne. Există o
strânsă corelaţie între numărul crestelor şi intensitatea consumului energetic; la
miocardocitele ventriculare crestele mitocondriale sunt mult mai numeroase şi
dispuse ordonat decât la alte tipuri de celule.
Prin colorarea negativă şi examinarea la microscopul electronic de înalt
voltaj, la nivelul membranei mitocondriale au fost evidenţiate particule
elementare (oxidozomi), de forma unor ciupercuţe dispuse la intervale regulate
32
de 10 nm. O particulă elementară prezintă o piesă bazală un segment de legătură
şi o extremitate globulară. Într-o mitocondrie, particulele elementare sunt de
ordinul miilor sau al zecilor de mii (40.000-50.000 în mitocondria
miocardocitului ventricular). Fiecare particulă elementară cuprinde sistemele
enzimatice ale unui lanţ respirator complet.
Mitocondriile reprezintă sediul respiraţiei celulare, intervenind prin
sistemele enzimatice în metabolizarea aerobă a glucidelor, lipidelor şi
protidelor. Ele eliberează energia din substanţele de provenienţă exogenă
(substanţe alimentare absorbite la nivel intestinal sub formă de monozaharide,
acizi graşi, glicerol, aminoacizi) sau de provenienţă endogenă (produşi
intermediari ai metabolismului glucidic, lipidic, protidic). Aceste substanţe sunt
supuse reacţiilor de oxido-reducere în cadrul ciclului Krebs până la produşi
finali nemetabolizabili (H2O, CO2) cu eliberarea totală a energiei.
Energia chimică eliberată treptat la nivel mitocondrial este utilizată pentru
sinteza ATP-ului sau a altor compuşi fosfat macroergici, de unde apoi este
eliberată prin hidroliză şi folosită de celule pentru diferite activităţi: contracţie
musculară, conducerea şi transmiterea impulsului nervos, transport activ prin
membrane, sinteze de orice fel, etc.
Ribozomii
Ribozomii (granulele Palade sau granule de ribonucleoproteine) sunt
particule submicroscopice cu dimensiuni de 25-30 nm. Sunt prezenţi în toate
celulele, dar sunt mai abundenţi în celulele tinere şi în acelea care sintetizează
proteine de secreţie. Când se află în cantitate mare conferă bazofilie
citoplasmei.
Au fost evidenţiaţi de G.E. Palade în celulele pancreatice acinare prin
studii de microscopie electronică pe fracţia microzomală, urmate apoi de
cercetări de citochimie, citoautoradiografie, biochimie, care au demonstrat
conţinutul lor bogat în ARN, de unde şi numele de ribozomi (granule de
ribonucleoproteine).
În stare funcţională ribozomii sunt asociaţi în polizomi (poliribozomi),
care pot fi liberi în hialoplasmă sau ataşaţi la suprafaţa cisternelor RE, cu care
formează RER (REG). Numărul ribozomilor într-un polizom este fix şi corelat
cu mărimea moleculei proteice ce urmează a fi sintetizată, în polizomi,
ribozomii sunt legaţi între ei printr-o moleculă filamentoasă de ARN-m, care
trece printre subunitatea mică şi cea mare; tratarea polizomilor cu RN-ază
determină disocierea lor în subunităţile din care se compun.
Fiecare ribozom (unitate ribozomală) este format din două subunităţi -
mică şi mare, de forme şi dimensiuni diferite, având coeficient diferit de
33
sedimentare (valoare S sau Svedberg). În funcţie de aceşti parametri se disting
două feluri de ribozomi:
a) - ribozomi de tip 70 S, caracteristici procariotelor (bacterii şi alge
albastre-verzi), formaţi dintr-o subunitate mică de 30 S şi o subunitate mare de
50 S; conţin 65% ARN-r şi au diametru de 14-24 nm.
b) - ribozomi de 80 S, caracteristici celulelor eucariote (plante şi animale),
formaţi din subunitatea mică de 40 S şi subunitatea mare de 60 S; conţin 45%
ARN-r; au un diametru de 20-30 nm.
Cele două subunităţi se menţin asociate într-o unitate ribozomală numai
la o concentraţie optimă a Mg++ (0,001 M). Dacă această concentraţie creşte se
formează dimeri sau polimeri, iar dacă concentraţia Mg++ scade, ribozomii se
disociază în subunităţile sale corespunzătoare.
Pe lângă ARN, compoziţia chimică a ribozomilor include şi proteine care
variază, în raport cu specia. Proteinele ribozomale au greutate moleculară mică
(13.000-25.000) şi sunt bogate în aminoacizi ca: arginină, lizină, acid aspartic,
acid glutamic.
Ribozomii reprezintă aparatul de sinteză al proteinelor. Polizomii liberi
din hialoplasmă sunt implicaţi în sinteza proteinelor specifice care nu părăsesc
celula, respectiv în sinteza proteinelor de structură şi a proteinelor enzirne care
catalizează diferite reacţii ale metabolismului celular; polizomii ataşaţi
cisternelor RE participă la sinteza proteinelor de secreţie „proteine de export”,
care sunt eliminate din celulă prin exocitoză.
Centrozomul
Centrozomul (centrul celular) este prezent în toate celulele care se divid
pe cale mitotică; este absent în celulele nervoase.
În intercineză, centrozomul apare format din centrosferă şi centrioli, la
care se ataşează asterul când celula intră în diviziune.
Centrosfera reprezintă o zonă densă de hialoplasmă de formă sferică sau
ovoidă, mult mai densă decât citoplasmă ambiantă; este situată în vecinătatea
nucleului.
Asterul apare la începutul profazei; este format din microtubuli cu
dispoziţie radială în raport cu centrosferă. La microscopul optic se prezintă ca
ozonă filamentoasă a citoplasmei.
Centriolii în număr de doi, sunt localizaţi în centrosferă. La microscopul
optic apar sub formă de granule sau bastonaşe scurte, dispuse perpendicular
unul pe celălalt. La microscopul electronic centriolul se prezintă ca un
microcilindru (0,15µm în diametru, 0,35 µm lungime).
Este format din 9 triplete de microtubuli. În tripletă microtubulii sunt
indicaţi cu: A, B, C în raport cu poziţia lor faţă de axul centriolului. Tripletele
34
sunt dispuse la periferia microcilindrului asemenea paletelor unei turbine.
Tripletele sunt formate din microtubuli alipiţi (numai microtubulul A are 13
protofilamente, microtubulii B şi C au doar câte 10 protofilamente, deoarece
microtubulii sunt concrescuţi: C→B→A). Tripletele sunt legate prin conectori
periferici, iar de matricea axială printr-un sistem tip „spiţe de roată”.
La microtubulul C al fiecărei triplete se ataşează diferite formaţiuni
anexe, electronodense - sateliţi şi lame alare. Sateliţii sau picioruşele bazale
sunt structuri cilindrice cu capătul butonat; lamele alare sunt expansiuni
lamelare cu contur triunghiular. La formaţiunile anexe se ancorează
microtubuli.
La celulele ciliate şi flagelate, la baza cililor şi flagelilor se află structuri
asemănătoare centriolilor, cunoscute sub numele de corpusculi bazali sau
cinetozomi (kinetozomi); la aceştia sunt caracteristice lamele alare.
Centriolii au un rol deosebit în pregătirea şi desfăşurarea mitozei. Înainte
de începutul profazei centriolii se duplică, iar cele două perechi de centrioli
migrează la polii opuşi ai nucleului. Ei induc polimerizarea dimerilor de
tubulină ce formează asterul şi fusul mitotic. Fusul mitotic se întinde de la un
pol la altul între cele două perechi de centrioli şi devine vizibil după
dezasamblarea cisternei perinucleare. Este format din două categorii de
microtubuli:
- unii se întind de la un pol la altul al fusului mitotic;
- alţii se întind de la cinetocorul cromatidelor la polii fusului, legând
fiecare cromatidă a cromozomului metafazic de unui din poli; au rol în
deplasarea cromozomilor (în anafază) spre polii fusului mitotic.
Pe lângă microtubuli, fusul mitotic mai cuprinde în structura sa
microfilamente de actină şi miozină, iar la periferia sa, filamente intermediare.
În interfază, centrozomul (centrul celular) plasat de regulă în vecinătatea
nucleului, controlează distribuţia organiteior în hialoplasmă şi polaritatea
celulară. Centriolii acţionează ca organizatori dominanţi, care determină poziţia
zonei dense pericentrionale (centrosferă).
Centrozomul constituie centrul formator al microtubulilor, care determină
deplasarea intracelulară a diferitelor organite, poziţionarea lor, precum şi alte
procese de motilitate celulară.
35
Organizarea ultrastructurală a cilului
Cilii au dimensiuni cuprinse între 0,2-0,5 µm grosime şi câţiva µm
lungime. Prezintă 3 părţi componente:
- axonema sau filamentul axial - partea liberă a cilului
- gr anului (corpusculul) bazal sau cinetozomul, situat în ectoplasmă, la
baza axonemei
- rădăcina cilului, care pătrunde în citoplasmă (în endoplasmă).
Organizarea ultrastructurală a axonemei poate fi examinată pe
electronofotografii. Este formată din 2 microtubuli centrali - dubleta centrală
plasaţi în matricea axială, slab electronodensă. În jurul dubletei centrale se află
o teacă matriceală fină. Microtubulii dubletei centrale (20 nm grosime) sunt
plasaţi la distanţă de 10 nm şi constituiţi fiecare din 13 protofilamente formate
din heterodimeri de tubulină. La periferia axonemei se află 9 dublete de
microtubuli - dubletele periferice alcătuite în total din 23 de protofilamente,
deoarece microtubulii sunt parţial concrescuţi (B→A).
De pe microtubulul A al dubletelor periferice pornesc şiruri longitudinale
de „braţe” prelungiri scurte orientate spre microtubulul B al dubletei vecine.
Braţele sunt alcătuite din dineină - o proteină cu proprietăţi enzimatice
asemănătoare miozinei. Ca şi miozina din fibrele musculare, hidrolizează ATP
în prezenţa Ca++ eliberând energia necesară mişcării cilului, determinată de
stabilirea reversibilă a unor legături transversale între microtubuli ce conferă
motilitate cilului.
La nivelul joncţiunii cilului cu suprafaţa celulei există o zonă de tranziţie
placa bazală cu densitate electronică mai mare decât matricea axonemei. La
acest nivel se termină dubleta centrală şi numai dubletele periferice se continuă
cu microtubulii A şi B ai tripletelor cinetozomului. De cele mai multe ori
cinetozomii se prelungesc în endoplasmă cu filamente grupate în fascicule ce
alcătuiesc rădăcina ciclului. Aceasta poate ajunge până în apropierea nucleului,
având rol de ancorare a cilului în citoplasmă.
36
Fibrilele groase ca şi teaca circumferenţială dispar către extremitatea
posterioară, flagelul fiind constituit numai din filamentul axial.
Cilii şi flagelii îndeplinesc diferite funcţii specifice tipului celular:
- la celulele mobile asigură deplasarea celulelor în mediu lichid (ex.
protozoarele ciliate, flagelii spermatozoizilor majorităţii metazoarelor).
- la celulele fixe, încadrate într-un epiteliu, mişcarea cililor provoacă
deplasarea fluidelor, sau a particulelor de la suprafaţa epiteliilor având rol în
curăţirea suprafeţei epiteliilor, ex. epiteliul căilor respiratorii; de transport al
ovocitelor în tubele uterine, etc.
NUCLEUL
Nucleul (karyon) este componentul central al celulei şi reprezintă partea
cea mai specializată din celulă (gr. karyon = lat. nucleus = sâmbure). Nucleul
conţine genomul - totalitatea genelor care reprezintă determinantele eredităţii. În
raport cu specia, genomul este reprezentat de un număr diferit de molecule mari
de ADN, în structura cărora este codificată informaţia genetică, respectiv
programul tuturor proceselor vitale, care se desfăşoară în celulă. În celula
animală, celulă eucariotă, nucleul se prezintă diferit în funcţie de fazele ciclului
celular. În interfază (intervalul dintre două diviziuni succesive) nucleul
reprezintă un compartiment intracelular distinct, separat de restul citoplasmei
prin membrana nucleară. In această fază a ciclului celular, nucleul este
constituit din membrana nucleară, care delimitează nucleoplasma (karioplasma),
ce conţine cromatina nucleara şi unul sau mai mulţi nucleoli.
Există mari variaţii în ceea ce priveşte numărul, forma şi dimensiunile
nucleilor în funcţie de tipul celular. Marea majoritate a tipurilor celulare au un
singur nucleu (celule uninucleate sau mononucleate); există însă şi celule
binucleate, polinucleate sau anucleate. Forma nucleului la multe tipuri celulare
este corelată cu forma generală a celulei, astfel: nucleii sunt sferici la celulele
izodiametrice, ovoizi la celulele prismatice, alungiţi sub formă de bastonaş în
celulele la care lungimea este dimensiunea dominantă sau de diverse alte forme
(lobat, incizat, ramificat, reniform, segmentat sau moniliform). Toate aceste
aspecte raportate la numărul, forma şi dimensiunea nucleilor pot fi urmărite pe
parcurs în cadrul prezentării diferitelor tipuri de ţesuturi.
Acum ne vom referi doar la organizarea ultrastructurală a componentelor
nucleului interfazic aşa cum apare pe electronofotografii.
Membrana nucleară este dublă şi reprezintă o parte specializată a
reticulului endoplasmic, fiind constituită din cisterne aplatizate dispuse într-un
singur plan la periferia conţinutului nuclear (nucleoplasmei), de unde şi numele
de cisterna perinucleară. Aceasta este formată din membrana nucleară externă
şi membrana nucleară internă, care delimitează spatul intracisternal perinuclear.
Membrana externă a cisternei perinucleare (membrana nucleară externă)
se continuă cu membranele RE, iar spaţiul intracisternal perinuclear comunică
cu spaţiile reţelei RE. Membrana nucleară externă are o structură similară cu
37
membranele RE; ca şi acestea, poate prezenta polizomi ataşaţi, implicaţi în
sinteza de proteine ce vor segrega în spaţiul intracisternal perinuclear.
Membrana internă a cisternei perinucleare (membrana nucleară internă)
este diferită de cea externă. Ea se sprijină pe o structură lamelară, numită
lamina densă (lamina fibroasă) ce asigură menţinerea formei nucleului. Lamina
densă, de grosime diferită (mai groasă la nucleii mari) se intercalează între
membrana nucleară internă şi cromatina nucleară şi are o electronodensitate mai
redusă decât primele două. În regiunea porilor nucleari lamina densă se continuă
cu materialul inelar al porului.
Cisterna perinucleară este fenestrată; fiecare minusculă fereastră, numită
por nuclear, are un diametru de aproximativ 80 nm. Porii nucleari cu structură
complexă sunt delimitaţi de formaţiuni inelare numite annuli sau „complexul
por”. Porii sunt acoperiţi de o diafragmă (componentă a „complexului por”),
fapt pentru care ei se disting mai greu pe faţa citoplasmatică a membranei
nucleare, fiind mai evidenţi pe faţa nucleară a membranei nucleare interne. Prin
porii nucleari se realizează schimburile, în ambele sensurile unor
macromolecule sau ansambluri macromoleculare. Numărul porilor pe unitatea
de suprafaţă a învelişului nuclear este direct corelat cu intensitatea acestor
schimburi.
Cisterna perinucleară nu are o existenţă permanentă; ea se dezorganizează
spre sfârşitul fiecărui ciclu celular, odată cu declanşarea mitozei (la sfârşitul
profazei) şi se reface către sfârşitul mitozei, (la sfârşitul telofazei), din cisternele
RE dispersate în citoplasmă.
Cromatina nucleară
La nucleii interfazici cromatina nucleară se prezintă sub formă de
eucromatină şi heterocromatină (fig. 56, 57).
Eucromatină = cromatina bună, (gr. eu = element de compunere cu
semnificaţia, bun, bine) este cromatina laxă, cu electronodensitate
redusă,dispersată dezordonat în carioplasmă.
Este constituită din filamente fine care aparent formează o reţea. Ea
reprezintă zonele despiralizate ale cromozomilor la nivelul cărora are loc
transcrierea informaţiei genetice. Eucromatină caracterizează nucleii luminoşi,
veziculoşi, activi din punct de vedre metabolic.
Heterocromatină (gr. heteros = altul, diferit) altă cromatina, cromatina
densă, cu electronodensitate mult mai mare. Este localizată de regulă lângă
membrana nucleară sau în jurul nucleolilor, şi lipseşte în dreptul porilor
nucleari. Heterocromatină reprezintă segmentele condensate ale cromozomilor
neimplicate în transcriere. Pe preparatele histologice heterocromatină se
prezintă sub formă de particule relativ, dense de formă şi mărime variabilă, care
se colorează intens cu coloranţii bazici. Heterocromatină caracterizează nucleii
hipercromatici mai puţin activi, iar în cazul celulelor degenerate în care
38
transcrierea se apropie de un punct mort - proces numit picnoză,
heterocromatină confluează în mase dense ce caracterizează nucleii picnotici.
Heterocromatină se poate transforma în eucromatină şi invers în raport cu
starea funcţională a celulei, aşa că mărimea şi distribuţia particulelor de
heterocromatină se poate schimba în timp, din moment ce în funcţie de
metabolismul celular, alte segmente ale cromatinei (ale cromozomilor
interfazici) devin accesibile transcrierii.
Nucleolul
Se prezintă ca un corpuscul distinct numai în nucleii interfazici. Aspectul
morfologic, mărimea, numărul şi poziţia nucleolilor în karioplasmă diferă în
raport cu tipul celular şi cu activitatea metabolică a celulei. Numărul nucleolilor
este de regulă corelat cu gradul de poliploidie a nucleului (un nucleol pentru
fiecare set haploid de cromozomi). Aspectul morfologic şi mărimea nucleolilor
reflectă intensitatea producţiei de ribozomi şi deci intensitatea sintezei de
proteine destinate creşterii celulare sau secreţiei. Poziţia nucleolilor în
karioplasmă exprimă relaţiile de schimb cu citoplasmă la nivelul porilor
nucleari; când schimburile sunt intense nucleolii sunt lipiţi de membrana
nucleară. Toate aceste aspecte pot fi urmărite pe parcurs la diferite tipuri de
celule, în cadrul studierii ţesuturilor. Pe preparatele histologice nucleolii se
colorează cu coloranţii bazici ca şi cromatina nucleară, iar selectiv se colorează
cu coloranţii care evidenţiază ARN (cu pironina în roşu).
Din punct de vedere ultrastructural nucleolul cuprinde două componente
distuincte: pars amorpha, cu electronodensitate moderată, traversată de coroane
electronodense, dispuse în reţea, care constituie nucleolonema. Nucleolonema
cu aspect granulo-filamentos cuprinde pars granulosa şi pars fibrosa. La
periferia nucleolului, mai ales, se află pars cromozoma.
39
CROMATINA ŞI CROMOZOMII
CROMOZOMII METAFAZICI
40
Fiecare celulă sexuală umană prezintă un număr HAPLOID de
cromozomi notat cu „n”, iar fiecare celulă somatică prezintă un număr dublu de
cromozomi DIPLOID, notat cu „2n”.
Astfel, în celulele sexuale se găsesc 22 de cromozomi autozomi şi un
cromozom de sex.
Într-o celulă somatică se găsesc 44 de cromozomi autozomi şi 2
cromozomi de sex, deci 23 perechi de cromozomi.
Mărimea cromozomilor variază cu specia, lungimea poate fi între 1-25µ,
iar grosimea 0,1-2 µ. Lungimea cromozomului este proporţională cu numărul de
gene pe care le conţine. Dimensiunile pot fi modificate de temperatură sau de
tratarea cu anumite substanţe ( de ex, colchicina).
STRUCTURA CROMOZOMULUI
Cromozomul metafazic este alcătuit din:
• două cromatide identice;
• centromer;
• constrincţie primară;
• telomere.
CROMATIDA
Reprezintă unitatea morfologică şi funcţională a cromozomului.
Cromozomul metafazic prezintă 2 cromatide identice numite CROMATIDE
SURORI. Sunt unite între ele printr-un centromer până la sfârşitul metafazei
mitotice şi metafazei II meiotice.
CENTROMERUL
Este structura care împarte transversal cromozomul în 2 braţe: braţul scurt
(notat cu p) şi braţul lung (notat cu q). Orientarea cromozomilor în cariotip se
face cu braţul „p” în sus şi „q” în jos.
41
Centromerul are rol important în diviziune asigurând prin mitoză
distribuţia egală a fiecărui cromozom, de la celula mamă la celulele fiice.
Poziţia lui este fixă pentru fiecare cromozom şi la nivelul lui se găseşte ADN
satelit noninformaţional şi netrascriptibil precum şi proteine.
Regiunea centromerică a cromozomului este formată din constricţia
primară a cromatidelor surori şi o pereche de KINETOCORI. Aceştia reprezintă
situsurile de ancorare ale microtubulilor fusului de diviziune. Complexul
centromer-kinetocor reprezintă o regiune ultraspecializată structural şi
funcţional, ce integrează semnalele reglatorii necesare pentru iniţierea
condensării cromozomilor, progresia mitozei şi pentru menţinerea coeziunii
cromatidelor surori până la începutul anafazei.
Kinetocorii sunt structuri tranzitorii care se formează la sfârşitul profazei,
funcţionează în metafază şi anafază şi se dezasamblează în telofază.
Kinetocorul are o structură de disc trilaminar format parţial din fibre de
cromatină superior organizate la care se ataşează microtubuli kinetocorici care
aliniază cromozomii în planul ecuatorial al fusului de diviziune.
Fiecare cromozom este menţinut în tensiune în placa metafazică de
perechile de kinetocori şi de microtubulii asociaţi, ataşaţi la polii opuşi ai
fusului de difuziune.
Unii cromozomi prezintă regiuni îngustate numite constricţii secundare –
notate convenţional „h”. Constricţii secundare se găsesc la cromozomii
acrocentrici din grupele D şi G ale cariotipului şi pe braţele lungi, în apropierea
centromerului, la cromozomii 1, 9 şi 16.
Ele reprezintă segmente nespiralate de cromatină.
Cromozomii 13, 14, 15, 21, 22 – prezintă constricţii secundare pe braţul
scurt (ele separă sateliţii de braţele scurte).
La nivelul constricţiilor secundare se organizează nucleolii de unde şi
numele de organizatori nucleolari, atribuit acestor regiuni.
TELOMERUL
Porţiunile distale ale braţelor cromozomului poartă numele de
TELOMER.
În limba greacă telos = terminaţie, capăt
meros = segment, parte
Lungimea telomerelor este caracteristică speciei. La om = 5-20 kb
(kilobaze; 1 kb = 1000 perechi de baze). Au rol în menţinerea stabilităţii
cromozomiale, pierderea lor ducând la instabilitate cromozomială şi formarea
cromozomilor dicentrici.
Telomerele sunt frecvent asociate cu învelişul nuclear şi această
interacţiune joacă un rol important în organizarea cromatinei şi facilitează
iniţierea împerecherii cromozomilor omologi în meioză.
Telomerul, porţiunea terminală a cromozomului eucariot, îndeplineşte 3
funcţii:
42
1) în organizarea cromatinei şi facilitarea împerecherii cromozomilor în
meioză;
2) funcţionează ca o capsulă internă, împiedicând eventuale
rearanjamente cromozomiale;
3) în replicarea cromozomului.
Menţinerea capetelor cromozomilor este realizată prin sinteza „de novo”
de către o telomerază care sintetizează secvenţe telomerice pe matriţă de ADN
sintetizat „de novo”.
Telomeraza are rol în:
- menţinerea lungimii cromozomului;
- repararea lui, capetele rupte, instabile prin diferite mecanisme sunt
reparate spontan prin dobândirea de noi telomere.
SATELIŢII
În limba latină satelos = însoţitor.
Sateliţii reprezintă mase sferice, mici, de material cromatic, care se leagă
de capetele distale ale braţelor scurte ale cromozomilor prin intermediul
constricţiilor secundare.
Sunt prezenţi la nivelul braţelor scurte ale cromozomilor acrocentrici 13,
14, 15, 21, şi 22.
Mărimea sateliţilor este variabilă. Sateliţi mari au fost semnalaţi la
persoane cu sdr. Down, sdr. Marfan / anormalităţi sexuale.
Regiunile satelitice ale cromozomilor au tendinţa de a se asocia cu
nucleolul rezultând asociaţii satelitice ale mai multor cromozomi acrocentrici.
Aceşti cromozomi sunt predispuşi la NONDISJUNCŢIE şi TRANSLOCAŢIE.
Frecvenţa asociaţiilor satelitice este influenţată de vârstă, sex şi de
anormalităţi sexuale.
Au fost observate în avorturile spontane, în bolile genetice determinate de
aneuploidii.
TIPURI DE CROMOZOMI
43
• TELOCENTRICI
- centromerul este situat terminal;
- au doar un braţ, braţul „q”;
- nu sunt prezenţi în cariotipul uman;
- există la şoarece, şobolan.
GENOMUL
TIPURI DE ADN
În celula eucariotă există 2 tipuri de ADN:
- Nuclear (cromozomial)
- Mitocondial (citoplasmatic)
Cantitatea de ADN nuclear nu este proporţională cu gradul de
evoluţie al speciei.
Ex: sunt specii „puţin” evoluate – care au cantităţi mai mari de ADN
decât altele mai evoluate.
• ariciul de mare (nevertebrat) – are cantitatea ADN nuclear de 50 ori mai
mare decât şoarecele
44
• salamandra (batracieni + unii peşti) au cantitatea ADN nuclear de 50
ori mai mare decât omul.
Nu există concordanţă între cantitatea de ADN nuclear şi numărul de
gene cu semnificaţie şi funcţie genetică.
• La om: în nucleu sunt 7,1× 109 perechi nucleotide. Dacă secvenţa de
1000 de nucleotide ar fi dimensiunea unei gene ar trebui să existe în celula
umană ≈ 3.5000.000 gene.
Sunt însă ≈ 50.000 – 100.000 gene care controlează caracterele celulare.
ADN MITOCONDRIAL
- este extracromozomial, localizat în mitocondriile citoplasmatice;
- are structură inelară, formă asemănătoare cromozomului bacterian
(procariot);
- are masă moleculară mai mică decât cel cromozomial ≈ 60× 106;
45
- are structură bicatenară;
- rol: asigurarea sintezei de ARN capabil să codifice sinteza proteică la
nivel mitocondrial.
Mitocondriile au genetica lor proprie, acesta fiind un argument în
favoarea eredităţii citplasmatice la animale.
GENA
46
• Genele alele = reprezintă forme alternative ale unei gene situate în loci
omologi şi care determină acelaşi caracter fenotipic.
Mutaţiile ce pot apărea la nivelul unei gene determină variaţii ale
caracterului codificat de gena respectivă. Aceste gene se numesc gene polialele
sau alele multiple.
Termenul de HOMOZIGOT = defineşte un genotip caracterizat prin 2
alele identice (NN; DD).
Termenul HETEROZIGOT = defineşte un genotip în care cele 2 alele
situate pe acelaşi locus sunt diferite (ND).
Gena dominantă – este o genă care se manifestă fenotipic în cazul unui
genotip heterozigot; se notează cu majuscule (ex: AA).
Gena recesivă – este o genă care se manifestă fenotipic doar în cazul unui
genotip homozigot; se notează cu literă mică (aa).
Genele codominante – sunt gene care se manifestă fenotipic la
heterozigoţi, în acelaşi timp şi cu aceeaşi intensitate.
Ex: grupa de sânge AB este determinată de genele codominante A şi B.
Fenomenul prin care genele vecine, nealele, situate pe acelaşi cromozom
nu se separă în meioză şi au tendinţa de a se transmite înlănţuit, împreună la
descendenţi poartă numele de înlănţuire genică sau „linkage”.
Termenul de HAPLOTIP defineşte un grup de gene care se transmit
împreună.
CICLUL CELULAR
47
Succesiunea proceselor ciclului celular se desfăşoară pe parcursul a două
faze: interfaza şi diviziunea (mitoza / meioza).
INTERFAZA
48
Fazele ciclului celular (după Junqueira)
49
În unele zone ale nucleului, fibrele de cromatină sunt mai dense, mai
concentrate, formând nişte mase vizibile în microscopia optică şi numite
CROMOCENTRI.
Stadiul G1 are perioadă variabilă, putând reprezenta între 30-50% din
durata interfazei. La mamifere este cuprins între 5-10 ore. Este mai scurt în
cazul celulelor embrionare (≈ 6 ore) şi mai lung în cazul celulelor adulte,
mature (≈ 12 ore).
Celulele care şi-au terminat diferenţierea sunt oprite într-un stadiu G1
„liniştit” numit stadiu G0 (ex: neuronii).
Stadiul G1 este caracteristic celulelor antrenate în ciclul celular. În stadiul
G0 metabolismul celular este funcţional, dar nu se modifică volumul celulei,
datorită echilibrului dintre procesele de sinteză şi cele de degradare. Chiar dacă
pot apărea modificări ale sintezelor proteice, statusul ADN-ului este acelaşi ca
în celulele stadiului G1.
STADIUL „S”
„S” (synthesis) cuprinde perioada în care are loc sinteza ADN-ului
(replicarea lui), esenţială pentru diviziunea celulară.
Procesele biochimice ce au loc în această perioadă sunt: biosinteza ADN
şi a proteinelor histonice, asamblarea moleculelor nou formate de ADN, în
structuri nucleozomale şi coeziunea fibrelor nucleozomale surori sau a
cromatidelor surori.
Lipsa coeziunii între fibrele nucleozomale surori duce la dispersarea lor şi
repartizarea inegală în celulele fiice.
Astfel, la sfârşitul acestui stadiu fiecare cromozom are o structură
bicromatidică (2 cromatide surori unite printr-un centromer).
La sfârşitul stadiului S are loc duplicarea centrozomului, cei 2 centrozomi
fii rămânând în vecinătatea nucleului până la începutul primei faze a mitozei.
Durata acestui stadiu este de 35-45% din durata interfazei (aproximativ 6-
8 ore).
STADIUL „G2”
Cuprinde perioada de la încheierea sinteze de ADN şi până la debutul
mitozei.
Se caracterizează prin continuarea sintezelor ARN şi a sintezelor proteice
şi combinarea ADN-ului sintetizat „de novo” cu proteinele cromozomiale.
Datorită fenomenelor acestea de creştere celulară, acest stadiu este
denumit „a doua etapă de creştere celulară”. Raportat la sinteza ADN-ului este
denumit şi „perioada postsintetică”.
În faza G2 cromozomii au structură bicromatidică, dar sunt despiralizaţi.
La sfârşitul acestei faze se sintetizează „factorul de declanşare al mitozei”
(MPF) cu rol în condensarea fibrelor de cromatină în cromozomi.
50
Durata stadiului G2 este de ≈ 10-20% din durata interfazei (3-4 ore).
În ciclul celular există puncte de control, ale trecerii de la o fază la alta:
unul la limita dintre stadiile G1 şi S, denumit START şi care odată depăşit
permite celulelor parcurgerea celorlalte etape ale ciclului celular. Un al doilea
punct de control se găseşte la limita dintre stadiul „G2” şi mitoză.
Durata ciclului celular la nivelul celulelor umane este de 20-25 ore.
MITOZA
51
Fazele mitozei – schemă (după Junqueira)
52
Fazele mitozei – aspecte microscopice observate în culturi de celule
(după Junqueira)
53
Fusul mitotic este alcătuit din 3 tipuri de fibre:
- fibre astrale – scurte şi care se dezvoltă în exteriorul fusului;
- fibre polare – care pornesc de la centrozom şi se orientează către
interiorul fusului;
- fibre kinetocorice – care se vor ataşa centromerilor cromozomilor.
Fusul mitotic este o structură bipolară a citoscheletului a cărui prezenţă
este tranzitorie. El are rol în segregarea cromozomilor.
PROMETAFAZA
- debutează brusc cu dezorganizarea membranei nucleare care formează
vezicule, ce rămân în vecinătatea fusului de diviziune;
- fusul de diviziune care s-a format în afara nucleului, intră în zona
acestuia;
- kinetocorii (complexe proteice specializate) de la nivelul fiecărui
centromer se ataşează la microtubulii fusului de diviziune;
- microtubulii kinetocorici cresc în direcţii opuse de la cele două
cromatide şi exercită o tensiune asupra comozomilor care sunt „aruncaţi” într-o
mişcare agitată;
- ataşarea cromozomilor la filamentele fusului determină o mişcare
activă, convergentă a cromozomilor.
54
METAFAZA
- se caracterizează prin condensarea maximă a cromatinei, astfel încât
cromatidele surori apar individualizate şi aşezate paralel;
- cromozomii sunt aliniaţi în zona ecuatorială a fusului de diviziune
formând PLACA ECUATORIALĂ METAFAZICĂ:
- fiecare cromozom este ţinut în tensiune de către kinetocori şi
microtubulii asociaţi;
- ei se aranjează astfel încât o cromatidă este orientată către un pol al
fusului de diviziune şi cealaltă cromatidă către polul opus;
- această aşezare permite împărţirea corectă a cromatidelor între celulele
fiice;
Cromozomii de la nivelul plăcii ecuatoriale au mişcări oscilatorii către cei
2 poli ai fusului de diviziune. Dacă unul din kinetocorii ataşaţi centromerului
este îndepărtat artificial prin iradiere lase, întreg cromozomul va migra spre
polul la care rămâne ataşat prin celălalt kinetocor.
TELOFAZA
- se caracterizează prin procese inverse celor din profază;
- cromatidele ajung la polii fusului de diviziune şi dispar microtubulii
kinetocorici (fibrele kinetocorice);
- învelişul nuclear se reasamblează în jurul fiecărui grup de cromozomi
monocromatidici pentru a forma 2 nuclei cu acelaşi număr de cromozomi ca şi
celula mamă;
- cromatina condensată se despiralizează;
- nucleolii reapar şi mitoza ia sfârşit.
55
CITOKINEZA
MEIOZA
56
Meioza se deosebeşte foarte mult de mitoză; ea constă din două diviziuni
succesive cu o singură replicare a materialului genetic. Prima diviziune este
reducţională, iar a doua este ecvaţională, adică o mitoză care, în general este
asemănătoare mitozei somatice, dar de care se deosebeşte prin faptul că ea se
desfăşoară în celule haploide şi nu este precedată de sinteză de ADN. În prima
diviziune segregă cromozomii omologi replicaţi, adică un cromozom dintr-o
pereche migrează spre un pol şi omologul său spre polul opus, iar în a doua
diviziune segregă cromatidele în acelaşi mod.
Fiecare din cele două diviziuni se desfăşoară în patru faze: profază,
metafază, anafază, telofază.
57
Reprezentarea schematică a stadiilor diviziunii meiotice
58
În diachineză, membrana nucleara se dezorganizează şi fusul de
diviziune, care s-a format, intră în sfera nucleului.
Metafaza I se caracterizează prin dispunerea bivalenţilor în planul
ecuatorial al fusului de diviziune, formând placa metafazică. În placă, bivalenţii
sunt co-orientaţi. Astfel, un centromer al unui cromozom este orientat spre un
pol al fusului, iar centromerul omologului său este orientat spre polul opus.
Dispariţia ultimelor chiasme şi separarea completă a omologilor marchează
sfârşitul metafazei I şi începutul anafazei I.
În anafaza I are loc disjuncţia cromozomilor omologi. Astfel, un
cromozom dintr-o pereche va migra spre un pol al fusului, în timp ce omologul
său va migra spre polul opus. Astfel, la fiecare pol al fusului ajunge un număr
haploid de cromozomi.
Telofaza I se caracterizează prin reorganizarea membranei nucleare în
jurul cromozomilor ajunşi la poli. Prin urmare, din prima diviziune meiotică
rezultă doi nuclei haploizi. Cei doi nuclei haploizi, fără o replicare prealabilă a
ADN, intră în a doua diviziune meiotică, care este o variantă a mitozei.
59
GAMETOGENEZA ŞI FECUNDAŢIA
Procesul prin care celulele germinale sau gameţii se formează din celulele
primordiale se numeşte gametogeneză. În specia umană modificările
morfologice ale celulelor germinale se produc începând cu săptămâna a 3-a de
viaţă intrauterină.
Atât ovogeneza cât şi spermatogeneza au la bază diviziunea reducţională
sau meioza,prin care se produce reducerea cromozomilor, dintr-un set diploid
devenind un set haploid. La femeie sunt 44 autosomi şi 2 gonosomi X, iar la
bărbat 44 autosomi, un gonosom X şi unul Y. Prin diviziunea meiotică fiecare
celulă sexuală va avea 22 autosomi şi un gonosom. Numărul diploid de
cromozomi se reface în momentul fertilizării când ovulul se uneşte cu
spermatozoidul.
OVOGENEZA
În perioada embrionară, celulele germinale, derivate din epiteliul
germinativ, migrează către creasta genitală unde va lua naştere gonada.
Diviziunea mitotică a ovogoniilor continuă până în săptămâna a 8-a sau a 10-a a
vieţii intrauterine, apoi se reduce treptat şi încetează la naştere.
Ovogeneza
60
Dintr-o ovogonie s-a format un ovocit de gradul I numit ovocit primar.
Maturarea ovocitului se face prin diviziune meiotică, a cărei profază începe
înainte de naştere şi se menţine în această stare până ce foliculul ovarian devine
matur la pubertate. În acest moment, ca răspuns la secreţia de LH hipofizar, se
produce meioza în urma căreia rezultă două celule surori, fiecare cu 22
autosomi şi un gonosom. Cele două celule sunt de mărimi diferite. Una primeşte
aproape toată citoplasmă de la celula mamă devenind ovocit de gradul II sau
secundar, iar cealaltă este de dimensiuni reduse şi se numeşte primul globul
polar. Acesta este eliminat în afara foliculului ovarian şi resorbit. Ovocitul de
gradul II ia naştere în momentul producerii ovulaţiei. Urmează a doua diviziune
de maturare, meiotică, din care rezultă tot două celule surori: una mare, ovocitul
de gradul III sau ovocitul matur, apt pentru fecundaţie şi o celulă mai mică, al
doilea globul polar care se distruge. Fiecare dintre aceste celule conţine un
număr haploid de cromozomi. Se crede că în specia umană a doua diviziune de
maturaţie se produce numai dacă ovulul este fertilizat.
SPERMATOGENEZA
61
săptămânii a 7-a apare diferenţierea gonadelor. Cordoanele sexuale primare se
anastomozează şi sub impuls genetic şi hormonal devin cordoane testiculare.
Acestea se separă de epiteliul celomic printr-un strat de ţesut conjunctiv care va
forma albugineea testiculară.
În luna a 4-a, din cordoanele testiculare iau naştere tubii contorţi
seminiferi, care rămân sub formă de cordoane pline. Tunelizarea se face
ulterior, după naştere, posibil la pubertate. Cordoanele testiculare conţin două
feluri de celule:
- gonocitele - care se vor transforma în spermatogonii în luna a 5-a de
viaţă intrauterină;
- celule de origine celomică-care se vor transforma în celule Sertoli.
Din mezenchimul pericordonal se vor forma celulele Leydig cu funcţie
endocrină. În evoluţia de la celula primară către celula matură se parcurg trei
etape:
- etapa de multiplicare;
- etapa de creştere;
- etapa de maturaţie.
Spermatogoniile provin direct din celulele primordiale (gonocite) şi au un
set de cromozomi 44+XY. Prin înmulţire dau naştere la spermatogonii de tip A
şi de tip B (mai diferenţiate), cu acelaşi număr de cromozomi. La un moment
dat spermatogoniile se transformă (prin diviziune şi creştere ) în spermatocite
primare sau de gradul I , cu set cromozomial 44 XY.
Spermatogeneza
62
În etapa de maturaţie au loc două diviziuni.
În prima diviziune spermatocitele primare se transformă în spermatocite
secundare sau de gradul II, mai mici. Această diviziune - meiotică, reducţională
- reduce la jumătate numărul de cromozomi, astfel că fiecare spermatocit
primeşte un bagaj cromozomial 22 X şi 22 Y şi o cantitate egală de citoplasmă.
Prima diviziune începe în viaţa intrauterină şi rămâne în stadiul de profază până
la pubertate.
A doua diviziune este ecuaţională şi în urma ei rezultă celule cu acelaşi
număr de cromozomi. Din fiecare spermatocit secundar rezultă câte două celule
cu acelaşi bagaj cromozomial şi cantitate egală de citoplasmă. Aceste celule se
numesc spermatide şi sunt în număr de patru. Acest fenomen se produce la
pubertate.
Din spermatide, care se localizează în adânciturile membranelor Sertoli,
iau naştere spermatozoizii, printr-o serie de modificări morfologice cunoscute
sub numele de spermiogeneză. Funcţionalitatea normală a organelor accesorii
are un rol important. Spermatozoizii care se extrag prin puncţie testiculară au
mobilitate redusă şi nu au putere fecundantă. Ei îşi îmbunătăţesc calitatea în
timpul trecerii prin epididim, datorită secreţiilor acestuia. De aici spermatozoizii
sunt depozitaţi în coada epididimului şi în canalul deferent, unde îşi continuă
perfecţionarea.
Veziculele seminale secretă un mucus bogat în glicoproteine şi glucide,
care vor servi ca material nutritiv spermatozoizilor în trecere. Prostata secretă
un lichid bogat în spermină, aminoacizi, peptone, săruri de K şi Na, Ca, care
serveşte ca material nutritiv, trofic şi neutralizant pentru mediul vaginal acid.
FECUNDAŢIA
Este procesul prin care cei 2 gameţi haploizi cu un număr de n
cromozomi (ovocitul şi spermia) fuzionează formând zigotul diploid cu un
număr de 2n cromozomi. Acesta constituie punctul de plecare pentru un individ
cu o zestre genetică nouă. Fecundaţia asigură astfel transmiterea genelor de la
părinţi la urmaşi şi menţine constant numărul de cromozomi ai speciei. Este un
proces complex, ce parcurge 4 etape:
1) contactul şi recunoaşterea dintre spermii şi ovocit;
2) realizarea pătrunderii spermiei în ovocit (este un pas de control
cantitativ prin care doar o spermie poate pătrunde în ovocit, asigurându-se
fecundaţia monospermică). Este foarte important - la om embrionii triploizi,
tetraploizi nu sunt viabili;
3) fuzionarea materialului genetic, mai precis a celor 2 pronuclei ai
gameţilor, restabilindu-se starea diploidă;
4) activarea metabolismului zigotului pentru începerea dezvoltării
(ovocitul e capabil să activeze metabolismul spermiei şi invers).
63
Fecundaţia se produce în apropierea locului de eliberare a ovocitului, în
1/3 externă a trompei,adică în porţiunea ei ampulară (practic e posibilă în orice
porţiune a trompei şi în lichidul peritoneal al spaţiului Douglas).
Prin ejaculare ajung în vagin zeci sau sute de milioane de spermii, din
acestea doar câteva sute de mii sau 1-2 milioane ajung în uter.
Ascensiunea spermatozoizilor în tractul genital al femeii permite: selecţia
gameţilor masculini; dobândirea puterii fecundante.
Trecerea prin col şi glera cervicală se face în aproximativ 3 minute.
Imediat după ejaculaţie sperma coagulează în fundul de sac vaginal şi
imobilizează spermatozoizii. În mai puţin de o oră, enzimele proteolitice ale
plasmei seminale, activate de pH-ul vaginal acid (cuprins între 4,5-5), lizează
coagulul şi eliberează spermatozoizii. Cei mai mobili străbat bariera cervicală şi
ajung în uter (~1%). Cei mai mulţi sunt distruşi de mediul vaginal acid.
Calitatea glerei cervicale este fundamentală permiţând printr-o reţea de
glicoproteine, orientarea spermatozoizilor către uter; glera este optimală cu 2-3
zile înainte de ovulaţie,când este filantă, cristalizează în frunză de ferigă şi are
pH alcalin. Are rol în: selecţia gameţilor; iniţierea capacitaţiei; este filtru
antibacterian.
La nivelul uterului spermiile înoată într-un lichid secretat de glandele
uterine, lichid care conţine glucoza şi fructoză, ce constituie sursa de energie
pentru spermiile aflate în mişcare spre trompele uterine.
Ajung în trompă prin mişcările proprii, favorizate şi de contracţii ale
musculaturii uterine şi probabil şi prin mecanism de tip chemotactic - doar
câteva mii sau sute. Trecerea prin uter şi trompă se face în decurs de câteva ore.
Pe parcursul acestui drum se produce capacitaţia spermatozoidului - este
un fenomen ce cuprinde toate modificările (ultrastructurale, funcţionale,
biochimice) pe care un spermatozoid le suferă în căile genitale feminine pentru
a deveni apt de fecundaţie. Aceste modificări sunt:
1) ultrastructurale - reprezentate de reacţia acrosomală ce presupune
adaptări la nivelul acrosomului şi membranei plasmatice;
2) funcţionale - cu accelerarea vitezei de deplasare în uter şi trompe;
3) biochmice şi metabolice - caracterizate prin intensificarea glicolizei
anaerobe şi consumul de O2 datorită necesităţii creşterii motilităţii şi sintezei
enzimelor litice.
Fluiditatea membranei plasmatice a spermiei poate fi alterată prin
modificarea compoziţiei lipidice:
- scăderea cantităţii de colesterol din membrana plasmatică;
- prin pierderea anumitor proteine specifice şi carbohidraţi în timpul
capacitării;
- fosforilarea proteinelor implicate în legarea spermiei la zona pellucida.
Spermiile ajunse în 1/3 ext. a trompei se întâlnesc cu ovocitul expulzat.
Ovocitul se află în metafaza a II-a a meiozei, înconjurat de celulele foliculare
ale coronei radiata şi cumulus proliger;
64
Spermiile pătrund printre celulele coronei radiata şi ajung în contact cu
zona pellucida.
Reacţia acrozomială
Este un fenomen declanşat de legarea capului spermiei la zona pellucida.
Zona pellucida - are structură glicoproteică;
- o grosime de 15-20 µm;
- este produsă de celulele foliculare şi de ovocitul în
creştere;
- are rol major în fecundaţie.
- spermia se leagă de zona pellucida prin intermediul unor glicoproteine
specifice.
- se consideră că sunt necesare câteva mii de locuri de legare pentru a
asigura legarea unei spermii, pentru că aceasta nu penetrează perpendicular, ci
tangenţial.
- legarea capului spermiei la zona pelucida declanşează
Reacţia acrozomială presupune următoarele etape:
• membrana plasmatică a spermiei se rupe;
• membrana externă a acrozomului se dezagregă (cea internă rămâne, dar
e foarte subţire şi se lipeşte de membrana vitelină);
• conţinutul enzimatic e eliberat în jurul capului spermiei (în special
acrozina) şi enzimele rarefiază ţesătura macromoleculelor zonei pellucida;
• spermia, prin mişcările cozii pătrunde prin această regiune rarefiată( „se
scufundă ca o navă în ovul”) până la integrarea completă a spermatozoidului;
• piesa intermediară împreună cu flagelul degenerează.
Contactul între capul spermiei şi plasmalema ovocitului declanşează două
procese:
- reacţia corticală - cu blocarea polispermiei;
- terminarea celei de a 2-a diviziuni a meiozei şi eliberarea celui de-al 2-
lea globul polar.
Reacţia corticală - previne pătrunderea în ovocit a mai multor spermii.
Mecanism
- creşte concentraţia Ca+ în citoplasma ovocitului, ceea ce face granulele
corticale aflate la periferia citoplasmei ovocitului, să se lipească de plasmalema
şi să elibereze conţinutul în spaţiul perivitelin;
- granulele conţin o serie de enzime care conduc la modificarea
stereospaţială a moleculelor zonei pellucida şi rigidizarea ei astfel încât este
împiedicată pătrunderea altor spermii.
Ovocitul desăvârşeşte meioza şi expulzează cel de-al doilea globul polar.
În jurul setului haploid de cromozomi se constituie membrana nucleară şi
se formează pronucleul feminin. Cel masculin se formează prin decondensarea
cromatinei spermiei şi este de obicei mai mare. Treptat, cei 2 pronuclei aflaţi la
distanţă migrează unul către altul, se alipesc, membrana dispare şi are lor unirea
65
materialului genetic (SINGAMIA). Se reface astfel setul diploid de cromozomi
şi se formează ZIGOTUL. După ovulaţie, ovocitul este apt de fecundaţie 12-24
h. Spermia este aptă pentru fecundaţie 48 h după depunerea în 1/3 superioară a
vaginului.
Zigotul - are diametru de 120µm şi e înconjurat de zona pellucida cu rol
de protecţie, care va însoţi embrionul până în stadiul de blastocist.
APOPTOZA
66
- un semnal intracelular precum lezarea ADN-ului ce duce la eliberarea în
citoplasmă a enzimei cytocrom c din mitocondrii.
În interiorul celulei multe proteine reglatoare controlează apoptoza,
precum bcl-2 şi inhibitorii apoptozei (inhibitors of apoptosis sau IAP_.
Rezultatul final al diferitelor semnale este un mecanism numit „cascada
caspazei” (o enzimă). Enzimele activate ale acestei cascade rup proteinele
celulare precum cele din membrana nucleară şi, de asemenea, activează
adiţional enzime precum DNA-aza (ce va rupe ADN-ul).
Fenomenul de apoptoză poate fi observat la majoritatea tipurilor celulare
în cursul dezvoltării şi maturării:
- anumite tipuri celulare au o durată de viaţă predefinită şi apoptaza se
produce inevitabil ca o parte a ciclului lor de viaţă (ex: celulele pielii sau ale
tractului intestinal, celulele glandei sebacee care se distrug odată cu eliberarea
sebuumului, spermatozoizii care au o durată de viaţă medie de 3-5 zile sau
ovocitul 24-48 ore);
- alte celule sunt determinate să se autodistrugă dacă au un comportament
„nepotrivit”; ex: limfocitele T care sunt capabile de reacţie împotriva
componentelor normale ale corpului (organismului) sunt determinate să se
autodistrugă în timus, proces cunoscut ca „deleţie clonală”. Eşecul acestui
proces poate duce la dezechilibre autoimune precum tiroidita autoimună sau
anemia pernicioasă;
- anumite ţesuturi ale organismului adult cresc şi apoi regresează în mod
ciclic, precum foliculii ovarieni, care cresc până la ovulaţie; proces urmat de
regresia corpului galben prin apoptoză şi formarea corpului albicans: dacă
ovulul nu este fertilizat, corpul luteal va involua, proces ce implică moartea
progresivă a celulelor constituente ce vor fi înlocuite de o cicatrice fibroasă
numită corp albicans;
- apoptoza celulelor epiteliale ale glandelor endometriale (din mucoasa
uterină) la începutul menstruaţiei.
Apoptoza este un mod de moarte a celulelor anormale, de ex. cele
infectate cu virusuri sau cu mutaţii genetice. În acest caz, eşecul apoptozei este
foarte important în procesele neoplazice când diviziunea şi multiplicarea
celulară nu mai este restricţionată.
Mecanismul apotozei
Deşi o serie de factori intrinseci/extrinseci pot iniţia apoptoza, la nivel
molecular modelul obişnuit îl reprezintă activarea cascadei caspazei.
Caspazele sunt o serie de enzime ce se găsesc în formă inactivă în toate
celulele. Când prima din serie este activată, ea este capabilă să activeze altele şi
odată declanşat, procesul se produce „în cascadă”. Acest fenomen „în cascadă”
a fost observat şi în alte situaţii, de exemplu în coagularea sangvină şi cascada
complementului (intervine în mecanisme imunologice).
67
În desenul următor este exemplificat procesul de apoptoză la nivelul unui
epiteliu simplu columnar (cilindric) aşezat pe o membrană bazală (BM).
68
În anumite circumstanţe, părţi din celulă rămân, după apoptoză, ca şi
componente normale ale ţesutului respectiv. De exemplu, în piele, apoptoza se
produce ca fenomen normal în cadrul ciclului celular, dar pentru o anumită
perioadă de timp după dispariţia nucleului, citoplasma se încarcă cu keratină,
formând o pătură de protecţie impermeabilă („waterproof”) la suprafaţa pielii.
69
BIOTEHNOLOGII, CLONARE, AMELIORARE
70
• celule multipotente, care produc un număr limitat de tipuri celulare; de
exemplu, celulele stem din măduva osoasă, formatoare de hematii, leucocite şi
trombocite;
• celule pluripotente, care produc toate tipurile de celule existente într-un
organism, cu excepţia celulelor placentare; se găsesc în butonul embrionar, în
stadiu de blastocist;
• celule totalpotente, care sunt apte de a produce un individ complet: se
găsesc într-un embrion format din 2-8 celule, la trei zile după fecundarea
ovulului de către spermatozoid.
În prezent sunt cunoscute şi bine stabilite următoarele însuşiri ale
celulelor stem:
- pot supravieţui timp îndelungat într-un mediu adecvat;
- pot produce celule diferenţiate sau specializate;
- în cursul evoluţiei se pot asambla, formând „societăţi celulare” care se
structurează în ţesuturi sau organe;
- în procesul de diviziune dau naştere la două tipuri de celule: o celulă
suşe şi o celulă specializată.
La ora actuală, celula suşe reprezintă o problemă disputată în mai multe
planuri: politic, etic şi legislativ.
Perspectivele incomensurabile ale folosirii celulelor stern în medicină, fac
ca problemele menţionate mai sus să fie trecute pe plan secund sau, în orice caz,
să se încerce o rezolvare legislativă.
Celulele stem adulte sunt celule nediferenţiate, capabile să se dezvolte ca
tipuri de celule caracteristice altor ţesuturi; celulele stern hematopoietice adulte
din măduva osoasă sunt capabile să dezvolte celule sangvine şi celule imunitare,
iar în alte condiţii sunt capabile să se transforme în celule cu caracteristici
neuronale.
Celula stem adultă are capacitate de autoreînnoire, cu menţiunea că nu se
replică timp îndelungat în cultură. Surse de celule stern adulte sunt: măduva
osoasă, sângele, corneea, retina, osul, muşchiul scheletic, pulpa dentară, ficatul,
pielea, mucoasa gastrointestinală şi pancreasul. Celule stern adulte au fost
identificate în regiunea hipocampului (zona memoriei) din creier.
Celulele stem adulte sunt rare; se întâmpină dificultăţi in identificare,
izolare şi purificare; nu sunt pluripotente şi au capacitate de reînnoire pe termen
lung.
Celulele stem din măduva osoasă reprezintă o sursă de un interes deosebit
pentru o serie de boli, în care s-au obţinut rezultate, dar încă nu este evaluat în
totalitate potenţialul lor, cu toate că sunt cele mai studiate celule stem adulte. În
măduva osoasă au fost identificate două tipuri de celule stem adulte: celule stem
hematopoetice, care formează celule sangvine şi imune şi celule stem
mezenchimale sau stromale, care formează celule osoase, cartilaginoase şi
celule grase (lipocite). Cercetările au demonstrat că în măduva osoasă ar exista
71
cel puţin încă două populaţii de celule stem adulte, dar care încă nu sunt bine
caracterizate.
Perspectivele folosirii celulelor stem embrionare se îndreaptă în două
direcţii majore:
- medicina regenerativă;
- testarea medicamentelor.
În diabetul de tip 1, a cărui patogeneză constă în distrugerea celulelor
insulinice de către sistemul imun, terapia prin celule stem embrionare ar avea
avantajul că acestea pot fi făcute să exprime gene compatibile, care ar putea
scăpa detectării sistemelor imune; o altă ipoteză de lucru ar fi încapsularea
celulelor stem insulinice într-un material care să permită insulinei să treacă uşor
în sânge, dar în acelaşi timp să fie inaccesibile sistemului imun.
Boala Parkinson, cel puţin teoretic, prin prisma actualelor cunoştinţe, ar fi
relativ uşor de tratat, deoarece ar fi vorba de înlocuirea unui singur tip de celulă
dintr-o zonă bine precizată din creier.
Leziunile măduvei spinării, mai frecvente de natură traumatică,
deteriorează grav un complex de celule (neuroni, oligodendrocite etc), sinapse şi
căi de transmitere a influxului nervos. Experimentele efectuate pe animale de
laborator au demonstrat că injectarea de oligodendrocite derivate din celule
stem embrionare pot remieliniza axonii, iar şobolanii astfel trataţi au redobândit,
parţial, funcţiile. Aceste experienţe efectuate în multe laboratoare din lume au
început să depăşească stadiul de speranţă, existând numeroase succese în terapia
unor boli ale sistemului nervos.
Modelul experimental obligatoriu, în studiul ESC umane, impune
formarea unor linii celulare în culturi pure, suficient de numeroase, cu stabilirea
condiţiilor de mediu, reţete speciale şi precise pentru cultivarea in vitro, apoi
testarea funcţiilor fiziologice ale fiecărei linii celulare izolate; stabilirea în timp,
de la o generaţie la alta de celule, a funcţiilor acestora. în continuare, cercetările
de laborator se vor axa pe următoarele trei probleme:
- demonstrarea eficacităţii;
- demonstrarea siguranţei;
- prevenirea rezecţiei.
În acest stadiu al investigaţiilor se va proba pe animale de experienţă
-rozătoare -, iar după aceea pe primate - maimuţe. Se vor induce la aceste
animale, boli precum diabet, boala Parkinson etc, evaluându-se integrarea
celulelor injectate în ţesuturi şi reacţia imunitară.
Demonstrarea siguranţei constă în investigaţii privind posibilitatea
dezvoltării unor tumori şi pericolul transmiterii unor boli infecţioase.
Testarea metodelor de prevenire a rezecţiei, constă în posibilitatea de
folosire a medicamentelor imunosupresive, crearea de celule diferenţiate
izogenice în perspectiva folosirii reprogramării nucleare, formarea de linii
celulare embrionare care să exprime genele primite şi stabilirea toleranţei
imunologice.
72
Extrapolarea rezultatelor pe pacienţi umani se va face numai după ce
rezultatele experimentale vor fi temeinic verificate.
Clonarea reproductivă. În reproducerea animală, în scopul obţinerii de
animale cu înalte performanţe economice, se practică:
- reproducerea sexuată, prin inseminare artificială şi prin fecundaţie in
vitro;
- reproducerea asexuată, prin clonare:
- transfer de nucleu embrionar sau adult;
- crearea de animale transgenice: inserarea de gene străine în patrimoniul
ereditar al spermatozoizilor, al celulelor-ou;
- clonarea unui animal adult deja transgenic sau manipulând direct
nucleul unei celule adulte, transferul nucleului, ceea ce permite obţinerea
clonelor transgenice.
Reproducerea asexuată, prin clonare, a fost verificată şi s-a realizat prin
biotehnologii care necesită încă perfecţionare. Să nu se uite că oaia Dolly a fost
obţinută după 277 de transferuri, totuşi concluzia este că se poate!
Toate aceste etape sunt aleatorii şi misterioase, ceea ce explică nivelul
încă scăzut al succeselor.
Numeroşi embrioni reconstruiţi nu se dezvoltă. Cauzele sunt necunoscute,
putând fi legate de ciclul embrionar, de starea nucleului şi a citoplasmei
primitoare, de activarea oului pus în joc etc. Dacă embrionul se dezvoltă şi se
implantează, mortalitatea embrionară şi fetală este considerabilă, poate datorită
efectului tardiv sau perturbărilor foarte precoce ale dezvoltării. Pot interveni
perturbaţii fiziologice ale placentei. Rezolvarea acestor neajunsuri, dat fiind
interesul, este o chestiune de timp.
În numeroase ţări clonajul uman reproductiv este prohibit, de altfel
Parlamentul European, Consiliul Europei prin convenţia de la Oviedo, OMS şi
UNESCO au condamnat clonajul reproductiv la om.
73
polimorfismului de lungime a fragmentelor de restricţie a ADN uman. Totodată
au realizat un program de conturare a unei hărţi genetice umane, în care să fie
localizate genele responsabile de manifestarea unor boli.
În anul 1983, Schimm şi Sutcliffe pun la punct o metodă de secvenţiere a
fragmentelor de ADN genomic, în vederea identificării rapide de gene, metodă
dezvoltată în perioada 1991-1995 de către Venter şi colaboratorii, protagoniştii
HGP.
Iniţiat în 1986 în SUA de către Department of Energy (DOE) şi National
Institutes of Health (NIH), beneficiind de o finanţare considerabilă (3 miliarde
dolari), programul a fost estimat să se întindă pe 15 ani. Obiectivele principale
ale acestui program au fost:
- să identifice genele din ADN-ul uman;
- să determine secvenţa perechilor de baze azotate ce alcătuiesc ADN-ul
uman, cu precizia de o eroare estimată / 10000 de baze;
- stocarea informaţiei obţinute într-o bază de date;
- dezvoltarea metodelor şi tehnologiilor pentru studiul acestor date;
- să dea răspunsuri problemelor etice, legale şi sociale care pot apărea în
urma studiilor.
Una dintre ideile de bază era alcătuirea unei hărţi a cromozomilor, pe care
să fie localizate genele, prin identificarea unui marcator genetic la fiecare două
milioane de baze (în medie). Există deja bănci de gene care deţin la ora actuală
complementele unor secvenţe cunoscute de ADN (marcatori).
Primii doi ani au fost consacraţi găsirii acestor marcatori-index.
Cercetările au avut utilitate imediată, ducând la crearea unei hărţi mai detaliate
şi uşurând munca de căutare a unei anumite gene.
Acest prim succes a determinat creşterea numărului de participanţi la
HGP, implicându-se europenii (centrul Sanger din Marea Britanie, laboratoare
din Franţa şi Germania) şi Japonia. Odată cu atingerea acestui scop intermediar
(o „clonă” a proiectului) s-a stabilit o nouă direcţie de cercetare: identificarea
variaţiilor individuale ale genomului uman. Chiar dacă 99,5% dintre secvenţele
de ADN sunt identice la toată populaţia, micile variaţii pot avea un impact
major asupra răspunsului la diferitele boli, rezistenţa la bacterii, virusuri, toxine
şi substanţe chimice, precum şi la tratamentele medicamentoase.
Se dezvoltă metode pentru a detecta diferitele tipuri de variaţii.
Cercetătorii speră că aceste studii să ajute la identificarea corelată a
genelor asociate cu boli complexe ca diabetul, cancerul, afecţiunile vasculare şi
unele boli mintale. Aceste corelări sunt greu de stabilit cu metode tradiţionale
de „vânare” a genelor, deoarece o singură genă alterată îşi poate aduce doar o
mică contribuţie la riscul de boală.
Primul plan cincinal (1990-1995) a fost revizuit în 1993 datorită
progreselor neaşteptate. Un al doilea plan a stabilit obiectivele proiectului până
în 1998. Al treilea şi cel mai recent a fost stabilit Ia 23 octombrie 1998 în urma
unei conferinţe internaţionale.
74
Complexitatea extraordinară a proiectului a făcut necesară participarea
cercetătorilor din domenii variate: biologie, informatică, chimie, matematică,
fizică, inginerie aplicată etc.
Finalizarea cercetărilor, estimată pentru anul 2003, ceea ce ar fi coincis cu
a 50-a aniversare a descoperirii structurii ADN-ului de către Watson şi Crick, a
fost realizată în februarie 2001. Publicarea în mediile ştiinţifice a secvenţei de
draft (schiţă) a genomului uman constituie un moment de referinţă al cunoaşterii
umane.
Aplicaţii prezente şi potenţiale ale cercetărilor HGP
Cartarea genetică la om este un proces complex, care implică
multidisciplinaritate. Ea reprezintă apogeul demersului ştiinţific de analiză a
genomului uman cu profunde semnificaţi şi implicaţii practice medicale,
îndeosebi în acordarea sfatului genetic.
Medicina moleculară asigură:
- diagnostic îmbunătăţit;
- detectarea din timp a predispoziţiei spre o anumită boală;
- terapie genică avansată;
- control mai eficient al acţiunii medicamentelor.
Bioarheologie, Antropologie, Evoluţionism
- corelarea cu diferite evenimente istorice;
- urmărirea migraţiilor umane pe baza studierii cromozomului Y;
- noi date despre relaţiile între archaebacterii-eucariote-procariote.
Medicina legală:
- identificarea suspecţilor pe baza probelor biologice;
- identificarea victimelor catastrofelor/crimelor;
- stabilirea paternităţii şi a altor relaţii de rudenie.
Alte domenii ale biologiei:
- găsirea speciilor în pericol pe baza analizei genetice;
- identificarea bacteriilor/organismelor care pot polua apa, aerul, solul,
hrana;
- compatibilitatea donor-primitor de organe;
- pedigree pentru diferite animale;
- autentificarea vinurilor, a caviarului.
Agricultura, creşterea animalelor, bioprocesare:
- obţinerea de culturi mai rezistente la boli, insecte, secetă;
- animale mai productive şi mai sănătoase;
- biopesticide;
- obţinerea de produse mai nutritive;
- organisme transgenice şi mutaţii controlate;
- depoluarea zonelor prin cultivarea plantelor modificate genetic şi care
au capacitatea de a metaboliza toxinele.
75
PERSPECTIVA CREŞTINĂ ASUPRA
CEASULUI MOLECULAR AL VIEŢII
76
pierderea doar a funcţiilor cognitive ale persoanei (ca în cazul morţii cerebrale
bazată pe criteriul cortical), ci cu dispariţia atât a funcţiilor cognitive ce ţin de
integritatea creierului superior, cât şi a funcţiilor vegetative ce ţin de integritatea
trunchiului cerebral.
Fiind create de Dumnezeu printr-un act special, sufletul şi trupul au
primit în tradiţia creştină o apreciere pozitivă. Sufletele au fost create simultan
cu corpurile (teoriile după care sufletele au preexistat trupurilor şi au fost
trimise în corpuri pentru pedepsirea lor este străină antropologiei creştine).
Prin urmare, dacă trupul şi sufletul au o raţiune în Dumnezeu şi au fost
create în acelaşi timp, înseamnă că nu există două raţiuni distincte a trupului şi a
sufletului, ci o singură raţiune comună ambelor. Această raţiune comună
sufletului şi trupului este raţiunea naturii umane integrale ce tinde spre
Dumnezeu cel infinit.
Aceasta înseamnă că sufletul nu este legat exclusiv de un anumit organ, ci
de întreg trupul. Imaginea clasică a Părinţilor este aceea a analogiei dintre
constituţia dihotomică a omului cu a fierului înroşit în foc. Precum focul
pătrunde şi cuprinde în acelaşi timp fierul întreg, negăsindu-se doar într-o parte
a sa, astfel este şi unirea sufletului cu trupul.
Omul este persoană pentru că a fost creat după chipul lui Dumnezeu cel
personal. Dumnezeu l-a creat după chipul său dăruindu-i virtual prin aceasta
capacitatea de a tinde spre asemănarea cu El. Dar nu a creat doar sufletul după
chip, ci întreaga persoană umană în unitatea sa psihosomatică. De aceea şi
calitatea de persoană şi cea de chip nu se referă exclusiv la suflet ci la suflet şi
trup; ele exprimă realitatea naturii umane integrale.
Al doilea ax al gândirii tomiste e acela care se bazează pe două principii
ale oricărei fiinţe reale, şi anume: esenţa şi existenţa (essentia ed esse în
termenii săi). Existenţa nu poate fi înţeleasă decât în interiorul unei esenţe, iar
esenţa omului este dată de uniunea substanţială a sufletului spiritual cu corpul
ce îşi împrumută forţa existenţială de la suflet.
Pe scurt, putem rezuma semnificaţiile creştine ale corpului cu următoarele
caracteristici şi valenţe: întrupare spaţio-temporală, diferenţiere individuală
(fiecare individ este unic şi irepetabil), relaţie cu lumea şi societatea,
instrumentalitate şi principiu al tehnologiei. Să ne reamintim că tehnica nu este
altceva decât o potenţare a corpului (de exemplu, maşina), a senzaţiilor sale
(tehnologia imaginilor şi sunetelor) sau chiar a creierului (informatică). Dar
corpul este şi limita, semn al limitării spaţio-temporale şi aceasta aduce cu sine
durerea, boala sau moartea.
Persoana este o realitate multidimensională prin atributele sale accesibile
cunoaşterii umane. Unicitatea şi irepetabilitatea persoanei priveşte atât
dimensiunea sa corporală, cât şi spirituală. In unicitatea sa, persoana umană este
şi o fiinţă relaţională dialogică, ca purtătoare a chipului lui Dumnezeu cel tri-
personal. Capacitatea sa relaţională se manifestă în cele trei dimensiuni ale
relaţiei cu Dumnezeu, cu cosmosul şi cu celelalte persoane. Persoana umană
77
este, de asemenea, şi o fiinţă raţională, raţionalitate ce-i conferă capacitatea de a
avea conştiinţă de sine şi apoi de toate realităţile înconjurătoare.
Ca fiinţă raţională şi prin aceasta superioară celorlalte fiinţe create de
Dumnezeu, fiinţa umană, în calitatea sa de persoană, este chemată a fi o fiinţă
responsabilă. Dumnezeu a încredinţat omului de la început responsabilitatea faţă
de toate realităţile create (Geneza 1.28-29; 2; 19).
Din acest fapt derivă importante consecinţe pe plan etic şi etico-medical.
Primul bine care se prezintă ca esenţial organismului viu este viaţa;, ceea ce
atinge viaţa, distruge organismul ca atare, este cea mai mare privaţiune care
poate fi adusă unei persoane. Viaţa fizică a unei persoane poate fi sacrificată sau
pusă în pericol doar pentru un bun moral superior care priveşte totalitatea
persoanei sau salvarea altora; este cazul martiriului sau al apărării celor dragi de
un agresor nedrept.
Dacă viaţa este primul bine, o altă valoare importantă este integritatea ei.
Celelalte bunuri ale vieţii de relaţie de tip afectiv sau social trebuie să se
subordoneze vieţii şi integrităţii ei. De exemplu, pentru o intervenţie
chirurgicală se justifică internarea în spital şi părăsirea celor dragi, în schimb
mutilarea sau sterilizarea nu au nici un fel de justificare.
Aceste valori sunt armonizate în ele, conduc la ceea ce moraliştii numesc
unitotalitate: atunci când una dintre valorile descrise mai sus lipseşte, viaţa
devine apăsătoare pentru totalitatea persoanei. De aceea, „mortificarea”,
renunţarea la oricare dintre aceste valori necesită o justificare printr-un bine
superior.
B. Pascal în capitolul „Morala creştină” din Cugetări, împrumută de la
apostolul Pavel (I Corinteni) imaginea membrelor şi a corpului. El scrie:
„Pentru a echilibra iubirea pe care ţi-o datorezi ţie trebuie să-ţi imaginezi un
corp cu membre... întrucât suntem membre ale totului, ale trupului tainic care
este Biserica lui Dumnezeu”. „Orice iubire ce se manifestă în afară de aceasta
este ceva nedrept”. Persoana, deşi element generativ al societăţii, nu se
investeşte pe sine în totalitate în ipostază social-temporară şi nici în cea politică.
Disoluţia persoanei în social şi în colectivism a reprezentat cea mai gravă
catastrofă a umanităţii (comunism). Binele comun nu este o medie statistică a
bunurilor materiale posedate de indivizi, ci o viaţă împlinită a unei multitudini
de persoane, a totalităţilor trupeşti şi spirituale laolaltă.
Având credinţa că viaţa umană este darul lui Dumnezeu, responsabilitatea
noastră va fi pe măsura credinţei. Spre a scoate în evidenţă responsabilitatea pe
care trebuie s-o avem faţă de viaţa, Sfântul Maxim Mărturisitorul crede că omul
„are fiinţă împrumutată”. Biserica îşi exprimă îngrijorarea ori de câte ori viaţa
este manipulată în scopuri care nu au nici o legătură cu viaţa individualităţii pe
care se intervine (din curiozitate, interes, în numele progresului ştiinţific şi chiar
în numele sănătăţii altor persoane). Cele mai uimitoare descoperiri ştiinţifice din
ultima jumătate de secol sunt cele legate de manipularea materialului genetic şi
biotehnologie. Marele savant şi neurolog american Van Rensselaer Potter,
78
îngrijorat el însuşi de dezvoltarea exponenţială a cunoştinţelor biologice şi de
perfecţionarea biotehnologiei, invită lumea la crearea unei noi ştiinţe a
supravieţuirii care să se fundamenteze pe acordul dintre cunoaşterea biologică şi
ştiinţele umane. El o denumeşte bioetică.
O bioetică laică comportă două riscuri majore consideră Vasile Răducă,
secretarul Comisiei de Bioetică a Patriarhiei Române:
1. Dacă corporeitatea umană este una între celelalte forme de viaţă
somatică, bioetica va putea îngădui ca viaţa umană să fie tratată/manipulată ca
viaţa oricărei alte fiinţe sub nivel uman, nesocotind faptul că fiul lui Dumnezeu
s-a făcut Om.
2. Biologia umană poate fi absolutizată şi divinizată: într-o societate
lipsită de speranţă în nemurirea asigurată de Hristos-Dumnezeu (dar cu
posibilitatăţi financiare) există riscul absolutizării propriei noastre biologii (de
exemplu, înverşunarea în terapiile intensive şi donarea reproductivă), omul
refuzând pur şi simplu moartea biologică.
Eutanasia
Etimologic, cuvântul eutanasie provine din limba greacă, putând fi tradus
prin sintagma o moarte bună. Spre deosebire de omucidere, eutanasia se
realizează de dragul persoanei căreia i se ia viaţa (de regulă, pentru a fi scutită
de chinuri insuportabile, atunci când se află într-un ultim stadiu al unei boli
incurabile). Eutanasia se poate clasifica în funcţie de decizia pacientului:
• eutanasie voluntară;
• eutanasie involuntară.
După acţiunea sau lipsa de acţiune a persoanei care efectuează eutanasia
se clasifică în:
• eutanasie activă;
• eutanasie pasivă.
Eutanasia voluntară presupune îndeplinirea a trei condiţii:
1. să existe un agent al actului eutanasie şi un pacient;
2. actul eutanasie să fie intenţionat (făcut în mod deliberat) şi în
cunoştinţă de cauză asupra consecinţelor sale posibile;
3. agentul să acţioneze în vederea apărării interesului şi spre binele
pacientului. În plus, moartea survine în urma cererii sau consimţământului
explicit al pacientului, cu condiţia ca acesta să fie în deplinătatea facultăţilor
sale mintale.
Cu alte cuvinte, eutanasia voluntară este înţeleasă ca o acţiune
premeditată a unui individ de a se omorî, acţiune ce nu poate fi dusă la
îndeplinire decât cu ajutorul altei persoane.
Eutanasia involuntară este opusul eutanasiei voluntare, respectiv
reprezintă acţiunea unei persoane care omoară sau lasă să moară o altă
persoană, fără a avea acordul acesteia. Ca încadrare juridica putem spune că
79
eutanasia involuntară este mai aproape de omucidere, pe când eutanasia
voluntară se apropie de sinucidere.
Controversele aprinse iscate de eutanasie au fost acelea asupra
superiorităţii unuia dintre cele trei principii fundamentale aplicabile în domeniu:
1. dreptul fiecărui om la viaţă;
2. dreptul omului de a dispune în mod liber de propria viaţă;
3. dreptul omului de a nu fi supus unor suferinţe inutile.
Biserica creştină condamnă eutanasia, considerând viaţa sacră şi
inviolabilă.
Adepţii eutanasiei susţin superioritatea dreptului omului de a nu fi supus
unor suferinţe inutile în faţa celorlalte două.
Practicile legate de eutanasie sunt interzise în majoritatea covârşitoare a
ţărilor (Olanda a legalizat eutanasia în 2000, iar Belgia a dezincriminat parţial
eutanasia în aceeaşi perioadă). Legislaţia României nu îngăduie eutanasia,
încadrând-o din punct de vedere juridic fie la infracţiunea de determinare sau
înlesnire a sinuciderii unei persoane (art. 179 din Codul Penal) sau infracţiune
de omor (art. 174-175 din Codul Penal).
80
5. Competenţa comunităţii. Problema intervenţiei în patrimoniul genetic
al omului şi al altor fiinţe nu poate fi încredinţată doar unor experţi, fie oameni
de ştiinţă, politicieni, ci cere participarea şi informarea responsabilă a
comunităţilor deoarece priveşte întreaga umanitate.
Principiul libertăţii ştiinţei şi cercetării trebuie recunoscut şi armonizat cu
exigenţele de informare şi responsabilizare a populaţiei. Avem în vedere
screening-ul genetic, manipularea mediului ecologic şi intervenţia asupra
genomului uman.
Diagnosticarea prematrimonială şi preconceptivă este indicată în cazul
subiecţilor care s-ar afla în situaţia riscantă de a fi purtătorii genei responsabile
pentru o boală genetică, existând astfel pericolul într-o proporţie de 25% ca
urmaşii să fie afectaţi (de exemplu, talasemie). Poate fi o alternativă la avortul
selectiv.
Screening-ul genetic asupra lucrătorilor. Se poate aplica pentru a
determina sensibilitatea lucrătorului la anumite substanţe, condiţii prezente la
locul de muncă şi se poate realiza pentru prevenirea apariţiei unei patologii, dar
nu ca mijloc de excludere a lucrătorilor mai puţin rezistenţi din punct de vedere
genetic.
Terapia genetică reprezintă introducerea în organisme şi în celulele
umane a unei gene, adică a unui fragment ADN care are efectul de a preveni sau
a trata o situaţie patologică. Se face distincţie între terapia genetică asupra
celulelor somatice (de exemplu, limfocite, măduvă osoasă care au drept efect
restabilirea normalităţii celulelor afectate) şi terapia genetică asupra celulelor
liniei germinate (gameţi sau embrioni precoce). În al doilea caz, modificarea
aşteptată se produce în genomul subiectului care va fi sau a fost conceput,
precum şi la descendenţii săi.
Se poate admite terapia genetică de tip somatic şi cea de tip germinai
atâta timp cât scopul este cel terapeutic. Se respinge modificarea constituţiei
genetice deoarece este contrară principiului respectului vieţii şi identităţii
biologice, şi a egalităţii dintre oameni.
Terapiile experimentale pot să comporte riscuri: mutaţii dăunătoare,
fenomene de respingere sau răspândirea unui vector viral.
81
4. dotarea omului cu calităţi străine speciei umane.
Primul caz coincide cu o formă de terapie, celelalte tipuri de intervenţie
ţin mai curând de eugenetică şi prezintă multe dificultăţi etice insurmontabile.
Clonarea umană
Clonarea este definită ca fiind multiplicarea asexuată a unui singur
individ în urma căreia rezultă serii de indivizi identici din punct de vedere
genetic.
În lumea ştiinţifică există două tabere, una care militează pentru
introducerea donării umane pe motive umanitare:
- posibilitatea cuplurilor sterile de a avea copii;
- evitarea naşterii copiilor cu boli ereditare;
- obţinerea de organe în vederea transplantului;
- posibilitatea înţelegerii mecanismului unor boli, precum cancerul, şi
descoperirea unor remedii.
Cealaltă tabără subliniază:
- existenţa unor ratări în procesul donării;
- transmiterea unor maladii congenitale;
- costul exorbitant al donării;
- accelerarea procesului de îmbătrânire;
- reducerea patrimoniului genetic al oamenilor;
- crearea unei subclase genetice;
- efectul psihologic asupra oamenilor;
- distrugerea demnităţii şi unicităţii persoanei umane.
Biserica apreciază că prin apariţia clonelor umane ne asumăm rolul
Creatorului - ispita faustică a zilelor noastre - ceea ce ar avea profunde
consecinţe tragice. Există numeroase acte normative internaţionale care interzic
donarea fiinţei umane:
- Articolul 1 şi 2 din Convenţia asupra drepturilor omului şi biomedicinei.
- Declaraţia Consiliului Europei referitoare la donare.
- Rezoluţia Parlamentului European privind donarea.
- Declaraţia Universală UNESCO.
- Rezoluţia Adunării Mondiale a Sănătăţii.
România a ratificat Convenţia europeană privind protecţia drepturilor
omului şi a demnităţii fiinţei umane faţă de aplicaţiile biologiei şi medicinei şi
Protocolul adiţional al acesteia referitor la interzicerea donării fiinţelor
umane. Această convenţie a fost ratificată prin Legea nr. 17/2001.
Noul Cod Penal al României incriminează crearea ilegală de embrioni şi
donarea în articolul 195; crearea de embrioni umani în alte scopuri decât
procreaţie se pedepseşte cu închisoare de la 3 la 10 ani şi cu interzicerea unor
drepturi. De asemenea, legea menţionează că se sancţionează cu aceeaşi
pedeapsă crearea prin donare a unei fiinţe umane genetic identică cu alte fiinţe
umane vii sau moarte.
82
Cu toată că legislaţia internaţională se pronunţă împotriva donării, Marea
Britanie a permis în august 2005 începerea acţiunii de donare de embrioni
umani, dar numai în scopuri medicale (se urmăreşte găsirea unor metode de
vindecare a unor maladii precum Parkinson şi Alzheimer).
83
genetice sunt laborioase şi foarte costisitoare (tehnica ELISA şi WESTERN-
BLOTT).
84
obţine o populaţie cu un număr de cosangvini care nu ştiu că au o legătură între
ei;
- cazul copilului adoptat de o pereche homosexuală; cazul perechii de
homosexuali bărbaţi care recurg la mame surogat, în timp ce două femei
lesbiene ar putea obţine măcar ipotetic un copil prin procesul donării cu
patrimoniul genetic al cuplului însuşi.
Charles Richert (Premiul Nobel pentru Pace) în lucrarea La selection
humaine (1919) spunea, referindu-se la selecţia părinţilor când nu existau
tehnicile actuale de procreare artificială că era vorba de un rasism liniştit. Astăzi
gândirea poate intra în derivă, trecând de la cunoştinţe biologice incontestabile
la o ideologie care poate fi calificată ca eugenism radical. Odată cu fecundarea
in vitro şi posibilitatea de a selecţiona embrionii prin tehnicile de diagnoză
preimplant se poate înregistra un nou impuls pentru idei eugeniste. Ne aflăm la
al doilea nivel al eugeniei, nu numai prin selecţia donatorilor, ci prin aceea a
gameţilor şi embrionilor cu succesiva eliminare a embrionilor care nu posedă
caracteristicile cerute.
Mamele ,,surogat”. Femeile care plătind sume de bani şi folosindu-se de
intermedierea unei agenţii au adus la termen, în contul unor terţe, gestaţia
embrionilor fecundaţi în vitro cu ovul şi spermă de la alte persoane. Există cazul
mamelor care, deşi aveau proprii copii, au acceptat această sarcină pentru a-i da
un copil propriei surori sterile sau cazul „mamei închiriate” care, după ce a avut
în gestaţie copilul comandat a refuzat să-1 mai dea, simţindu-l ca fiind propriul
copil. Este o manipulare a corporalităţii copilului care primeşte patrimoniul
genetic de la două persoane, în timp ce sângele, nutriţia şi comunicarea vitală
intrauterină (cu consecinţe la nivel psihic) le primeşte de la altă persoană, de la
mama înlocuitoare. Având în vedere probleme etico-juridice ale maternităţii
„surogat” toate normativele existente cu excepţia statului Arkansas (SUA)
interzic contractele de înlocuire sau le consideră juridic nonvalide.
85
Bibliografie
86