Uso de la fluorescencia clorofílica como indicador de estrés por

altas temperaturas en plantas frutales.

Mario Sebastián Alegría Ayala

 Índice.

1. La fluorescencia clorofílica como parte del proceso fotoquímico………………….2

1.1. La fotosíntesis y la fluorescencia clorofílica…………………………………………..2
1.2. El origen de la fluorescencia clorofílica………………………………………………..3
1.3. La fluorescencia como vía de disipación de energía………………………………...3
1.4. Cambios en la fluorescencia clorofílica………………………………………………..4
1.5. Procesos asociados a la fluorescencia clorofílica……………………………….……5
1.6. Medición de fluorescencia clorofílica…………………………………………….…….6

2. El estrés en los vegetales superiores........………………………………………………7

2.1. El estrés……………………………………………………………………………….….7
2.2. El estrés por altas temperaturas.............................................................................7
2.3. La complejidad de la respuesta al estrés por altas temperaturas...........................9

3. Las plantas frutales....................................................................................................10

3.1. Plantas frutales y su origen..................................................................................10
3.2. Importancia de la temperatura en las especies frutales.......................................11
3.3. La domesticación y sus problemas......................................................................12

4. Comprensión del uso de la fluorescencia clorofílica como indicador de estrés

por altas temperaturas en las plantas frutales.........................................................13
4.1. La fluorescencia como indicador de estrés...........................................................13
4.2. Adaptación al estrés por calor...............................................................................13
4.3. La fluorescencia y la fruticultura............................................................................15

5. Conclusiones...............................................................................................................16

6. Bibliografía..................................................................................................................17

1
1. La fluorescencia clorofílica como parte del proceso fotoquímico.

1.1. La fotosíntesis y la fluorescencia clorofílica.

La absorción de luz para la realización de fotosíntesis por parte de los organismos
autotróficos fotosintéticos es llevada a cabo por los complejos pigmento-proteínas
cosechadores de luz (LHCs., por su sigla en inglés), los que están asociados a los centros
de reacción de los foto-sistemas (Müller et al., 2001). Los LHCs. están embebidos en la
membrana del tilacoide en las plantas verdes, las algas y las cianobacterias; la separación
de carga y el transporte de electrones secundario para la realización fotoquímica
(fotosíntesis) se realiza en el centro de reacción (RC) del fotosistema II (PSII). Los centros
de reacción están rodeados por proteínas del centro de antenas, las que capturan y
reparten la luz absorbida por las moléculas de clorofila a los centros de reacción de
manera eficiente (Andrizhiyevskaya et al., 2005).
La energía que reciben las moléculas de clorofila a partir de la luz solar, puede distribuirse
por 3 diferentes vías: esta puede ser usada para la realización de fotosíntesis por el
vegetal (fotoquímica), las otras vías pueden ser la disipación por calor, o puede ser re-
emitida como luz (fluorescencia clorofílica), estas últimas ocurren cuando hay un exceso
de energía luminosa (Maxwell y Johnson, 2000), o cuando el aparato fotosintético sufre
algún tipo de daño por estrés. Müller et al. (2001) señala que existe una alternativa extra,
indicada como un proceso no fotoquímico mediante la formación de un estado de triplete
de la molécula de clorofila (Chl*), el cual se encarga de producir una especie oxigénica
reactiva (O2*), que se constituye en una especie altamente dañina para el aparato
fotosintético (Foto-oxidación).
Por lo anterior se puede mencionar que las vías de disipación de energía antes
mencionadas (fotosíntesis, emisión de calor, emisión de fluorescencia y formación de
tripletes) ocurren en competencia, y un aumento en uno de ellos lleva a una disminución
en cualquier otro. Lo que ya deja de manifiesto que, desde un cierto nivel, la fotosíntesis y
la fluorescencia clorofílica son procesos antagónicos.
Según Maxwell y Johnson (2000), la ventaja que presenta utilizar la medición de
fluorescencia clorofílica para estimar la fotosíntesis en relación al método que se basa en
la fijación de CO2, es que esta indica el funcionamiento del fotosistema II como punto
crítico de la fotosíntesis, mientras que la absorción de CO2, no es tan representativa,
porque este proceso compite con muchos otros y su estimación es muy sesgada.

2
 1.2. El origen de la fluorescencia clorofílica.
Como se mencionó anteriormente, durante la fotosíntesis los fotones (partículas de luz)
provenientes de la energía solar son absorbidos por complejos sistemas denominados
pigmentos antena, los cuales se encargan de capturar y de canalizar la energía para el
funcionamiento fotoquímico de los vegetales.
El fotosistema II ha sido señalado por mucho tiempo como el eslabón clave más débil, y
como el principal artífice de la fluorescencia clorofílica, pero el daño en el fotosistema II
sólo ocurre a altas temperaturas, generalmente sobre los 45ºC (Sharkey, 2005). De hecho
Ducruet et al. (2007) señala que el fotosistema II es el único con una capacidad de
realizar fluorescencia variable, y su rendimiento en fluorescencia depende de 2 formas de
procesos de disipación de energía, el proceso de disipación fotoquímico (fotosíntesis) y
los procesos de disipación no fotoquímica (emisión de calor, fluorescencia y formación de
tripletes). Por lo tanto, la fluorescencia clorofílica ocurre a nivel del fotosistema II.

1.3. La fluorescencia como vía de disipación de energía.

Como se señaló anteriormente la fluorescencia clorofílica es una de las vías mediante la
cual los vegetales disipan energía, el espectro de absorción de luz es por lo tanto
diferente al espectro de fluorescencia. Sharkey (2005) señala que la emisión de
fluorescencia debido al desacople del fotosistema II, es una manera de evitar dañar todo
el sistema de reacciones en cascada posterior, que se produce una vez que la
plastoquinona QA acepta los electrones de la fotólisis del agua, meditado por la energía
solar absorbida por las clorofilas. Esto, debido a lo que señala Müller et al. (2001), ya que
al no generarse este freno se podrían producir especies oxigénicas con un poder de daño
muy elevado, capaces de dañar de manera irreversible todo el aparataje celular,
comprometiendo con ello la homeostasis, y la vida de la planta. Por tanto dentro de un
evento de estrés por calor, para cualquier planta, es mucho más económico, desde un
punto de vista fisiológico, desacoplar el sistema, que volver a generar las estructuras
dañadas y detoxificar las especies oxigénicas reactivas. Para Allakhverdiev et al. (2008)
esto es muy importante porque el daño generado por el estrés puede ser generado, por 2
causas, la primera es por la desnaturalización de las proteínas, y la segunda por la
inhibición de la síntesis de novo de proteínas a causa de las especies oxigénicas
reactivas.

3
 1.4. Procesos asociados a la fluorescencia clorofílica.
A consecuencia de los ajustes fisiológicos que ocurren en la planta, se pueden medir la
fluorescencia clorofílica como una derivada del estrés por calor, entre los cambios que
ocurren en la planta asociados a ella, se pueden mencionar una estimulación de la
reducción oscura de la plastoquinona, y un aumento del flujo cíclico de electrones a la luz;
también aumentan las fugas de electrones del tilacoide, se puede presentar una
desactivación de la RUBISCO (Ribulosa 1,5 bi-fosfato-carboxilasa-oxigenasa), y la
generación de especies oxigénicas reactivas tales como el O2* y el H2O2. En esta línea
Sharkey (2005) señala que el Isopreno tiene la función de otorgar termo-tolerancia gracias
a su acción sobre especies oxigénicas reactivas, indica que esta acción es muy rápida,
pero tiene serias consecuencias sobre las reservas de carbono en plantas leñosas.
También ocurren cambios en la composición lipídica de las membranas tilacoidales y el
abastecimiento de isopreno, lo que tiene una importancia en la respuesta al estrés por
calor (Sharkey, 2005), en este mismo sentido Ducruet et al. (2007) señala que la
membrana tiene la capacidad de pasar de una membrana de tipo fluida líquido-cristalina a
una sólida el tipo gel, esto genera cambios radicales en la permeabilidad de las
membranas, lo que disminuye el intercambio iónico y tiene sus efectos en la fotosíntesis.
Una línea de investigación se ha desarrollado en el estudio de la actividad de las
proteínas del shock térmico (HSPs), las cuales fueron tempranamente señaladas como
responsables de las respuestas a diferentes tipos de estrés y especialmente en el estrés
por calor (Kotak et al., 2007). En cuanto a la importancia de las HSPs o chaperonas, Sun
et al. (2002) indican que la gran diversidad y su inusual diversidad dentro de los vegetales
las hace parecer muy importantes, esto se refleja en la necesidad que tiene las plantas de
adaptarse a distintos tipos de estrés, de hecho las HSPs son capaces de ensamblar,
translocar y degradar muchas proteínas; estabilizan membranas y proteínas bajo
condiciones de estrés (Wang et al., 2004). En este mismo caso Wang et al. (2004) señala
que para las plantas es muy necesario mantener las conformaciones nativas de las
proteínas, y que estas no se desnaturalicen, ya que así les permite a las células sobrevivir
en condiciones de estrés.
Schrader et al. (2007) señalan que el pool de Ribulosa 1,5 bi-fosfato decae fuertemente
cuando las plantas son sometidas rápidamente a un estrés por calor, pero que se puede
recuperar si son mantenidas a dichas temperaturas, lo que puede indicar una
desnaturación de la RUBISCO como respuesta al estrés, pero afirma que es un

4
mecanismo para evitar el daño que este pueda generar, mediante producción de radicales
libres por su actividad oxigenasa.

1.5. Medición de fluorescencia clorofílica.

“La base en la que se sustentan los análisis de la fluorescencia clorofílica es bastante
sencilla” (Maxwell y Johnson, 2000) y señalan que medir la fluorescencia clorofílica
permite entender el comportamiento del fotosistema II.
Los 3 procesos de disipación de la energía lumínica que llega a la hoja (Fotoquímico,
calor, fluorescencia) ocurren en competencia entre sí, por tanto un aumento en un u otro
va en detrimento de los restantes. Por ello la medición de la eficiencia de alguno de ellos
entrega inmediatamente una idea del comportamiento de los otros procesos (Maxwell y
Johnson, 2000).
Para realizar mediciones de fluorescencia clorofílica, Maxwell y Johnson (2000) señalan
que se debe “apagar” un de los 2 mecanismos por los cuales se disipa energía en los
sistemas fotosintéticos, principalmente se apaga el mecanismo fotoquímico a través del
oscurecimiento del material fotosintético y del tal forma se desarticula todo el mecanismo
de transporte de electrones que permite la realización de la fotosíntesis, esto sirve para
determinar la máxima fluorescencia clorofílica (Fm) o en otras palabras, el mínimo
rendimiento cuántico fotosintético (energía fotónica que puede ser almacenada como
energía de enlace químico). La máxima fluorescencia clorofílica o máximo rendimiento de
fluorescencia clorofílica (Fmáx) se obtiene al iluminar el material oscurecido, que no
tendrá otra vía de disipación de energía más rápida que la fluorescencia. Luego de unos
minutos, el sistema de transporte de electrones se restituye y el rendimiento de
fluorescencia clorofílica llega a un mínimo estable (Fmín). La diferencia entre el Fmáx y el
Fmín (Fv= Fmáx-Fmín) determina el rendimiento de fluorescencia variable o Fv. La gracia
del Fv, como su nombre lo indica, es que es un valor que puede variar en el tiempo entre
los 2 valores máximo y mínimo, según sean las condiciones en las que se encuentre el
fotosistema II. Esta variación está determinada por el Fmáx, ya que dependiendo del nivel
de estrés que tenga el fotosistema, este puede aumentar su índice, por aumento en los
niveles de fluorescencia clorofílica (disipación de energía que compite con la eficiencia
fotosintética). El rendimiento fotoquímico, rendimiento fotosintético o cuántico (Quantum
yield) está determinado por la razón Fv/Fmax= (Fmax-Fmin)/Fmax, por lo tanto si
aumenta Fmáx, el valor del rendimiento cuántico tendería a cero, reflejando una

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disminución en la eficiencia del rendimiento de la fotosíntesis. Según Maxwell y Johnson
(2000), para la mayoría de las especies el valor óptimo de rendimiento cuántico es de
0,83 (un valor muy alejado de cero), y señalan que valores más bajos indican que las
plantas han sido sometidas o han sufrido de forma natural algún tipo de estrés,
especialmente por foto-inhibición o por algún daño en el fotosistema II (foto-oxidación).
La fluorescencia clorofílica es bastante pequeña en condiciones normales, y comprende
entre 1 y 2% del total de luz absorbida (Maxwell y Johnson, 2000).
Al tener un espectro diferente la medición se puede realizar mediante la exposición de
una hoja o tejido a cierta longitud de onda y cuantificar la luz re-emitida a una longitud de
onda mayor, pero esta medición es sólo relativa porque siempre hay una pérdida de luz
en el proceso de medición. La medición de la fluorescencia clorofílica se puede realizar
mediante fluorímetros tanto en laboratorio, o en campo con los nuevos modelos portátiles
(Maxwell y Johnson, 2000).

1.6. Cambios en la fluorescencia clorofílica.

Kautsky y sus colaboradores descubrieron que al exponer material fotosintético desde la
oscuridad a la luz, este aumentaba de manera muy importante el rendimiento de
fluorescencia clorofílica en periodos cortos de hasta 1s (Maxwell y Johnson, 2000).
Maxwell y Johnson (2000) señalan que se debe a una disminución en los aceptores en la
cadena de electrones, especialmente de las plastoquinonas, y de manera muy importante
la plastoquinona QA. Esta tiene la capacidad de recibir los electrones de la fotólisis del
agua y entregarlos uno por uno a la plastoquinona QB, para que continúe la cadena de
electrones. Por lo tanto mientras la QA tenga asociado un electrón (reducida) estará en un
estado “cerrado” y no recibirá otro electrón hasta que no traspase el primero,
constituyéndose así, nuevamente en un estado “abierto”. Esto significa que un aumento
en los estados cerrados de la plastoquinona A, permite una reducción en el rendimiento
fotoquímico (fotosíntesis) y un aumento en el rendimiento no fotoquímico (fluorescencia
clorofílica). Cuando las hojas están en un estado oscuro, sus aceptores de electrones
quedan rápidamente en estados cerrados al ser expuestos a la luz, sin embargo este
estado puede durar unos pocos minutos a causa de la producción de más aceptores y el
concomitante aumento de la capacidad para llevar a cabo el proceso fotoquímico. Al
aumentar el pool de plastoquinonas y de aceptores de electrones, y por la estimulación de
la apertura estomática a través de la luz, lo que lleva a restituir el metabolismo de

6
reducción fotoquímica del CO2. Otra razón está referida a un aumento de la disipación a
través de la pérdida por calor.

2. El estrés en los vegetales superiores.

2.1. El estrés.
El estrés es cualquier factor que genera cambios a nivel bioquímico, fisiológico y
molecular de manera negativa (Wang et al., 2004). El estrés puede tener 2 grandes
orígenes, puede ser causado por organismos vivos, o bien, puede ser causado por
factores ambientales no biológicos, en el primer caso se denomina estrés biótico, y en el
segundo estrés abiótico. En este trabajo se habla sólo del segundo por estar más
relacionado con la fluorescencia clorofílica
Las plantas al ser organismos inmóviles, están siempre expuestas a cambios bruscos en
la temperatura y a otros factores abióticos constituyentes de estrés.
Wang et al. (2004) señala que tanto el estrés abiótico, como estrés hídrico, la salinidad,
las altas temperaturas, la toxicidad química y el estrés oxidativo, son muy serios para la
agricultura y también generan grandes daños al medio ambiente. Vinocur y Altman (2005)
señalan que son las causas más importantes en las pérdidas de los cultivo a nivel
mundial.
El estrés abiótico, causa principalmente una pérdida de la funcionalidad de las proteínas
(Wang et al., 2004), esto se puede deber a la pérdida de la conformación nativa de las
proteínas, aunque sea de forma momentánea, sea esto por cambios de pH o bien por
cambios de temperatura.

2.2. El estrés por altas temperaturas.

Todos los organismos vivientes sienten estrés por altas temperaturas cuando la
temperatura a la cual se exponen está por sobre el óptimo normal de su desarrollo (Kotak
et al., 2007). Wahid y Close (2007) definen el estrés por calor como un aumento en la
temperatura por un periodo determinado que es capaz de causar un daño irreversible en
el desarrollo de la plantas.
El estrés por alta temperatura se presenta cuando una planta interrumpe su mecanismo
más importante para la disipación del calor, esta es la vía de refrigeración transpiracional,

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esta se puede desarrollar por un evento de estrés hídrico (Sharkey, 2005), un cierre
estomático que no permita transpirar u otro evento que altere esta vía, como el uso de
herbicidas. Salvucci et al. (2004a,b,c) señala que las plantas con un adecuado acceso al
agua, mantienen sus estomas abiertos, usando la refrigeración transpirativa para reducir
la temperatura de sus hojas. De hecho, este mecanismo puede generar un diferencial de
hasta 10ºC entre la temperatura del aire y la temperatura foliar en zonas calidas y
semiáridas, siendo la temperatura del aire la superior. Sin embargo, afirma que esta
capacidad de respuesta al estrés por calor se puede ver disminuida por una alta humedad
relativa y por un deficiente proceso evaporativo, a causa de un estrés hídrico.
Las hojas de los vegetales son en su mayoría muy delgadas y aplanadas para aumentar
la superficie de captación de fotones, sin embargo esta cualidad las hacer tener una
mínima capacidad de calor propio, y con ello ser muy susceptibles a cambios bruscos del
medio, por lo tanto, al quedar expuestas a toda la energía solar pueden sobrecalentarse
de manera sustancial, por sobre la temperatura del aire. El uso de termocuples de
alambre fino ha demostrado que con bajas tasas de transpiración las plantas sufren
episodios frecuentes de alta temperatura en las hojas, la cual puede alcanzar hasta 15ºC
por sobre la temperatura del aire (Sharkey, 2005) y las fluctuaciones pueden ser del orden
de hasta 10ºC en 1s (Schrader et al., 2007). Sin embargo Allakhverdiev et al. (2008)
señala que las alteraciones que el estrés por calor genere, va a depender del grado de
desarrollo del órgano fotosintético, y resume que las hojas jóvenes y las más viejas
responden de manera diferente al estrés por calor.
La fotosíntesis en uno de los procesos fisiológicos de los vegetales más sensible al estrés
por altas temperaturas (Sage y Kubien, 2007; Zhang y Sharkey, 2009), el aparato
fotosintético y la cadena transportadora de electrones son los principales blancos de
estrés por temperatura, sea este por frío o calor (Ducruet et al., 2007). Según Allkhverdiev
et al. (2008) hay tres procesos que se ven afectados por el estrés causado por altas
temperaturas, siendo estos, los fotosistemas y el más importante es el fotosistema II, la
generación de ATP y el proceso de asimilación de Carbono. Sin embargo Sharkey et al.
(2005) señala que el estrés por calor moderado (35 a 40ºC) promueve un pequeño o nulo
daño en el PSII, aunque afirma que la tasa fotosintética se puede reducir hasta cero. Esto
se puede explicar porque según Pshybytko et al. (2008) el complejo oxidativo del agua se
ve interrumpido, lo que genera que el transporte electrónico se detenga y la energía no

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puede ser almacenada como enlace químico, esto tiene su efecto en el centro de reacción
y en los LHCs del fotosistema II.
La tasa de fotosíntesis aumenta progresivamente con la temperatura, hasta que alcanza
un máximo, que representa la temperatura óptima de foto-asimilación, luego decae
bruscamente por un estrés por alta temperatura, y antes del óptimo, la temperatura puede
causar estrés por baja temperatura, incluso causar daño, o bien constituirse en una
temperatura sub-óptima para la fotosíntesis, bajando la eficiencia de este proceso
(Ducruet et al., 2007).
Taub et al. (2000) señala que las plantas creciendo en condiciones de mayor
concentración de CO2 pueden tolerar de mejor forma el estrés por calor, tanto en
condiciones de laboratorio como de campo.

2.3. La complejidad de la respuesta al estrés por altas temperaturas.

Las plantas en su evolución han desarrollado un sinnúmero de respuestas al estrés por
altas temperaturas para evitar o minimizar el daño y asegurar la protección del equilibrio
celular (Kotak et al., 2007). Los últimos estudios de las respuestas al estrés indican que la
respuesta a los mismos es compleja, debido a que nunca una condición de estrés se
encuentra por sí sola en condiciones de campo, por lo tanto, la respuesta no se puede
asociar a sólo un factor de estrés, ya que, muchas de las respuestas son concordantes
para más de una condición y no son exclusivas de solo una. Es así como la respuesta
fisiológica y metabólica al estrés por altas temperaturas y al estrés hídrico es la misma
(Mittler, 2006).
La RUBISCO cataliza los primeros pasos de 2 vías competitivas, la reducción del CO2 y
la foto-respiración, las cuales están determinadas por la actividad carboxilasa y oxigenasa
respectivamente (Salvucci et al., 2004a,b,c).
Sharkey (2005) señala que aún sin daño en el fotosistema debería esperarse que
disminuya la eficiencia de la fotosíntesis debido a un aumento de la foto-respiración
debido a un alza de la temperatura por sobre el óptimo para este proceso en cada
especie. Pero aún no toda esta pérdida puede ser explicada por el efecto de la foto-
respiración.
El daño en el fotosistema II se presenta sólo con temperaturas que superan los 45ºC, sin
embargo estos daños son reversibles pero tienen su efecto detrimental sobre la tasa y por
ende sobre la eficiencia fotosintética (Sharkey, 2005), y el daño sobre la fotosíntesis no es

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recuperable (Zhang y Sharkey, 2009). Este daño irreversible puede deberse al aumento
en la actividad oxigenasa de la RUBISCO a altas temperaturas, que va en desmedro de la
actividad carboxilasa, que permite la reducción del CO2 atmosférico (Schrader et al.,
2007). En este sentido Salvucci et al. (2004a,b,c) declaran que la RUBISCO aumenta su
capacidad catalítica, pero su afinidad con el CO2 va disminuyendo, disminuye también la
solubilidad del CO2 en comparación a la solubilidad del O2 y aumenta su naturaleza
oxigenasa, limitando así el posible aumento de fotosíntesis neta con el aumento de la
temperatura.
El estrés moderado por calor reduce el metabolismo de los carbohidratos y el transporte
electrónico en la fotosíntesis. (Zhang y Sharkey, 2009).

3. Las plantas frutales.

3.1. Plantas frutales y su origen.

Los vegetales, y por ende los árboles frutales, tienen un dominio de temperatura óptima
dependiendo de su zona de origen, la adaptación a largo plazo va generando la aparición
de ecotipos que de alguna manera toleran o resisten temperaturas más frías o más
cálidas en comparación a sus parentales (Ducruet et al., 2007).
Para describir las especies según su origen en cuanto a la temperatura y el
comportamiento de las mismas a esta variable, Ducruet et al. (2007) define 5 dominios:
Dominio frío (1 a 18ºC), Dominio de temperatura óptima (18 a 30ºC), Zona cálida (30 a
40ºC), Dominio del estrés por calor (40 a 60ºC), Dominio de la temperatura muy alta
(sobre 60ºC). La mayoría de las especies frutales de origen tropical o subtropical, se ven
dañadas o incluso pueden morir en el dominio frío, precisamente por no ser resistentes a
las bajas temperaturas. En el dominio de temperatura óptima, las plantas se pueden ver
enfrentadas a un estrés particular, que para este caso el autor señala a la foto-inhibición
como aquel punto crítico, además indica que en este dominio las plantas alcanzan su
máximo rendimiento fotosintético (quantum yield). Para el caso de la zona cálida, uno de
los factores determinantes de estrés es la disminución de la asimilación de Carbono,
derivado del decrecimiento de la afinidad de la RUBISCO con este sustrato (CO2), y el
aumento de su actividad oxigenasa, que genera especies oxígeno reactivas, además
ocurren importantes cambios en la membrana del tilacoide con efectos en su

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permeabilidad, es aquí donde comienza a aumentar la fluorescencia clorofílica, y donde
se manifiestan los primeros índices de daño por estrés generado por altas temperaturas.
En el dominio de estrés por calor, como su nombre lo indica, es en el cual derechamente
las plantas sufren daños por este factor y es en el cual las plantas están constantemente
sometidas a los perjuicios mencionados, antes que se relacionan a la fluorescencia
clorofílica. Y en el dominio de muy altas temperaturas, son pocas las especies del reino
vegetal que pueden desenvolverse con algún grado aceptable, sin embargo a estas
temperaturas, la mayoría de las plantas presentan severos daños a nivel de la membrana
del tilacoide, que se hace imposible realizar fotosíntesis, y por ende vivir y producir.

3.2. Importancia de la temperatura en las especies frutales.

La fisiología, la distribución y la productividad de las plantas, incluidas las frutales, está
controlada principalmente por la temperatura, teniendo esta importantes efectos en la
actividad fisiológica en todas las escalas espacio-temporal (Sage y Kubien, 2007). Taub et
al. (2000) agregan que es responsable de restricciones en el crecimiento, y que con el
proceso del cambio climático, las plantas se verán expuestas a eventos de estrés por
calor con mayores frecuencias, ya sea en ambientes naturales como en agro-
ecosistemas.
Las plantas C3 (incluyendo las frutales) muestran una temperatura óptima de fotosíntesis
que va desde los 20ºC a los 35ºC, con un máximo de asimilación de carbono con una
temperatura por debajo de los 30ºC (Schrader et al., 2007).
En el mundo grandes pérdidas en el ámbito agrícola, se pueden atribuir al estrés por altas
temperaturas en los cultivos, sobre todo si están acompañados de sequía u otros factores
determinantes de estrés (Vinocur y Altman, 2005; Mittler, 2006; Kotak et al., 2007). El
estrés por altas temperaturas es considerado uno de los principales factores de estrés
que afecta la producción de biomasa y la productividad, tanto es países tropicales, como
aquellos subtropicales (Allakhverdied et al., 2008) y cálidos. Sharkey (2005) señala que
por cada grado Celsius aumentado en la temperatura media de la temporada de
crecimiento resulta en un decrecimiento de los rendimientos en un valor aproximado de
17%.
La inhibición de la fotosíntesis a causa del estrés por calor es común para los cultivos en
zonas tropicales y subtropicales, y es experimentada periódicamente en las zonas más
cálidas (Salvucci et al., 2004a,b,c). El estrés abiótico es la principal causa de pérdidas en

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la agricultura a nivel mundial, constituyendo pérdidas que pueden alcanzar hasta un 50%
de la producción o incluso mucho más (Wang et al., 2004).
La temperatura de la hoja, en las condiciones naturales de ambiente y por lo mismo
también en condiciones agroambientales, varía durante el día, de un día a otro en incluso
varía dentro de la ubicación que tenga la hoja en la planta y el grado de exposición que
tenga esta a la luz (Hüve et al., 2006).
Saakov (2001) señala que existe una depresión en la tasa de asimilación de CO2 al
medio día, derivado de las altas temperaturas, además afirma que esto no sólo ocurre en
plantas en condiciones de ambientes desérticos, sino que es muy importante en especies
que se desarrollan es áreas en donde los veranos son muy calurosos. Además este autor
señala que si las plantas son sometidas a temperaturas superiores a 35ºC (óptima para la
fotosíntesis) la capacidad fotosintética se ve afectada hasta un 80%, y va más allá
diciendo que una vez restituido el sistema, la planta queda a una capacidad del 70% de la
que poseía previo a la situación de estrés.
Mittler (2006) realizó una matriz (stress matrix) donde relacionó los diferentes factores que
pueden ofrecer algún grado de estrés a las plantas, y observó que desde el punto de vista
agrícola, el estrés por calor tiene una alta importancia al combinarse con estrés por
salinidad, estrés hídrico, el ozono atmosférico, los patógenos y la radiación ultravioleta,
mientras que con las del daño por heladas o por frío (bajas temperaturas) no tiene
importancia, dado que no ocurren de modo simultáneo, y no queda clara la importancia de
su combinación con el déficit de nutrientes que pueda existir.

3.3. La domesticación y sus problemas

Las culturas nacen o se forjan a través del surgimiento de la agricultura. El hombre por
miles de años ha ido seleccionando los animales y plantas de acuerdo a sus propias
necesidades (alimento, abrigo, madera, etc.). Por lo tanto el problema de la domesticación
siempre ha existido y seguirá estando presente. Poder domesticar una especie significa
seleccionar el mejor material para que se adapte a las nuevas condiciones de crecimiento
y de desarrollo, y darle las condiciones mejores para su desarrollo. En el caso de las
plantas frutales los ciclos de vida son más largos y los procesos de mejora varietal duran
mucho tiempo, por lo tanto, se hace necesario poder medir el daño que se genera en una
especie al cambiarla de su lugar de origen, con el fin último de determinar manejos

12
culturales que permitan a la especie responder de la mejor manera posible, para obtener
los beneficios esperados.

4. Comprensión del uso de la fluorescencia clorofílica como indicador de estrés

por altas temperaturas en las plantas frutales.

4.1. La fluorescencia como indicador de estrés

Importante es reconocer que la fluorescencia clorofílica entrega información acerca del
estado del fotosistema II (Maxwell y Johnson, 2000). Cambios en la fluorescencia indican
no sólo cambios en el estado del fotosistema, sino que también se relaciona por
extrapolación con otros eventos que ocurren de manera simultánea que claramente
indican el padecimiento de algún tipo de estrés (Ver apartado 1.4).

4.2. Adaptación al estrés por calor.

A corto plazo las plantas tienen la capacidad de adaptarse o aclimatarse a las
temperaturas (Ducruet et al., 2007). Wang et al. (2004) señala que la adaptación al estrés
involucra una serie de mecanismos de respuestas al estrés, que actúan de manera
coordinada e incluso sinérgica, para evitar el daño o bien para restituir el funcionamiento
celular. Las HSPs juegan un papel fundamental, tanto en condiciones normales de
crecimiento y desarrollo, como en condiciones de estrés.
Pshybytko et al. (2008) señala que mientras más complejos es el sistema de respuesta al
estrés, el individuo tiene mayores posibilidades de adaptación a condiciones de estrés en
el aparato fotosintético y en la protección de específica del fotosistema II. Esto deja de
manifiesto la importancia que tiene en los vegetales la diversidad de las proteínas HSPs.
Kotak et al. (2007) señala que la principal vía de adaptación en la evolución de los
vegetales, se ha forjado a través de la conservación y diversificación de las proteínas
HSPs, de las cuales existen grupos de ubicación o acción a nivel citosólico, nuclear,
mitocondrial, cloroplástico, a nivel del retículo endoplasmático rugoso, etc. cada una de
las cuales ayuda a proteger de manera individual o sinérgica a los diferentes organelos y
compartimientos celulares. La conservación de estas proteínas se ha llevado a cabo a
través de la conservación de factores de transcripción (HSFs), los cuales se activan una
vez que la planta sufre algún tipo de estrés y particularmente un evento de estrés por

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altas temperaturas. La función que cumplen estas proteínas es evitar el daño a la
conformación nativa de las proteínas y enzimas para que la planta no pierda su actividad
fisiológica, por otra parte son capaces de renaturalizar las proteínas que han perdido su
estructura cuaternaria, de modo de poder recuperar en parte el daño provocado por el
estrés. Hüve et al. (2006) señala por su parte que el poder de adaptación de las plantas
está centrado en poder responder de manera óptima a la temperatura media a la cual
están expuestos durante un periodo determinando, dejando en claro que, bajo ninguna
circunstancia, las plantas se van a adaptar a la máxima temperatura a la que ellas se
vean enfrentadas. Esto, según lo hasta ahora analizado, sería muy fácil de entender, ya
que, si se adaptaran a poder resistir a temperaturas mayores a la media, estarían
exigiéndole a todo su aparataje enzimático y proteico responder a temperaturas mayores,
lo cual no es una ventaja desde un punto de vista de la cinética enzimática. Este mismo
autor señala que, una forma más eficiente para la planta es utilizar el ciclo de las
xantofilas para cambiar la rigidez de las membranas y permitir a las células ser más o
menos permeables según sea su necesidad frente a la temperatura ambiental.
Hüve et al. (2006) señala que un cambio en la concentración de azúcares también genera
una mayor resistencia al estrés, lo que se puede relacionar a lo indicado por Zhang y
Sharkey (2009), quienes observaron un patrón de cambio en el metabolismo del carbono.
Y en parte esta discusión puede dar luces de la posibilidad que tiene el cloroplasto de
almacenar grandes cantidades de almidón. Se puede decir que estaría allí a modo de
quedar fácilmente disponible frente a un shock térmico, que incitaría a las células a perder
agua para activar la refrigeración evaporativa, sin embargo no se puede perder toda el
agua, porque podría haber plasmólisis si va acompañado de estrés hídrico (es usual que
así sea) (Mittler, 2006). Por lo tanto este carbono podría utilizarse para poder generar
solutos compatibles que permitan ligar mucha más agua a la célula en situaciones de
estrés. De lo contrario Mittler (2006) señala que de ocurrir un evento de estrés hídrico y
estrés por calor, implica un cierre estomático, un aumento en la temperatura foliar, una
perdida de capacidad fotosintética y una alta foto-respiración.
La capacidad de recuperación del daño del fotosistema II es para Allakhverdiev et al.
(2008) la base para la aclimatación que pueden presentar las plantas bajo condiciones de
estrés. Este mismo autor señala que existen seis factores importantes en la tolerancia al
estrés por calor, enumerando los siguientes: HSPs, antioxidantes, lípidos insaturados de
membranas, la estabilidad de las proteínas al calor y la acumulación de solutos. Sin

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embargo para Vinocur y Altman (2005) la adaptación al estrés está dada por las cascadas
de redes de reacciones en la percepción, la transducción de la señal, y la expresión de
genes y metabolitos específicos relacionados con el estrés.

4.3. La fluorescencia y la fruticultura.

En este apartado se discutirá la aplicación que puede tener en la fruticultura el uso de la
medición de la fluorescencia clorofílica en relación a la información que entrega de la
condición de estrés por calor. Ya quedó clara la relación entre la fluorescencia clorofílica y
la fotosíntesis, también se señalaron los complejos procesos que ocurren al aumentar la
temperatura que conlleva a una mayor fluorescencia. Así, quedan relacionadas las
mediciones de fluorescencia con los diferentes daños que se puede deducir, están
ocurriendo en la planta a través del aumento de la fluorescencia con la temperatura. El
conocer que hay aumentos en fluorescencia indica que hay estrés y que la producción en
último término se está viendo desfavorecida. En la fruticultura, como en todas las áreas de
la agricultura, no se desea tener plantas estresadas, ya que, eso significa plantas que no
están expresando su máxima productividad. Las plantas al no expresar su máxima
productividad, llevan a que en los cultivos se obtengan bajos rendimientos, lo que
determina menores ingresos por unidad de superficie. Por lo tanto cada vez que aumente
la fluorescencia uno puede pensar en una disminución de la eficiencia económico-
productiva del sistema en análisis. Esto es muy importante, en la búsqueda de nuevas
tecnologías de manejo de huertos, que permitan disminuir el daño generado por el exceso
de calor.

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Conclusiones.
El uso de la fluorescencia clorofílica como indicador de estrés permite tener una visión del
estado en que se encuentra el fotosistema II, por lo tanto se deriva de ello, la capacidad a
la cual la planta como un todo está respondiendo en términos de asimilación fotosintética.
Una planta con buenos indicadores de fluorescencia clorofílica (cercanos a 0,83) significa
que es una planta que está libre de estrés en su fotosistema. Una planta que trabaja al
nivel máximo con sus fotosistemas, es una planta que puede tener un rendimiento
cuántico óptimo. Con un rendimiento cuántico óptimo, las plantas pueden satisfacer
fácilmente sus necesidades de foto-asimilados y realizar una partición menos ajustada,
con lo cual se asegura que ningún fruto, ni ninguna estructura quedarán en condiciones
sub-óptimas. Las mediciones de fluorescencia clorofílica, en su último fin, miden al grado
de foto-inhibición en el cual están las plantas, por lo tanto el grado de estrés que padece.
La utilidad de este indicador puede ser, utilizarlo para buscar manejos mediante los cuales
se logre minimizar el daño en aquellos días en que tanto la radiación, el abastecimiento
hídrico y la temperatura sean limitantes, esto es de vital importancia para la fruticultura de
que se desarrolla en climas de tipo mediterráneo, semi-desértico e incluso en climas
tropicales. Esta técnica, permitirá determinar la temperatura óptima de fotosíntesis de
todas las especies, el nivel de luz (PAR) que se necesita para tener un fotosistema no
estresado, pero en su máximo rendimiento cuántico. En fin, se puede utilizar con fines
investigativos, pero el aporte que entrega para un mejor desempeño de las plantas es de
muy alto valor, ya que muchas veces es fácil determinar cuando las especies producen o
vegetan mal en condiciones de estrés más comunes y conocidas (estrés hídrico, déficit de
nutrientes, pH, toxicidad química, etc.), sin embargo, existen muchas situaciones, en
donde estos factores están manejados bien e incluso así no se logran producciones
óptimas. A futuro, no se puede dudar que el uso de tecnología de percepción remota y de
posicionamiento global, dará la posibilidad de generar imágenes bidimensionales de los
huertos y de los ecosistemas naturales, y el uso de estas tecnologías, en la mayoría de
los casos, se relaciona con la emisión de fluorescencia por parte de los elementos
investigados. Por lo tanto, hoy es necesario entender como se puede utilizar la referencia
del estado del fotosistema que entrega la fluorescencia clorofílica, para poder desarrollar
mejores diseños y manejos de los huertos. Mañana, será posible recibir esta tecnología
en tiempo real, mediante ordenador y poder estimar día a día el efecto del estrés por foto-
inhibición mientras ocurre, ya sea por exceso de luz, temperatura o déficit hídrico.

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5. Bibliografía.

Allakhverdiev, S., Kreslavski, V., Klimov, V., Los, D., Carpentier, R. y Mohanty, P. 2008.
Heat stress: an overview of molecular responses in photosynthesis. Photosynth Res 98:
541-550.

Andrizhiyevskaya, E., Chojnicka, A., Bautista, J., Diner, B., van Grondelle, R. y Dekker, J.
2005. Origin of F685 and F695 fluorescence in photosystem II. Photosynth Res 84: 173-
180.

Ducruet, J-M., Peeva, V. y Havaux, M. 2007. Chlorophyll thermofluorescence and

thermoluminiscence as complementary tool for study of temperature stress in plants.
Photosynth Res 93: 159-171.

Hüve, K., Bichele, I., Tobias, M. y Niinemets, Ü. 2006. Heat sensivity of photosynthetic
electron transport varies during the day due to changes in sugar and osmotic potential.
Plant, Cell and Environment 29: 212-228.

Kotak, S., Larkindale, J., Lee, U., von Koskull-Döring, P., Vierling, E. y Scharf, K-D. 2007.
Complexity of the heat stress response in plants. Plant Biol 10: 310-316.

Maxwell, K. y Johnson, G. 2000. Chlorophyll fluorescence- a practical guide. Journal of

Experimental Botany 51: 659-668.

Mittler, R. 2006. Abiotic stress, the field environments ans stress combination. Trends
Plant Sci 11:15-19.

Müller, P., Li, X. y Niyogy, Krishna. 2001. Non-photochemical quenching. A response to

excess light energy. Plant Physiol 125: 1558-1566.

Pshybytko, N., Kruk, J., Kabashnikova, L. y Strzalka, K. 2008. Function of plastoquinone in

heat stress reactions of plants. Biochimica et Biophysica Acta 1777: 1393-1399.

17
Sage, R. y Kubien, D. 2007. The temperature response of C3 and C4 photosynthesis.
Plant, Cell and Environment 30: 1086-1106.

Salvucci, M. y Crafts-Brandner, S. 2004a. Inhibition of photosynthesis by heat stress: the

activation state of Rubisco as a limiting factor in photosynthesis. Physiol Plant 120: 179-
186.
Salvucci, M. y Crafts-Brandner, S. 2004b. Mechanism for deactivation of Rubisco under
moderate heat stress. Physiol Plant 122: 513-519.

Salvucci, M. y Crafts-Brandner, S. 2004c. Relationship between the heat stress tolerance

of photosynthesis and thermal stability of Rubisco activase in plants from constrasting
thermal environments. Plant Physiol 134: 1460-1470.

Saakov, V.2002. Hight-temperature stress-related changes in the harmonics Fo, Fm and

Fvof pulse-amplitud modulated fluorescence signals: Locating thermal damage in reaction
center in photosystem II. Doklady Biochemistry and Biophysics 382: 4-9.

Schrader, S., Kleinbeck, K. y Sharkey, T. 2007. Rapid heating of intact leaves reveals
initial effects of stromal oxidation on photosynthesis. Plant, Cell and Environment 30: 671-
678.

Sharkey, T. 2005. Effects of moderate heat stress on photosynthesis: importance of

thylacoid reactions, Rubisco deactivation, reactive oxigen species, and thermotolerance
provided by isoprene. Plant, Cell and Environment 28: 269-277.

Sun, W., van Montagu, M. y Verbrugguen, N. 2002. Small shock proteins and stress
tolerance in plants. Biochimica et Biophysica Acta 1577: 1-9.

Taub, D., Seemann, J. y Coleman, J. 2000. Growth in elevated CO2 protects

photosynthesis against hight temperature damage. Plant, Cell and Environment 23: 649-
656.

18
Vinocur, B. y Altman, A. 2005. Recent advances in engineering plant tolerance to abiotic
stress: achievements and limitations. Curr Opin Biotechnol 16: 123-132.

Wahid, A. y Close, T.J. 2007. Expression of dehidrins under heat stress and their
relationship with water relations of sugarcane leaves. Biol Plant 51: 104-109.

Wang, W., Vincour, B., Shoseyov, O. y Altman, A. 2004. Role of plant heat shock-proteins
and molecular chaperones in the abiotic stress response. Trend Plant Sci 9: 244-252.

Zhang, R. y Sharkey, T. 2009. Photosynthetic electron transport and proton flux under
moderate heat stress. Photosynth Res 100: 29-43.

19