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También denominado método del hemocitómetro, esta técnica tiene como finalidad
determinar en forma manual el número aproximado de eritrocitos y leucocitos totales
de una muestra sanguínea determinada por unidad de volumen. Esto se expresa en
número total de células por microlitro (ul). Requiere la dilución de la muestra en
pipetas adecuadas para cada tipo celular y con diluyentes especiales para cada caso.

En el caso de los eritrocitos se utiliza una pipeta especialmente calibrada, la cual posee
una perla roja en su interior. Se diluyen con una solución isotónica para evitar la lisis y
crenación celular que puede ser Hayen A, Gowers o simplemente puede usarse suero
fisiológico. La pipeta, una vez llena, debe agitarse manual o mecánicamente.

En el caso de los leucocitos se usa una pipeta especialmente calibrada, la cual posee
una perla blanca en su interior, y se diluyen con una solución ligeramente ácida que
destruye las células anucleadas, dejando intactas las células nucleadas. Se puede
utilizar la solución Hayen B (ácido acético al 2%). La pipeta debe agitarse manual o
mecánicamente.

Una vez realizadas las diluciones, se depositan sobre la cámara de Neubauer la cual
posee dos superficies de conteo, una central para eritrocitos y cuatro laterales para
leucocitos (Figura 2.1.). Al final del capítulo hay un recordatorio con las pautas básicas
de uso del microscopio.

Figura 2.1. Esquema de cámara de Neubauer




· Pipetas para conteo de eritrocitos (perla roja) y leucocitos (perla blanca)
· Manguerilla de goma con boquilla
· Solución fisiológica
· Solución Hayen B
· Cámara de Neubauer








· Aspirar la sangre hasta la marca 0,5 de la pipeta. Luego, limpiar por fuera la pipeta
antes de introducirla en la solución.
· Diluir la sangre con solución fisiológica hasta la marca 101.
· Agitar sucesivamente en forma suave y lenta para mezclar la sangre con el
diluyente.
· Cargar la cámara de Neubauer.
· Identificar en el microscopio, con el lente de menor aumento, los cuadrantes de
conteo tal como se observa en la figura 1. Luego, enfocar paulatinamente con los
siguientes lentes hasta enfocar la zona de conteo de eritrocitos.
· Realizar el conteo de eritrocitos en la zona central de la cámara utilizando los
cuatro extremos y el centro (figura 2.2.).
· Multiplicar el número obtenido por el factor 10.000. Este factor es el resultante de
la multiplicación de la dilución de la muestra (200 [proporción de 0.5 de sangre por
100 de diluyente]) por la profundidad de la cámara (10 [0.1 mm de profundidad])
por el número de cuadrantes usados para el conteo (5 [se usó la quinta parte de
los 25 cuadrantes centrales]).
· El total se expresa en eritrocitos/ul.

Figura 2.2. Cuadrantes de conteo de eritrocitos.








· Aspirar la sangre hasta la marca 0,5 de la pipeta. Luego, limpiar por fuera la pipeta
antes de introducirla en la solución.
· Diluir la sangre con Hayem B hasta la marca 11.
· Agitar sucesivamente en forma suave y lenta para mezclar la sangre con el
diluyente.
· Cargar la cámara de Neubauer.
· Identificar en el microscopio, con el lente de menor aumento, los cuadrantes de
conteo tal como se observa en la figura 1. Luego, enfocar paulatinamente con los
siguientes lentes hasta enfocar una de las 4 zonas de conteo de leucocitos (figura
2.3).
· Con aumento mediano se cuentan los leucocitos y se obtiene el promedio
· El número de células obtenidas se multiplica por un factor de 200. Este factor
resulta de la multiplicación de la profundidad de la cámara (10 [0,1 mm de
profundidad]) por la dilución de la muestra (20 [proporción de 0.5 de sangre en 10
de diluyente]). En caso de contar en las cuatro zonas, el factor a aplicar es de 50
(200/4).
· El valor obtenido se expresa en leucocitos/ul.

Figura 2.3. Cuadrantes de conteo de leucocitos.





El conteo de células en la cámara de Neubauer, especialmente de eritrocitos, puede
resultar bastante engorroso y confuso si no se siguen ciertas pautas.

En primer lugar se debe identificar claramente el cuadrante en el que realizaremos el

conteo y observar sus límites. Las células se observarán como pequeños discos
transparentes y brillantes dispersos en el campo de observación.

Se recomienda comenzar el recuento en el cuadrante superior izquierdo incluyendo

todas las células ubicadas sobre los bordes superior e izquierdo. Siguiendo este patrón
en los cuadrantes siguientes nos aseguraremos de no omitir ninguna célula. Un
ejemplo gráfico de lo expuesto se observa en la figura 2.4.

Figura 2.4. Patrón de conteo en cámara de Neubauer*

La letra A muestra tres cuadrantes con células dispersas al azar. En las letras B, C y D
se grafica de color azul las células que son contadas en cada cuadrante, siguiendo un
orden de conteo de izquierda a derecha.






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El siguiente es un recordatorio básico de manejo de un microscopio.
· Enchufar
· Encender lámpara
· Bajar diafragma
· Abrir totalmente el condensador del diafragma
· Colocar el objetivo menor
· Colocar portaobjeto con el extendido en la platina
· Seleccione el objetivo para observar
· Subir el condensador al máximo
· Enfocar el plano de células
· Abrir el diafragma lo suficiente para que ilumine la muestra. Se debe regular la
intensidad cuando corresponda.
· Usar aceite de inmersión en los casos que se requiera observar en el aumento
mayor (100X). No olvidar limpiar el mismo una vez que se deja de usar así como el
frotis. De esta manera se evita que el aceite de inmersión ensucie los otros
objetivos.
· En el objetivo de mayor aumento (100X) enfocar sólo con el micrométrico y con
cautela. De esta manera evitaremos romper algun frotis ($$$).
· Una vez que se desocupe el microscopio, dejar en el aumento menor, con su funda
y desenchufado.