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PROCEDIMIENTO
- De cada tubo que presente gas (+) se transfiere un asa del cultivo a tubos
que contengan caldo lactosa bilis verde brillante al 2 % con tubo de Durham,
o se repica por estrías a placas que contengan agar Levine (EMB) o agar
Endo.
- Los tubos positivo de caldo lauril sulfato triptosa (CLST) que fueron
confirmados como coliformes en caldo LBVB o en placas de agar Endo o
Levine, se anotan como positivos y los resultados se llevan a la tabla del
NMP que corresponda. (ver anexo)
- A partir de los tubos de gas (+) en caldo Mac Conkey ó Caldo Lactosa Bilis
Verde Brillante (CLBVB) tubo de Durham, se inoculan con una asa,
respectivamente:
a.- Un tubo que contenga caldo lactosa bilis verde brillante al 2 % con tubo
Durham.
b.- Un tubo que contenga agua peptonada o caldo triptonado.
- Se consideran positivos los cultivos que den gas e indol. Estos resultadoss
(tubos positivos) se llevan a la tabla del NMP que corresponde (ver anexo).
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
- En caso de que todos los tubos sean positivos, se tomarán en cuenta las
series de diluciones más altas de la muestra; expresándose el resultado
como estimado del NMP, "más de" el número de la tabla, multiplicado por la
dilución intermedia.
TABLA Nº 1
Número Más Probable (NMP) por 1 g de muestra y 95% de límites de confianza
Usando tres tubos con porciones de 0,1; 0,01 y 0,01 g
Número de tubos positivos NMP NMP límite
0,1 0,01 0,001 /g ó /ml Más bajo Más alto
0 0 0 <3
0 0 1 3 0.5 9
0 1 0 3 <0.5 13
1 0 0 4 <0.5 20
1 0 1 7 1 21
1 1 0 7 1 23
1 1 1 11 3 36
1 2 0 11 3 36
2 0 0 9 1 36
2 0 1 14 3 37
2 1 0 15 3 44
2 1 1 20 7 89
2 2 0 21 4 47
2 2 1 28 10 150
3 0 0 23 4 120
3 0 1 39 7 130
3 0 2 64 15 380
3 1 0 43 7 210
3 1 1 75 14 230
3 1 2 120 30 380
3 2 0 93 15 380
3 2 1 150 30 440
3 2 2 210 35 470
3 3 0 240 36 1.300
3 3 1 460 71 2.400
3 3 2 1.100 150 4.800
3 3 3 >2.400
DETERMINACIÓN DEL NUMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES
TOTALES, DE COLIFORMES FECALES EN MUESTRAS DE AGUA
POTABLE
PROCEDIMIENTO
PRUEBA PRESUNTIVA
PRUEBA CONFIRMATIVA
a.-. Se agita suavemente cada uno de los tubos positivos de la prueba anterior, y
se transfiere una asada del cultivo a tubos que contengan caldo lactosa bilis
verde brillante (2%), con tubo de fermentación invertido.
En caso de que todos los tubos sean negativos, el resultado se expresa como
“menos de 2,2 o menos de 1,1” según se hayan inoculado 5 ó 10 tubos
respectivamente.
En caso de que todos los tubos sean positivos, el resultado se expresa como
“más de 16 o más de 23” según se hayan inoculado 5 ó 10 tubos
respectivamente.
Tabla 2
Indices de NMP y límites de confianza de 95% para varias
combinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se utilizan 5
tubos inoculados con 10 ml de muestra de agua potable
Nº de tubos Indice NMP/100 ml Limite de confianza de 95%
positivos Inferior Superior
0 ≤ 2,2 0 6
1 2,2 0,1 12,6
2 5,1 0,5 19,2
3 9,2 1,6 29,4
4 16 3,3 52,9
5 ≥ 16 8 infinito
Tabla 3
Indices de NMP y límites de confianza de 95% para varias
combinaciones de resultados positivos y negativos, cuando se utilizan
10 tubos inoculados con 10 ml de muestra de agua potable
Nº de tubos Indice NMP/100 ml Limite de confianza de 95%
positivos Inferior Superior
0 ≤ 1,1 0 3
1 1,1 0,13 5,9
2 2,2 0,36 8,1
3 3,6 0,69 10,6
4 5,1 1,3 13,4
5 6,9 2,1 16,8
6 9,2 3,1 21,1
7 12 4,3 27,1
8 16,1 5,9 36,8
9 23 8,1 59,5
10 ≥ 23 13,5 Infinito
RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS EN PLACAS
DE PETRI (Norma COVENIN 902-87)
PRINCIPIO DE ENSAYO.
PROCEDIMIENTO
1
NOTA: Debe mantenerse la humedad necesaria dentro de la estufa para prevenir la deshidratación del agar
(Las placas con el agar no deben perder más del 15% de su peso original)
7.- Si las placas de todas las diluciones tiene más de 300 colonias, se seleccionan
aquellas que tengan el valor más cercano a 300.
8.- Si las placas de todas las diluciones tienen menos de 300 colonias, se
seleccionan aquellas que tengan el valor más cercano a 30.
9.- El número de colonias promedio de las dos placas de una misma dilución se
multiplica por la dilución correspondiente y este será el resultado final.
Los resultados se expresan como recuento estándar por mililitro (ml) o gramo (g)
de muestra.
3.- Cuando se emplean series de 5 tubos, se procede en la misma forma, pero utilizamos la
tabla del NMP correspondiente.
ANEXO 2
PREPARACION DE LA MUESTRA
CONDICIONES GENERALES
2.- Cuando se abra el recipiente con la muestra debe evitarse cualquier tipo de
contaminación.
NOTA: Si no se dispone de cabinas especiales, deben abrirse primero los productos
que se supone tienen menor carga microbiana (pasteurizados, precocidos) y por último
los crudos o desecados. Esto es con la finalidad de prevenir la contaminación del área
de trabajo y así evitar contaminaciones cruzadas.
3.- Las latas, jarras y otros recipientes cerrados deberán lavarse y secarse;
desinfectar el área de preparación de la muestra mediante algún agente
adecuado tal como el alcohol de 70º. El cual se elimina a la llama (flameado). No
se debe flamear aquellos envases o empaques que puedan dañarse o explotar.
NOTA: En caso de que se requieran condiciones de asepsia más estrictas
(prueba del deterioro microbiológico) deben utilizarse además otros desinfectantes,
tales como el alcohol yodado (2% de yodo) y compuestos derivados de amonio
cuaternario. Deben utilizarse cabinas especiales (flujo laminar). Si no se dispone
deberán utilizarse áreas desinfectadas y protegidas de las corrientes de aire.
4.- Cuando el producto este envuelto en cartón, papel celofán, papel aluminio o
cualquier otro material de empaque similar, éste deberá limpiarse con una tela o
esponja humedecida con un agente desinfectante (alcohol de 70º) para eliminar la
contaminación superficial y el polvo. Debe darse una atención especial al área de
abertura del empaque o envase.
MUESTRA SÓLIDA
1.- Se pesan 10, 25 o 50 grs ± 0.1 de la muestra en una jarra, frasco apropiado o
en bolsas de polietileno estériles, previamente tarados.
NOTA 2: Cuando se analicen alimentos con alto contenido de grasa (mayor de 20%) o
polvo que formen grumos, pueden añadirse al diluente, agentes humectantes tales
como el tergitol 7 anionico (1% p/v) para facilitar la emulcificación (ejemplo: quesos,
cremas de leche, mantequilla, chorizo, albúmina)
NOTA 3: Se recomienda tomar siempre que sea posible la mayor cantidad de muestra
(50 gr) a fin de obtener resultados más confiables.
MUESTRAS LÍQUIDAS
2.- La muestra se agita luego 25 veces, bien sea por un movimiento del brazo en
un ángulo de 45 grados o por rotación del recipiente en diferentes sentidos.
NOTA: La homogeneización de la muestra, bien sea sólida o líquida en la forma antes
descrita, corresponde a la primera dilución (10-1)