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Ensenada b.c.
Semestre 3 y 4, periodos agt-jul 09-10
SEP DGETI
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO
INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS #41
ATLAS DE BACTERIOLOGIA
BIO. LUZ ELENA HERNANDEZ LOPEZ
EQUIPO:
ALVARADO
MEZA
OSORIO
SALINAS
VALLE
Índice:
PARTE I, TEORIA DE LA BACTERIOLOGIA
Capitulo i, introducción a la bacteriología
PARTE I,
TEORIA DE LA
BACTERIOLOGIA
Capitulo i
Introducción a la bacteriología
Introducción:
¿Qué es Bacteria?
Las bacterias son microorganismos
unicelulares que presentan un tamaño de
algunos micrómetros de largo (entre 0,5 y 5
μm, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas, barras y hélices. Las
bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las células eucariotas (de
animales, plantas, etc.), no tienen núcleo ni orgánulos internos.
Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglucano.
Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y
son móviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriología, una rama de
la microbiología.
¿Qué es la Bacteriología?
Estudio de las bacterias y enfermedades que éstas
provocan.
Queda incluida la cadena epidemiológica (reservorio,
mecanismos de transmisión, inmunidad, factores que
hacen que existan más o menos defensas contra
ellas...). Las bacterias son seres microscópicos
estudiadas mediante microscopios ópticos en
preparaciones teñidas o sin teñir (en fresco) para
estudiar su estructura o morfología, pero para estudiar
su estructura interna se necesita un microscopio
electrónico.
La bacteriología (más tarde una subdisciplina de la
microbiología) se considera fundada por el medico
Robert Koch, descubridor del bacilo de la tuberculosis y
el vibrio del cólera y ganador del premio Nobel en
1905.
Taxonomía Bacteriana:
¿Qué es Taxonomía?
La taxonomía (del griego ταξις, taxis, "ordenamiento", y νομος,
nomos, "norma" o "regla") es, en su sentido más general, la
ciencia de la clasificación. Habitualmente, se emplea el término
para designar a la taxonomía biológica, la ciencia de ordenar a
los organismos en un sistema de clasificación compuesto por
una jerarquía de taxones anidados.
Clasificación de Linneo:
La Taxonomía de Linneo clasifica a los seres vivos en
diferentes niveles jerárquicos, comenzando originalmente por el
de Reino, Los reinos se dividen en Filos para los animales, y en
Divisiones para plantas y otros organismos. Éstos se dividen en
Clases, Órdenes, Familias, Géneros y Especies. Aunque el
sistema de Linneo era firme, la expansión de conocimiento ha dado lugar a una expansión del
número de niveles jerárquicos, incrementando los requerimientos administrativos del sistema,
aunque permanece como único sistema de clasificación básica que actualmente cuenta con la
aprobación científica universal.
Los biólogos usan nombres científicos para referirse a los taxones creados por la ciencia de la
Taxonomía. Una subdivisión de la Taxonomía, la Nomenclatura, es la que se ocupa de reglar los
nombres de los taxones. Las reglas para crear nombres científicos están escritas en los Códigos
Internacionales, hay uno para cada disciplina (Botánica, Zoología, Microbiologia). El objetivo del
nombre científico es el de poseer un único nombre que deba ser utilizado en todo el mundo, en
cualquier lengua, para referirse a un único taxón. Los nombres científicos son en latín, o
latinizados.
Clasificación de Bacteriología de Berjey
Fue presentada en 1923 por David Berjey, este manual de
clasificación se ha ido adaptando y modificando con el paso de
los años.
Esta clasificación se basa en la tinción de Gram, la agrupación
bacteriana en el reino Procaryotae, donde se reconocían 4
volúmenes pero actualmente se utiliza la división e dos ordenes
Pseudomonas y Eubacterias.
Volumen I: Archae y bacterias, Gram – como las
Cianobacterias.
Volumen II: Proteobacterias, Gram -, como Neisseria,
Brucella, Pseudomonas.
Volumen III: Bacterias Gram positivas, Con bajo
contenido de Guanina-Citosina como los Staphylococcus
y Streptococcus.
Volumen IV: Bacterias Gram positivas, Con alto
contenido de Guanina-Citosina como las Mycobaterias
Volumen V: Sin clasificación o factores en común como la
Clamydia y la Treponema.
Capitulo ii
Anatomía y fisiología bacteriana
Orgánulos Bacterianos:
Pared Celular
• Es una estructura compleja y fundamental
para la bacteria formada por
peptidoglucanos.
• El peptidoglucano representa el 5-20 % de
la composición de la pared de las bacterias
G- y el 90 % en las G+.
• La protege de los cambios de la presión
osmótica del medio que la rodea.
• Es el lugar donde se localizan numerosos
determinantes antigénicos que permiten
diferenciar a las bacterias entre si.
• La endotoxina de algunos grupos tambien
se encuentra aquí.
• La pared celular se constituye (se "fabrica")
mediante una serie de etapas enzimaticas
en las que participan al menos 30 enzimas.
Membrana Citoplasmática
• Esta formada por fosfolipidos y proteínas, y a diferencia de las eucariotas, no contiene
esteroles.
• Las enzimas del transporte electronico se encuentran aquí (produce energia).
• Componentes de la capsula y la pared celular son sintetizados aquí.
• Es una barrera osmótica, selectiva y activa:
• Las bacterias gramnegativas tienen dos membranas: una interna y otra externa, mientras
que las grampositivas, solo poseen una membrana (interna).
• Es sitio de acción de detergentes y antibióticos polipeptídicos.
Citoplasma
Formado 85 % por agua. Contiene los ribosomas y el cromosoma bacteriano.
Ribosomas
Compuestos por ARN ribosomico. Su importancia radica en ser el sitio de accion de numerosos
antibioticos: Aminoglucosidos, tetraciclinas, cloranfenicol, macrolidos y lincosamidas.
Nucleoide
No posee membrana nuclear (de alli el termino nucleoide). Esta
formado por un unico filamento de ADN apelotonado
(superenrollado). Confiere sus peculiaridades geneticas a la
bacteria. Regula la sintesis proteica.
Capsula Bacteriana
Estructura polisacarida de envoltura. Puede ser una modificación
de la pared celular o ser una secreción bacteriana. Sus funciones
es antígena y los anticuerpos, que reaccionan con ella de forma
muy visible, produciendo hinchazón o Fenomeno de Neufeld,
protegiendo así a la bacteria de la fagocitosis y es la reacción
directa con la virulencia, un ejemplo bacterias capsuladas
patológicas son el Bacillus anthracis, Clostridium perfingens,
Klebsiella pneumoniae, Diplococo pneumoniae.
Flagelos
Estructuras formadas por una proteína llamada Flagelina, de
mayor longitud que los pili. De estructura helicoidal y
locomotores (responsables de la motilidad bacteriana).
Según la posición de los flagelos tenemos bacterias:
Monotricas: un flagelo en un extremo, Logotricas: varios
flagelos en un extremo o ambos, Ambitricas: flagelos en
ambos extremos y Peritricas: flagelos en toda la superficie.
Pilis
Son estructuras cortas parecidas a pelos. Visibles solo al
Microscopio Electronico. Carentes de motilidad. Los poseen
fundamentalmente las Gramnegativas. Intervienen en la
adherencia de las bacterias al huesped. Facilitan el
intercambio de ADN durante la conjucion bacteriana. Tiene
capacidad antigenica.
Esporas
Estructura presente en algunas especies bacterianas
exclusivamente bacilares. Le permite a la celula sobrevivir en
condiciones extremadamente duras. El material genetico de la
celula se concentra y es rodeado por una capa protectora, que hace
que la celula sea impermeable a la desecacion, al calor y
numerosos agentes quimicos. Se coloca en una situacion
metabolica de inercia. Puede permancer meses o años asi. Cuando
las condiciones son mas favorables se produce la germinacion, con
la formacion de una celula unica que despues se reproduce con
normalidad. El esporo no se tiñe con los colorantes habituales y se identifica como una zona clara,
redondeada u ovalada, que contrasta con el resto de la bacteria que aparece coloreada.
Glicocaliz
Entramado de fibrillas polisacaridas situadas en posicion extracelular. Facilita la adherencia.
Plásmidos y Transpones
Los plásmidos (plasmidios) son elementos extracromosómicos compuestos por ADN de doble
cadena, con frecuencia circular, autoreplicativos y autotransferibles.
Los transposones (genes móviles) son elementos compuestos de ADN que pueden moverse de
forma autosuficiente a diferentes partes del genoma bacteriano. No poseen la capacidad de
autoreplicarse pero pueden transferirse a traves de plasmidios.
Fisiología Bacteriana:
Se Refiere a las necesidades para que una bacteria pueda llevar a cabo sus funciones vitales con
normalidad.
Factores Nutricionales y Químicos:
Azucares y Fuentes de Carbono: Son indispensables para el desarrollo bacteriano,
mientras existan en una concentración de 0.3 a 5%, pero si se aplican a mas del 20% se
inhibe el crecimiento bacteriano.
Se clasifican según como obtienen sus fuentes de carbono en dos grupos, Autótrofos y
Heterótrofos.
Los Autótrofos: Capaces de sintetizar las substancias orgánicas a partir de las minerales;
las hay que son fotosintetizantes, quimiosintetizantes, nutrificantes del suelo y las
sulfobacterias de las aguas sulfurosas
Los heterótrofos: Las cuales unas utilizan los compuestos orgánicos elaborados por otros
seres vivos a los que parasitan, otras viven en substancias orgánicas, descomponiéndolas
aprovechando la materia orgánica muerta para la alimentación, las bacterias de la
putrefacción o o saprófitas; provocando fermentaciones y por último, las bacterias
simbióticas, que viven en plan o ayuda mutua con organismos vivos, estas son la mayor
parte de las bacterias.
ATP: Es un nucleótido fundamental en la obtención de energía celular, se basa o se forma
en la unión de la Adenina que es una base nitrogenada, única a la Ribosa y a tres grupos
Fosfato. Este compuesto es la fuente principal de energía de las células ya que al
romperse sus enlaces con los grupos fosfatos se libera una gran cantidad de energía que
es aprovechada por las bacterias y otras células.
Agua: Deberá de existir una cantidad de agua de 80-90%, por lo tanto es indispensable
para el crecimiento bacteriano, ya que si esa concentración disminuye el crecimiento se
dificulta, aun así hay organismos muy resistentes las bajas concentraciones de este
Compuesto vital.
Minerales: Para el crecimiento bacteriano se requieren Sulfatos, Fosfatos y Cloruros, así
como cantidades pequeñas de Potasio, Magnesio, Sodio, Hierro, Manganeso, Zinck,
Cobalto, Cobre y Mb.
Factores Físico-Térmicos:
Temperatura: El patrón de crecimiento bacterial se ve profundamente influenciado por la
temperatura. La temperatura a crecimiento óptimo permite el crecimiento más rápido de las
bacterias durante un período de tiempo, usualmente entre 12 y 14 horas. Los
microorganismos se dividen en 3 grandes grupos en base a su preferencia de rango de
temperatura.
Bacterias Psicrofilas: son aquellos organismos que pueden crecer a 0°C, pero crecen
mejor a una temperatura de entre 20 a 30°C.
Bacterias Mesofilas: crecen mejor a temperaturas que fluctúan de entre 25°C a 40°C.
Aquí encontramos los patógenos de humanos y animales de sangre caliente, éstos crecen
mejor a 37°C.
Bacterias Termófilas: son bacterias que crecen a una temperatura óptima sobre los 45°C.
La región de crecimiento de muchos termófilos se extiende a la región de los mesófilos.
pH
En la mayoría de las bacterias el crecimiento óptimo es entre 6.5 y 7.5. Muy pocas bacterias crecen
a un pH menor de 4.0. Sin embargo, las bacterias clasificadas como acidófilos son tolerantes a la
acidez, un ejemplo es Thiobacillus thiodans que crece a un pH óptimo de entre 2.0 a 3.5.
Factores de Respiración:
Haciendo referencia a su respiración, se dividen así:
• Bacterias aerobias: Utilizan oxígeno para realizar la respiración.
• Bacterias anaerobias: Para respirar sustituyen el oxígeno por otras sustancias, obtenidas
por reacciones Anaeróbicas o fermentaciones que consisten en obtener el O pero no en forma
molecular.
• Capitulo iii
• Morfología Bacteriana
•
Formas de Agrupación:
Además presentan diversas formas de agrupación y se les añaden prefijos: Diplo 2 bacterias
unidas, Estrepto mas de 2 bacterias unidas en cadena, Tetra 4 bacterias unidas en grupo, Estafilo
mas de 2 bacterias unidas de forma irregular en racimos, Sarcinas paquetes cubicos de cocos,
Micrococos aun mas pequeños de lo normal.
Capitulo iV
La reproducción bacteriana
Las bacterias, así como otros seres vivos se reproducen normalmente por bipartición pero aun asi
tienen formas de reproducción Sexual.
Reproducción Asexual:
Bipartición: Se lleva a cabo por un proceso donde, el cromosoma bacteriano es duplicado e inicia
un proceso similar al de la mitosis celular, donde el resultado son dos células hijas idénticas.
Reproducción Sexual
Transformación: Consiste en el intercambio genético producido cuando una bacteria es capaz de
captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran dispersos en el medio donde vive.
Conjugación: En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a través de un puente o pili,
un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La bacteria que se llama F+ posee un
plasmido, además del cromosoma bacteriano.
Transducción: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra se realiza a través de
un virus bacteriófago, que se comporta como un vector intermediario entre las dos bacterias.
Este diagrama nos da una idea del crecimiento bacteriano, sobre un determinado tiempo, asi como
las diversas etapas del desarrollo bacteriano.
Capitulo V
año, mayoritariamente en la región del África sub-Sahariano. Las bacterias patógenas contribuyen
a otras enfermedades globales importantes, tales como la neumonía, la cual puede ser causada
por bacterias como Streptococcus y Pseudomonas, y enfermedades asociadas con alimentos, que
pueden ser causadas por bacterias como Shigella, Campylobacter y Salmonella. Las bacterias
patógenas también causan infecciones tales como el tétanos, fiebre tifoidea, difteria, sífilis y lepra.
Las mas comunes son:
Bordetella pertussis
Los Bordetella pertussis son bacterias gram negativas, aerobias y
anaerobias facultativas, no productoras de esporas, con fimbrias,
capsulados, del género Bordetella. Son los agentes causantes de la
tos ferina. A diferencia de las B. bronchiseptica, B. pertussis son
inmoviles.
Clostridium tetani
Clostridium tetani es una bacteria, gram positiva formador de
esporas, y es anaerobio, Encontrado en la naturaleza como
esporas en el suelo o como parásito en tracto gastrointestinal de
animales, causante de toxicidad grave en los humanos, provoca el
tétanos generalizado, tétanos cefálico, tétanos de las heridas y
tétanos neonatal.
Clostridium botulium
Clostridium botulinum es una bacteria, bacilar, Gram
positiva, anaerobia, que se encuentra por lo general en la
tierra y es productora de la toxina botulínica, el agente causal
del botulismo. Las bacterias forman esporas que les permiten
sobrevivir en un estado latente hasta ser expuestas a
condiciones que puedan sostener su crecimiento. La espora
es ovalada subterminal y deformante.
Es móvil por flagelos peritricos, no produce cápsula y es
proteolítico y lipolítico.
Helicobacter pylori
H. pylori es una bacteria Gram negativa de forma espiral, de
alrededor de 3 micras de largo y con un diámetro aproximado
de unas 0,5 micras. Tiene unos 4–6 flagelos. Es microaerófila.
Usa H y metanogénesis como fuente de energía. Además es
oxidasa y catalasa positiva. Con su flagelo y su forma espiral, la
bacteria "taladra" literalmente la capa de mucus del estómago,
y después puede quedarse suspendida en la mucosa gástrica o
adherirse a células epiteliares.
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria gonorrhoeae es un agente etiológico de
gonococia, una enfermedad de transmisión sexual. Es un
diplococo Gram negativo, oxidasa positivo, como todas las
Neisserias. Se diferencia del resto por la prueba de la
fermentación de carbohidratos, fermentando solamente a la
glucosa. Se caracteriza por ser de difícil cultivo, siendo muy
exigente a nivel nutricional y a la vez muy sensible a sustancias que se encuentran en los medios
de cultivo corrientes.
Neisseria meningitidis
La Neisseria meningitidis, también conocida por su nombre
más simple de meningococo, es una bacteria diplocóccica
heterótrofa gram negativa, de importancia en salud pública
por su papel en la meningitis y otras formas de enfermedad
meningocóccica. Sólo afecta a seres humanos ya que no
existe ningún reservorio. Es la única forma conocida de
meningitis bacteriana en causar epidemias.
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pyogenes es una bacteria Gram-positiva
que crece en largas cadenas, hace hemólisis del tipo beta-
hemólisis cuando se cultiva en agar sangre. S. pyogenes
típicamente produce grandes zonas (halo) de beta-hemólisis,
con completa rotura de eritrocitos y la recuperación de
hemoglobina Posee numerosas exotoxinas. Se trata de un
microorganismo no esporulado (no produce esporas).
Es el agente más frecuente del Síndrome de
Faringoamigdalitis Bacteriana.
Streptococcus pneumoniae
El neumococo, Streptococcus pneumoniae, es un
microorganismo patógeno capaz de causar en humanos diversas
infecciones y procesos invasivos severos. Se trata de una bacteria
Gram positiva de 1,2-1,8 µm de longitud, que presenta una forma
oval y el extremo distal lanceolado. Es inmóvil, no forma
endosporas, y es un miembro alpha-hemolítico del género
Streptococcus. Generalmente, se presenta en forma de diplococo,
por lo que inicialmente fue denominado Diplococcus pneumoniae.
Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus Es un estafilococo, Son gram positivas.
Su metabolismo es de tipo fermentativo, son aerobios y
anaerobios facultativos, catalasa positivo y oxidasa negativo. Son
capaces de fermentar la glucosa sin producción de gases y
producen acetin metil carbinol. Fermentan el manitol con
formación de ácidos y puede hacerlo en anaerobiosis. No
hidrolizan el almidón y son capaces de crecer en presencia de un
40% de bilis. Soportan tasas elevadas de cloruro sódico, hasta un
15%. Infecta la piel y causa infecciones nocosomiales.
Vibrio cholerae
Vibrio cholerae es una bacteria Gram negativa con forma de
bastón (un bacilo) curvo que provoca el cólera en humanos,
Bioquímicamente se caracterizan por dar positivo en las
pruebas de la catalasa y de la oxidasa. Es una bacteria
anaerobia facultativa, y su metabolismo es fermentativo; pueden
fermentar, entre otros sustratos, la glucosa. Poseen flagelación
polar, que les otorga una movilidad máxima.
Pese a que nutricionalmente son poco exigentes, se emplean
medios específicos para aislarlos de muestras clínicas.
Pseudomonas
Son bacilos G(-), móviles con flagelos polares, aerobios
estrictos, metabolismo oxidativo no fermentativo.
La principal especie es la Pseudomona Aeruginosa, crecen
entre 10 y 42º.
Muy repartidas por el medio: suelo, agua y de aquí pasan a
las plantas o animales. En el hombre son oportunistas.
Los alimentos implicados: vegetales crudos, agua, leche no
pasteurizada.
Características:
Los miembros de este género son móviles gracias a uno o más flagelos polares que poseen, son
catalasa positivos y no forman esporas. Algunas especies sintetizan una cápsula de
exopolisacáridos que facilita la adhesión celular, la formación de biopelículas y protege de la
fagocitosis, de los anticuerpos o del complemento aumentando así su patogenicidad.
Otras características que tienden a ser asociadas con las especies de Pseudomonas -con algunas
excepciones- incluye la secreción de pioverdina (fluorescein), un sideróforo fluorescente de color
amarillo verdoso bajo condiciones limitadas de hierro. Algunas especies pueden producir otros
sideróforos, tales como la piocianina por la Pseudomonas aeruginosa y tioquinolobactina por
Pseudomonas fluorescens.
Las especies de Pseudomonas son típicamente oxidasa positivas, con ausencia de formación de
gas a partir de glucosa, son hemolíticas (en agar sangre), prueba del indol negativas, rojo de
metileno negativas y Voges Proskauer negativas.
El género demuestra una gran diversidad metabólica, y consecuentemente son capaces de
colonizar un ámplio rango de nichos.
Estructura antigénica
Los factores de virulencia de la estructura celular incluyen antígenos somáticos O y flagelares H,
fimbrias y cápsula de polisacáridos.
Producen enzimas extracelulares como elastasas, proteasas y
dos hemolisinas: fosfolipasa C termolábil y un lipopolisacárido
termoestable.
La exotoxina A bloquea la síntesis de proteínas responsable de
la necrosis tisular.
Cultivo
Las Pseudomonas crecen en medios simples. En agar simple
forman colonias brillantes, confluentes, de borde continuo y a
veces ondulado con un centro opaco. El pigmento (piocianina)
se difunde en el medio dándole una tonalidad verdosa. Este
pigmento tiene cualidades bactericidas sobre otras bacterias
Gram positivas y Gram negativas.
Patogenia:
P. aeruginosa es un patógeno oportunista humano, más comúnmente afecta a los
inmunosuprimidos.
Estas infecciones pueden afectar a muchas partes del cuerpo, pero típicamente afectan las vías
respiratorias, causando 50 % de las pulmonías bacteriana nosocomiales. El tratamiento de dichas
infecciones puede ser dificil debido a la frecuente y repetitiva resistencia antibiótica
Micobacterias.
Las micobacterias son bacterias aerobias y no móviles.
Tienen acido-alcohol resistencia (BAAR+) no
producen endosporas ni cápsulas y suelen
considerarse Gram-positivas.
La familia Micobacteria
Mycobacterium es el único género de la familia de las
bacterias Mycobacteriaceae. Por las características únicas
entre otros generos bacterianos y por la importancia médica
de las mismas, se estudian en la sub-rama de la
Microbiología llamada Micobacteriologia. El género incluye
patógenos que causan graves enfermedades en los
mamíferos, incluyendo tuberculosis y lepra.
El prefijo latino "myco—" significa tanto hongo como cera; su uso aquí se relaciona con los
compuestos cerosos de la pared celular. Las micobacterias tienen forma de bacilos rectos o
ligeramente curvados y miden 0,2-0,6 µm de ancho por 1,0-10 µm de largo.
Patogenisidad
Las micobacterias a veces colonizan a sus huéspedes sin que estos muestren signos de
enfermedad. Por ejemplo, miles de millones de personas están infectadas por M. tuberculosis pero
nunca lo sabrán puesto que no desarrollarán síntomas. Esto es debido en gran parte a que en gran
parte de los países la cepa de M. tuberculosis esta circulando en el medio ambiente produciendo
una primo infección, que permite desarrollar una respuesta inmune pero sin presentar los síntomas
específicos creando así células de memoria lo que mantienen vigilancia específica en el
organismo, al transitar por la calle el paciente esta expuesto a una reinfeccion de M. tuberculosis
pero no desarrollara la infección por que al tener las células de memoria estas se encargan de
neutralizar al patógeno, esa también es la explicación de por que algunos pacientes
inmunocomprometidos (como los pacientees con HIV) tienden a desarrollar cuadros crónicos de
tuberculosis.
Las infecciones micobacteriales son notoriamente difíciles de tratar. Su pared celular, que no es
realmente ni gram-negativa ni gram-positiva, los hace muy resistentes. Como caso único en su
grupo, son naturalmente resistentes a varios antibióticos que destruyen las paredes celulares, tales
como la penicilina. También, gracias a esta pared celular, pueden sobrevivir a largas exposiciones
a ácidos, bases, detergentes, ráfagas oxidativas, lisis por complemento y pueden desarrollar
naturalmente resistencia a los antibióticos. La mayoría de las micobacterias son susceptibles a los
antibióticos claritromicina y rifampicina, pero se conocen cepas resistentes a estos antibióticos.
Cultivo
Muchas especies de Mycobacterium se adaptan fácilmente al crecimiento en sustratos muy
simples, utilizando amoníaco o aminoácidos como fuentes de nitrógeno y glicerol como fuente de
carbono en presencia de sales minerales. La temperatura óptima de crecimiento varía ampliamente
según la especie desde 25 °C a más de 40 °C.
Algunas de las especies pueden ser extremadamente difíciles de cultivar y puede llevar más de
dos años desarrollar su cultivo. Además, algunas especies tienen también ciclos de reproducción
muy largos. M. leprae puede tardar más de 20 días para completar un ciclo de división, aunque
jamás se ha podido aislar de manera artificial a esta especie, haciendo que el cultivo en laboratorio
sea un proceso lento. Las micobacterias que forman colonias claramente visibles a simple vista en
los cultivos en un plazo de 7 días se denominan de cultivo rápido, mientras que las que requieren
períodos más largos se denominan de cultivo lento.
Igualmente el medio de cultivo para las Micobacterias es el medio Lowenstein-Jensen.
Medio Lowenstein-Jensen
Es esta una base para la preparación de varios medios destinados al aislamiento, cultivo y
diferenciación de micobacterias.
Fundamento
Los nutrientes de este medio basal, más los aportados por el agregado de la mezcla de huevos,
constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias. El verde de
malaquita inhibe a gran parte de la flora acompañante. Con el agregado de glicerina se estimula el
crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de M. bovis es inhibido. Agregando
un 5% de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de M.
smegmatis.
Fórmula (en gramos por litro) 1.1 Instrucciones
Fosfato monopotásico 2.5 Suspender 37,3 g del polvo en 600 ml de agua
Sulfato de magnesio 0.24 destilada y agregar 12 ml de glicerina.
Siembra
Se recomienda, en procedimientos de rutina, inocular la muestra previamente decontaminada,
sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubación
A 35-37°C. A los 7 días de incubación, se observa por primera vez si hubo crecimiento. Luego,
observar cada semana, hasta un total de 8 semanas.
Resultados
Observar las características morfológicas y la presencia o ausencia de pigmento en las colonias.
Microorganismos Crecimiento Características de las colonias
Mycobacterium tuberculosis Excelente Grandes, secas, amarillentas, granulares
Mycobacterium avium Excelente Lisas, sin pigmentos
Mycobacterium gordonae Excelente Lisas
Mycobacterium bovis --- ---
Clasificacion Dx
Las micobacterias pueden clasificarse en varios grupos con objeto de diagnóstico y tratamiento:
• Complejo M. tuberculosis, que causa tuberculosis: M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum
y M. microti.
• M. leprae, que causa lepra.
• Micobacterias no tuberculosas (NTM), que comprende a todas las otras especies de
micobacterias que pueden causar trastornos pulmonares que se asemejan a tuberculosis,
linfadenitis, trastornos en la piel, etc.
M. leprae
Lepra:
La clínica del paciente depende de su reacción inmune a la bacteria.
La bacteria produce citoquinas que inducen y medían la activación macrofágica y fagocitosis.
La semiología de la lepra es función de la reacción inmune del paciente, y puede tomar dos
formas: tuberculoide o lepromatosa.
Los pacientes con lepra tuberculoide tienen una fuerte reacción celular pero baja humoral
(baja titulación de anticuerpos): presentan por lo tanto reacción positiva a la lepromina. Los
tejidos infectados típicamente tienen muchos linfocitos y granulomas, pero relativamente
pocas bacterias.
En la lepra lepromatosa aparecen numerosas máculas eritematosas, pápulas o nódulos.
Existe extensa destrucción de tejidos, como por ejemplo cartílago nasal y orejas,
apareciendo en fases avanzadas la típica "facies leonina". También hay afectación difusa
de los nervios periféricos con pérdidas sensoriales.
M. tuberculosis
Es una bacteria responsable la tuberculosis.
Fue descrito por primera vez el 24 de marzo
de 1882 por Robert Koch, de ahí su
sobrenombre de «Bacilo de Koch», quien
posteriormente recibiría el premio Nobel de
Medicina en 1905.
Su genoma está secuenciado, lo que permitirá
aclarar su relación con las otras especies del
complejo Mycobacterium Tuberculosis.
Las enterobacterias son causantes de infecciones oportunistas ya que algunas son patógenas y
causan efermedades Sistemicas, entéricas o Urinarias.
En el ser humano habitan normalmente en el Colon, en la piel de la zona perianal y genital junto
con el tracto respiratorio superior.
Las enterobacterias forman parte del 80 % de infecciones por GRAM (-) y además constituyen el
50 % de los aislamientos clínicos relevantes.
Serotipos
Se diferencian por serotipificacion.
Las enterobacterias poseen 3 grupos de antígenos
que se han usado para su clasificación:
1) flagelares “H” que son termolábiles;
2) capsulares “K”
3) somáticos “O”.
Durante una infección se generan anticuerpos
dirigidos mayormente contra el antígeno
somático “O”.
Factores de patogenicidad:
1) Adhesinas, actividad presente en fimbrias,
que se asocian con uropatogenicidad de E.coli y
enteropatogenicidad para otros géneros de
enterobacterias. También existen adhesinas
afimbricas.
2) Pseudocápsula, que permite la adherencia a
fómites, como sondas urinarias y catéteres.
3) Cápsula, se asocia con mayor invasividad,
particularmente en las Meningitis por E.coli.
4) Exotoxinas y exoenzimas: especificas para
cada género y especie
5) Endotoxinas, representada por LPS. Puede
provocar el Shock endotóxico.
6) Sideróforos
7) Plásmidos, permiten la transferencia de
factores de patogenicidad y genes que otorguen
resistencia antibiótica a otras bacterias.
Enterobacter
G-,Bacilo, Anaerobia facultativa, patógena oportunista, descomponedoras de la materia orgánica
muerta o en el ser humano como microbiotas intestinales normales.
Causan Meningitis, infecciones de tracto respiratorio y urinario, además de enfermedades
nosocomiales e incluso septicemia.
Cuando se detecta un cultivo positivo a esta bacteria se recomienda realizar un Antibiograma ya
que son ampliamente resistentes a varios antibióticos.
Presenta dos Especies de importancia patógena:
• Enterobacter cloacae
• Enterobacter sakazakii
Escherichia
Bacilo, G-, Flagelos Peritricos, fermentadora de glucosa y
lactosa, no esporulada
Se localiza en el I. Grueso y aguas residuales, necesaria para
el funcionamiento intestinal y la absorción de los nutrientes.
Solo presenta una especie de bacteria patógena, la
Escherichia coli pero esta presenta multitud de cepas
diferentes.
E. coli puede causar infecciones intestinales y extra-
intestinales generalmente severas, tales como infecciones del
aparato excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis,
septicemia y neumonía Gram-negativa.
La E. coli rica está dividida por sus propiedades virulentas,
pudiendo causar diarrea.
Otras cepas causan diarreas hemorrágicas por virtud de su agresividad, patogenicidad y toxicidad.
Causado generalmente por la contaminación de alimentos, y posterior mala cocción de los mismos,
es decir, a temperaturas internas y externas menores de 70ºC.
Klebsiella
Son bacilos Inmóviles, anaerobios facultativos, G-, poseen una capsula prominente de
polisacáridos, fijan el nitrógeno, son despendedoras de gas, fermentadoras de Cetonas.
Posee tres especies patógenas:
• Klebsiella pneumoniae: infecciones del tracto urinario, septicemia, e
infecciones de tejidos blandos.
• Klebsiella ozaenae: rinitis atrófica.
• Klebsiella rhinoscleromatis: infecciones en vías respiratorias, causando
rhinoescleroma o escleroma.
La mas común es K. pneumoniae y es la que tomaremos como representante
del genero.
Proteus
Son Bacilos G-, Oxidasa y Ureasa Negativos, no esporulados, no ptan. Capsulas, productores de
fenilalanina desaminasa, no fermentadoras de Lactosa ya que presentan β Galactosidasa.
Presenta 2 especies patógenas:
• Proteus vulgaris
• Proteus mirabilis
Causan infecciones urinarias, abscesos hepáticos, meningitis, otitis, neumonías.
Son resistentes a la Penicilina.
Causan un olor similar a la masa en su cultivo en agares EMB y McConkey.
Salmonella
Bacilos G-, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos
y que no desarrollan cápsula (excepto la especie S. typhy)
ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro
de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una
enzima especializada, pero no lactosa, y no producen
ureasa.
Bacteria de distribución universal. Se transmite por
contacto directo o contaminación cruzada durante la
manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar,
también por vía sexual.
Presenta dos especies de importancia clínica:
• Salmonella typhy
• Salmonella paratiphy
Salmonella crece con facilidad en agar sangre formando colonias de 2 a 3 milímetros. En
laboratorios de microbiología clínica se aísla con medios selectivos como SS para inhibir el
crecimiento de otras bacterias patógenas y de la flora intestinal saprófita. Tienen los siguientes
antígenos:
• Somático O, del lipopolisacárido en la pared celular, termoestable y es la base de la
clasificación en subgrupos.
• Flagelar H, de la proteína flagelina, termolábil, es la base de la clasificación de especies.
• Envoltura Vi, termolábil, responsable de la virulencia de varias especies patogénicas.
Produce salmonelosis con un período de incubación de entre 5 horas y 5 días, diarrea y dolor
abdominal. A través de las heces del enfermo se elimina un gran número de esta bacteria y se
observa fiebre entérica con un periodo de incubación de 7 a 28 días, causante de dolor de cabeza,
fiebre, dolor abdominal y diarrea, erupción máculo-papulosa en pecho y espalda. Los enfermos
presentan un período de convalecencia entre 1 y 8 semanas y las personas curadas eliminan
Salmonella.
También puede ocasionar fiebres entéricas o infección intestinal por intoxicación con algunos
alimentos.
Shigella
Bacilos G-, no móviles, no formadoras de esporas e incapaces de
fermentar la lactosa, que puede ocasionar diarrea en los seres
humanos.
Hay varias especies diferentes de bacterias Shigella, clasificados en
cuatro subgrupos:
• Serogrupo A: S. dysenteriae (12 serotipos), es un tipo que se
encuentra en los países del mundo en desarrollo donde
ocasiona epidemias mortíferas.
• Serogrupo B: S. flexneri (6 serotipos), causante de cerca de
una tercera parte de los casos de shigelosis en America.
• Serogrupo C: S. boydii (23 serotipos).
• Serogrupo D: S. sonnei (1 serotipo), conocida también como
Shigella del grupo D, que ocasiona más de dos terceras partes
de todos los casos de shigelosis en Norteamérica.
La infección por Shigella, típicamente comienza por contaminación fecal-oral. Dependiendo de la
edad y la condición del hospedador, puede que solo sea suficiente entre 10 y 100 organismos
para causar una infección. La Shigella causa disentería, resultando en destrucción de las células
epiteliales de la mucosa intestinal. La Shigella está involucrada en el síndrome urémico hemolítico.
Los síntomas más comunes son diarrea, fiebre, náusea, vómitos, calambres estomacales y otras
manifestaciones intestinales. Las heces pueden tener sangre, moco, o pus: clásico de la disentería.
En casos menos frecuentes, los niños más jóvenes pueden tener convulsiones. Los síntomas
pueden tomar hasta una semana, pero por lo general duran entre 2 y 4 días en aparecer después
de la indigestión.
Serratia
Es un género de bacteria gram negativa, anaerobio facultativo, basiliforme de la familia
Enterobacteriaceae.
La especie mas comun en el genero, la Serratia marcescens, es normalmente el único patógeno y
usualmente causa infección nosocomial.
Los miembros de este género producen un pigmento rojo caracteristico, la prodigiosina, y puede
ser distinguidas de los otros miembros de la familia Enterobacteriaceae por su única producción de
tres enzimas: DNasa, lipasa, y gelatinasa.[2]
En el hospital, las especies de Serratia tienden a colonizar los tractos respiratorios y urinarios, y el
tracto gastrointestinal en adultos.
La infección por Serratia es responsable del 2% de las infecciones nosocomiales del torrente
sanguíneo, tracto respiratorio inferior, vías urinarias, heridas quirurgicas, piel y tejidos blancos en
pacientes adultos. Brotes de meningitis por S. marcescens, infección de heridas, y artritis han
sucedido en pabellones de pediatría.
Infecciones por Serratia han causado endocarditis y osteomielitis en personas adictas a la heroína.
Casos de artritis por Serratia han sido reportados en pacientes ambulatorios que reciben
infiltraciones intraarticulares.
Yersina
La Yersinia en un género de bacterias que pertenece a la
familia de las Enterobacteriaceae. Estas bacterias son
patógenos de animales, de donde pasan al ser humano
produciendo enfermedades.
Las Yersinias son bacilos del tipo gramnegativos aerobios y
anaerobios facultativos; son mótiles a 22°C, pero no a 37°C,
por flagelos anfitricos, o peritricos, forman pilis, y fimbrias.
No forman cápsulas de gran espesor ni esporas.
Las especies de Yersinia son:
• Yersinia pestis,
• Yersinia enterocolitica
• Yersinia pseudotuberculosis.
Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis producen enteritis,
frecuentemente en los niños, pero el padecimiento se muestra en cualquier edad. Las
manifestaciones se muestran entre dos y ocho días después de la incubación.
ENTEROBACTER
ESCHERICHIA
KLABSIELLA
PROTEUS
SALMONELLA
SHIGELLA
*En medio Salmonella-
Shigella
SERRATIA
*En medio XLD
YERSINIA
* Poco recomendadable y
usado el cultivo.
PARTE II,
TECNICAS DE
DIAGNOSITCO
BACTERIOLOGICO
Capitulo ViI,
TOMA Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
Orina
La muestra de orina se encuentra en entre las mas comunes,
comúnmente se lleva a procesar para determinar males renales y
hepáticos, así como para los rutinarios EGO, donde analizaremos los
parámetros Fisicoquímicos de la Orina y examen Microscópico de
Sedimento Urinario, donde revisaremos microscópicamente el
contenido tanto celular como sedimentario de la orina, encontrándose
desde cristales hasta Bacterias, normalmente del tipo cocoide o
esféricas.
En ultimas instancia cuando se sospeche de una enfermedad
infecciosa en las vías urinarias se lleva a cabo un Urocultivo, que
consiste en sembrar una pequeña porción de la orina en un medio
enriquecido para el crecimiento y desarrollo de las colonias bacterianas
que causan la enfermedad.
Para poder analizar una muestra de orina se debe de dar las siguientes indicaciones para que los
resultados tengan la mayor precisión posible.
Indicaciones Previas:
• Que sea la Primera Orina de la mañana, por ser la más concentrada.
• Llevarla en un recipiente estéril y especial para EGO o Urocultivo según sea el caso.
• Si es mujer y esta menstruando, no tomar la muestra excepto si es imprescindible ya que la
sangre presente en el flujo menstrual alteraría varios parámetros de los análisis.
Toma de la Muestra:
• Orinar un primer chorro en el inodoro, que se desechara, recolectar la segunda Micción o
Chorro de Orina en un recipiente estéril.
Sangre
Esta será la muestra menos utilizada en el área de
bacteriología en el Laboratorio Clínico, regularmente será
utilizada para fines Bacteriológicos en los Llamados
Hemocultivos y esto será en hospitales mayormente, donde
los casos de Septicemias o Bacteriemias son más comunes.
Deberá hacerse una BHC y el Hemocultivo de cada muestra
tomada, para determinar los niveles de las Leucocitosis.
Indicaciones Previas:
• Suspender Antibióticos si es posible por 3 horas
mínimo
Toma de la Muestra:
• Flebotomía Venosa-Arterial
• Tomar muestras Seriadas, si el px no es
venocomprometido tomar muestras de cada brazo
cada 2 horas y si no es posible de los brazos o
dorso de la mano, apoyarse en otras venas y/o
Arterias.
• Las muestras deberán tomarse utilizando guantes y
la asepsia deberá hacerse con soluciones Iodadas
con pinzas, para el caso de la piel del px y en el
caso del materia los tubos para hemocultivos deben
ser limpiados con alcohol etílico en el caucho donde
se introduce la aguja del sistema Vacutainer.
Esputo
Las muestras de Expectoración, también conocidas como Esputo o
Flema son útiles en el Dx en el Laboratorio Clínico, de Tuberculosis y
Neumonías Bacterianas.
Se analizara sus características Físicas, donde se buscara como dato
importante la presencia de sangre, las características Químicas como el
pH y sus características Microscópicas como la presencia de Bacterias
del tipo BAAR, o cocos Gram tanto – como +.
Indicaciones Previas:
• Sin contaminar con Saliva.
• Que presente lo menos de moco Naso-Faríngeo.
• Directamente del Pulmón a un recipiente de Vidrio para cultivos
y pruebas bacteriológicas.
Toma de Muestra:
• La muestra deberá ser recolectada con una expectoración
simple y profunda, por el px.
Exudados en General:
Se entiende por exudados al
Hisopado o toma de muestra con
Hisopo de alguna área especifica
del cuerpo, pudiendo ser Faríngea
que es la mas común, Uretral,
Vaginal, Otica, dérmica, etc.
Nasal
Es la toma de muestra de la nariz, mediante un hisopado, útil al
realizar pruebas como un Eosinofilo en moco Nasal, o cultivos
bacteriológicos.
Indicaciones Previas:
• Sin aseo nasal previo,
• Sin usar lavados nasales, ni soluciones salinas.
Toma de Muestra:
• Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza
hacia atrás.
• Se introduce un hisopo de alginato de calcio, dacrón o
nylon (nunca de algodón en caso de sospechar Bordetella)
por las fosas nasales hasta la nasofaringe, sin tocar los
cornetes y tratando de producir un acceso de tos.
• El hisopo se mantiene in situ de 10-15 segundos durante el
acceso de tos, después de lo cual se retira rápidamente.
Faríngeo
Es la toma de muestra de la Oro-Faringe, que sirve para detectar
enfermedades causadas por microorganismos y virus, a través
del hisopado de la garganta.
Indicaciones Previas:
• Ayuno total, tanto de líquidos como sólidos en las últimas
8 horas.
• Sin aseo buco-faríngeo, mínimo 8 horas.
• Sin utilizar enjuagues antisépticos, un día antes del
examen.
Toma de Muestra:
• El px colocara su cabeza hacia atrás y la apoyara sobre
algún objeto, pared, etc.
• Con la cavidad orofaringea iluminada y con un
abatelenguas se empuja la lengua hacia abajo.
• Con un hisopo de algodón estéril y nuevo, se hace un
raspado de la faringe, especialmente de las áreas
hiperemicas, purulentas, necróticas, en algunos casos
también de las amígdalas, el hisopo NUNCA debe tocar nada que no sea la faringe o área
de toma de muestra.
• Usar un Hisopo nuevo para cada toma de muestra.
• Tomar la muestra nuevamente si se requiere.
• Colocar en un medio de transporte si se requiere.
Uretral
Es el hisopado de la Uretra, que sirve para
detectar enfermedades causadas por
microorganismos y virus...
Indicaciones Previas:
• Se recomienda al paciente que no orine
por lo menos una hora antes de tomar
la muestra.
• Sin limpieza urogenital.
• Sin actividad sexual un día como
mínimo.
Toma de Muestra:
• En casos de gonorrea, cuando se
produce un exudado abundante, se presiona ligeramente la uretra con el fin de que lo
expulse y éste se recoge con un hisopo de alginato estéril el cual se deposita en el medio
de transporte de Stuart.
• Cuando se sospecha de una infección por clamidia, se emplea un hisopo de alginato de
calcio adecuado para toma de muestras en varones, el cual se introduce unos 2 a 4 cm en
la uretra y se frotan las paredes haciendo girar el hisopo durante 5 a 10 segundos; con
esta muestra se deben hacer de inmediato frotes en portaobjetos limpios que se fijan con
acetona.
Vaginal
Es el hisopado de la Vagina, que
sirve para detectar enfermedades
causadas por microorganismos y
virus, a través del hisopado de la
vagina.
Indicaciones Previas:
• Se recomienda al paciente que no
orine por lo menos una hora antes
de tomar la muestra.
• Sin limpieza urogenital.
• Sin actividad sexual un día como
mínimo.
• Sin duchas ni óvulos vaginales, un
día antes.
Toma de Muestra:
• Se utiliza un espejo vaginal para
revisar el cérvix.
• En caso de gonorrea no se hace
ningún tipo de limpieza y se recoge
una muestra de exudado con ayuda de un hisopo; la muestra se debe sembrar de
inmediato en la placa de agar y sólo que ésto no sea posible, se puede transportar en
medio de Stuart.
• Cuando se sospecha de infección por clamidias, se limpia el exocérvix con un hisopo de
algodón para eliminar el moco y el exudado, se introduce el hisopo (de alginato de calcio o
de dacrón, nunca de algodón) o el cepillo unos 2 a 4 cm dentro del canal endocervical y se
rota cuidadosamente presionando contra la pared, evitando el contacto con las superficies
vaginales. Con esta muestra se deben hacer de inmediato frotes en portaobjetos limpios
que se fijan de inmediato con acetona.
CAPITULO VIII
Técnicas bacteriológicas básicas y tinciones
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el
microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la
rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos
pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de
determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredes celulares,
centros de actividad respiratoria, etc.
Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso
llamado fijación. Para bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente, aunque también puede
fijarse con sustancias químicas como formaldehido, ácidos y alcoholes. Después de la fijación, si
se añade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La
fijación se realiza habitualmente en células que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando
después éste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tinción. La fijación
produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por el contrario, hace que las
células aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las células
que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con mucha precisión.
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra
sustancia química, que no es un colorante por sí mismo.
Si se desea simplemente incrementar el contraste de las células para la microscopía, son
suficientes los procedimientos simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorante simple
que actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tan intenso
que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias
en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.
La tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir,
pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las
células.
La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la
microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de
las células bacterianas.
Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaución, ya que
pueden conducir a errores.
Frotis Bacteriológico
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teñir (si
es líquido) o se hace rodar el hisopo con que se tomó la muestra. Una vez que el hisopo ha tocado
la superficie del portaobjetos, que no está estéril, ya no puede ser empleado para inocular los
medios de cultivo.
Puede usarse una aguja estéril para transferir una pequeña cantidad de un cultivo bacteriano a la
superficie del portaobjetos. Este material es suspendido en una gota de agua o solución salina
previamente colocada sobre el portaobjetos.
Cuando se trata de colonias muy pequeñas que pueden perderse en una gota de líquido se emplea
una varilla delgada de madera estéril con la cual se toca la colonia obteniéndose así una fracción
apreciable del desarrollo.
El material se frota directamente sobre el portaobjetos, en forma de Coma o Espiral, donde puede
visualizarse con facilidad.
El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la
zona azul de la llama de un mechero de Bunsen hasta que el vidrio esté tan caliente que moleste al
tacto pero no queme.
Microscopia Directa:
No se utiliza ningún tipo de colorante.
Es el montaje directo húmedo o examen en fresco: las muestras se extienden directamente sobre
la superficie de un portaobjetos para su observación. El material que es demasiado espeso para
permitir la diferenciación de sus elementos puede diluirse con igual volumen de solución salina
fisiológica estéril. Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del material.
Tinciones Diferenciales:
Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras
celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes
que fijan de acuerdo con su propia constitución química.
Los ejemplos clásicos serían la tinción de GRAM o la de Ziehl-
Neelsen.
Tinción de Gram
La tinción de Gram es uno de los
métodos de tinción más importantes en
el laboratorio bacteriológico y con el se
debe estar perfectamente familiarizado.
PROCEDIMIENTO:
1. Preparar el frotis bacteriológico.
2. Fijar al mechero.
3. Teñir con Cristal Violeta por un minuto, al transcurrir el minuto enjuagar con H2O
destilada, sin que el agua caída directamente en la muestra, realizándose en
posición inclinada y secar.
4. Agregar el mordiente, una solución Iodada por un minuto y enjuagar, secar.
5. Decolorar con Alcohol-Cetona, y enjuagar inmediatamente.
6. Secar abanicando
7. Agregar Safranina y que actué por un minuto
8. Enjuagar y secar de nuevo.
9. Leer a 100X
10. Las Bacterias G+ se teñirán de un color Azul o Violeta, mientras que las G- de un
color rojo o rosa.
Tinción de Ziehl-Neelsen.
Las paredes celulares de ciertos parásitos
y bacterias contienen ácidos grasos
(ácidos micólicos) de cadena larga (50 a
90 átomos de carbono) que les confieren
la propiedad de resistir la decoloración con
alcohol-ácido, después de la tinción con
colorantes básicos.
Por esto se denominan ácido-alcohol
resistente.
Las micobacterias y los parásitos como
Cryptosporidium se caracterizan por sus
propiedades de ácido-alcohol resistencia.
PROCEDIMIENTO:
1. Realizar el Frotis.
2. El frotis se tiñe durante unos 3 min con Carbolfucsina.
3. Lavar con agua y secar.
4. Decolorar con Alcohol-Acido por 1 min.
5. Lavar y teñir durante 1 a 1 ½ min con Azul de Metileno de Leofer.
6. Lavar y secar
7. Realizar la Observacion a 100X
8. BAAR + se verán ROJOS, BAAR- se verán AZULES.
9. Reportar 100 Campos, con Cruces:
• Negativo (-): ° No se encuentran BAAR en 100 campos observados (c.o.). o si se
encuentran menos de 1 BAAR en 100 campos ópticos observados.
• Número exacto: de 1-9 BAAR en 100 campos observados.
• Positivo (+): Promedio de menos de 1 BAAR por campo, en 100 campos
observados. Lo que es lo mismo, de 10 a 99 BAAR en 100 campos
• Positivo (++): Promedio de entre 1 a 10 BAAR por campo, en 50 campos
observados.
• Positivo (+++): Promedio de más de 10 BAAR por campo, en 20 campos
observados.
Capitulo IX
TECNICAS DE CULTiVO BACTERIOLOGICO
Medios de Cultivo
Los medios de cultivo, son mesclas de sustancias nutritivas y que son requeridas para las bacterias
para su desarrollo Los medios de cultivo se dividen acorde a sus características en generales,
selectivos o diferenciales.
• Selectivos: sólo permiten crecer un cierto tipo o genero. Ejemplo Agar EMB.
• Diferenciales: permiten distinguir entre dos o más bacterias por características coloniales.
Ejemplo Salmonella Shigella
Agar y Caldos
Además se clasifican según sus características Físicas en dos tipos de medio:
• Los Medios Gelificados o Agares, que normalmente los encontraremos preparados en
cajas de Petri, aunque también pueden preparase en tubos.
• Los Medios Líquidos o Caldos, que siempre los hallaremos preparados en tubos para
cultivo.
Agar Caldo
Preparación
REGLAS:
• Siempre preparar los medios con agua destilada
PROCEDIMIENTO:
1. En un matraz de Erlenmeayer, se pesara la cantidad del medio requerida y se suspende
con Agua Destilada y tapar con un algodón.
2. Calentar agitando vigorosamente hasta punto de ebullición, durante un minuto para
disolverlo completamente.
3. Esterilizar en Autoclave a 121ºC a 15 Lbf de Presión por 15 min.
4. Enfriar a 45º C aproximadamente y vaciar en cajas o tubos estériles, a la medida indicada
por caja o tubo, aprox. 20ml.
Esterilización
La esterilización tiene como objetivo, destruir a todos los seres vivos que existan dentro de objetos
o sustancias que se desee libre de ellos, en este caso los instrumentos o medios para realizar un
cultivo bacteriológico para evitar así la contaminación y errores a la hora de reportar resultados.
Fuego Directo
Autoclave Hipoclorito de
Sodio Ox. De Etileno
Siembra
La siembra es una de las partes mas
importantes en el laboratorio de
bacteriología, consiste en inocular
una pequeña parte homogeneizada de la muestra ya sea directamente como es el caso de la orina,
sangre, exudados y otras muestras liquidas, o realizando una dilución con H2O, o solución salina
Fisiológica, ambas a ¾ de el recipiente o según el contenido de la muestra, como es en el caso de
la materia fecal, esputo, semen, etc.
Todas deben realizarse en el área de mecheros y sin abrir totalmente la caja Petri para evitar una
no deseada contaminación.
Capitulo X
Medios más Utilizados y Antibiogramas
Agar McConkey
Fundamento:
Medio diferencial para la detección, aislamiento y
enumeración de bacterias coliformes y patógenas
intestinales en aguas, productos lácteos y muestras
biológicas.
Su acción diferencial esta basada en que los
microorganismos capaces de fermentar lactosa
producen una caída de pH, junto con una absorción del
colorante, apareciendo en la colonia el color rojo, las
colonias de microorganismos que no fermentan la
lactosa permanecen incoloras.
El agar Mc Conkey es un medio sólido, diferencial y
selectivo. Se usa para la discriminación de bacterias con
capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -).
Preparación a 50g/L
Lac +
El uso de los colorantes, Eosina y Azul de Metileno, permite la identificación de las bacterias
fermentadoras de lactosa de las no fementadoras.
Resultados:
BACTERIA DESCRIPCION DE LA COLONIA
Escherichia coli Verde metálico, con centro negro azulado,
difundida en el medio.
Klebsiella pneumoniae Mucosa, rosa-purpura confluente
Proteus mirabilis Incolora
Enterococcuss faecalis Incolora y Puntiforme
Shigella flexneri Incolora
Salmonella typhimirium Incolora
Ejemplos:
Preparación a 40g/L
Agar Salmonella-Shigella
Fundamento:
Medio selectivo para el aislamiento de salmonellas y
de Shigella de heces, de comestibles y de otros
materiales.
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el
verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias
Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y
a la formación de ácido sulfhídrico a partir del
tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa
capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo
virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias
rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no
fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la
formación de sulfuro de hierro.
Composición por Litro:
Peptona de casina y carne- 5g
Extracto de carne de buey- 5g
Lactosa- 10g
Citrato sódico- 8.5g
Tiosulfato sódico- 8.5g
Citrato de hierro- 1g
Sales Biliares- 8.5g
Rojo neutro- 0.025g
Agar- 15g
Verde brillante- 0.3mg
Preparación: 60g/L
Enterotubos
La identificación de microorganismos patógenos y microorganismos alterantes, cultivos iniciadores,
etc., en microbiología clinica, es una parte importante de los métodos microbiológicos. Los métodos
convencionales (que datan de hace más de 100 años) utilizaban grandes volúmenes de medio
para examinar una característica particular de una bacteria, por ejemplo: 10 ml de caldo lactosado
Principales enterobacterias;
De los integrantes de la familia unos fermentan la lactosa y otros no. Incluye los siguientes
géneros:
No fermentadores de lactosa Fermentadores de lactosa
Salmonella Escherichia
Shigella Enterobacter
Edwarsiella Citrobacter
Hafnia Serratia (a veces)
Proteus Klebsiella (excepto.Kb. rhinoscleromatis)
Providencia
Yersinia
Morganella
Erwinia
Enterotubos, Son tubos de plástico con compartimientos, formado por 12 medios de cultivo
diferentes, que permiten la determinación de 15 reacciones bioquímicas.
Está concebido para la inoculación simultánea de los 12 medios con una sola colonia, utilizando, la
aguja de inoculación dispuesta en el centro.
La combinación de reacciones resultante, junto con la guía de interpretación (libro de códigos),
permite la identificación de Enterobacteriaceae con importancia clínica.
Reacciones bioquímica:
Prueba Reacción / Enzimas Negativo Positivo
Glucosa fermentación de glucosa rojo (a naranja) amarillo (a
dorado)
Gas producción de gas en la fermentación de la sin sin
Procedimiento de Inoculación
2. Etiquetar el Enterotube II
correctamente
3. Retirar las dos tapas. La punta de la
guía de inoculación se encuentra debajo
de la tapa blanca.
8. Incubar a 35 o 37 °C durante 18 - 24
h sobre una superficie plana o en
posición vertical. Permitir la circulación
de aire entre los tubos incubados.
Interpretación de resultados
Si no se registra cambio de color o se observa un color naranja en el compartimiento de glucosa y
el crecimiento es evidente por los cambios de color en otros compartimientos, el organismo no es
miembro de la familia Enterobacteriaceae.
1. Después de 18 - 24 h de incubación,
efectuar la interpretación de todas las
reacciones, efectuar la lectura de las
reacciones de manera secuencial, Vista delantera
comparando los colores de los medios en el
tubo después de la incubación con aquellos
que se suministran en el esquema de colores.
Todas las reacciones positivas, pueden ser de
igual, mayor o menor intensidad que los
colores indicados en el gráfico de reacciones
de colores.
Antibiogramas
El primer objetivo del antibiograma es el de medir la
sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es
la responsable de una infección a uno o varios
antibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de
los requisitos previos para la eficacia in vivo de un
tratamiento antibiótico. El antibiograma sirve, en primer
lugar, para orientar las decisiones terapéuticas
individuales.
El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la
evolución de las resistencias bacterianas. Gracias a este
seguimiento epidemiológico, a escala de un servicio, un
centro de atención médica, una región o un país, es como
puede adaptarse la antibioterapia empírica, revisarse
regularmente los espectros clínicos de los ab y adoptarse
ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de
programas de prevención en los hospitales.
Interpretación de un Antibiograma
Ciertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando se inscriben en el DNA
bacteriano. Su expresión en el organismo, en donde las condiciones en cuanto a medios son
diferentes, expondría al riesgo de fracaso terapéutico. Para evitar esto, el antibiograma debe ser
interpretado de manera global a fin de descubrir, a través de la comparación de las respuestas
para cada antibiótico, un mecanismo de resistencia incluso débilmente expresado. Así, gracias a la
interpretación, una cepa que aparece como falsamente sensible será categorizada como I o R.
Durante muchos años, y a pesar de ser una técnica puramente cualitativa, el método de difusión
por disco, en función sobre todo de su comodidad, economía y fiabilidad, ha sido, y aun es, uno de
los más utilizados en los laboratorios de todo el mundo.
El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su superficie se
disponen los discos correspondientes a varios antibióticos. Se incuban las placas durante 16-24
horas a 35ºC y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas.
Se valora el diámetro de la zona de inhibición que se forma alrededor de cada disco y se compara
con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS. Con esta referencia podemos informar si
el microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibióticos
ensayados en las placas.
RESPONSABLE SANITARIO:
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PATOLOGO DR. LEANDRO DEL VALLE Y ALTAMIRANO
PARTE iII,
practicas
realizadas
Capitulo XI
Prácticas en los Cursos.
Bacterioscopico de Orina
LABORATORIO CLINICO CBTIS #41
REG.SSA 9374
BACTERIOLOGIA
T.L.C. RESPONSABLE:
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T.L.C. Alvarado Ramírez Denisse J.
RESPONSABLE SANITARIO
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Bio. Luz E. Hernández López
BACTERIOLOGIA
T.L.C. RESPONSABLE:
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T.L.C. Meza Dueñas Stephany B.
RESPONSABLE SANITARIO
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BACTERIOLOGIA
T.L.C. RESPONSABLE:
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T.L.C. Osorio Casillas Carla Gpe.
RESPONSABLE SANITARIO
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Bio. Luz E. Hernández López
BACTERIOLOGIA
T.L.C. RESPONSABLE:
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T.L.C. Salinas Luna Karla Michelle
RESPONSABLE SANITARIO
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Bio. Luz E. Hernández López
BACTERIOLOGIA
T.L.C. RESPONSABLE:
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T.L.C. Valle Gutiérrez Andrés
RESPONSABLE SANITARIO
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Bio. Luz E. Hernández López