Hematología. Prácticas de laboratorio.

15 de noviembre de 2010

PRÁCTICA 15: TINCIÓN DE GIEMSA

• Introducción.
La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos. Es una
tinción diferencial que es capaz de distinguir distintas estructuras celulares según su afinidad
por colorantes básicos, ácidos o mezcla de ellos.
Con esta tinción los eritrocitos aparecen de color naranja rosado, los núcleos de los
leucocitos de azul púrpura, el citoplasma marfil o azul claro, las granulaciones neutrófilas
pardo claro o violeta claro, las granulaciones eosinófilas rojo naranja, las granulaciones
basófilas azul oscuro a púrpura y las plaquetas lila oscuro.

• Material.
o Microscopio.
o Portas.
o Puente de tinción.
o Cubeta para la tinción.
o Cristalizador.
o Pipetas Pasteur.
o Frasco lavador.
o Tubos de ensayo.

• Reactivos y muestras.
o Sangre anticoagulada con EDTA o heparina (muestra nº).
o Colorante GIEMSA, que es una mezcla de azul de metileno + eosina.
o Tampón 7,2, compuesto por:

Fosfato monopotásico = 0,431 gr.

Fosfato disódico + 12 H2O = 1,15 gr.

Agua destilada o suero fisiológico (NaCL 0,9 %) hasta completar 1 litro.
o Metanol.
o Aceite de inmersión.

• Ejercicios y/o técnica.

1- Preparación del frotis.
2- Fijación.
3- Tinción.
4- Observar en el microscopio usando el objetivo de 100x.

• Desarrollo y resultados.
Ejercicio 1.
Para la preparación del frotis usaremos un porta de canto liso y otro de canto biselado para
realizar la extensión sobre el primero. Se coge una pequeña gota de la muestra con una
pipeta Pasteur y se pone en un parte del porta, con el otro porta y en una inclinación
aproximada de 45º se coloca en contacto con la gota de sangre y se extiende hacia el otro
lado del portaobjetos, tal y como muestra la figura 1.

José Luis Nieto Ferrando. 1º Lab. Diag. Clínico.

jonife@gmail.com 1
Hematología. Prácticas de laboratorio. 15 de noviembre de 2010

Fig. 1. Realización de un frotis.

Ejercicio 2.
Para fijar el frotis hemos de colocarlo sobre el puente de tinción y con una cubeta debajo, a
la que añadiremos un poco de agua, y cubrirla con metanol durante 3 minutos. Después,
decantaremos el metanol y dejaremos secar la fijación poniéndola en posición vertical.

Ejercicio 3.
Prepararemos el colorante realizando una dilución 1/10 de colorante con solución Tampón
7,2 y mezclaremos suavemente (para 2 mL = 200 µ de colorante y 1800 µ de Tampón 7,2).
Hemos de tener especial cuidado con el filtrado del colorante para que no nos queden
grumos que nos puedan confundir a la hora de ver la muestra al microscopio.
Para teñir usaremos una pipeta Pasteur, y con esta cubriremos el frotis en su totalidad, y lo
dejaremos actuar durante 25 minutos.
Cuando haya pasado este tiempo decantaremos el sobrante de tinte y lavaremos
cuidadosamente la extensión con Tampón 7,2 y lo dejamos secar en posición vertical.

Ejercicio 4.
Observamos la extensión al microscopio y se pueden distinguir con bastante claridad los
distintos tipos de células sanguíneas.

• Conclusiones.
Hemos de tener cuidado de hacer suficiente colorante para todas las extensiones que
queramos teñir, aproximada mente se gasta 1 mL por porta, aunque conviene hacer de
sobra.
Una vez fijada la muestra se puede teñir al cabo de unos días, y si la hemos teñido, ya se
puede observar cuando queramos.

José Luis Nieto Ferrando. 1º Lab. Diag. Clínico.

jonife@gmail.com 2