Recogida, preparación y conservación de muestras

biológicas humanas
1 Exploración de la función respiratoria:
1.1 Espirometría forzada:
Es una técnica de exploración que se basa en realizar una espiración
con máximo esfuerzo y rapidez,
partiendo de una situación de
máxima inspiración. Hay que
medir una serie de parámetros,
los más destacados son:
• FVC, capacidad vital
forzada, es el volumen
total espirado
• FCE o VENS, volumen
espirado en el primer
segundo
Con los dos parámetros se
establece un cociente FVC/FVE, se le llama índice de Tifenall. Esta
prueba orienta sobre el tipo de patología del aparato respiratorio, es un
aprueba frecuente en el chequeo del aparato respiratorio, permite
diferenciar entre una patología obstructiva o restrictiva.
La obstructiva se reduce el FVC y el FVE, por tanto se encuentra
disminuido el índice de Tifenall, en la restrictiva se encuentra reducido
el FVC, pero el FVE no tiene porque estar disminuido, así el índice de
Tifenall puede estar normal o elevado.
1.2 Gasometría arterial:
Indicaciones de la gasometría:
La finalidad es determinar la presión parcial
de O2, CO2 y el pH, es fundamental para
realizar estudios y controles de
enfermedades respiratorias. Hay 4
indicaciones básicas para hacer la
gasometría:
1. En toda persona que se sospeche que
tenga una insuficiencia respiratoria
2. Para controlar a pacientes que tengan
alteraciones restrictivas
3. En caso de que haya alteraciones
obstructivas graves
4. En los estudios preoperatorios de
pacientes del aparato respiratorio
 Se suele hacer la punción en las arterias cubitales, media, humeral y
también en la femoral. Los pasos son los siguientes:
1. Se identifica la arteria por palpación
2. Se desinfecta la zona de punción
3. Se introduce la aguja en vertical,
montada sobre una jeringa de
cristal, tiene que llevar heparina
4. Una vez dentro de la arteria el
émbolo de la jeringa sube, y sale la
sangre debido a la presión que tiene
la arteria.
5. Se retira todo el mecanismo
montado y se le coloca un corcho
6. Puede ocurrir que entre aire, hay
que quitarla inmediatamente
7. Este examen hay que realizarlo
inmediatamente, en 10- 15 min., y
se aconseja que desde el punto de
extracción al laboratorio se lleve la
muestra en un baño de hielo.
8. Cuando se retira la aguja hay que
hacer una presión sobre la zona
durante unos 5 min., para evitar que
se formen hematomas serios. A veces se coloca un saquito con
arena para provocar presión. Los valores normales que se deben
conseguir de pO2, va a variar si es una persona joven o mayor,
en personas jóvenes la pO2 es mayor que en personas mayores y
varones.
2 Estudio de esputo:
2.1 Técnica de obtención:
El esputo es una secreción del árbol bronquial y de las vías aéreas
altas, se define como una mezcla de secreciones del árbol respiratorio.
Básicamente se compone de secreciones formadas por plasma, agua,
electrolitos y moco. También forman parte del esputo secreciones
nasales y salivares, células exfoliadas del árbol traqueobronquial, la
faringe y boca, también forman parte de eso moco microorganismos
saprofitos (que normalmente no causan
secreción) que suelen proceder de la boca.
En condiciones normales el árbol
traqueobronquial segrega aproximadamente
100 ml. diarios de secreción.
La recogida se hará preferiblemente por la
mañana, se procurará que la persona este en
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ayunas desde la noche anterior, se hace por la mañana porque el
cambio de postura favorece la movilización de la secreción. Antes de
expectorar se deben seguir estas pautas:
1. Cepillado de encías, boca y lengua con un cepillo de dientes y
agua para eliminar residuos de la boca.
2. Se aconseja realizar gargarismos y enjuagues de la boca para
eliminar residuos que están en la rinofaringe.
3. Una vez hecho lo anterior, el paciente realizará inhalaciones
profundas y toserá enérgicamente intentando traer el esputo de
la traquea y de los bronquios.
Para recoger la muestra tiene
que ser recogida en un frasco
estéril, a veces es necesario
recoger varias muestras a
distintas horas, cada una de
ellas en recipientes distintos.
Si no va a ser analizado
inmediatamente hay que
conservarlo en frigorífico
Para algunos estudios como
hongos y mycobacterias
(bacterias ácido- alcohol
resistentes), es preciso una
muestra de 3 días consecutivos. Si se quiere hacer el estudio
citológico, si la muestra no se puede enviar directamente al laboratorio
necesitamos fijar la muestra, se fija utilizando alcohol de 50º.
En muchas ocasiones los pacientes tienen dificultad para expectorar,
en esos casos se puede proceder a estimular la salida de esputo, puede
ser por medios físicos, aplicando técnicas de percusión porque se hace
vibrar la pared torácica. Otra forma es por medios químicos, consiste
en la aplicación a nivel de la traquea o el árbol bronquial de partículas
salinas mediante nebulización, consiste en combinar la solución de
agua con sal con aire para crear partículas muy pequeñas, esto provoca
un aumento de la secreción bronquial y una mayor facilidad para que
aparezca el esputo.
2.2 Procesamiento:
Al laboratorio llega la muestra y se siguen las siguientes pautas:
1. Se hace el registro e identificación de la muestra.
2. Se deposita la muestra en una caja de Petri, se realiza un
análisis macroscópico. Se registran las características
organolépticas para distinguir los distintos tipos de
esputos: mucoso, purulento, mucopurulento, herrumbroso
 (color ferroso), etc. En la observación macroscópica se pueden
detectar fragmentos, coágulos de sangre…
3. Realización de extensiones y fijaciones, se coge una cantidad
pequeña, se deposita en un porta y se extiende con otro porta
para obtener una peliculita. Una vez realizada la extensión se
introduce en alcohol 96º durante mínimo 30 min.
4. Tinción y montaje de las extensiones, una vez fijadas se hace la
tinción, una de las más utilizadas es la tinción de papanicolau,
es una tinción especial para citología. Para bacterias se utiliza la
tinción de Baar. Hecha la tinción se coloca un cubre, evitando
que queden burbujas y se observa.
2.3 Examen físico y características organolépticas:
En condiciones normales el esputo
está compuesto por las siguientes
sustancias químicas:
• 95 % H2O
• 5% de hidratos de carbono,
lípidos y ácidos nucleicos, y
sobre todo ADN.
La consistencia que tenga depende de
la cantidad de agua (%) y también del
% de glicoproteínas.
Además en el esputo aparecen células
como leucocitos, macrófagos y
células epiteliales.
Cantidad de esputo:
• La secreción traqueotomial tiene que aumentar en más de 100
ml. para producir expectoración
• Se considera que hay una expectoración escasa cuando la
secreción no es superior a 400 ml.
• La expectoración se considera abundante cuando es mayor de
500 ml. las 24 horas.
• Se considera crónica cuando se expectoran cantidades
excesivas, abundantes y suelen ser una expectoración purulenta.
Color:
• Incoloro, tipo saliva, aparece en procesos inflamatorios leves
pero no infecciosos y suele producirse por un trasudado
bronquial.
• Blanco, tiene gran cantidad de moco y suele aparecer en
procesos catarrales.
• Amarillo- verdoso, es indicativo de pus, indica la presencia de
infecciones bacterianas.
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 • Grisáceo, típico de abscesos pulmonares y tiende a tener muy
mal olor.
• Herrumbroso, con un color parecido al óxido, aparece en
algunas patologías como por ejemplo en neumonías
neumocócicas o en casos de infarto pulmonar.
• Polvo de ladrillo, es indicativo de un tipo de bacilo determinado
llamado “Fried Lander”
• Hemático, hay presencia de sangre en el esputo y puede tener
distintas características:
1. Rojo puro: presencias de sangrado “hemoptisis”
2. Rojo, color mermelada: puede indicar cáncer
broncopulmonar
3. Rosado con espuma: tiene aire, indica edema de pulmón
4. Achocolatado, muy marrón: aparece en los casos de
absceso pulmonar por una complicación hepática
Sabor:
• Sabor salado: en casos de bronquitis aguda
• Sabor amargo: en casos en los que hay procesos hepáticos
2.4 Examen microscópico en fresco:
En este examen se pueden
observar unas fibrillas incoloras
con doble contorno, sus extremos
aparecen como doblados. Si
aparece esto es indicativo de que
puede haber un proceso que
destruye el tejido pulmonar.
También pueden aparecer cristales,
por ejemplo de oxalato cálcico,
fosfato amónico, Charcot- Leyden
(son los cristales más
característicos, tienen forma alargada y se originan cuando se
degradan las granulaciones de los leucocitos al haber infecciones).
2.5 Estudio citológico:
Para poder observar bien las células se necesita que antes se tomase
bien la muestra y que esta sea fresca, sino las células se rompen.
En estos casos es preferible obtener la muestra por una técnica
determinada llamada broncoscopia
La técnica sería la siguiente:
1. Dilución con solución salina fisiológica
2. Centrifugar
3. Cogemos el sedimento (unas gotas)
4. Colocamos esas gotas en un porta obteniendo una gota fina muy
uniforme
 5. La fijamos con alcohol 95º más éter
6. Procedemos a su
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coloración
7. Observamos al
microscopio en lo que podemos encontrar lo siguiente
• Células faríngeas: Son grandes, ovaladas o poliédricas,
con un núcleo muy pequeño que se tiñe de violeta claro.
• Células bronquiales: son células
alargadas, en uno de los extremos
aparecen como unos cilios que
vibran, núcleos grandes los cuales
se tiñen de violeta rojizo y el
citoplasma de violeta claro.
• Macrófagos: son células grandes y
redondas que a veces se colorean
de violeta.
• Neutrófilos: suelen ser de origen alveolar, y sobre todo si
es purulento.
• Linfocitos: aparecen muchos en la fase precoz de la
tuberculosis.
• Eosinófilos: cuando hay cuadros alérgicos de tipo
asmático.
• Células neoplásicas: son
células tumorales, de
tamaño más grande, tienen
varios núcleos, muchas
células, se agrupan
demasiado, cuanto más
raras son más grave es el
cáncer.
2.6 Estudio bacteriológico:
Para el diagnóstico de infecciones del aparato respiratorio se utiliza
sobre todo dos tipos de tinción: Gram y Baar (ácido- alcohol
resistente)
2.7 Estudio bioquímico e inmunológico:
En condiciones normales en el esputo hay H2O, sales y enzimas, estos
aparecen como consecuencia de la degradación de leucocitos.
Aparecen las proteínas pero no aparece la albúmina y tampoco el
fibrinógeno a no ser que sea un caso de bronquitis aguda. En caso de
asma o bronquitis aparecen inmunoglobulinas.
2.8 Cuerpos asbestósicos:
Es un mineral que se usa para fabricar amianto, que es un material
aislante térmico.

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 El amianto suelta un polvo en el cual va el asbesto, el cual entra en el
aparato respiratorio. Si esto ocurre puede producirse asbestosis que es
un cuadro similar a silicosis.
Esta es una enfermedad
que puede tardar años en
aparecer y que se
caracteriza porque en el
esputo aparecen
macrófagos en el interior
de estos cuerpos
ferruginosos.
3 Otras
exploraciones:
3.1
Fibrobroncoscopia:
Es una técnica
endoscópica realizada con un broncoscopio flexible, que es un
instrumento que puede ser introducido hacia el interior de los
bronquios para poder observar su
interior.
Un fibrobroncoscopio flexible es un
tubo flexible de 5 mm., que a través
de fibra óptica nos va a permitir ver
la luz bronquial.
Una broncoscopia con un
broncoscopio rígido es exactamente
la misma técnica, pero la sonda es
con un tubo rígido, muchas veces
tiene en su extremo como un canal
que sirve para aspirar secreciones.
Otras veces en ese canal se pueden
insertar pinzas para poder extraer muestra, esta técnica es para
personal adiestrado, la introducción de esa sonda a veces se hace por
vía bucal o por vía nasal, muchas veces se
hace bajo control radiológico. Esta prueba se
puede hacer con fines diagnósticos, sobre todo
para confirmar diagnósticos sospechosos de
cáncer pulmonar y también cuando se
observan imágenes radiológicas con causas
desconocidas. Otras veces la prueba se hace
con fines para controlar la eficacia terapéutica
o con fines terapéuticos, incluso para eliminar
cuerpos extraños.

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 3.2 Biopsia bronquial:
Consiste en extraer un trozo de
tejido de los bronquios y eso se
puede hacer llevando un
fibrobroncoscopio hasta el
bronquio, en el canal se insertan
unas pinzas de biopsia y se recoge
la muestra.
3.3 Broncoaspirado:
Consiste en introducir en el
interior del bronquio una cantidad
3
que oscila entre 5-10 cm de solución salina, inmediatamente se hace
una aspiración, con esa aspiración vendrán células que servirán para
analizar que se desprenden de la pared bronquial.
3.4 Cepillado bronquial:
A través de un broncoscopio se introduce un cepillo y se va haciendo
un cepillado de las paredes del bronquio, luego se introduce una
solución salina y se aspira, por el cepillado de la pared se obtienen
células bronquiales.
3.5 Biopsia transbronquial:
Se hace a través del bronquio pero la lesión es pulmonar,
la muestra se extrae del pulmón que se va a analizar.
3.6 Lavado broncoalveolar:
En los procesos broncoalveolares se introduce entre 100-
150 ml. de suero fisiológico y posteriormente se aspira,
se obtiene así muestras del alveolo.
4 Líquido pleural:
El objetivo de este líquido es evitar el roce de las hojas de la pleura,
este líquido se produce a expensas del plasma, se trata de un
ultrafiltrado de plasma que se realiza a través del endotelio capilar de
las hojas pleurales. En su formación
intervienen varios factores, la presión
oncótica (presión debida a las
proteínas), la permeabilidad capilar, el
drenaje linfático.
El volumen de ese líquido pleural es de
unos 10 ml., en condiciones normales
se caracteriza porque no hay
fibrinógeno, la concentración de
proteínas es de 1g./ 100 ml. Cualquier
desequilibrio que ocurra en los factores
que intervienen en su producción
puede dar lugar a un exudado o a un trasudado, cuando la cantidad de
líquido pleural es mayor a 10 ml. se dice que hay un derrame pleural,
y estos derrames
pueden ser clasificados
de dos formas, puede
ser un derrame que sea
un exudado o un
trasudado.
Un exudado aparece en
los siguientes casos:
cuando hay un
aumento de la
permeabilidad capilar,
cuando hay una disminución de la reabsorción linfática.
Los trasudados se producen cuando hay un aumento de la presión
capilar o que disminuye la presión oncótica de las proteínas.
Causas del derrame:
Neoplasias, infección (por ejemplo neumonías), puede ser producido
por un traumatismo, enfermedad reumatoidea, pancreatitis.
Toracocentesis o punción transtorácica
Consiste en una técnica para la obtención de líquido pleural, es una
técnica sencilla pero necesita ciertos cuidados, control radiológico, la
punción se realiza con el paciente sentado,
se hace una infiltración anestésica local,
se introduce una aguja gruesa y larga en la
cavidad pleural con un sistema que sirve
para dirigirla (fiador) porque la aguja
tiene que primero atravesar la pared
torácica, músculos, y luego encuentra una
resistencia que es la cavidad pleural.
Cuando se encuentra dentro de la cavidad
se aspira líquido evitando que entre aire,
no todas las muestras son iguales y los
líquidos densos con pus son más difíciles
de extraer.
El proceso de recogida tiene que ser en
condiciones asépticas. La muestra se
reparte en tubos para hacer distintos
estudios, puede ser que el líquido sea un líquido hemorrágico y se le
llama un hemotórax, si es lechoso porque tiene contenido linfático se
le llama quilotórax. En el hemotórax hay que comprobar si viene
manchado con sangre (rotura de un capilar) o viene con sangre. Si es
debido a rotura de un capilar al ir extrayendo el líquido va a ir
clareando, si es que la pleura ya contiene sangre se mantiene durante
toda la extracción el mismo tono.
Examen macroscópico:
En condiciones normales se caracteriza porque es amarillo pálido y
transparente, si el líquido es turbio es que hay presencia de leucocitos,
que indican que tiene un origen inflamatorio que puede ser que sea
infeccioso o no.
Otras veces tiene aspecto
lechoso, quiloso, aún así
hay dos casos, quiloso
verdadero o
pseudoquiloso. Quiloso
verdadero, se produce
por una fuga de
contenido torácico hacia
el espacio pleural y si es
pseudoquiloso se origina
por una ruptura de grasas
que están en las células.
Puede haber un derrame sanguíneo, hemotórax, su causa más
frecuente es por un traumatismo o también puede aparecer si hay un
tumor.
Muchas veces la extracción de líquido pleural es hemorrágica pero
debida a la toracocentesis porque se pudo romper un vaso sanguíneo y
al aspirar sale sangre, pero eso no tiene significado patológico y se
distingue que la sangre es producida por la punción cuando la salida
de líquido se produce con aclaramiento.
Examen bioquímico:
Se considera que el líquido pleural
es un trasudado cuando la
concentración de proteínas es menor
de 3g./ 100ml. y la densidad es
menor de 1,018g./cm3. El exudado
es al contrario que el trasudado.
Hay otros parámetros bioquímicos:
hay 2 enzimas para diferenciar
exudado de trasudado, la amilasa
suele estar alta en los casos de
exudado, en trasudado casi no varía.
La otra enzima LDH (lactato
deshidrogenasa), en los trasudados
la relación que hay entre el LDH del

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líquido pleural y la LDH del suero es menor de 0,6 y para el exudado
es mayor de 0,6.
Puede interesar hacer un análisis bacteriológico, la infección que
ocurre en esta zona anatómica es secundaria, aparece a consecuencia
de otra patología, las causas pueden ser indirectas, la infección llega a
la pleura por alguna vía que está en contacto con la pleura, A través del
mediastino si hay una perforación,
mediastinitos, o si hay una
afectación de la pared torácica.
Otras causas pueden ser directas,
por ejemplo un traumatismo
punzante, por ejemplo un navajazo
o al realizar una toracocentesis sin
la asepsia adecuada, por vía
sanguínea al llegar los gérmenes a
la pleura desde la sangre. La
muestra la debemos de recoger en
condiciones estériles utilizando
tubos especiales, a veces
manteniendo condiciones
anaerobias, además se aconseja
que se centrifugue la muestra unos 20 min. A 1500 rpm., si es muy
líquida, si tiene aspecto muy purulento no se centrifuga. Además se
suelen hacer cultivos y se tiñe con Zhiel y con Gram.

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