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1
d>K&KEdEd

LABORATORY ASSESSMENT ...............................................................................................................................3
INTRODUCTION: BIOCHEMICAL LABORATORY OPERATION AND SAFETY.......................................5
EXPERIMENT 1: MICROSCOPY AND ASEPTIC TECHNIQUE ......................................................................7
EXPERIMENT 2 STAINING AND IDENTIFICATION OF CELL.................................................................... 12
EXPERIMENT 3 BIOMASS CONCENTRATION MEASUREMENT .............................................................. 16
EXPERIMENT 4 PROTEIN CONCENTRATION MEASUREMENT............................................................... 20
EXPERIMENT 5 STERILIZATION METHOD ................................................................................................... 23
EXPERIMENT 6 MICROBIAL STRAIN DEVELOPMENTS ............................................................................ 34
EXPERIMENT 7: MEASUREMENT OF OXYGEN UPTAKE RATE AND OXYGEN TRANSFER RATES
..................................................................................................................................................................................... 37
EXPERIMENT 8: PREPARATION AND GROWTH OF MICROBE IN BIOREACTOR .............................. 39
EXPERIMENT 9: CELL SEPARATION ............................................................................................................... 43
EXPERIMENT 10: CELL DISRUPTION .............................................................................................................. 45
EXPERIMENT 11: PROTEIN PURIFICATION: EFFECT OF DIFFERENT PUMP POWER IN CROSS-
FLOW MEMBRANE FILTRATION SYSTEM .................................................................................................... 47
EXPERIMENT 12: ENZYMATIC KINETICS ...................................................................................................... 52

2
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KEǁĞĞŬĨƌŽŵƚŚĞĚĂƚĞŽĨƚŚĞĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚ͘

YƵŝnj

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ŝŶƚŚŝƐĐŽƵƌƐĞ

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ŽŶ͘
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ůĂďǁŽƌŬƐĂŶĚĂůƐŽĂƐĂǀĞƌŝĨŝĐĂƚŝŽŶŽĨĚĂƚĂƚŚĂƚŚĂƐďĞĞŶƉƌĞƐĞŶƚĞĚŝŶƚŚĞƌĞƉŽƌƚƐ͘

ƌƌŽƌĂŶĂůLJƐŝƐ

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zŽƵĐĂŶƐŝŵƉůLJƉƌŽǀŝĚĞƵƐǁŝƚŚĞŝƚŚĞƌƚŚĞĂǀĞƌĂŐĞǀĂůƵĞǁŝƚŚĞƌƌŽƌďĂƌƐŽƌĂƐĂŵƉůĞĚĂƚĂ
ǁŝƚŚ ƚŚĞ ĂƚƚĂĐŚŵĞŶƚ ŽĨ ŽƚŚĞƌ ƌĞĂĚŝŶŐƐ͘  DĂŬĞ ƚŚŝƐ ĂƐ Ă ŚĂďŝƚ ǁŚĞŶ ĐĂƌƌLJŝŶŐ ŽƵƚ ĂŶLJ
ĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚ͘

zŽƵƌZĞƐƉŽŶƐŝďŝůŝƚLJ


3
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ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚŽƌͬƚƵƚŽƌͬůĞĐƚƵƌĞƌ͘/ƚŝƐĂůƐŽLJŽƵƌƌĞƐƉŽŶƐŝďŝůŝƚLJƚŽĐůĞĂŶƚŚĞĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚĂůĂƌĞĂ
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ƉƌŽƉĞƌĐŝƚĂƚŝŽŶƐĨŽƌĂůůƌĞĨĞƌĞŶĐĞƐƚŚĂƚLJŽƵƵƐĞĚ͘

4
/ŶƚƌŽĚƵĐƚŝŽŶ͗ŝŽĐŚĞŵŝĐĂů>ĂďŽƌĂƚŽƌLJKƉĞƌĂƚŝŽŶĂŶĚ^ĂĨĞƚLJ

KďũĞĐƚŝǀĞƐ

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ďŝŽŚĂnjĂƌĚǁĂƐƚĞ͘
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ϯ͘ dŽƉĞƌĨŽƌŵĂƐĞƉƚŝĐƚĞĐŚŶŝƋƵĞĨŽƌďŝŽĐŚĞŵŝĐĂůůĂďƉƌĂĐƚŝĐĞ
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ŽŶƚĞŶƚƐ

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ƐĂĨĞƚLJ ĞƋƵŝƉŵĞŶƚ͕ ĞŵĞƌŐĞŶĐLJ ƉƌŽĐĞĚƵƌĞƐ͕ ĨŝƌĞ Ěƌŝůů͕ ůŽĐĂƚŝŽŶ ŽĨ Ğdžŝƚ͕ ŶŽ ĞĂƚŝŶŐ Θ
ĚƌŝŶŬŝŶŐ͕ĞŵĞƌŐĞŶĐLJĐŽŶƚĂĐƚƐ͕ƉƌŽƉĞƌůLJĐŽǀĞƌĞĚƐŚŽĞƐ͕ůĂďĐŽĂƚ͕ŶŽĂĐĐĞƐƐŽƌŝĞƐ;ǁĂƚĐŚ͕
ũĞǁĞůůĞƌLJͿ͕ƚŝĞůŽŶŐŚĂŝƌ͕ŶŽƐŵŽŬŝŶŐ
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ƚŝƉƐ͕ ƉĞƚƌŝ ĚŝƐŚ͕ ƐůŝĚĞƐ͕ ĐŽŶƚĂŵŝŶĂƚĞĚ ƚŝƐƐƵĞ͕ ŐƌŽǁƚŚ ŵĞĚŝĂ͕ ĚŝƐŝŶĨĞĐƚĂŶƚͿ  ʹ ƐƉŝůůĂŐĞ
;ĂĐĞƚŽŶĞͿ͕ƐƚĞƌŝůŝnjĂƚŝŽŶ͕ĐůĂƐƐŝĨŝĐĂƚŝŽŶŽĨǁĂƐƚĞ
ϱ͘ ^ƚŽƌĂŐĞŽĨĐƵůƚƵƌĞʹĐŽůĚƌŽŽŵ͕ƌĞĨƌŝŐĞƌĂƚŽƌ͕ůĂďĞůŝŶŐ͕ĚĞĞƉĨƌĞĞnjĞƌ͕ƐĞĂůŝŶŐ;ĂůƵŵŝŶŝƵŵ
ĨŽŝů͕ƉĂƌĂĨŝůŵͿ
ϲ͘ ^ĂĨĞƚLJůĂďĞůŝŶŐʹŶŽƚƐŝŵƉůLJŽƉĞŶŝŶŐƐĞĂůĞĚƉĞƚƌŝĚŝƐŚ͕ĐŽŶŝĐĂůĨůĂƐŬ



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5
ZĞƐƵůƚΘŝƐĐƵƐƐŝŽŶ

ϭ͘ LJŵĂŬŝŶŐƌĞĨĞƌĞŶĐĞƐƚŽůŝƚĞƌĂƚƵƌĞƐ͕ĚĞĨŝŶĞĐŽŶĐĞƉƚŽĨďŝŽŚĂnjĂƌĚƐ͘

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ďͿ tƌŝƚĞĚŽǁŶƚŚĞƐƚĂƌƚͲƵƉĂŶĚƐŚƵƚĚŽǁŶƉƌŽĐĞĚƵƌĞƐĨŽƌůĂŵŝŶĂƌĨůŽǁ͘

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 1




ENVIRONMENTAL LAB












DĂƌŬƚŚĞůŽĐĂƚŝŽŶŽĨƚŚĞĨŽůůŽǁŝŶŐŝƚĞŵƐͬĞƋƵŝƉŵĞŶƚŝŶƚŚĞůĂď͘

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ϭ͘ ŶƚƌĂŶĐĞͬdžŝƚĚŽŽƌ

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ϯ͘ &ŝƌĞĞdžƚŝŶŐƵŝƐŚĞƌ ϴ͘ ŝƐƉŽƐĂůďŝŶ
ϰ͘ ŽůĚƌŽŽŵ ϵ͘ ĞŶƚƌĂůŚĞŵŝĐĂů^ƚŽƌĂŐĞ
ϱ͘ >ĂŵŝŶĂƌĨůŽǁ ϭϬ͘ &ƵŵĞŚŽŽĚ
ϲ͘ ĞĞƉĨƌĞĞnjĞƌ

6
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K:d/s

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ϯ͘ dŽƵƐĞůŝŐŚƚͬĞůĞĐƚƌŽŶͬĨůƵŽƌĞƐĐĞŶƚŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞĨŽƌŵŝĐƌŽďŝĂůĐŚĂƌĂĐƚĞƌŝnjĂƚŝŽŶ͘
ϰ͘ dŽůĞĂƌŶŝŵĂŐŝŶŐƚĞĐŚŶŝƋƵĞ
ϱ͘ dŽůĞĂƌŶĐŽƌƌĞĐƚĂƐĞƉƚŝĐƚĞĐŚŶŝƋƵĞŝŶďŝŽĐŚĞŵŝĐĂůǁŽƌŬƐ͘

/EdZKhd/KE

 ŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ ŝƐ ĂŶ ŽƉƚŝĐĂů ŝŶƐƚƌƵŵĞŶƚ ĨŽƌ ǀŝĞǁŝŶŐ ŽďũĞĐƚƐ ƚŚĂƚ ĂƌĞ ƚŽŽ ƐŵĂůů ƚŽ ďĞ ƐĞĞŶ ďLJ
ŶĂŬĞĚ ĞLJĞ͘  dŚĞ ƐĐŝĞŶĐĞ ŽĨ ŝŶǀĞƐƚŝŐĂƚŝŶŐ ƐŵĂůů ŽďũĞĐƚƐ ƵƐŝŶŐ ƐƵĐŚ ĂŶ ŝŶƐƚƌƵŵĞŶƚ ŝƐ ĐĂůůĞĚ
ŵŝĐƌŽƐĐŽƉLJ͘dŚĞƚĞƌŵΖŵŝĐƌŽƐĐŽƉŝĐΖŵĞĂŶƐŵŝŶƵƚĞŽƌǀĞƌLJƐŵĂůů͕ŶŽƚǀŝƐŝďůĞǁŝƚŚƚŚĞĞLJĞƵŶůĞƐƐ
ĂŝĚĞĚďLJĂŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ͘DŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐĐĂŶůĂƌŐĞůLJďĞƐĞƉĂƌĂƚĞĚŝŶƚŽƚŚƌĞĞĐůĂƐƐĞƐŶĂŵĞůLJ͕ŽƉƚŝĐĂů
ƚŚĞŽƌLJŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐ͕ĞůĞĐƚƌŽŶŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐ͕ĂŶĚƐĐĂŶŶŝŶŐƉƌŽďĞŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐ;^WDͿ͘

dŚĞŵŽƐƚĐŽŵŵŽŶƚLJƉĞŽĨŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞŝƐŽƉƚŝĐĂůŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ;Ğ͘Ő͘ůŝŐŚƚŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞͿ͘dŚŝƐŝƐĂŶ
ŽƉƚŝĐĂůŝŶƐƚƌƵŵĞŶƚĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐŽŶĞŽƌŵŽƌĞůĞŶƐĞƐƚŚĂƚƉƌŽĚƵĐĞĂŶĞŶůĂƌŐĞĚŝŵĂŐĞŽĨĂŶŽďũĞĐƚ
ƉůĂĐĞĚŝŶƚŚĞĨŽĐĂůƉůĂŶĞŽĨƚŚĞůĞŶƐ;ĞƐͿ͘ZĞŐĂƌĚůĞƐƐŽĨŶƵŵĞƌŽƵƐĚĞƐŝŐŶƐ͕ŽƉƚŝĐĂůŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐ
ĨƵŶĐƚŝŽŶƚŚƌŽƵŐŚƚŚĞŽƉƚŝĐĂůƚŚĞŽƌLJŽĨůĞŶƐĞƐŝŶŽƌĚĞƌƚŽŵĂŐŶŝĨLJƚŚĞŝŵĂŐĞŐĞŶĞƌĂƚĞĚďLJƚŚĞ
ƉĂƐƐĂŐĞ ŽĨ Ă ǁĂǀĞ ƚŚƌŽƵŐŚ ƚŚĞ ƐĂŵƉůĞ͘ KƉƚŝĐĂů ŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐ͕ ƚŚƌŽƵŐŚ ƚŚĞŝƌ ƵƐĞ ŽĨ ǀŝƐŝďůĞ
ǁĂǀĞůĞŶŐƚŚƐŽĨůŝŐŚƚ͕ĂƌĞƚŚĞƐŝŵƉůĞƐƚĂŶĚŚĞŶĐĞŵŽƐƚǁŝĚĞůLJƵƐĞĚƚLJƉĞŽĨŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ͘KƉƚŝĐĂů
ŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐƚLJƉŝĐĂůůLJƵƐĞƌĞĨƌĂĐƚŝǀĞůĞŶƐĞƐŽĨŐůĂƐƐĂŶĚŽĐĐĂƐŝŽŶĂůůLJŽĨƉůĂƐƚŝĐŽƌƋƵĂƌƚnj͕ƚŽĨŽĐƵƐ
ůŝŐŚƚ ŝŶƚŽ ƚŚĞ ĞLJĞ Žƌ ĂŶŽƚŚĞƌ ůŝŐŚƚ ĚĞƚĞĐƚŽƌ͘ DŝƌƌŽƌͲďĂƐĞĚ ŽƉƚŝĐĂů ŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞƐ ŽƉĞƌĂƚĞ ŝŶ ƚŚĞ
ƐĂŵĞŵĂŶŶĞƌ͘dLJƉŝĐĂůŵĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶŽĨĂůŝŐŚƚŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ͕ĂƐƐƵŵŝŶŐǀŝƐŝďůĞƌĂŶŐĞůŝŐŚƚ͕ŝƐƵƉƚŽ
ϭϱϬϬdžǁŝƚŚĂƚŚĞŽƌĞƚŝĐĂůƌĞƐŽůƵƚŝŽŶůŝŵŝƚŽĨĂƌŽƵŶĚϬ͘ϮŵŝĐƌŽŶƐŽƌϮϬϬŶĂŶŽŵĞƚĞƌƐ͘

ŽŵŵŽŶ ůĂď ĂǀĂŝůĂďůĞ͕ ůŝŐŚƚ ŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ ŚĂƐ ϯ ŵĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶƐ͗ ^ĐĂŶŶŝŶŐ͕ >Žǁ ĂŶĚ ,ŝŐŚ͘ ĂĐŚ
ŽďũĞĐƚŝǀĞǁŝůůŚĂǀĞǁƌŝƚƚĞŶƚŚĞŵĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶ͘/ŶĂĚĚŝƚŝŽŶƚŽƚŚŝƐ͕ƚŚĞŽĐƵůĂƌůĞŶƐ;ĞLJĞƉŝĞĐĞͿŚĂƐ
ĂŵĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶ͘dŚĞƚŽƚĂůŵĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶŝƐƚŚĞŽĐƵůĂƌŵĂŐ͘džŽďũĞĐƚŝǀĞŵĂŐ͘dŚĞĨŽůůŽǁŝŶŐ&ŝŐƵƌĞ
ϭ͘ϭƐŚŽǁƐƚŚĞƉĂƌƚƐŽĨƚLJƉŝĐĂůůŝŐŚƚŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ͘


 DĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶ KĐƵůĂƌůĞŶƐ dŽƚĂůDĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶ
^ĐĂŶŶŝŶŐ ϰdž ϭϬdž ϰϬdž

>ŽǁWŽǁĞƌ ϭϬdž ϭϬdž ϭϬϬdž

,ŝŐŚWŽǁĞƌ ϰϬdž ϭϬdž ϰϬϬdž




7



&ŝŐƵƌĞϭ͘ϭ͗>ŝŐŚƚŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞĂŶĚŝƚƐƉĂƌƚ

8
&ŝŐƵƌĞϭ͘Ϯ͗^ĐĂŶŶŝŶŐůĞĐƚƌŽŶDŝĐƌŽƐĐŽƉLJ




9
Yh/WDEdEDdZ/> 

ϭ͘ DŝĐƌŽƐĐŽƉĞ ϱ͘ ^ĐĂůƉĞůͬZĂnjŽƌďůĂĚĞ
Ϯ͘ ^ůŝĚĞƐ ϲ͘ dǁĞĞnjĞƌƐ
ϯ͘ ŽǀĞƌƐůŝƉƐ ϳ͘ ŽƌŬ
ϰ͘ ^ƚĂŝŶŝŶŐ ŐĞŶƚ ʹ /ŽĚŝŶ͕ DĞƚŚLJůĞŶĞ ϴ͘ KŶŝŽŶ
ůƵĞ

yWZ/DEdWZKhZ^

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ϭ͘ WůƵŐLJŽƵƌŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞŝŶƚŽƚŚĞĞdžƚĞŶƐŝŽŶĐŽƌĚƐ͘DĂŬĞƐƵƌĞƚŚĞĐŽƌĚŝƐŶŽƚĞŶƚĂŶŐůĞĚ͘
Ϯ͘ hƐŝŶŐ ƐŽĨƚ ĐůŽƚŚͬƚŝƐƐƵĞ͕ ǁŝƉĞ ĂŶLJ ƌĞŵĂŝŶŝŶŐ ůŝƋƵŝĚͬƐŽůŝĚ ŽŶ ƚŚĞ ƐƚĂŐĞͬƉůĂƚĨŽƌŵ ĂŶĚ
ůĞŶƐ͘
ϯ͘ ŚĞĐŬƚŚĞǀŝĞǁŝŶŐƵŶĚĞƌƚŚĞŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ͘
WůĞĂƐĞ ĞŶƐƵƌĞ ƚŚĞƌĞ͛Ɛ ŶŽ ĚƵƐƚͬŽďũĞĐƚ ŝŶ ƚŚĞ ŝŵĂŐŝŶŐ ĂƌĞĂ͘ /Ŷ ĐĂƐĞ ŽĨ
ďƌŽŬĞŶͬƐĐƌĂƚĐŚĞĚ ͬďůƵƌƌĞĚ ůĞŶƐ͕ ƉůĞĂƐĞ ƌĞƉŽƌƚ ŝŵŵĞĚŝĂƚĞůLJ ƚŽ ůĂď
ƚĞĐŚŶŝĐŝĂŶͬƚƵƚŽƌͬůĂďĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚŽƌ͘
ϰ͘ WůĂĐĞ ƐůŝĚĞ ŽŶ ƚŚĞ ƐƚĂŐĞ͘ ŽŶ͛ƚ ƵƐĞ ƚŚĞ ƐƚĂŐĞ ĐůŝƉƐ ĨŝƌƐƚ ĂƐ LJŽƵ ǁĂŶƚ ƚŽ ĂĚũƵƐƚ ƚŚĞ
ƉŽƐŝƚŝŽŶŽĨƚŚĞƐůŝĚĞůĂƚĞƌŝŶĂĐĐŽƌĚĂŶĐĞƚŽƚŚĞǀŝĞǁ͘
ϱ͘ ůǁĂLJƐ ƐƚĂƌƚ ĂŶĚ ĞŶĚ ǁŝƚŚ ƚŚĞ ^ĐĂŶŶŝŶŐ KďũĞĐƚŝǀĞ͘ Ž ŶŽƚ ƌĞŵŽǀĞ ƐůŝĚĞƐ ǁŝƚŚ ƚŚĞ
ŚŝŐŚƉŽǁĞƌŽďũĞĐƚŝǀĞŝŶƚŽƉůĂĐĞͲƚŚŝƐǁŝůůƐĐƌĂƚĐŚƚŚĞůĞŶƐ͊
ϲ͘ KĚĚƐĂƌĞLJŽƵǁŝůůďĞĂďůĞƚŽƐĞĞƐŽŵĞƚŚŝŶŐŽŶƚŚŝƐƐĞƚƚŝŶŐ͘hƐĞƚŚĞŽĂƌƐĞ<ŶŽďƚŽ
ĨŽĐƵƐ͕ŝŵĂŐĞŵĂLJďĞƐŵĂůůĂƚƚŚŝƐŵĂŐŶŝĨŝĐĂƚŝŽŶ͕ďƵƚLJŽƵǁŽŶΖƚďĞĂďůĞƚŽĨŝŶĚŝƚŽŶ
ƚŚĞŚŝŐŚĞƌƉŽǁĞƌƐǁŝƚŚŽƵƚƚŚŝƐĨŝƌƐƚƐƚĞƉ͘ŽŶŽƚƵƐĞƐƚĂŐĞĐůŝƉƐ͕ƚƌLJŵŽǀŝŶŐƚŚĞƐůŝĚĞ
ĂƌŽƵŶĚƵŶƚŝůLJŽƵĨŝŶĚƐŽŵĞƚŚŝŶŐ͘
ϳ͘ KŶĐĞLJŽƵĂƌĞƐĂƚŝƐĨŝĞĚǁŝƚŚƚŚĞƉŽƐŝƚŝŽŶŝŶŐŽĨƚŚĞƐůŝĚĞ͕LJŽƵŵĂLJƵƐĞƚŚĞƐƚĂŐĞĐůŝƉƐ
ϴ͘ KŶĐĞ LJŽƵΖǀĞ ĨŽĐƵƐĞĚ ŽŶ ^ĐĂŶŶŝŶŐ͕ ƐǁŝƚĐŚ ƚŽ >Žǁ WŽǁĞƌ͘ hƐĞ ƚŚĞ ŽĂƐĞ <ŶŽď ƚŽ
ƌĞĨŽĐƵƐ͘ŐĂŝŶ͕ŝĨLJŽƵŚĂǀĞŶΖƚĨŽĐƵƐĞĚŽŶƚŚŝƐůĞǀĞů͕LJŽƵǁŝůůŶŽƚďĞĂďůĞƚŽŵŽǀĞƚŽ
ƚŚĞŶĞdžƚůĞǀĞů͘
ϵ͘ EŽǁƐǁŝƚĐŚƚŽ,ŝŐŚWŽǁĞƌ͘;/ĨLJŽƵŚĂǀĞĂƚŚŝĐŬƐůŝĚĞ͕ŽƌĂƐůŝĚĞǁŝƚŚŽƵƚĂĐŽǀĞƌ͕ĚŽ
EKd ƵƐĞ ƚŚĞ ŚŝŐŚ ƉŽǁĞƌ ŽďũĞĐƚŝǀĞͿ͘ ƚ ƚŚŝƐ ƉŽŝŶƚ͕ KE>z ƵƐĞ ƚŚĞ &ŝŶĞ ĚũƵƐƚŵĞŶƚ
<ŶŽďƚŽĨŽĐƵƐƐƉĞĐŝŵĞŶƐ͘
ϭϬ͘ /ĨƚŚĞƐƉĞĐŝŵĞŶŝƐƚŽŽůŝŐŚƚŽƌƚŽŽĚĂƌŬ͕ƚƌLJĂĚũƵƐƚŝŶŐƚŚĞĚŝĂƉŚƌĂŐŵ͘
ϭϭ͘ /ĨLJŽƵƐĞĞĂůŝŶĞŝŶLJŽƵƌǀŝĞǁŝŶŐĨŝĞůĚ͕ƚƌLJƚǁŝƐƚŝŶŐƚŚĞĞLJĞƉŝĞĐĞ͕ƚŚĞůŝŶĞƐŚŽƵůĚŵŽǀĞ͘
/ƚŝƐĂƉŽŝŶƚĞƌ͕ĂŶĚŝƐƵƐĞĨƵůĨŽƌƉŽŝŶƚŝŶŐŽƵƚƚŚŝŶŐƐLJŽƵƐĞĞƚŽŽƚŚĞƌƉĞƌƐŽŶƐ

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ϭ͘ hƐĞĂƐĐĂůƉĞůͬƌĂnjŽƌďůĂĚĞƚŽĐƵƚĂƚŚŝŶƐůŝĐĞŽĨĐŽƌŬ
Ϯ͘ WůĂĐĞƚŚŝƐƚŚŝŶƐůŝĐĞŽŶĂƐůŝĚĞĂŶĚĞdžĂŵŝŶĞŝƚƵŶĚĞƌůŽǁƉŽǁĞƌ
ϯ͘ ^ŬĞƚĐŚƚŚĞŝŵĂŐĞLJŽƵƐĂǁƵŶĚĞƌƚŚĞŵŝĐƌŽƐĐŽƉĞ


10
ĐͿdžĂŵŝŶŝŶŐůŝǀĞĐĞůůƐƐƉĞĐŝŵĞŶ

ŝͿWůĂŶƚĐĞůů
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11
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12
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Ϯ͘ DŝdžϬ͘ϬϯŐŽĨ<K,ŝŶϯϬϬŵůŽĨǁĂƚĞƌ͖ƚŚŝƐŝƐ^ŽůƵƚŝŽŶ͘
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ϭ͘ ŝƐƐŽůǀĞ Ϯ͘ϱ Ő ŽĨ ƐĂĨƌĂŶŝŶ K ŝŶ ϭϬϬ ŵů ŽĨ ϵϱ й ĞƚŚĂŶŽů ƚŽ ŵĂŬĞ Ă ƐƚŽĐŬ
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Ϯ͘ tŽƌŬŝŶŐ ƐŽůƵƚŝŽŶ ŝƐ ŽďƚĂŝŶĞĚ ďLJ ĚŝůƵƚŝŶŐ ŽŶĞ ƉĂƌƚ ŽĨ ƚŚĞ ƐƚŽĐŬ ƐŽůƵƚŝŽŶ ǁŝƚŚ
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Ϯ͘ ZĞƉĞĂƚϭĨŽƌ'ƌŽƵƉ͘WůĂĐĞƚŚĞĐƵůƚƵƌĞŽŶƚŚĞƐĂŵĞƐůŝĚĞ
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ƐŝŵƵůƚĂŶĞŽƵƐůLJĂĐĐŽŵŵŽĚĂƚĞϯƚŽϰƐŵĂůůƐŵĞĂƌƐŝĨŵŽƌĞƚŚĂŶŽŶĞĐƵůƚƵƌĞŝƐƚŽ
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13
ϰ͘ ,ŽůĚ ƚŚĞ ƐůŝĚĞ ǁŝƚŚ Ă ĐůŽƚŚ ƉŝŶ͘ ŝƌͲĚƌLJ ƚŚĞ ĐƵůƚƵƌĞ ĂŶĚ Ĩŝdž ŝƚ Žƌ ŽǀĞƌ Ă ŐĞŶƚůĞ
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ĐƵůƚƵƌĞ͘ ,ĞĂƚ ĐĂŶ ĂůƐŽ ďĞ ĂƉƉůŝĞĚ ƚŽ ĨĂĐŝůŝƚĂƚĞ ĚƌLJŝŶŐ ƚŚĞ ƚŚĞ ƐŵĞĂƌ͘ ,ŽǁĞǀĞƌ͕
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ĐƵůƚƵƌĞ͘>ĞƚƐƚĂŶĚĨŽƌϯϬƐĞĐŽŶĚƐ͘
ϰ͘ WŽƵƌŽĨĨƚŚĞŝŽĚŝŶĞƐŽůƵƚŝŽŶĂŶĚƌŝŶƐĞƚŚĞƐůŝĚĞǁŝƚŚƌƵŶŶŝŶŐǁĂƚĞƌ͘^ŚĂŬĞŽĨĨƚŚĞ
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ǁŝƚŚ ǁĂƚĞƌ ĂĨƚĞƌ ϱ ƐĞĐŽŶĚƐ͘ dŚĞ ĞdžĂĐƚ ƚŝŵĞ ƚŽ ƐƚŽƉ ŝƐ ǁŚĞŶ ƚŚĞ ƐŽůǀĞŶƚ ŝƐ ŶŽ
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ϯ͘ džƉůĂŝŶ ƚŚĞ ŵĞĐŚĂŶŝƐŵ ŽĨ 'ƌĂŵ͛Ɛ ƐƚĂŝŶŝŶŐ ďLJ ƐƚĂƚŝŶŐ ƚŚĞ ƐŝŐŶŝĨŝĐĂŶƚ ŽĨ ĞĂĐŚ ƐƚĂŝŶŝŶŐ ƐƚĞƉ
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14
ϰ͘ >ŝƐƚ Ăůů ŶĞĐĞƐƐĂƌLJ ƉƌĞĐĂƵƚŝŽŶ ƐƚĞƉƐ ŝŶ ƐƚĂŝŶŝŶŐ ƚĞĐŚŶŝƋƵĞ ĂŶĚ ƉƌŽǀŝĚĞ ũƵƐƚŝĨŝĐĂƚŝŽŶ ĨŽƌ ĞĂĐŚ
ƉƌĞĐĂƵƚŝŽŶƐƚĞƉ͘


15
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ƐĂŵƉůĞƐĂƚĚŝĨĨĞƌĞŶƚǁĂǀĞůĞŶŐƚŚͿ
Ϯ͘ dŽ ƉƌĞƉĂƌĞ ƐƚĂŶĚĂƌĚ ĐƵƌǀĞ ŽĨ ďŝŽŵĂƐƐ ĐŽŶĐĞŶƚƌĂƚŝŽŶ ďĂƐĞĚ ŽŶ ŽƉƚŝĐĂů ĚĞŶƐŝƚLJ
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ϯ͘ dŽƉĞƌĨŽƌŵĐĞůůƋƵĂŶƚŝĨŝĐĂƚŝŽŶĨŽƌĂŐŝǀĞŶďŝŽŵĂƐƐƐƵƐƉĞŶƐŝŽŶ

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ĐĞůůƐŽƌŝŶƚŚĞǁĞŝŐŚƚŽĨƐŽŵĞĐŽŵƉŽŶĞŶƚŽĨĐĞůůŵĂƐƐŽƌƚŽƚĂůĚƌLJǁĞŝŐŚƚŽĨĐĞůůƐƚŚĞŵƐĞůǀĞƐ͘
dŚĞƌĞĂƌĞƐĞǀĞƌĂůŵĞƚŚŽĚƐĨŽƌĞƐƚŝŵĂƚŝŶŐĐĞůůŶƵŵďĞƌƐŽƌĐĞůůŵĂƐƐƚŚĂƚĂƌĞƐƵŝƚĞĚƚŽĚŝĨĨĞƌĞŶƚ
ŽƌŐĂŶŝƐŵƐŽƌĚŝĨĨĞƌĞŶƚƉƌŽďůĞŵƐ͘dŚĞƌĞĂƌĞƚǁŽďĂƐŝĐǁĂLJƐƚŽŵĞĂƐƵƌĞŵŝĐƌŽďŝĂůŐƌŽǁƚŚƚŚĂƚ
ĂƌĞ ĚŝƌĞĐƚ ĂŶĚ ŝŶĚŝƌĞĐƚ ŵĞĂƐƵƌĞŵĞŶƚƐ ;DĂĚŝŐĂŶ Ğƚ Ăů͕ ϮϬϬϯͿ͘ &ƌŽŵ ƚŚĞ ƚǁŽ ďĂƐŝĐ ƚĞĐŚŶŝƋƵĞƐ͕
ƚŚĞƌĞ ĂƌĞ ǀĂƌŝŽƵƐ ŵĞƚŚŽĚƐ ƚŚĂƚ ŚĂǀĞ ďĞĞŶ ĚĞǀĞůŽƉĞĚ ĨŽƌ ƚŚĞ ĞƐƚŝŵĂƚŝŽŶ ŽĨ ďŝŽŵĂƐƐ ƵƐŝŶŐ
ƉŚLJƐŝĐĂůĂŶĚďŝŽĐŚĞŵŝĐĂůƚĞĐŚŶŝƋƵĞ;^ŝŶŐŚĞƚĂů͕ϭϵϵϰͿ͘

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ƐƵƐƉĞŶĚĞĚƐŽůŝĚƐŽƌƵŶǁĂŶƚĞĚĐŽŵƉŽƵŶĚƐŝŶƚŚĞŵĞĚŝƵŵ͘ŝƚŚĞƌĐĞůůŶƵŵďĞƌŽƌĐĞůůŵĂƐƐĐĂŶ
ďĞƋƵĂŶƚŝĨŝĞĚĚĞƉĞŶĚŝŶŐŽŶƚŚĞƚLJƉĞŽĨŝŶĨŽƌŵĂƚŝŽŶŶĞĞĚĞĚĂŶĚƚŚĞƉƌŽƉĞƌƚŝĞƐŽĨƚŚĞƐLJƐƚĞŵ͘
ĞůůŵĂƐƐĐŽŶĐĞŶƚƌĂƚŝŽŶŝƐŽĨƚĞŶƉƌĞĨĞƌƌĞĚĂƐƚŚĞŵĞĂƐƵƌĞŵĞŶƚŽĨĐĞůůŶƵŵďĞƌĚĞŶƐŝƚLJ͕ďƵƚƚŚĞ
ĐŽŵďŝŶĂƚŝŽŶŽĨƚŚĞƚǁŽŵĞĂƐƵƌĞŵĞŶƚƐŝƐŽĨƚĞŶĂĚǀĂŶƚĂŐĞŽƵƐ;^ŚƵůĞƌĂŶĚ<ĂƌŐŝ͕ϮϬϬϮͿ͘

dŚĞĐĞůůĚĞŶƐŝƚLJŝŶĚŝƌĞĐƚŵĞƚŚŽĚĐĂŶďĞƋƵĂŶƚŝĨŝĞĚŝŶƚǁŽďĂƐŝĐǁĂLJƐ͗ĂƐŐƌĂŵƐŽĨĚƌLJŽƌ
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