P. 1
Técnicas de Determinación del Grupo Sanguíneo y Pruebas de Compatibilidad

Técnicas de Determinación del Grupo Sanguíneo y Pruebas de Compatibilidad

|Views: 4,805|Likes:
Published by Jhonny Alvarez

More info:

Published by: Jhonny Alvarez on Nov 10, 2010
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

05/12/2013

pdf

text

original

Tecnicas de Determinacion del Grupo Sanguineo y Pruebas de Compatibilidad

La finalidad de esta secci6n es familiarizar al estudiante con los principios de las tecnlcas de uso habitual en la determinaci6n del grupo sangutneo, La precisi6n es esencial en la labor diaria y s610 se logra merced al empleo de procedimientos correctos y control adecuado de todas las pruebas realizadas. La interpretaci6n de los resultados tarnblen es fundamental.

OBJET/VOS DEL APRENDIZAJE

Despues de completar esta secci6n, el estudiante sera capaz de:

1 Dominar las tecnicas de determinaci6n del grupo sanguineo y sus controles.

2 Utilizar un sistema de puntaje apropiado para definir la potencia de las reacciones.

3 Reconocer y evitar errores comunes en la determinaci6n del grupo sangulneo, en particular en relaci6n con los metodos incorrectos.

4 Llevar a cabo pruebas de compatibilidad de rutina y de emergencia.

SECCION 7

7.1 INTRODUCCION

En comparaci6n con otras tecntcas de laboratorio, las que se emplean en la determinaci6n del grupo sanguineo son bastante simples. No obstante, los resultados a menudo son mas significativos que en el caso de otros estudios. Cualquier error en la determinaci6n del grupo ABO 0 Rh 0 en la compatibilidad, puede tener consecuencias graves para el paciente y en ocasiones pod ria ser fatal. Por 10 tanto, es crucial comprender los principios que se describen en esta secci6n.

Esta secci6n y el apendice 1 detallan la realizaci6n de los siguientes procedimientos:

1 Lavado y preparaci6n de suspensiones de gl6bulos rojos 2 Tecnlca del portaobjetos

3 Tecnlca de centrifugaci6n inmediata (CI) 4 Tecnlca a temperatura ambiente

5 Agregado de alburntna para la tipificaci6n Rh 6 Determinaci6n del grupo ABO y Rh en tubos

7 Determinaci6n del grupo ABO y Rh en microplacas 8 Estudio de DU

9 Prueba de antlglobultna indirecta (PAl)

10 Prueba de antlglobullna indirecta en soluci6n salina de baja potencia i6nica (PAIjLlSS)

10.1 Suspensi6n en LlSS

10.2 Agregado de LlSS

11 Prueba de antiglobulina directa (PAD)

12 Preparaci6n de celulas recubiertas de IgG de control, para la prueba antlglobullna (celulas control)

13 Compatibilidad

13.1 En tubo: centrifugaci6n inmediata y PAl 13.2 En tubo con LlSS

13.3 A temperatura ambiente con alburnlna y soluci6n salina

13.4 De emergencia.

7.2 HIGIENE Y SEGURIDAD

La manipulaci6n de muestras de sangre y otros materiales blologlcos implica rlesgos potenciales para la salud. Por 10 tanto, la higiene de-

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Rgura 23: Equipo necesario para las pruebas serol6gicas de rutina

be ser meticulosa y el personal debe tomar todas las precauciones del caso.

La seguridad en el laboratorio se detalla en la secci6n 3 del m6dulo introductorio. EI estudiante debe leer el tema con detenimiento y comprenderlo con claridad antes de proseguir.

7.3 EQUIPO

La flgura 23 enumera el equipo minima que requieren las pruebas serologlcas de rutina.

EQUIPO NECESARIO PARA LAS PRUEBAS SEROLOGICAS DE RUTINA

• centrifuga de sobremesa

• refrigerador para conservar reactivos, controles y muestras

de sangre

• congelador para conservar muestras de suero

• caja de luz 0 azulejo blanco

• bano a 37°C (0 incubadora)

• recipientes para soluci6n salina

• envases de plastlco

• term6metros

• pipetas Pasteur

• tubos de vidrio para pruebas de antlglobullna indirecta (75 x 12 mm)

• tubos (de vidrio 0 plastlco) para determinaci6n del grupo san-

guineo (50 x 7 mm)

• gradillas para tubos de ensayo

• portaobjetos de vidrio

• aplicadores de madera

• marcadores indelebles para tubos de vidrio y plastlco

• lupa (2x a 5x)

• indicadores de pH

• egua destilada 0 desionizada

• microplacas (opcionales)

• centrlfuga con soporte para microplacas (opcional)

SECCION 7

ACTIVIDAD 25

Confeccione una lista de los elementos utilizados en su centro para las pruebas serol6gicas de rutina. comperet« con la de la Figura 23. (,Carece de alguno de los items enumerados? Si es est, anote sus sugerencias en la lista de acci6n y sefiale al supervisor la importancia de este equipo.

7.4 SOLUCION SALINA

Cuando se trabaja con globulos rojos, la soluci6n salina debe tener un pH de 6,5-7,5. Por fuera de este range, algunos anticuerpos no se combinan con los anngenos y se obtienen resultados falsos negativos. Si el pH es adecuado y la soluci6n salina se usa en el dla, no se requiere buffer.

Sin embargo, como la soluci6n salina sue Ie utilizarse en un lapso de 2 a 3 dlas y como el pH declina con el tiempo, es preciso agregar sales amortiguadoras en forma de tabletas de pH 7 0 un buffer apropiado.

Para la preparaci6n de soluciones salina y amortiguadora, vease el apendlce 1. EI procedimiento estandar se detalla en el apendice 1 del m6dulo introductorio.

7.5 PIPETA DE PASTEUR

La pipeta de Pasteur es un tubo de vidrio 0 de plastlco de 5 mm con un extrema mas delgado que deja caer una gota de alrededor de 0,02 mi.

EI volumen de la gota varia de acuerdo con el angulo de inclinaci6n de la pipeta. Por 10 tanto, para obtener gotas iguales es preciso mantener siempre la pipeta en la misma posici6n. En general se emplea en forma vertical. Si es factible, se usa una pipeta para cad a muestra, porque podrian quedar vestlglos de suero que alteran los resultados. Si no es posible, se lava la pipeta para eliminar todo rastro de material extrano, EI lavado correcto consiste en:

• enguajar la pipeta con agua y sacudirla

• repetir la operaci6n con soluci6n salina

• volver a enguajar la pipeta con soluci6n salina y sacudirla.

Cuando se emplean pipetas de vidrio es muy facll lastimarse. Las de plastlco son mas seguras, Ante un accidente, es esencial denunciar el incidente y solicitar asesoramiento.

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Rgura 24: Placa estfmdar de 96 pozos

Rgura 25: Cubetas en V, plana y en U

7.6 PORTAOBJETOS, TUBOS Y MICROPLACAS

EI grupo sangulneo puede determinarse mediante tres metodos:

• portaobjetos de vidrio 0 azulejo blanco

• tubos de ensayo de vidrio 0 plastlco

• microplacas

Portaobjetos de vldrio 0 azulejo blanco

Este procedimiento (vease tecnlca 2 del apendlce 1) es poco sensible y conduce a error. En consecuencia, s610 se utiliza como evaluaci6n previa a la determinaci6n del grupo sanguineo en tubo 0 microplaca.

Tubos de ensayo

Los tubos de ensayo pueden ser de vidrio 0 plastlco. En general, para determinar el grupo sangulneo se usan tubos de 50 x 7 mm ypara las pruebas de antlglobullna, de 75 x 12 mm. La ventaja de este metodo es que permite la incubaci6n prolongada sin evaporaci6n del contenido.

Es fundamental lavar bien los tubos, enjuagarlos con agua destilada y secarlos antes de reutilizarlos.

Microcubetas 0 microplacas

En muchos centros, las placas reemplazaron a los tubos de ensayo. Como se ilustra en la figura 24, consisten en una pequefia bandeja con 96 pozos que pueden contener 200 a 300 microlitros de reactivo.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A 000000000000 a 000000000000 cOOOOOOOOOOOO 0000000000000 eOOOOOOOOOOOO FOOOOOOOOOOOO GOOOOOOOOOOOO HOOOOOOOOOOOO

Como se aprecia en la figura 25, existen tres tipos de cubetas:

• en V
• planas
• en U.
U U U SECCION 7

Para los estudios serol6gicos se prefieren las cubetas en U porque facilitan la lectura de los resultados.

La ventaja de las microplacas radica en que suplantan a 96 tubos de ensayo, de manera que requieren mucho menos antisuero y reducen los costos.

Las placas pueden reutilizarse, pero es crucial lavarlas y secarlas para eliminar todas las protein as extrai'ias. Es aconsejable no usar una placa para diferentes reactivos, sino separarlas, por ejemplo, para trabajar con anti-A empleando siempre las mismas microplacas.

7.7 LECTURA DE LAS REACCIONES

Tecnica del portaobjetos 0 azulejo

Se mezclan los gl6bulos rojos y el suero en un area de 2 cm de diametro. Luego se inclina el portaobjetos para observar la presencia de aglutinaci6n. La reacci6n debe leerse antes de los 2 minutos para evitar que los reactivos se sequen y brinden resultados falsos posltlvos.

Tecnica del tubo

Se deja depositar los globules rojos en el fondo del tubo. Si no se centrifugan, este proceso demora por 10 menos 45 minutos. Se evalOa un tubo por vez, colocandolo contra un fondo blanco bien iluminado, un negatoscoplo con luz difusa 0 un espejo c6ncavo. Si se advierte hem6lisis, se conslgna,

Se inclina el tubo y se agita con suavidad para movilizar los globules rojos sedimentados. Se analiza la presencia de aglutinaci6n. EI empleo de una lupa (2x 0 5x) facilita la lectura. Antes de prosegulr se reglstra el resultado.

Tecnica de la microplaca '

Como en el caso de los tubos, se deja depositar los globules rojos 0 se centrifuga la placa a baja velocidad. Se examina en busca de hem61isis y luego se movilizan las celulas sedimentadas mediante un agitador 0 golpeteando el borde de la placa con la palma de la mano. Los resultados se leen en forma directa 0 con el auxilio de un lector especial. Existen otros rnetodos, pero requieren centrifugaci6n. Este es simple perc satisfactorio.

7.8 DEFINICION DE LA POTENCIA DE LA REACCION

Cuando se leen los resultados es necesario contar con un sistema que diferencie la potencia de las reacciones; en general se utili zan puntajes. Por ejemplo:

4+ = aglutinaci6n completa de todas las celutas

3+ = aglutinaci6n de la rnayorla de las celulas

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

2+ = egtutlnaclon a simple vista

1 + = positividad debil a simple vista; neta cuando se

emplea una lupa 0 espejo concave

Negativo = no se observa aglutinacion

L = lisis de los globules rojos

7.9 REACTIVOS DE GRUPO SANGUINEO

Los reactivos de grupo sanguineo se preparaban a partir de antlcuerpos policlonales naturales 0 inmunes de sangre humana y en ocasiones animal. Ahora se obtienen de anticuerpos monoclonales derivados de cultivos de celulas secretoras 0 hibridomas.

La ventaja de los reactivos monoclonales es que proporcionan montos casi ilimitados de anticuerpos ldenticos, muy especificos y libres de contaminantes que podrian generar resultados falsos positivos. Tarnblen estan exentos de virus como los VIH y de la hepatitis. No obstante, deben conservarse y usarse de acuerdo con las instrucciones del proveedor, porque se preparan con un diluyente estandarizado y son susceptibles a los cambios de pH y otros factores.

Algunos reactivos sufren modificaciones quimicas; es asl que se alteran los anticuerpos IgG para que se comporten como IgM aglutinantes 0 se mezclan con otros anticuerpos no tratados para producir reactivos "combinados". Es esencial cumplir con las especificaciones del proveedor.

7.10 GLOBULOS ROJOS PARA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Los globules rojos que se utlllzan en la determinacion del grupo sanguineo pueden necesitar lavarse con soluclon salina para remover el plasma 0 suero y los coagulos que podrian provocar resultados falsos positivos si se confunden con aglutlnados. Este procedimiento tambien elimina los eritrocitos hemolizados. Los globules rojos de la sangre coagulada requieren un lavado y los de la anticoagulada, dos. EI sobrenadante del ultimo lavado no debe mostrar hemohsls.

Las celulas lavadas se suspenden en soluclon salina para alcanzar la concentraclon adecuada, en general del 2-4%. Esta proporclon es fundamental y para lograrla se necesita practlca, Para obtener una suspension al 3% se egrega 1 gota de globulos rojos sedimentados (centrifugados) a 30 gotas de solucion salina (vease tecnica 1 del apendtce 1).

Cuando se analizan muchas muestras, aun los tubos bien rotulados podrian mezclarse e inducir a error. Si se evaluan muestras frescas, es aceptable preparar la suspension al 2-3% en forma directa, pero cuidando que los gtobulos rojos no ingresen en la pipeta con demasiado suero. Si la muestra pertenece a un paciente con anemia, se lavan los eritrocitos para remover el exceso de suero, as! como tambien cuando parece haberse producido hemollsls.

SECCION 7

Preparaci6n de gl6bulos rojos A, B Y 0 para la prueba inversa

Estos globules rojos pueden prepararse a partir de muestras frescas y sl es factible, provenientes de dos individuos. En 10 posible se usan celulas A Rh D negatlvas, B Rh D positivas y 0 Rh D positivas. Tambien pueden utilizarse para controlar los sueros de determinaci6n de los grupos ABO y Rh.

ACTIVIDAD 26

Lea la tecntce 1 del apendice 1.

Tome cinco muestras de sangre ya tipificadas y empleando la tecnice 1, prepare una suspensi6n al 3% de cada una. Necesitara estas suspensiones para la pr6xima actividad.

SOlicite al supervisor que verifique si las suspensiones de gl6bulos rojos que acaba de preparar son correctas.

7.11 CONSERVACION DE LOS ANTISUEROS Y GLOBULOS ROJOS

En general los antisueros se conservan a 4°C, pero es preciso leer y seguir las instrucciones del proveedor. Los sueros no deben descongelarse y congelarse en forma reiterada porque se alteran. En condiciones ideales, se descongetan una sola vez y se mezclan bien, porque las protelnas tienden a separarse del agua,

En 10 posible, los globulos rojos que se utilizan en la determinaci6n inversa del grupo sangulneo deben prepararse a diario. Si se conservan a 4°C, pueden emplearse durante dos dlas, Si exhiben hem61isis o decoloraci6n, deben descartarse.

Si el banco de sangre recibe reactivos (antisueros 0 globules rojos) de otra instituci6n, es menester conslgnar la slgulente informaci6n:

• fecha de recepci6n
• orlgen
• condiciones de conservaci6n
• fecha en que comenzaron a usarse
• nomero de lote
• fecha de vencimiento • comentarios 0 problemas derivados de los reactivos.

7.12 EVALUACION DE LOS ANTISUEROS Y GLOBULOS ROJOS Antes de usar los antisueros en estudios de rutina es necesario evaluarlos con una bateria de controles para garantizar los resultados correctos. tuego deben evaluarse con cada lote de pruebas 0 por 10 men os una vez por dla.

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Los globules rojos deben analizarse de la misma manera que los antisueros.

7.13 DETERMINACION DE LOS GRUPOS ABO Y Rh D

En general, la determinacion de los grupos ABO y Rh D es simultanea,

En el caso del grupo ABO, casi slernpre se utiliza una tecnlca con solucien salina a temperatura ambiente.

EI empleo de los antisueros Rh D varia. Algunos reactivos monoclonales requieren el mismo procedimiento que los ABO y si se usan microplacas, puede lIevarse a cabo la determinacion de los grupos ABO y Rh D al mismo tiempo. Otros deben incubarse a 37°C y suelen ser mas adecuados para los estudios en tubos de ensayo.

Determinacion del grupo sanguineo de los donantes

EI grupo de los don antes debe determinarse cad a vez que donan sangre, empleando anti-A, anti-B y anti-AB y globules rojos A, By O.

Se utiliza por 10 menos un reactivo anti-D. En las muestras negativas se investiga la presencia de DU.

Determinacion del grupo sanguineo de los pacientes

Los globules rojos del paciente se estudian con anti-A y anti-B y el suero 0 plasma, con celulas A, B Y O. Se usa un anti-D y aunque no es imprescindible, en algunos centros se busca DU en las muestras negativas.

Como en los nines el suero no contiene anti-A ni anti-B, no es necesario efectuar la determinacion inversa en nlfios menores de tres meses.

Determinacion de los grupos ABO y Rh en tubos

La determinacion de los grupos ABO y Rh en tubos se describe en la tecnlca 6 del apendice 1.

Determinacion de los grupos ABO y Rh en mlcroplacas

La determinacion de los grupos ABO y Rh en microplacas se describe en la tecnica 7 del apendtce 1.

Investigacion de DU

La lnvestlgaclon de DU se describe en la tecnica 8 del apendlce 1.

SECCION 7

seudoaglutlnacl6n: Aglutinaclon falsa que suele deberse a alteraciones de la proporcion albumina/globulinas.

pllas de monedas: Reaccion en la cual los globules rojos parecen aglutinarse. Por 10 tanto, se trata de una seudoaglutlnaclon (vease antes).

Rgura 26: Aglutinaci6n verdadera (vista microsc6pica)

Rgura 27: Formaci6n de pi/as de monedas (vista microsc6pica)

1:t.I

ACTIVIDAD 27

Lea las tecmces 2-8 del eoenaice 1.

Mediante la teonice 6 0 7, determine los grupos ABO y Rh de las muestras ya tipificadas (suspensiones celulares preparadas en la actividad 26). Anote los resultados utilizando el sistema de puntaje que se detalla en la secci6n 7.B.

Compare sus resultados con los obtenidos con anterioridad. lCoinciden con los grupos ABO y Rh originales? Si no es asf, intente explicar el motivo de la discrepancia.

Solicite al supervisor que verifique los resultados.

7.14 ERRORES EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Es preciso conocer los errores potenciales en la determinaci6n del grupo sanguineo, que podlian generar resultados talsos positivos 0 talsos negativos.

Estandarizacl6n 0 conservacl6n Incorrecta de los antlsueros

Es muy importante evaluar todos los lotes de antisueros antes de utilizarlos. Para evitar los resultados talsos negativos, siempre deben conservarse a la temperatura indicada por el proveedor. Los antisueros intectados pueden inducir resultados talsos positivos.

Formaci6n de "pllas de monedas"

La tormaci6n de pllas de monedas a menu do se denomina seudoaglutinacl6n. Para detectarla se requiere practice. La figura 26 ilustra la aglutinaci6n y la 27, la tormaci6n de pilas de monedas. Este ten6- me no suele observarse en el suero de pacientes con proporci6n alburnlna/globullnas anormal, Ante la duda, es esencial consultar a un protesional experimentado. Si se sgrega 1 gota de soluci6n salina hipert6nica (1,5%), las pilas de monedas desaparecen pero la aglutinaci6n verdadera no.

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Muestras de sangre contamlnadas

Las muestras de sangre contaminadas pueden afectar los resultados. En general (pero no siempre) se reconocen por el olor desagradable. Ademas, cuando se preparan las celulas para determinar el grupo, se advierte hem6lisis. En estas circunstancias es preferible solicitar una nueva muestra.

Gelatlna de Wharton

La gelatina de Wharton es la sustancia que recubre el cuerpo y cord6n umbilical del recien nacido y a menudo se identifica en las muestras de sangre del cord6n umbilical obtenidas en forma directa y no a traves de una jeringa. Este material mucoide contamina las muestras y puede provocar formaci6n de pilas de monedas. Para eliminarlo, se lavan las celulas en soluci6n salina calentada a 37°C.

Autoantlcuerpos y antlcuerpos de reaccl6n en frio

La sangre de algunos pacientes contiene autoanticuerpos que reaccionan con las cetulas A, B Y ° en la determinaci6n inversa del grupo. En estos casos se incuba la preparaci6n a 37°C antes de leer los resultados. Como muchos de estos anticuerpos actuan a temperaturas inferiores a la corporal, se advierten reacciones ABO verdaderas. A veces los anticuerpos son potentes y causan hem61isis a 37°C. Si es aSI, se realiza una prueba antiglobulina directa (vease tecnica 11 del apendlce 1). Es preciso informar al medico de cabecera, porque el paciente podrla tener una anemia hemolltica autoinmune.

Tecnica Incorrecta

La mayorla de los errores en ta determinaci6n del grupo sanguineo deriva de la tecnlca inadecuada, en particular:

• colocaci6n de los antisueros 0 celulas en los tubos equivocados

• falta de apreciaci6n de la importancia de la temperatura y el tiempo de incubaci6n

• transcripci6n incorrecta de los resultados.

Si se apllca el procedimiento indicado y se efectOan los controles correspondientes, es factible evitar muchos errores.

7.15 METODOS DE DETECCION DE ANTICUERPOS ERITROCITARIOS INMUNES

La mayorla de las muertes vinculadas con las transfusiones se debe a incompatibilidad ABO, de manera que es esencial lIevar a cabo con gran cuidado Ia determinaci6n del grupo sangulneo del donante y el paciente y asegurar la compatibilidad. Sin embargo, despues de transfusiones 0 gestaciones algunas personas desarrollan anticuer-

SECCION 7

pos inmunes (en general IgG). Es fundamental detectar estos anticuerpos y encontrar sangre compatible.

Los anticuerpos inmunes se identifican cuando se evalua el suero 0 los globules rojos del paciente 0 cuando se realiza la compatibilidad ABO y Rh D. EI procedimiento mas apropiado es la prueba antlglobullna indirecta (de Coombs). En 10 posible, debe utilizarse en todos los estudios de compatibilidad. Si las existencias de reactivo son Iimitadas, se reserva la prueba antiglobulina indirecta (PAl) para los pacientes que recibieron transfusiones con anterioridad 0 las mujeres que pudieran haber desarrollado anticuerpos inmunes durante un embarazoo En los dernas enfermos puede recurrirse a una tecnica con albUmina (vease secci6n 7.18).

EI estudio no s610 debe reconocer los anticuerpos inmunes, sino tambien la incompatibilidad ABO debida a la selecci6n de una unidad de sangre inadecuada. Adernas de la PAl y la tecnica de la albumlna, se agrega otra con soluci6n salina a temperatura ambiente 0 compatibilidad en tubo, centrifugaci6n inmediata y PAl.

Estos procedimientos se describen en el apendlce 1.

7.16 PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA

La prueba de antiglobulina indirecta (PAl) 0 de Coombs es un rnetodo de aglutinaci6n en tubo en el cual el suero anttglobullnlco demuestra la combinaci6n de los anticuerpos incapaces de provocar aglutinaci6n directa, con los receptores eritrocitarios correspondientes.

En la secci6n 3 se sefial6 que la PAl consiste en tres pasos:

Paso 1: Sensibilizaci6n e incubaci6n Paso 2: Lavado

Paso 3: Agregado del reactivo antlglobullnlco.

Tarnblen se indic6 que diversos facto res como el pH y la potencia i6- nica, afectan las reacciones antlgeno-anticuerpo.

Paso 1: Sensibllizacl6n

En la fase 1 se incuba el suero y los globules rojos a 3rC. Si se utilizan eritrocitos suspendidos en soluci6n salina (vease la tecnica 9), la incubaci6n se prolonga 45-60 minutos, pero si se emplea soluci6n salina de baja potencia i6nica (L1SS) (vease la tecnica 10.1), se reduce a 15 minutos porque la fijaci6n de los anticuerpos a las celutas se acelera.

La proporci6n entre suero y globules rojos es importante; en presencia de anticuerpos de reacci6n debll se requieren 3-4 gotas de suero por cad a gota de suspensi6n celular al 2-4%. Si se usa L1SS, los volumenes deben ser lguales para correglr el medio i6nico. Por 10 tanto, por cada 2 gotas de suero se afiaden otras 2 de celulas al 2-4% en L1SS.

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

Como alternativa, se recurre al "agregado de LlSS" (vease la tecnica 10.2). Es esencial segulr las instrucciones del proveedor, pero en general se utilizan 3 gotas de suero y 1 de celulas al 2-4% en soluclon salina y luego se agregan 3 gotas de LlSS. Se mezcla bien y se incuba a 37°C durante 15 minutos.

Despues de la incubaci6n y antes de lavar los gl6bulos rojos se inspecciona el tubo en busca de hem61isis y aglutinaci6n.

Paso 2: Lavado

EI lavado es fundamental porque debe eliminar todo vestlglo de suero de los globules rojos. Por 10 tanto, se repite la operaci6n cuatro veces. EI pH de la soluci6n salina debe ser de 6,5-7,5. En caso contrario, el lavado podr'ia remover los anticuerpos que recubren a los eritrocitos.

Paso 3: Agregado del reactlvo antiglobulinlco

Los reactivos antlglobutlnlcos (AHG) deben usarse de acuerdo con las instrucciones del proveedor. En general se aconseja aiiadir 2 gotas de AHG y centrifugar de inmediato. Si se emplea menos AHG, podr'ian pasarse por alto las reacciones debiles. Los resultados deben leerse y conslgnarse con cuidado (vease la secci6n 7.7).

Los resultados falsos negativos suelen deberse a lavado incorrecto de los globules rojos y neutralizaci6n de la AHG por parte del suero remanente. Para evitar este problema, se agregan eritrocitos recubiertos de IgG a las pruebas negativas (vease la tecnlca 12 del apendice 1), se mezclan y se centrifugan. Debe observarse aglutinaci6n, que confirma que el estudio es negativo. Si no se produce aglutlnaci6n, la AHG se neutraliz6 y los hallazgos no son confiables. En consecuencia, es necesario repetir la prueba. Si se presta atenci6n a los detalles y se lIeva a cabo el procedimiento con el debido cuidado, los fracasos no son frecuentes.

La tabla 5 ilustra las causas de reacciones falsas positivas y falsas negativas en la prueba antiglobulina indirecta.

Tabla 5: Causas de reacciones falsas positivas y falsas negativas en la prueba de antiglobulina indirecta

Resultados falsos oositivos

• Presencia de polvo 0 particulas en los tubos

• Contaminaci6n de un tubo a otro

• Centrifugaci6n muy raplda 0 muy prolongada

SECCION 7

Resultados falsos negativos

• Lavado inadecuado de los globules rojos

• Falta de AHG

• Tubos sucios

• Presencia de coagulos en el suero 0 las celulas

• Soluci6n salina de pH incorrecto

• Centrifugaci6n a velocidad inapropiada

• Demora en el agregado de AHG

• Demora en la lectura

7.17 PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA

La prueba de antlglobulma directa (PAD) se realiza para saber si los globutos rojos del paciente se recubrieron de anticuerpos in vivo (en el organlsrno), Este fen6meno es inusual y tiene lugar en la anemia hemolttlca autoinmune, las reacciones transfusionales hemollticas y la enfermedad hemolitica del reclen nacido. Los eritrocitos no se incuban con suero, sino que se lavan y mezclan con AHG; es decir, se evalOan en forma directa (vease la tecnlca 11 del apendlce 1).

La tabla 6 enumera los cuadros en los cuales la PAD es positiva.

Tabla 6: Cuadros asociados a prueba antiglobulina directa positive

Anemia hemolitica autoinmune

Los anticuerpos del paciente que reaccionan con sus propios globules rojos, provocan destrucci6n eritrocitaria in vivo

Reacciones transfusionales hemoliticas

Los anticuerpos del paciente que reaccionan con los globules rojos transfundidos, provocan destrucci6n eritrocitaria in vivo

Enfermedad hemolitica del recien nacido

Los anticuerpos IgG de la madre que atraviesan la placenta, provocan destrucci6n in vivo de los globulos rojos fetales

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

7.18 PRUEBA DE LA ALBUMINA

La prueba de la alburnlna no es tan sensible como la PAl. No obstante, cuando es dificil obtener AHG 0 cuando se emplean ciertos reactivos anti-D, puede suplantar a la PAL Se lIeva a cabo en dos pasos:

Paso 1

Se incuba suero y gl6bulos rojos a 3JOC y se deja sedimentar las celutas. Si existen anticuerpos (lgG 0 IgM), recubren los eritrocitos.

Paso 2

Se agrega alburnlna por la pared del tubo. Se incuba durante 10-15 minutos y se observa aglutinaci6n de los globules rojos recubiertos.

Albumina en la PAl

Algunos proveedores recomiendan aiiadir alburnlna al suero y los gl6- bulos rojos para incrementar la sensibilidad de la PAL Sin embargo, si la tecnica es correcta, no es necesario agregar album ina.

7.19 TECNICAS ENZIMATICAS

Las tecnlcas enzimatlcas se emplean para detectar anticuerpos inmunes, pero como las enzimas destruyen algunos antlgenos de grupo sangulneo, su valor es limitado. Por 10 tanto, no reemplazan a la prueba de antiglobulina y s610 se efectUan como procedimientos de referencia.

7.20 PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

Las pruebas de compatibilidad son fundamentales para garantizar la ausencia de anticuerpos sericos del paciente capaces de reaccionar con los antigenos de los globules rojos transfundidos. EI procedimiento debe ser 10 mas simple posible, sin comprometer la exactitud, porque la complejidad aumenta el rlesgo de cometer errores.

Existen varios metodos, algunos de los cuales son muy sensibles a ciertos tipos de anticuerpos. La tecnlca de la soluci6n salina a temperatura ambiente detecta la incompatibilidad ABO, pero no los anticuerpos debidos a transfusiones 0 gestaciones previas. Sin embargo, la prueba antlglobullna es muy sensible y demuestra casi todos los anticuerpos. Por 10 tanto, en 10 posible, debe formar parte de todos los estudios de compatibilidad.

La evaluaci6n se lIeva a cabo en tubos a temperatura ambiente para identificar la incompatibilidad ABO y a 37°C para reconocer los anticuerpos IgG mediante una prueba de inmunoglobulina indirecta. Si la PAl no es factible, se recurre a la tecnlca de la albumlna,

SECCION 7

Atenci6n: EI metodo del azulejo blanco no es apropiado porque no siempre revela la incompatibilidad.

Para realizar una prueba de compatibilidad es preciso:

1 Verificar si la muestra de sangre del paciente coincide con la solicitud correspondiente. Es esencial garantizar que la sangre del donante es ABO compatible con la del paciente.

2 Determinar el grupo ABO y Rh D en tubos 0 microplacas, con reactivos confiables (vease el apendlee 1).

3 Efectuar compatibilidad cruzada entre el suero del paciente y los gl6bulos rojos de las unidades de sangre seleccionadas y una prueba de antlglobullna indirecta para detectar anticuerpos inmunes. Se usa soluci6n salina a temperatura ambiente por "centrifugaci6n inmediata" (vease la tecnlca 3), seguida de PAl 0 soluci6n salina en tubo. Si no puede realizarse PAl, se emplea soluci6n salina en tubo a temperatura ambiente y luego agregado de albumina a 37°C.

4 Si no se observa aglutinaci6n ni hem6lisis, se considera que la sangre es compatible. Se completa y firma el reglstro pertinente y se rotulan las bolsas con los datos del destinatario. Si se advierte aglutinaci6n 0 hem6lisis, se considera que la sangre es incompatible y no puedeser transfundida a ese paciente.

5 En caso de incompatibilidad, controlar los resultados de la determinaci6n del grupo sanguineo. Repetir el estudio en la muestra del paciente y la unidad de sangre donada. Si no existen discrepancias, se reitera el estudio de compatibilidad y se analizan otras unidades de sangre. Las compatibles pueden entregarse, pero es aconsejable solicitar al medico que preste atenci6n a la eventual aparici6n de slgnos de incompatibilidad durante la transfusi6n.

Si no se encuentra sangre compatible, es importante solicitar asesoramiento a un profesional de un servicio de medicina transfusional.

EI apendlce 1 describe cuatro tecnlcas de compatibilidad: 13.1: En tubo - centrifugaci6n inmediata y PAl

13.2: En tubo con agregado de LlSS

13.3: Agregado de albumlna y soluci6n salina a temperatura ambiente

13.4: De emergencia .

• :1,

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

ACTIVIDAD 28

Lea las tecnices 13.1, 13.2, 13.3 Y 13.4 del ap{mdice 1.

Utili zan do uno de estos procedimientos, realice una prueba de compatibilidad con suero del grupo 0 y una suspension de globulos rojos A 0 8. Anote 105 resultados usando el sistema de puntaje senalado en la seccion 7.B.

Repita el estudio con una tecnice de emergencia. Anote 105 resultados usando el sistema de puntaje seneteao en la seccio» 7.B.

Con el mismo metoda empleado en la primera parte de esta actividad, efectOe una prueba de compatibilidad con suero y globulos rojos del grupo O. Anote 105 resultados usando el sistema de puntaje senalado en la seccion 7.B.

Repita el estudio con una tecnica de emergencia. Anote 105 resultados usando el sistema de puntaje senalado en la seccion 7.B.

Compare 105 hallazgos y solicite al supervisor que 105 verifique.

RESUMEN

1 Los errores en la determinacion del grupo sangulneo podrlan tener consecuencias graves para el paciente y aun causar la muerte.

2 Es esencial cumplir con las normas de higiene y seguridad en el laboratorio.

3 Para determinar el grupo sangutneo se dispone de tres metodos manuales que utilizan:

• portaobjetos de vidrio 0 azulejos blancos

• tubos de ensayo

• microcubetas 0 microplacas.

La tecnlca del azulejo es poco sensible y solo se usa antes de la determinacion completa del grupo sangutneo en tubos o microplacas.

4 La potencia de la reacclon se consigna en una escala de 1+ a 4+ y se emplean los termlnos Negativo para indicar ausencia de aglutinaclon y L para denotar lisis.

5 Es preciso seguir las instrucciones de almacenamiento y uso de los reactivos especificadas por el proveedor.

6 Las causas de resultados falsos positivos y falsos negativos incluyen:

• estandarlzaclon 0 almacenamiento incorrecto de los antisueros

SECCION 7

• formaci6n de pitas de monedas 0 Rouleaux

• muestras de sangre contaminadas

• gelatina de Wharton

• autoanticuerpos y anticuerpos de reacci6n en fr'io

• tecnlca inadecuada.

7 La prueba de antlglobullna indirecta (PAl) se desarrolla en tres pasos:

• sensibilizaci6n

• lavado

• agregado de reactivo AHG.

8 La prueba de antiglobulina directa (PAD) detecta la sensibilizaci6n in vivo debida a anticuerpos eritrocitarios del paciente.

9 La compatibilidad cruzada se lIeva a cabo en tubos a temperatura ambiente para identificar la incompatibilidad ABO y a 37°C para descrubrir los anticuerpos IgG, si es posible mediante PAL

AUTOEVALUACION

19 Sefiale dos factores importantes a recordar cuando se usa una pipeta.

20 i.,Por que no se aconseja emplear portaobjetos de vidrio 0 azulejos?

21 i.,Por que se utiliza un sistema de puntaje para consignar los resultados?

22 i.,Cufll es la causa de la mayoria de los errores que se cometen en la determinacion del grupo sanguineo?

23 i.,A que podria deberse una reeccion falsa positiva en la prueba antiglobulina indirecta?

24 i.,A que podria deberse una reeccion falsa negativa en la prueba antiglobulina indirecta?

25 i.,En que cuadros puede obtenerse una prueba antiglobulina directa positiva?

26 Oescriba los pasos de la tecnica de la albumina .

• :1:1

TECNICAS DE DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

CONTROL DEL PROGRESO

Antes de pasar a la secci6n 8, el estudiante debera decidir si cumpli6 con los objetivos de aprendizaje de la seccion 7:

1 Dominar las tecnlcas de determinaci6n del grupo sanguineo y sus controles.

2 Utilizar un sistema de puntaje apropiado para definir ta potencia de las reacciones.

3 Reconocer y evitar errores comunes en la determinaci6n del grupo sanguineo, en particular en relaci6n con los rnetodos incorrectos.

4 Llevar a cabo pruebas de compatibilidad de rutina y de

emergencia.

Si comprendi6 todos los puntos con claridad, puede proseguir. Si necesita dedicar mas tiempo a esta secci6n, repase los puntos mas complejos 0 dificiles. Pod ria ser util comunicarse con el tutor u otros colegas para discutir el tema.

I:E'

Plan de Acci6n

Esta secclon se centra en la lista de acclon preparada durante el desarrollo del modulo. Es probable que el estudiante haya identificado diversos medios para perfeccionar los estudios serologlcos que se realizan en su centro, de manera que ahora debera establecer las prioridades e implementar sus ideas.

OBJET/VOS DE APRENDIZAJE

AI finalizar esta secclon, el estudiante sera capaz de:

1 Reevaluar sus conocimientos y aptitudes en relacion con los objetivos del modulo 3 que acaba de completar.

2 Revisar la lista de acclon para definir las medidas que puede poner en practlca y las que requieren la intervenclon de otras personas.

3 Preparar e implementar un plan de acclon realista para introducir modificaciones que acrecienten la calidad de los estudios serologlcos que realiza su servicio.

PLAN DE ACCION

8.1 EVALUACION DEL PROGRESO

Antes de comenzar el plan de acci6n, el estudiante debera analizar los objetivos del m6dulo y los avances logrados hasta el momento.

ACTIVIDAD 29

Complete la tabla. Notara que es igual a la de la aetividad 2. Utilieela para evaluar los eonoeimientos adquiridos y aetividades desarrolladas durante el estudio de este m6dulo. i,Se modifie6 el puntaje?

Debe haber progresado algo en todas las areas. No obstante, si aun existen puntos debiles, relea las seeeiones eorrespondientes y diseuta las dudas eon el tutor 0 supervisor antes de proseguir.

Objetivos del m6dulo Puntaje Comentarios
(1-4)
Seccl6n 2
Explicar las funciones de los principales compo-
nentes de la sangre y su importancia en medici-
na transfusional.
Secci6n 3
Explicar la reacci6n antigeno-anticuerpo eritroci-
taria y los factores que la afectan.
Secci6n 4
Explicar el sistema ABO y utilizar los resultados
de las pruebas para identificar los grupos san-
gulneos de donantes y pacientes.
Secci6n 5
Explicar el sistema Rh y seiialar en que casos de-
be transfundirse sangre Rh D positiva 0 negativa
y cuando debe investigarse la presencia de DU.
Secci6n 6
Explicar la importancia de las pruebas de com-
patibilidad y desarrollar y mantener procedimien-
tos y reglstros apropiados para solicitar, selec-
cionar y distribuir la sangre en forma adecuada
en situaciones de rutina y de emergencia.
Seccl6n 7
Explicar los principios de las tecnlcas empleadas
en la determinaci6n del grupo sangutneo y la
compatibilidad y realizarlas con precisi6n. SECCION 8

8.2 PREPARACION DEL PLAN DE ACCION

EI plan de acci6n brinda la oportunidad de introducir mejoras en el lugar de trabajo, a pesar de las limitaciones econ6micas, de recursos 0 de personal. Durante el desarrollo del m6dulo el estudiante habra anotado sus sugerencias en la lista de acci6n (pag. 93). Habra enumerado las actividades en la columna 1 y los medios para perfeccionarlas en la 2. Tamblen habra discutido sus ideas con el tutor.

Podr'ia haber intentado poner en praetica algunas propuestas, pero otras podr'ian demandar mas tiempo y esfuerzo y por 10 tanto, es esencial establecer prioridades. La posici6n del estudiante podrla no permitirle actuar por Sl solo y podr'ia ser necesario convencer a otros miembros del equipo para que se encarguen de impulsar los cambios relevantes y factibles.

ACTIVIDAD 30

Analice con detenimiento las sugerencias anotadas en la Iista de acci6n. Marque las que todavia no pudo aplicar. Dividalas en dos categorias:

1 Medldas que puede Implementar. Elija las mas importantes a su juicio y ordenetes segCm su prioriad. Consignelas en la columna 1 del plan de acci6n (pag. 94). En la columna 2, resuma las acciones planeadas y en la 3, anote los resultados previstos.

2 Medldas que otras personas podrian Implementar. Consignelas en la columna 1 del plan de acci6n (pag. 94). En la columna 2, indique el nombre de la persona que podria lievar a cabo las modificaciones propuestas y en la 3, resuma los resultados previstos.

Muestre el plan al supervisor y el tutor y aiscuteto con ellos. Podria ser necesario modificar algunas sugerencias. Tambi{m podria ser preciso efectuar consultas con otros profesionales. En esta etapa podria analizar el tema con el instructor.

Despues de lIegar a un acuerdo acerca de las medidas a tomar, rtje una fecha tentativa para completarlas y an6tela en la columna 4. Consigne tambien la fecha correspondiente a las acciones a cargo de otras personas.

Ya puede poner en marcha el plan de acci6n.

8.3 IMPLEMENTACION DEL PLAN DE ACCION

En este momento el estudiante debera comenzar a implementar el plan de acci6n segun los lineamientos acordados con el supervisor y el tutor. Esta tarea podr'ia lIevarle varias semanas 0 meses y demorar mas de 10 previsto. De hecho, podr'ia empezar el pr6ximo m6dulo antes de completar todas las propuestas. Adernas, podr'ia ser dificil ma-

PLAN DE ACCION

LlSTA DE ACCION

Actividad nQ

Propuestas

SECCION 8

V)
~
t::
s
.0
0
V)
0
"'0
!9
"5
V)
<1>
a:
e
co .S
.t::C6~
~ ~'<1>
u:: """
~
cog
co.;::·_
.t::1iJ~
0 ..... '<1>
~t:: .....
~~
Z
0
-
(.) V)
o .8
CC .~
1.1.1 :;:.
~
Q Q.
Z V)
S .g
!9
D.. "5
V)
<1>
a: PLAN DE ACCION

terializar algunas ideas y ser necesario revisarlas si son demasiado ambiciosas 0 no brindan los resultados esperados. Sin embargo, si el estudiante analiz6 a conciencia los medios para apncar sus conocimientos y los discuti6 con las personas adecuadas, podra poner en practica la mayoria de las sugerencias planteadas. Tamblen podria advertir beneficios no anticipados. Si surgen problemas, es esencial solicitar ayuda al tutor 0 el supervisor. Por otra parte, estes deberan estar siempre al tanto de los avances.

ACTIVIDAD 31

Despues de completar las propuestas incluidas en el plan de eccion, anote la fecha en la columna 5 y los resultados en la 6. ReevaltJe entonces el plan de eccion, comparando los resultados reales con los previstos. Coteje temoie« las fechas. Discuta los hal/azgos con el tutor y el supervisor.

Identifique otras medidas necesarias para garantizar la implementacion de las modificaciones propuestas.

En los proximos meses controle la eficacia de las modificaciones introducidas y oreoerese para rea/izar cambios adicionales 0 seguimientos que aseguren /a ca/idad creciente de su servicio.

CONTROL DEL PROGRESO

Ahora que complet6 el m6dulo, el estudiante debera decidir si cumpli6 con los objetivos de esta secci6n:

1 Reevaluar sus conocimientos y aptitudes en relaci6n con los objetivos del m6dulo 3 que acaba de completar.

2 Revisar la lista de acci6n para definir las medidas que puede poner en practlca y las que requieren la intervenci6n de otras personas.

3 Preparar e implementar un plan de acci6n realista para introducir modificaciones que acrecienten la calidad de los estudios serologlcos que realiza su servicio.

Listas de Control de Actividades y Respuestas

SECCION 1.

Actlvldad 1

Rnalldad

Identificar un "tutor" personal para el desarrollo del m6dulo 3.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Identificado colegas que puedan asesorarlo durante el desarrollo del m6dulo

• Elegido a una persona, de preferencia el supervisor, para que actue como tutor y averiguado si acepta colaborar

• Explicado el mecanisme operativo del program a y el papel del tutor

• Acordado reuniones para discutir las tareas

• Mostrado el m6dulo 3 al tutor

• Informado al instructor acerca del tutor deslgnado

• Solicitado asesoramiento al instructor si surgleron dificultades para encontrar un tutor.

Actlvldad 2

Rnalldad

Antes de comenzar, evaluar sus conocimientos, aptitudes y experiencia en relaci6n con los objetivos del m6dulo 3.

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Analizado can detenimiento los objetivos del m6dulo y evaluado sus conocimientos, aptitudes y experiencia, utilizando un puntaje de 1 a 4

• Completado la tabla de la paglna 6

• Agregado comentarios, por ejemplo acerca de objetivos no vinculados con sus tareas habituales.

Actlvldad 3

Rnalldad

Formular un plan de estudio realista para el m6dulo 3.

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Holeado las otras secciones del m6dulo para tener una idea del contenido, nivel y enfoque y reconocer el material nuevo

• Estimado cuanto tiempo dernandara el estudio de cada secci6n, incluyendo las actividades y respuesta a las preguntas de autoevaluaci6n

• Discutido con el supervisor el tiempo disponible para estudiar

• Completado el plan de estudio de la pagina 8, indicando las fechas de finalizaci6n de cad a secci6n y de reuni6n con el instructor y el tutor.

SECCION 2

Actlvldad 4

Rnalldad

Investigar los niveles mlnimos de hemogloblna aceptados en su servicio.

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Averiguado los niveles mlnimos de hemoglobina aceptados en su servicio

• Descrito los metod os de determinaci6n de las concentraciones de hemoglobina en su centro.

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Actlvldad 5

Final/dad

Investigar las indicaciones principales de las transfusiones de sangre solicitadas a su banco.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Analizado los reglstros 0 consultado con sus colegas para determinar los motivos de la transfusi6n de las ultlmas 20 unidades de sangre solicitadas a su banco

• Identificado las indicaciones mas comunes de las transfusiones

• Si no pudo obtener esta informaci6n, consignado los motivos de la transfusi6n de las siguientes 20 unidades de sangre solicitadas a su banco.

SECCION 4

Actividad 6

Finalidad

Indicar si se produce aglutlnaclon en las reacciones de:

• anti-A y anti-B con gl6bulos rojos del grupo A, B, AB Y 0

• suero del grupo A, B, AB Y 0 con gl6bulos rojos A, B Y 0

Respuestas

Grupo

Anti-A Anti-B
A + -
B - +
AB + +
0 - - 1

Grupo

Celulas A Celulas B Celulas 0
A - + -
B + - -
AB - - -
0 + + - 2

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Actlvldad 7

Rnalldad

Utilizar un arbol familiar para identificar los genotipos y fenotipos.

Respuestas

1 Genotipo:

o

AB

Genotipo:

AO

BO

Fenotipo:

A

B

2 Genotipo:

BO

BO

Genotipo:

BB

BO

00

Fenotipo:

B

B

o

3 Genotipo:

o

BO

Genotipo:

BO

00

Fenotipo:

B

o

Actlvldad 8

Rnalldad

Utilizar 105 resultados de la determinaci6n celular e inversa para identificar 105 grupos ABO.

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Respuestas
Grupo
1 A
2 0
3 AB
4 0
5 B
6 0
7 AB
8 A
9 B
10 A Actlvldad 9

Rnalldad

Calcular la frecuencia porcentual de los grupos sangulneos ABO en su poblaclon de donantes.

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Analizado los resultados de 100 determinaciones realizadas en su centro y consignado el porcentaje de los distintos grupos - A, B, AB Y 0

• Comparado los hallazgos con la frecuencia porcentual ilustrada en la flgura 4 (pagina 30)

• Controlado los reglstros y consultado con los colegas para establecer si los resultados obtenidos son tlpicos de la proporcion de los diferentes grupos sanguineos en esa localidad.

Actlvldad 10

Rnalldad

Identificar los motivos posibles de los resultados de las determinaciones del grupo ABO.

I'';''

L1STAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Respuestas

1 Grupo A con otro anticuerpo presente, qulzas anti-A1 2 Grupo 0 con otro anticuerpo presente

3 Grupo B con otro anticuerpo presente

4 Grupo AB con otro anticuerpo presente, quizas anti-A1 5 Grupo AB, quizas A2B.

Actlvldad 11

Rnalldad

Revisar sus procedimientos de detecci6n de tttulos elevados de anticuerpos.

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Consignado los procedimientos utilizados en su servicio para determinar el grupo sanguineo en muestras de sangre del cord6n umbilical 0 del reclen nacido

• Comprobado si en el estudio de los donantes se reglstran los titulos elevados de anticuerpos

• Oefinido las medidas a tomar si no se documentan los titulos altos de anticuerpos

• Oiscutido sus ideas con los colegas y anotado sus sugerencias en la lista de acci6n.

SECCION 5

Actlvldad 12

Rnalldad

Utilizar un arbot familiar para identificar los genotipos posibles y los tipos Rh 0 correspondientes.

Respuestas
Genotipo: DID Old Genotipo: Old did
[XJ [XJ
Genotipo: DID Old Genotipo: Old did
Tipo Rh 0: o pos o pos Tipo Rh 0: o pos o neg I""

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Actividad 13

Rnalldad

Identificar la frecuencia porcentual de pacientes y donantes Rh D positivos Y Rh D negativos.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Consignado los resultados de 100 determinaciones del grupo Rh de pacientes y donantes

• Comprobado el porcentaje de Rh D positivos Y Rh D negativos

• Comparado los hallazgos con las frecuencias porcentuales seiialadas en la paglna 37.

SECCION 6

Actividad 14

Rnalldad

Revisar los procedimientos de solicitud de sangre utilizados en su hospital.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Comparado el ejemplo de la figura 13 con el formulario empleado en su hospital

• Identificado modificaciones que podrlan introducirse en el formulario 0 la manera en que se utiliza

• Anotado sus sugerencias en la lista de acclon

• Hablado con el supervisor y los medicos ace rca de la importancia del formulario de solicitud de sangre, si no se usa ninguno

• Definido el contenido y modo de empleo y conslgnado sus propuestas en la lista de acclon,

Actividad 15

Rnal/dad

Revisar los procedimientos de selecci6n de la sangre destinada a transfusiones utilizados en su banco.

F!lt!

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Analizado los procedimientos empleados en su banco de sangre para seleccionar la sangre y comparado con los que se describen en la secci6n 6.3

• Identificado medios para perfeccionarlos

• Anotado sus propuestas en la lista de acci6n y discutido el tema con el supervisor y otros colegas.

Actlvldad 16

Rnalidad

Revisar las etiquetas de compatibilidad utilizadas en su banco de sangre.

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Comparado las etiquetas empleadas en su banco de sangre

con et ejemplo de la flgura 14

• Identificado medios para perfeccionarlas

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n

• Hablado con el supervisor acerca de la importancia de las etiquetas de compatibilidad, si no se usa ninguno

• Definido el contenido y conslgnado sus propuestas en la lista de acci6n.

Actividad 17

Finalidad

Revisar el procedimiento de entrega de sangre utilizado en su servicio.

Lista de control

EI estudiante habra:

• Comparado el procedimiento empleado en su banco de san-

gre con el ejemplo de la flgura 17

• Identificado medios para perfeccionarlo

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n

• Confeccionado su propia lista de control para la entrega de sangre, teniendo en cuenta las normas locales 0 adoptado la de la figura 17

".,1

L1STAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

• Exhibido la lista en el banco de sangre para que el personal la lea y ponga en practlca

• Presentado la lista a los integrantes del comite de hemoterapia del hospital, si es que existe, para que todo el personal conozca el procedimiento de entrega de sangre segura de su banco.

Actlvldad 18

Rnalldad

Revisar el procedimiento de transfusi6n de sangre utilizado en su hospital.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Comparado el procedimiento empleado en su hospital con

el ejemplo de la figura 18

• Identificado medios para perfeccionarlo

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n

• Discutido sus propuestas con el supervisor y los medicos

• Confeccionado su propla lista de control para la transfusi6n de sangre, teniendo en cuenta las normas locales 0 adoptado la de la flgura 18

• Desarrollado un sistema para entregar una copia de la lista con cad a unidad de sangre 0 plasma 0 colocado una lista en todas las areas destinadas a transfusi6n

• Intentado que todo el personal involucrado en las transfusiones de sangre lea la lista y la ponga en practlca,

Actlvldad 19

Finalldad

Revisar los procedimientos de investigaci6n de las reacciones transfusionales utilizados en su banco de sangre.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Comparado los procedimientos de investigaci6n de las reacciones transfusionales empleados en su banco de sangre con los descritos en las paglnas 55-57.

"."

LISTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

• Identificado medios para perfeccionarlos

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n

• Hablado con el supervisor ace rca de la implementaci6n de un sistema de evaluaci6n adecuado, si no existe ninguno establecido

• conslgnado sus propuestas en la lista de acci6n.

Actlvldad 20

Rnal/dad

Revisar 105 reglstros de compatibilidad utilizados en su banco de sangre.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Comparado 105 reglstros de determinaci6n del grupo sanguineo de 105 donantes y de compatibilidad (estudio de 105 pacientes) empleados en su banco de sangre, con 105 ejemplos de las flguras 19 y 20

• Identificado medios para perfeccionarlos

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n

• Hablado con el supervisor acerca de la importancia de estos reglstros si en su servicio no usa ninguno

• Consignado sus propuestas en la lista de acci6n.

Actlvldad 21

Rnal/dad

Utilizar 105 registros de requerimientos anuales de sangre y plasma para calcular la demanda semanal promedio de 105 distintos grupos.

Respuestas

Ntsmero de unidades

11,5 0,4 13,5

1 9,6 0,4 1,9 0,2

Grupo sanguineo A Rh positivo

A Rh negativo ° Rh positivo ° Rh negative B Rh positivo

B Rh negative AB Rh positivo AB Rh negative

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Actividad 22

Final/dad

Utilizar los reglstros de requerimientos semanales promedio de sangre y plasma para calcular la cantidad de unidades de cad a grupo que deben agregarse a las existencias para la semana siguiente.

Respuestas

Numero de unidades

6 o 9 1 4 1 1 o

Grupo sanguineo A Rh positivo

A Rh negativo

o Rh positivo

o Rh negativo B Rh positivo B Rh negativo AB Rh positivo AB Rh negativo

Actividad 23

Finalidad

Revisar el metodo utilizado en su servicio para calcular la demanda semanal promedio de sangre y plasma.

Lista de control

EI estudiante habra:

• Averiguado el rnetodo empleado en su servicio para calcular la demanda semanal promedio

• Determinado ese monto:

• contado las unidades de sangre y plasma solicitadas por semana durante el ultimo ano 0 los ultimos 6 meses

• separado los resultados obtenidos de acuerdo con los grupos ABO y Rh

• excluido la cifra semanal mas alta de cada grupo sanguineo.

• sum ado el total de cad a grupo (sin considerar la cifra semanal mas alta)

• dividido el total por el numero de semanas menos una

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

• Comparado los hallazgos con los del procedimiento usado en su banco de sangre

• Identificado medios para perfeccionar el calculo de los requerimientos de sangre

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n.

Actlvldad 24

Rnalldad

Revisar la organizaci6n de su banco de sangre.

Llsta de control

EI estudiante habra:

• Averiguado cuales de los siguientes datos se reglstran en su banco de sangre:

• nOmero de unidades recolectadas 0 recibidas

• nOmero de unidades transfundidas

• nOmero de pacientes transfundidos

• porcentaje de unidades vencidas

• nOmero de oportunidades en que se cancel6 una operaci6n 0 transfusi6n por falta de sangre apropiada.

• Identificado medios para aprovechar mejor esta informaci6n en la planificaci6n y organizaci6n de las existencias de sangre y plasma

• Anotado sus sugerencias en la llsta de acci6n

• Desarrollado un sistema simple de reglstro de esta informaci6n si su banco de sangre no dispone de ninguno

• Consignado sus propuestas en la lista de acci6n

• Discutido el tema con el supervisor y los colegas.

SECCION 7

Actlvldad 25

Rnalidad

Revisar el equipo para realizar estudios serol6gicos de rutina existente en su servicio.

I,·t'

L1STAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Usta de control

EI estudiante habra:

• Confeccionado una lista del equipo disponible para efectuar

pruebas serol6gicas de rutina

• Comparado este equipo con el de la figura 23

• Identificado el material adicional necesario

• Anotado sus sugerencias en la lista de acci6n

• Discutido sus propuestas con el supervisor.

Actlvldad 26

Rna/ldad

Preparar suspensiones celulares al 3%.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Leido la tecnica 1 del apendlce 1

• Obtenido cinco muestras de sangre ya tipificadas

• Preparado una suspensi6n al 3% de cada una, utilizando la tecnlca 1

• Solicitado al supervisor que verifique si la preparaci6n fue correcta.

Activldad 27

Rna/ldad

Determinar con exactitud los grupos sanguineos ABO y Rh D.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Leido las tecnicas 2-8 del apendice 1

• Utilizando tubos (tecnlca 6) 0 microplacas (tecnlca 7), determinado los grupos ABO y Rh D de las muestras preparadas en la actividad 26

• Registrado la potencia de cad a reacci6n, empleando el sis-

tema de puntaje descripto en la secci6n 7.8

• Comparado sus resultados con los origlnales

• Explicado los motivos de eventuales diferencias

• Solicitado al supervisor que verifique los resultados.

!'n:1

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Actlvldad 28

Rnalldad

Realizar una prueba de compatibilidad.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Leido las tecnlcas 13.1-13.4 del apendice 1

• Elegido un procedimiento y efectuado una prueba de compatibilidad utilizando suero del grupo 0 y una suspensi6n de gl6bulos rojos del grupo A 0 B

• Repetido el estudio usando una tecnica de emergencia

• Registrado los resultados empleando el sistema de puntaje descrito en la secci6n 7.8

• Realizado una prueba de compatibilidad utilizando globules rojos y suero del grupo 0

• Solicitado al supervisor que verifique los resultados.

SECCION 8

Actlvidad 29

Rnalldad

Evaluar los avances togrados merced al desarrollo del m6dulo 3.

Usta de control

EI estudiante habra:

• Evaluado sus conocimientos, aptitudes y experiencia en relaci6n con los objetivos del modulo que acaba de finalizar

• Completado la tabla de la pagina 91.

• Definido areas en las que debe reforzar sus conocimientos o aptitudes

• Releido las secciones correspondientes y analizado los problemas remanentes con el tutor 0 el instructor.

Actlvldad 30

Rnalldad

Planificar la implementaci6n de los cambios necesarios para garantizar la calldad de su servicio de medicina transfusional 0 banco de sangre.

LlSTAS DE CONTROL DE ACTIVIDADES Y RESPUESTAS

Lista de control

EI estudiante habra:

• Analizado las propuestas conslgnadas en la lista de acci6n y sefialado las que aun no pudo poner en practica

• Dividido estes proyectos en dos categor'ias:

• medidas que puede implementar

• medidas que otras personas podr'ian implementar

• Identificado las prioridades

• Preparado el plan de acci6n:

• columna 1: modificaciones que considera necesarias

• columna 2: medidas que piensa tomar 0 nombre de la persona responsable de lIevarlas a cabo

• columna 3: resultados previstos

• Discutido el plan con el supervisor, tutor, instructor y otras personas competentes

• Anotado en la columna 4 las fechas tentativas de finalizaci6n de la implementaci6n.

Actlvldad 31

Rnal/dad

Revisar la implementaci6n del plan de acci6n y definir el seguimiento requerido.

Lista de control

EI estudiante habra:

• Consignado en la columna 5 las fechas en que se completaron las actividades planificadas y comparado con las tentativas

• Resumido los resultados en la columna 6 y comparado con los anticipados

• Discutido los resultados con el tutor

• Discutido los resultados con el supervisor

• Identificado medidas adicionales necesarias para garantizar la implementaci6n de las modificaciones propuestas

• Monitoreado la efectividad de los cambios introducidos

• Definido modificaciones 0 controles adicionales.

I!'I'

Respuestas a las Preguntas de Autoevaluaci6n

SECCION 2

1 La sobrevida promedio de los gl6bulos rojos circulantes es de 120 dlas.

2 La funci6n principal de la hemoglobina consiste en transportar el oxlgeno a los tejidos para proporcionar energia y calor al organlsmo y eliminar impurezas como el di6xido de carbono.

3 Los linfocitos se encargan de producir anticuerpos contra los antigenos extra nos y combatir las infecciones virales.

4 Las tres indicaciones principales de la transfusi6n de sangre son:

• correglr una anemia (disminuci6n del nivel de hemoglobina)

• reemplazar la sangre perdida por hernorragla durante una operaci6n 0 a causa de un accidente

• reemplazar otros componentes de la sangre, por ejemplo facto res de coagulaci6n.

SECCION 3

5 La respuesta primaria se produce cuando un antlgeno especifico invade el organlsmo por primera vez. Se desarrolla con lentitud y a menu do se asocia a concentraciones bajas de anticuerpos IgM.

La respuesta secundaria tiene lugar cuando el organismo vuelve a exponerse al mismo antlgeno extrafio. Es mucho mas intensa que la primaria y se acomparta de niveles elevados de anticuerpos, en particular IgG, que se sintetizan en poco tiempo.

"~"

RESPUESTAS A LAS PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION

6 En el suero del cord6n umbilical 0 del recten nacido, los anticuerpos ABO son escasos 0 nulos. Alrededor de las 12 semanas de vida aparecen anticuerpos "naturales", en generallgM, inducidos por las bacterias que ingresan en el organismo.

7 Las dos etapas de la aglutinaci6n son:

Paso 1

Los anticuerpos se fijan a los antigenos eritrocitarios y recubren 0 sensibilizan las celulas.

Paso 2

se forma una trama que determina el coagulo 0 aglutinaci6n.

8 La prueba antiglobulinica se lIeva a cabo en tres etapas:

Paso 1: Sensibilizaci6n 0 cobertura

5e incuban gl6bulos roles y suero para que los anti cuerpos serlcos se fijen a los antigenos eritrocitarios.

Paso 2: Lavado

5e lavan las celulas con soluci6n salina para remover las proteinas 0 inmunoglobulinas no fijadas.

Paso 3: Agregado de reactivo de antiglobulina

5e anade reactivo de antiglobulina (AHG) a los gl6bulos rojos lavados. 5i las celulas estan recubiertas de anticuerpos IgG 0 componente C3 del complemento, el reactivo antlglobulina se fija a estos y provoca aglutinaci6n. En ausencia de anticuerpos en la superficie eritrocitaria, no se observa aglutinaci6n.

SEC CION 4

9 Los cuatro grupos sanguineos principales poseen los siguientes antigenos eritrocitarios y anti cuerpos serlcos:

Antigenos eritrocitarios Anticuerpos sencos
Grupo A A anti-B
Grupo B B anti-A
Grupo AB AyB ninguno
Grupo 0 ninguno anti-A y anti-B 10 EI anti-AB se utiliza en las pruebas de rutina para no pasar por alto antigenos de grupo A y B mas deblles,

"tl

RESPUESTAS A LAS PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION

SECCION 5

11 EI antigeno Rh D se desarrolla durante la vida fetal. Por 10 tanto, en los globulos rojos del cord6n umbilical y el reclen nacido, es tan potente como en el adulto.

12 La tipificaci6n correcta de las mujeres Rh D negativas es muy importante porque si se transfunden con sangre Rh D positiva, producen anticuerpos IgG anti-Rh D. Si mas tarde conciben un hijo Rh D positlvo, los anti-Rh D cruzan la placenta y destruyen los gl6bulos rojos fetales, provocando la enfermedad hemolitica del recien nacido.

13 Es preciso evaluar el aotlgeno DU en 105 pacientes cuando:

• la incidencia de DU en la poblaci6n es elevada y las normas locales indican que debe investigarse

• el grupo Rh D obtenido difiere de 105 resultados previos

• despues de emplear dos reactivos, 105 hallazgos son discrepantes, es decir, uno es positivo y otro negative.

Es preciso evaluar el antigeno DU en 105 donantes cuando: • 105 resultados del estudio con anti-D son negativos.

14 Los donantes con DU se consideran Rh D positivos. Como estas personas poseen anngeno D debil, no producen antiD y por 10 tanto, pueden recibir sangre Rh D positiva.

SECCION 6

15 Debe eleglrse:

• sangre 10 mas fresca posible, si es factible, de menos de 7 dlas de antlguedad

• concentrados de gl6bulos rojos de menos de 7 dias de

antlguedad

• concentrados de gl6bulos rojos de cualquier antlguedad

• sangre 10 mas fresca posible

• concentrados de gl6bulos rojos, si es factible, de menos de 7 dias de antlguedad.

16 Es necesario efectuar una prueba de compatibilidad porque un paciente ABO y Rh D compatible con el donante, puede presentar una reacci6n transfusional grave. Esta se debe a la existencia de muchos otros sistemas de grupo sangulneo adem as de 105 ABO Y Rh. EI paciente podrla tener anticuerpos anti-Kell 0 anti-Duffy y si 105 gl6bulos roles del donante poseen 105 antlgenos correspondiente, la sangre ABO y Rh compatible se convierte en incompatible.

",,

RESPUESTAS A LAS PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION

17 Es esencial investigar todas las reacciones transfusionales para establecer la causa y evitar que vue Ivan a ocurrir en el futuro.

18 Para calcular la proporci6n de unidades de sangre vencidas es preciso saber:

• numero de unidades que se recolectan 0 reciben en un ano

• numero de unidades vencidas durante ese lapso.

SECCION 7

19 Cuando se utiliza una pipeta, cabe recordar que:

• debe sostenerse siempre con el mismo angulo de inclinaci6n para que el volumen de las gotas sea uniforme

• debe usarse una pipeta para cad a muestra 0 lavarse bien entre una prueba y otra, para eliminar todo vestigio de material extrano,

20 No se aconseja usar portaobjetos de vidrio 0 azulejos porque este rnetodo no es sensible y se asocia a demasiados errores.

21 Para registrar la potencia de las reacciones obtenidas se emplea un sistema de puntaje.

22 La meyorta de los errores que se cometen durante la determinaci6n del grupo sangulneo se debe a la tecnlca incorrecta.

23 Las reacciones falsas positivas en la prueba antlglobultnlca indirecta pod nan derivar de:

• presencia de polvo 0 partlculas en los tubos

• contaminaci6n de un tubo a otro

• centrifugaci6n muy raplda 0 muy prolongada.

24 Las reacciones falsas negativas en la prueba antlgtobutlnlca indirecta podrlan derivar de:

• lavado inadecuado de los gl6bulos rojos

• no agregar el AHG

• tubos sucios

• presencia de coagulos en el suero 0 las celulas

• soluci6n salina de pH incorrecto

• centrifugaci6n a velocidad inapropiada

• demora en el agregado de AHG

• demora en la lectura.

",I

RESPUESTAS A LAS PREGUNTAS DE AUTOEVALUACION

25 Los cuadros que pueden acompafiarse de una prueba antiglobulina directa positiva son:

• anemia hemol'itica autoinmune

• reacciones transfusionales hemoliticas

• enfermedad hemol'itica del recien nacido.

26 La prueba de la albumlna se lIeva a cabo en dos etapas:

Paso 1

Se incuba suero y gl6bulos rojos a 37°e y se deja sedimentar las celulas. Si existen anticuerpos (lgG 0 IgM), recubren los eritrocitos.

Paso 2

Se egrega alburnina por la pared del tubo. Se incuba durante 10-15 minutos y se observa aglutinaci6n de los gl6bulos rojos recubiertos.

'ffj

Glosario

Aglutlnacl6n

Proceso por el cuallos gl6bulos rojos se unen y ligan entre sl.

Antlcuerpo

Proteina protectora producida por la respuesta lnmune del individuo ante la estimulaci6n inducida por una proteina extraiia. Reconoce los antlgenos de los globules roles extraiios y podria provocar aglutinaci6n in vivo y hem6lisis.

Anf/cuerpo natural

Anticuerpo que aparece en el torrente sangulneo en ausencia de estimulaci6n antlgenlca conocida.

Antigeno

Cualquier sustancia reconocida por el organismo como extraiia, que estimula una respuesta inmune.

Bas6f110

Leucocito involucrado en la lucha contra la infecci6n.

Celula recublerta

Vease Celula sensibilizada.

Celula senslbllizada

Celula recubierta de anticuerpos, pero no aglutlnada,

GLOSARIO

Coagulael6n

Coagulaci6n de la sangre que tiene lugar cuando se recolecta en un recipiente seco 0 alcanza una herida abierta.

Compatlbllidad

Prueba que analiza el suero del paciente con los eritrocitos del donante y el suero del donante con los eritrocitos del paciente, antes de la transfusi6n.

Compatlbllidad eruzada Vease Compatibilidad.

Complemento

Protein a presente en el suero humano normal. A menu do partlclpa en las reacciones de grupo sangulneo y alteraciones inmuno- 16gicas.

Cromosoma

Estructura filiforme que contiene genes. Se localiza en el nucleo de las celulas somatlcas,

Donante voluntarlo no remunerado

Persona que dona sangre, plasma y otros componentes por iniciativa propia y sin recibir retribuci6n alguns.

Edema laringeo

Tumefacci6n de la larlnge que dificulta la respiraci6n.

Enfermedad hemolitlea del ree/en naeldo

Cuadro en el cual los anticuerpos maternos cruzan la placenta y atacan a los eritrocitos fetales que poseen los antlgenos correspondientes.

Enzlma

Sustancia capaz de remover algunas protelnas y sustancias quimicas que rodean a los gl6bulos raj os y reduclr ast las fuerzas de atracci6n circundantes (potencial zeta). Este fen6meno incrementa la sensibilidad de los eritrocitos suspendidos en soluci6n salina, a la aglutinaci6n a cargo de los anticuerpos IgG.

f'f'

GLOSARIO

Eosln6f110

Leucocito involucrado en la lucha contra la infecci6n.

Er/froc/fo

GI6buio rojo (el tipo celular mas numeroso) que contiene el plgrnento rojo hemoglobina y es responsable del transporte de oxigeno a los tejidos.

Espermafozolde

Celula reproductora del var6n.

Fagoc/fosls

Proceso por el cual ciertos gtobulos blancos lngleren bacterias y otros cuerpos extrafios.

Fenofipo

Efecto observable de los genes heredados; es decir, el grupo sangutneo en sl.

Fibrina

Filamentos proteicos delicados que se forman cuando la trombina actua sobre el fibrin6geno soluble, durante la coagulaci6n de la sangre.

Fibrln6geno

Sustancia involucrada en la coagulaci6n de la sangre.

Gammaglobullna

Clase de proteinas sericas que incluye a los anticuerpos.

Gen

Unidad baslca de la herencia que se encuentra en el cromosoma.

Gen alellco

Gen alternativo que ocupa un locus unlco en uno de los dos componentes de un par de cromosomas homologos.

Genof/po

Genes heredados de cada uno de los progenitores y que se encuentran en los cromosomas.

'1':1

GLOSARIO

Globullna

Protelna serica de la que derivan los anticuerpos.

Glanuloclto

GI6buio blanco (Ieucocito) que contiene granules neutr6filos, eosin6filos 0 bas6filos en el citoplasma.

Hemogloblna

Uquido rojizo presente en los eritrocitos, constituido por hierro (hem) y cadenas polipeptldicas (globlna).

Hemoglobinemia

Presencia de hemoglobina libre en el torrente sangulneo (plasma).

Hemollsina

Anticuerpo que se combina con el complemento y destruye (hemoliza) los gl6bulos rojos portadores del antlgeno correspondiente.

Hemolisis

Destrucci6n (Iisis) de la membrana eritrocitaria que libera el contenido: hem y globlna, Resulta de la reacci6n entre un anticuerpo hernolltico y el antigeno eritrocitario correspondiente, en presencia de complemento.

Hetelocigota

Situaci6n en la cual los cromosomas homologos pose en genes alellcos no ldentlcos.

Homocigota

Situaci6n en la cual los cromosomas homologos poseen genes alelicos identlcos.

Inmunoglobulina

Anticuerpo sintetizado por los linfocitos especializados B en respuesta a un antlgeno,

In vitro

Reacci6n que tiene lugar fuera del organlsrno, es decir, en un tubo de ensayo.

I'U

GLOSARIO

In vivo

Reacci6n que tiene lugar en el organlsrno, como por ejemplo en la anemia hemolftica autoinmune.

Leucoclto

GI6buio blanco nucleado involucrado en la defensa contra la infecci6n y la producci6n de anticuerpos.

Llnfoclto

Leucocito formado en los gangllos linfaticos. Se distinguen dos tipos: 8, que produce anticuerpos circulantes y T, responsable de la respuesta inmune celular.

LlSS

Vease Soluci6n salina de baja fuerza i6nica.

Macrofago

ceiura fagocftica que se encuentra en el torrente sangufneo y los tejidos que lnglere bacterias y detritus celulares.

Monocito

Leucocito grande que lnglere bacterias y otros cuerpos extrai'ios.

Neutrofllo

Leucocito involucrado en la lucha contra la infecci6n.

Ovulo

Celula reproductora de la mujer.

PI/as de monedas

Reacci6n en la cual los gl6bulos rojos parecen aglutlnarse. Por 10 tanto, se trata de una aglutinaci6n falsa. vease Seudoaglutinaci6n.

Plasma

Porci6n Ifquida de la sangre que transporta las celulas y otros componentes - protefnas, factores de coagulaci6n y sustancias qufmicas.

GLOSARIO

Prueba ant/globulin/ca

Tecnica que emplea reactivo de antlgtobullna para detectar la presencia de globulina humana en los globules rojos sensibilizados.

Prueba de ant/globullna directa (PAD)

Tecnlca que se utiliza para detectar la presencia de globulina humana en la superficie de las celulas sensibilizadas en vivo.

Prueba de ant/globulina /nd/recta (PAl)

Tecnica de aglutlnaclon en tubo, tamblen lIamada prueba de Coombs, que emplea suero antlglobullnico para demostrar que los anticuerpos incapaces de causar sglutlnaclon directa, se combinan con los receptores eritrocitarios especfficos.

Prueba inversa

Procedimiento para detectar anticuerpos anti-ABO en el suero 0 plasma.

Reactivo ant/globulinico (AHG)

Compuesto que reacciona en forma especffica con la globutlna humana.

Respuesta /nmune primaria

Respuesta del organlsmo ante el primer encuentro con un antfgeno extraiio.

Respuesta /nmune secundaria

Incremento del titulo de anticuerpos ante el segundo encuentro con el antlgeno en cuestion.

Secretor

Persona que posee el gen secretor dominante y produce sustancia de grupo sangufneo especffico en algunos Ifquidos corporales, como la saliva y suero.

Seudoaglutlnac/6n

Aglutlnaclon falsa que suele deberse a alteraclon de la proporcion albumtna/globullnas.

If!'

'tf'

GLOSARIO

Sistema retlculoendotellal

Conjunto de celulas endoteliales que producen macr6fagos 0 mononucleares grandes. Se encuentra en la rnedula 6sea, hfgado, bazo y gangllos linfatlcos,

Solucl6n salina de baJa fuerza i6nica (USS)

Cuando se reduce la potencia i6nica de la soluci6n salina normal al 0,2% en glucosa al 7%, el titulo de la mayorfa de los anticuerpos de grupo sangufneo aumenta. Ahora se expende LlSS ya preparada.

Suero

Llquido que rodea a los gl6bulos rojos coagulados.

Trombocito

Plaqueta, que desempeiia un papel fundamental en el mecanismo de la coagulaci6n.

Urticaria

Erupci6n cutanea con ronchas.

Apendices

'tl'

Tecnicas de Determinacion del Grupo Sanguineo y Pruebas de Compatibilidad

SOLUCION SALINA

Cuando se trabaja con globules rojos, el pH de la soluci6n salina debe ser de 6,5-7,5. Por fuera de ese rango, algunos anticuerpos no se combinan con los antigenos y se obtienen resultados falsos negativos.

Para preparar soluci6n salina se disuelven 8,5 g de cloruro de sodlo en 1 litro de agua reclen destilada 0 desionizada. Se controla el pH. Si es de 6,5-7,5 Y se usara en el eta, no se requiere amortiguador.

Sin embargo, la soluci6n salina suele emplearse durante un lapse de 2-3 dlas y el pH disminuye con el tiempo. Por 10 tanto, es necesario agregar tabletas de pH 7 0 alguna soluclon amortiguadora.

Buffer fosfato

Soluel6n A: de pH Beido

Fosfato de sodio dihidrogenado - 0,15 mol/t

Dihidrato de fosfato de sodio con 2 molecules de H20 - 23,4 g.

(anhidro - 18 g)

Agua desionizada - hasta 1000 ml Soluel6n B: alealino

Fosfato de sodio hidrogenado - 0,15 mot/t

Fosfato dis6dico hidrogenado - 53,7 g con 12 moleculas de agua

(dihidrato - 26,7 g) (anhidro - 21,3 g)

Agua desionizada - hasta 1000 ml

Mezclar 40 ml de la soluci6n A y 60 ml de la B para obtener un pH 7.

Agregar 10 ml de este amortiguador por cad a litro de soluci6n salina. Controlar el pH. Si es

preciso, aiiadir mas buffer hasta alcanzar el range de 6,5-7,5.

EI procedimiento estandar de preparaci6n de soluciones salinas y buffer fosfato se detalla en el aoendlce 1 del m6dulo introductorio.

TECNICA 1

LAVADO Y PREPARACION DE SUSPENSIONES DE GLOBULOS ROJOS

Material

• Tubos de 75 x 12 mm

• Muestra de sangre

• Soluci6n salina

Metodo

1 Centrifugar la muestra para separar el suero 0 plasma de los globules rojos. Pasar el suero 0 plasma a otro tubo limpio rotulado.

2 Con una plpeta de Pasteur, colocar 0,2- 0,5 ml de gl6bulos rojos en cada tubo.

3 Completar con soluci6n salina hasta 1 cm del borde.

4 Centrifugar durante 1-2 minutos para sedimentar las celulas,

5 Extraer la soluci6n salina.

6 Agltar el tubo para resuspender los gl6bulos rojos. Esta secuencia constituye el primer lavado.

7 Repetir los pasos 3-6 por 10 menos dos veces. En el ultimo lavado, la soluci6n salina debe ser clara, sin slgnos de hem6lisis.

8 Para preparar una suspensi6n al 3%, agregar 1 volumen de gl6bulos rojos sedimentados a 30 volurnenes de soluci6n salina.

Itf1

TECNICA 2

TECNICA DEL PORTAOBJETOS (AZULEJO)

Este es un metodo rapldo, pero los anticuerpos deblles no aglutlnan los gl6bulos rojos y no se aconseja emplearlo como procedimiento de rutina. Si se utiliza para determinar el grupo sangutneo. es crucial confirmarlo mediante una tecnlca en tubo 0 microplaca.

Material

• Portaobjetos 0 placa de vidrio esmerilado

• Suero reactivo 0 en estudio

• GI6buios rojos reactivos 0 en estudio

• Varillas de madera

Metodo

1 Usar un portaobjetos 0 un sector de 3 cm de la placa.

2 Rotular los sectores para identificar las muestras.

3 Agregar 1 gota de suspensi6n de gl6- bulos rojos al 10-20% a 1 gota de suero.

4 Mezclar con un aplicador de madera en un area de 2 cm de dlarnetro.

5 Inclinar el portaobjetos 0 la placa para apreciar la presencia de aglutlnaci6n.

6 Registrar los resultados antes de transcurridos 2 minutos.

TECNICA 3

TECNICA DE CENTRIFUGACION INMEDIATA (CI)

Este es un metodo adecuado para la determinaci6n raplda del grupo ABO y tipo Rh D.

Material

• Tubos de 75 x 12 mm

• Suero tipificador

• GI6buios rojos en estudio

ltD

Metodo

1 Agregar 2 gotas de suero a 1 gota de suspensi6n de gl6bulos rojos al 2-4%. Mezclar agitando el tubo.

2 Centrifugar durante 15-20 segundos. 3 Inspeccionar en busca de slgnos de hem61isis y/o aglutinaci6n.

4 Consignar los resultados.

Los reactivos utilizados en la CI deben mantenerse a temperatura ambiente.

TECNICA 4

TECNICA DE LA SOLUCION SALINA A TEMPERATURA AMBIENTE

Material

• Tubos de precipitaci6n de 50 x 7 mm

• Suero reactivo 0 en estudio

• GI6buios roles reactivos 0 en estudio Metodo

1 Agregar 1 gota de suspensi6n de gl6- bulos rojos al 2-4% a 1 gota de suero 0 antisuero. Mezclar.

2 Incubar a temperatura ambiente durante 60 minutos.

3 Inspeccionar en busca de slgnos de hem61isis y/o aglutinaci6n.

4 Consignar los resultados.

TECNICA 5

TECNICA DEL AGREGADO DE ALBUMINA PARA LA TIPIFICACION Rh D

Material

• Tubos de precipitaci6n de 50 x 7 mm

• Reactivo anti-D

• GI6buios rojos en estudio

• Albnrnlna bovina (20-30%)

Metodo

1 Agregar 1 gota de suspensi6n de gl6- bulos rojos al 2-4% a 1 gota de anti-D.

2 Mezclar e incubar a 3rC durante 45-60 minutos.

3 Agregar 1 gota de albumlna por la pared del tubo para no dispersar los globules rojos sedimentados.

4 Incubar a 3rC durante 15 minutos.

5 Leer y consignar los resultados.

TECNICA 6

DETERMINACION DEL GRUPO ABO Y Rh D EN TUBOS

Como se ilustra en la figura 1, se colocan los tubos de precipitaci6n de 50 x 7 mm en una gradilla.

Grupo ABO

Se utiliza la tecnlca de la soluci6n salina a temperatura ambiente (tecnlca 4).

Rh D

EI rnetodo depende del reactivo anti-D disponible. Algunos anti-D monoclonales operan en soluci6n salina a temperatura ambiente (tecnlca 4), pero otros requieren incubaci6n a 3rC o agregado de alburnlna (tecnlca 5).

Es importante leer las instrucciones del proveedor,

Grupo rapido

Puede emplearse anti-A, anti-B y anti-D, sin prueba inversa, pero luego debe efectuarse una determinaci6n completa. La centrifugaci6n inmediata (tecnlca 3) es mas apropiada que el procedimiento del portaobjetos (tecnica 2).

TECNICA 7

DETERMINACION DEL GRUPO ABO Y Rh D EN MICROPLACAS

Grupo ABO Material

• Microplacas

• Suero reactivo 0 en estudio

• GI6buios rojos reactivos 0 en estudio Metodo

1 Colocar 101-11 de antisuero en las cubetas, como se muestra en la figura 1.

2 Agregar 1 got a de suspensi6n al 2-4% de gl6bulos rojos del paciente.

3 Evaluar los sueros anti-A, anti-B y antiAB con gl6bulos rojos A, B Y 0 para controlar los reactivos.

Grupo Inverso Metodo

1 Colocar 1 gota de suero del paciente en las cubetas, como se muestra en la flgura 1.

Rgura 1

Grupo serico celulasA1~ CelulasB ~ CelulasO~

Globulos rojos del paciente 23456

Controles GRAGRB GRO

, , ,

7 8 9 10

Grupo celular

Anti-A ~

Anti-B ~

Anti-A+B~

Suero del paciente 23456

7

Iti'

2 Agregar 1 gota de suspensi6n al 2-4% de gl6bulos rojos A, BoO.

3 Incubar a temperatura ambiente (20-23°C) durante 1 hora.

4 Inclinar la microplaca para resuspender los gl6bulos rojos no aglutinados y evaluarla sobre una superficie blanca.

5 Registrar los resultados.

Rh D en solucl6n salina

Si el anti-D 10 permite, puede usarse la misma microplaca.

Metodo

1 En las cubetas de la hilera G, colocar 1 gota de anti-D y 1 gota de globules rojos del paciente, utilizando eritrocitos A, B Y 0 como controles. La hilera H puede emplearse otro anti-D 0 el reactivo de control.

2 Mezclar y cubrir la microplaca con una tapa 0 pelicula plastica y dejarla sobre la mesa durante 60 minutos.

3 [xaminar las cubetas en busca de hem61isis y conslgnar los hallazgos,

4 Inclinar la microplaca para resuspender los gl6bulos rojos no aglutinados y evaluarla sobre una superficie blanca.

5 Registrar los resultados.

TECNICA 8

INVESTIGACION DE DU

Si es necesario investigar la presencia de DU, se realiza una prueba de antiglobulina indirecta (tecnlca 9) con anti-D.

Material

• Tubo de 75 x 12 mm

• Reactivo anti-D

• GI6buios rojos en estudio

• Reactivo de antiglobulina (AHG)

Metodo

1 Agregar 2 gotas de anti-D a 1 gota de suspensi6n al 2-4% de gl6bulos rojos en estudio.

2 Incubar a 37°C durante 30 minutos.

Itt:'

3 Examinar en busca de aglutinaci6n.

4 Si se observa aglutinaci6n, registrar la muestra como D positiva.

5 Si no se observa aglutinaci6n, lavar

los gl6bulos rojos cuatro veces.

6 Anadir 2 gotas de AHG y centrifugar. 7 Leer la reacciOn.

S Si es positiva, efectuar una prueba de antiglobulina directa (PAD) (tecnica 11).

9 Si la PAD es negativa, los resultados de la investigaci6n de DU son correctos y el paciente 0 donante puede considerarse Rh positivo (Du).

Si la PAD es positiva, los resultados no son confiables.

Si se dispone de reactivo de control, se usa igual que el anti-D. EI resultado debe ser negativo; si es posltivo, no es confiable.

Si los resultados son negatlvos, afiada una got a de celulas (gtobutos rojos) de control cubiertas con IgG. Centrifugue y lea.

TECNICA 9

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAl)

Material

• Tubos de vidrio de 75 x 12 mm (son

mas adecuados que los de plastlco)

• Suero reactivo 0 en estudio

• GI6buios rojos reactivos 0 en estudio

• Reactivo de antiglobulina (AHG)

• GI6buios rojos recubiertos de IgG de control (tecnlca 12)

Metodo

1 En un tubo, mezclar 3-4 gotas de suero y 1 gota de suspensi6n de glObulos rojos al 2-4%.

2 Incubar a 37°C durante 45-60 minutos.

3 Examinar en busca de hem61isis y/o aglutinaci6n. En su presencia, conslgnar como prueba positiva.

4 Si no se observa hem6lisis ni sglutlnaci6n, lavar los gl6bulos rojos cuatro veces.

5 Agitar el tubo, agregar 2 gotas de AHG y mezclar.

6 Centrifugar a 1000 g durante 15-20 segundos (Ia velocidad y el tiempo dependen de la centrffuga).

7 Retirar los tubos y leer sobre un negatoscopio 0 azulejo blanco.

8 Registrar los resultados.

9 Si la prueba sigue siendo negativa, agregar 1 gota de globules rojos recubiertos de IgG de control.

10 Repetir los pasos 6 y 7.

La reacci6n positiva indica que el resultado negativo obtenido en el paso 7 es valido, pero si los globules rojos de control no se aglutinan, es preciso repetir la prueba.

TECNICA 10

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA

INDIRECTA CON SOLUCION SALINA DE BAJA POTENCIA IONICA (PAIjLlSS)

10.1 Suspension en LlSS Material

• Tubos de vidrio de 75 x 12 mm

• Soluci6n salina de baja potencia i6nica (LlSS)

• Suero reactivo 0 en estudio

• GI6buios rojos reactivos 0 en estudio

• Reactivo de antiglobulina (AHG)

• GI6buios rojos recubiertos de IgG de

control (tecnica 12)

EI LlSS, los globules rojos suspendidos en LlSS y el suero, deben utilizarse a temperatura ambiente.

Metodo

1 Lavar los globules rojos dos veces en soluci6n salina y una en LlSS.

2 Resuspender los gl6bulos rojos al 2-4% en LlSS.

3 En un tubo, mezclar volurnenes iguales de suero en estudio y gl6bulos rojos suspendidos en LlSS (2 0 3 gotas de una pipeta de Pasteur 0 100 ~I).

4 Incubar a 37°C durante 15 minutos (en barto marfa si es posible).

5 Retirar los tubos y examinar en busca de hem6lisis y/o aglutinaci6n. En su presencia, conslgnar la prueba como positiva.

6 Si no se observa aglutinaci6n ni hem6- lisis, lavar en soluci6n salina los g16- bulos rojos por 10 menos tres veces.

7 Agltar el tubo, agregar 2 gotas de AHG y mezclar.

8 Centrifugar a 1000 g durante 15-20 segundos (Ia velocidad y el tiempo dependen de la centrlfuga).

9 Retirar los tubos y leer sobre un negatoscopio 0 azulejo blanco.

10 Registrar los resultados.

11 Si la prueba slgue siendo negativa, agregar 1 gota de globules rojos recubiertos de IgG de control.

12 Repetir los pasos 8 y 9.

10.2 Agregado de LlSS

Material

• Tubos de vidrio de 75 x 12 mm

• LlSS

• Suero reactivo 0 en estudio

• GI6buios rojos reactivos 0 en estudio

• Reactivo de antiglobulina (AHG)

• GI6buios rojos recubiertos de IgG de control (tecnlca 12)

Metodo

1 En un tubo, colocar 3 gotas de suero y 1 gota de suspensi6n de gl6bulos rojos al 2-4%.

Ifi'

2 Agregar 3 gotas de LlSS y mezclar (el
volumen podrla variar con el reactive).
3 Incube los tubos a 37° C, por 15 minu-
tos.
4 Examinar en busca de hem61isis y/o
aglutinaci6n. En su presencia, conslg-
nar como prueba positiva.
5 Si no se observa hem61isis ni sglutl-
naci6n, lavar los gl6bulos rojos cua-
tro veces.
6 Agttar el tubo, agregar 2 gotas de
AHG y mezclar.
7 Centrifugar a 1000 g durante 15-20
segundos (Ia velocidad y el tiempo
dependen de la centrlfuga),
8 Retirar los tubos y leer sobre un ne-
gatoscopio 0 azulejo blanco.
9 Registrar los resultados.
10 Si la prueba slgue siendo negativa,
agregar 1 gota de globules rojos recu-
biertos de IgG de control.
11 Repetir los pasos 6 y 7. TECNICA 11

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA

Material

• Tubos de vidrio de 75 x 12 mm (son

mas adecuados que los de plastlco)

• GI6buios rojos en estudio

• Reactivo de antlglobullna (AHG)

• GI6buios rojos recubiertos de IgG de control (tecnlca 12)

Metodo

1 Lavar por 10 rnenos tres veces 1 volumen de suspensi6n de globules rojos aI2-4%.

2 Agitar el tubo, agregar 2 volurnenes de AHG y mezclar.

3 Centrifugar a 1000 g durante 15-20 segundos (Ia velocidad y el tiempo

!,Iel

dependen de la centrlfuga),

4 Retirar los tubos y leer sobre un negatoscopio 0 azulejo blanco.

5 Registrar los resultados.

6 Si la prueba slgue siendo negativa, agregar 1 gota de gl6bulos rojos recubiertos de IgG de control.

7 Repetir los pasos 3 y 4.

La reacci6n posit iva indica que el resultado negativo obtenido en el paso 4 es valido, pero si los gl6bulos rojos de control no se aglutinan, es preciso repetir la prueba.

TECNICA 12

PREPARACION DE GLOBULOS ROJOS RECUBIERTOS DE IgG PARA LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA (Celulas control Coombs)

Material

• Tubos de 75 x 12 mm

• GI6buios rojos de grupo 0 Rh positivo

• Reactivo anti-D

• Soluci6n salina

• Reactivo de antlglobullna (AHG) Metodo

1 Lavar los gl6bulos tres veces en soluci6n salina.

2 Agregar un volumen lgual de anti-D a

los globules rojos sedimentados.

3 Incubar a 3rC durante 30 minutos.

4 Lavar los globules rojos cuatro veces. 5 Resuspender al 5% en soluci6n salina. 6 Agregar 2 volurnenes de AHG a 1 vo-

lumen de la suspensi6n al 5%, mezclar y centrifugar. La reacci6n debe ser +++. Si es demasiado potente 0 demasiado debtl, los globules rojos no son apropiados para controlar la prueba de antlglobullna,

7 Estos globules rojos sensibilizados pueden conservarse en suspensi6n a 4°C durante 48 horas.

TECNICA 13

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

13.1 En tubo: centrlfugacl6n Inmedlata y PAl Material

• Tubos de 75 x 12 mm

• Suero del paciente

• GI6buios rojos del donante

• Reactivo de antlglobullna (AHG)

• GI6buios rojos recubiertos de IgG de

control

Se requiere un tubo para cada prueba de compatibilidad; debe rotularse con cuidado para garantizar que la sangre en estudio es la que corresponde.

Metodo

1 Lavar algunos globules roles de cada una de las donaciones a estudiar.

2 En un tubo rotulado, colocar 3 gotas de suero del paciente.

3 Agregar 1 gota de suspensi6n al 2-4% de gl6bulos rojos del donante.

4 Mezclar.

5 Centrifugar para sedimentar los g16- bulos rojos.

6 Examinar el tubo en busca de hem61isis y/o aglutinaci6n. En su presencia, la sangre es incompatible.

7 Si en esta etapa (centrifugaci6n rapida) no se observa hem61isis ni aglutinaci6n, mezclar e incubar a 3rC durante 45-60 minutos.

8 Examinar el tubo en busca de hem6lisis y/o aglutinaci6n. En su presencia, la sangre es incompatible.

9 Si no se observa hem61isis ni aglutinaci6n, lavar los gl6bulos rojos cuatro veces.

10 Agttar el tubo, agregar 2 gotas de AHG y mezclar.

11 Centrifugar a 1000 g durante 15-20 segundos (Ia velocidad y el tiempo dependen de la centrifugal.

12 Retirar los tubos y leer sobre un negatoscopio 0 azulejo blanco.

13 Registrar los resultados.

14 Si la prueba sigue siendo negativa, egregar 1 gota de globulos rojos recubiertos de IgG de control.

15 Repetir 105 pasos 11 y 12.

16 Si se confirma que la PAl es negativa, la sangre es compatible y despues de completar la documentaci6n y rotulaci6n pertinente, puede entregarse.

13.2 En tubo, con agregado de LlSS

Material

• Tubos de 75 x 12 mm

• Suero del paciente

• GI6buios rojos del donante

• LlSS

• Reactivo de antlglobullna (AHG)

• GI6buios rojos recubiertos de IgG de control

Se requiere un tubo para cad a donaci6n a estudiar; debe rotularse con cuidado para garantizar que la sangre en estudio es la que corresponde.

Metodo

1 Lavar algunos globules rojos de cada una de las donaciones a compatibilizar.

2 En un tubo rotulado, colocar 3 gotas de suero del paciente.

3 Agregar 1 got a de suspensi6n al 2-4% de globules rojos del donante.

4 Mezclar.

5 Centrifugar para sedimentar 105 g16- bulos rojos.

IE"

6 Examinar el tubo en busca de hem61isis y/o aglutinaci6n. En su presencia, la sangre es incompatible.

7 Si en esta etapa (centrifugaci6n inmediata) no se observa hem61isis ni aglutinaci6n, sgregar 3 gotas de L1SS, mezclar e incubar a 37°C durante 15 minutos.

8 Examinar el tubo en busca de hem6lisis y/o aglutinaci6n. En su presencia, la sangre es incompatible.

9 Si no se observa hem6lisis ni aglutlnaci6n, lavar los gl6bulos rojos cuatro veces.

10 Agltar el tubo, agregar 2 gotas de AHG y mezclar.

11 Centrifugar a 1000 g durante 15-20 segundos (Ia velocidad y el tiempo dependen de la centrlfuga),

12 Retirar los tubos y leer sobre un negatoscoplo 0 azulejo blanco.

13 Registrar los resultados.

14 Si la prueba slgue siendo negativa, agregar 1 gota de gl6bulos rojos recubiertos de IgG de control.

15 Repetir los pasos 11 y 12.

16 Si se confirma que la PAl es negativa, la sangre es compatible y despues de completar la documentaci6n y rotulaci6n pertinente, puede entregarse.

EI L1SS se afiade despues de la centrifugaci6n inmediata para evitar los resultados falsos positivos debidos a anticuerpos de reacci6n en frio.

Los gl6bulos rojos del donante pueden suspenderse en L1SS. En este caso se usan 2 gotas de la suspensi6n y 2 gotas de suero. Para evitar los resultados falsos positivos debidos a anticuerpos de reacci6n en frio, el L1SS y el suero se emplean a temperatura ambiente. La PAI/L1SS requiere incubaci6n a 37°C durante 15 minutos.

"tl

13.3 Agregado de albumlna y solucl6n salina a temperatura amblente

Material

• Tubos de 50 x 7 mm

• Suero del paciente

• GI6buios rojos del donante

• Albumina bovina (20-30%)

Metodo

1 Lavar algunos gl6bulos rojos de cad a una de las donaciones a estudiar.

2 Se necesitan 2 tubos (50 x 7 mm) para cada donaci6n. Colocar 1 gota de suero del paciente en cada tubo.

3 Agregar 1 got a de suspensi6n al 2-4% de gl6bulos rojos del donante.

4 Incubar un tubo de cada par a 37°C durante 45-60 minutos.

5 Afiadir 1 gota de alburnlna por la pared del tubo. Comprobar que lIegue a los globules rojos y el suero. No mezclar.

6 Incubar durante 10-15 minutos.

7 Dejar los dernas tubos a temperatura ambiente.

8 Examinar todos los tubos en busca de hem6lisis y/o aglutinaci6n.

9 Si no se observa hem61isis ni aglutlnaci6n en ninguno de los tubos, la sangre es compatible.

13.4 Compatlbllldad de emergencla

Ante una ernergencla, la compatibilidad se determina con el metodo de rutina. Si despues de la etapa de centrifugaci6n inmediata no se observa aglutinaci6n, se entrega la sangre compatibilizada mediante una tecnlca de emergenera y luego se completa el estudio.

Si se descubre alguna incompatibilidad, es preciso informar al medico sin demora.

La reducci6n de los penodos de incubaci6n puede ser peligrosa. Si en la PAl se utilizan gl6bulos rojos suspendidos en soluci6n salina, la incubaci6n minima es de 30 minutos. Si se usa LlSS, debe ser de 15 minutos a 3rC.

En la tecruca de la albumlna con soluci6n salina a temperatura ambiente, se efectua centrifugaci6n inmediata. Si es menester acelerar el procedimiento, se incuba el tubo a 37°C durante 30 minutos, se centrifuga, se egrega la albumlna, se incuba 10 minutos mas y se lee.

ffE'

Preparaci6n de Concentrados de GI6buios Rojos

Cuando se solicitan concentrados de globules rojos, por ejemplo para un paciente con anemia, es preciso extraer el plasma de la unidad de sangre total. No obstante, si los concentrados provienen del servicio de medicina transfusional, no es necesario recurrir a este procedimiento. En caso contrario 0 cuando no se dispone de concentrados de un grupo sangulneo en particular, pueden prepararse a partir de sangre total mediante la tecnica que se describe a continuaci6n.

Si no se dispone de separador de plasma, es imposible preparar concentrados de globules rojos.

Equlpo

Para preparar concentrados de globules rojos se requiere:

• separador de plasma

• pinza metallca 0 plastlca

• recipiente.

EI sellador manual de gulas es util pero no imprescindible.

Metodo

1 Dejar reposar la sangre hasta que se forme una linea neta entre los globulos rojos y el plasma (figura 1).

Linea neta entre los gl6bulos rojos

GI6buios rojos

Rgura 1

If#'

2 Colocar la bolsa en el separador de plasma (figura 2).

Rgura 2

3 Pinzar la guia y romper el sello entre la bolsa y la gula (figura 3).

Romper el sello aquf

Rgura 3

4 Colocar el recipiente en la posicion adecuada para recolectar el plasma y seccionar el extrema de la gula. Retirar la pinza (figura 4).

Rgura 4

5 Dejar f1uir el plasma en el recipiente hasta que queden 2-3 cm sobre los globules rojos (figura 5). Pinzar la gula (flgura 6).

Rgura 5

Pinzar la guia para date-

ner el flujo de plasma y evitar el ingresode aire en la bolsa

Figura 6

6 Sellar la gula con clips rnetallcos 0 un nudo bien ajustado (flgura 7). EI cierre herrnetlco es fundamental para evitar la contamlnaclon. Oprimir con suavidad la bolsa para controlarlo.

7 Liberar la bolsa de la prensa para plasma.

Rgura 7

Cerrar la guia con un nudo o clip metalico

Plasma

GI6buIos rojos ~

1 ( Plasma

_iJff_ descartar

a Conservar el concentrado de globules rojos entre 2 y aoc. Debe transfundirse antes de transcurridas 24 horas, por el peligro de contamlnaclon, Por este motivo, nunca deben prepararse concentrados si no se tiene la certeza de que seran utilizados en el dla.

9 Descartar el plasma de acuerdo con el procedimiento habitual de eliminacion de material infectado potencial. Para mayor informacion al res pecto , vease la secclon 3 del modulo introductorio.

"f'

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->