INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CIENCIA E TECNOLOGIA DO RIO

GRANDE DO NORTE CAMPUS CURRAIS NOVOS

CURSO TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
DISCIPLINA: ANLISES MICROBIOLGICAS DE ALIMENTOS
PROFESSOR: JONAS ALMADA
ESTUDO DIRIGIDO
1- Explique o funcionamento da autoclave
2- O que voc esterilizaria:
a) Na autoclave
Meios de cultura, solues aquosas e vidrarias e materiais termoresistentes.
b) Na estufa
Vidrarias e objetos metlicos.
c) Por filtrao
Solues termolbeis.
d) Por incinerao
Alas e agulhas de inoculao.
3- Marque verdadeiro (V) ou falso (F)
a) A esterilizao pelo calor seco ou pelo ar quente no recomendada quando
o contato direto do vapor dgua sob presso indesejado (F )
b) Meios de cultura sintticos (quimicamente definidos) so aqueles que no
posuem a composio qumica definida (F )
c) Quando um microrganismo cresce na superfcie de um gar camada alta
caracterizado como anaerbio aerbio (F )
d) A proporo do gar em meio semi-slido de 1,5% 0,075-0,5% (F )
4- Como voc poderia ter certeza que um caldo nutritivo est realmente estril?
Incubando uma frao do caldo 35C na estufa por cerca de 24h. Assim, se houver
crescimento microbiano um indicador da m qualidade no processo de esterelizao.
5- Justifique o que for falso:
a) A esterilizao por autoclave pode ser empregada sem limitaes, isto , para
qualquer soluo. Falso, as solues termolbeis (enzimtica, por exemplo) no podem
ser autoclavadas.
b) Meios complexos so aqueles que possuem composio qumica definida.
Falso, os meios complexos so aqueles os quais no se sabe quantidades nem a composio
qumica de algum(ns) elemento(s).
c) O gar usado como agente solidificante em meios de cultura na proporo
de 0,5%. Falso, para meios slidos a proporo de gar em torno de 1 a 2%.
d) Numa estufa (forno Pasteur), os microrganismos so eliminados pela
desnaturao das protenas. Falso, no s pela desnaturao, mas tambm pela
oxidao.
6- Com relao aos mtodos de esterilizao pelo calor seco e mido cite:
equipamento, agente esterilizante, fundamento, temperatura e tempo.
Seco: estufa; ar quente; oxidao e desnaturao das protenas e combusto da
matria orgnica; entre 160 e 180C de 1 a 2h.
mido: autoclave; vapor de gua sob presso; coagulao das protenas, destruio
das clulas vegetativas e esporos; 121C de 15 a 30min.
7- Descreva detalhadamente as etapas de preparo de uma vidraria at sua utilizao
no laboratrio. O processo difere caso a vidraria seja volumtrica? Em caso
afirmativo, justifique.

Preparo de vidraria para utilizao:

Lavagem (enxague na torneira, aplicao de soluo detergente, enxague na torneira
e por ltimo na gua destilada);
Esterelizao (15min a 121C na autoclave);
Identificao; e
Utilizao.
8- Um laboratorista do laboratrio de microbiologia do IFRN deve iniciar uma
anlise de coliformes em gua, para tanto ele reservou 9 tubos de ensaio, 1 vidro
(200mL) com tampa, pipetas de 1 mL. Qual deve ser o seu procedimento quanto
montagem e esterilizao de cada vidraria?
Tubos de ensaio: caso no tenham tampa, colocar algodo hidrfobo (boneca) na
abertura para tampar, juntar os nove numa lata, embrulhar com papel adequado
(kraft, jornal, alumnio);
Vidro com tampa: tampar o frasco;
Pipetas: enrolar no papel adequado (kraft, jornal, alumnio);
Autoclavar as vidrarias a 121C por 15 min.
9- Qual o objetivo do uso de tcnicas asspticas no trabalho em laboratrio de
Microbiologia?
Prevenir contaminao do meio, do manipulador e do ambiente ao mximo possvel.
10- Qual tcnica voc utilizaria para o isolamento de bactrias? Justifique.
Esgotamento por estriagem em quadrante; pois, com a diminuio da concentrao de
microorganismos que vai ocorrendo nas mudanas de quadrante, os microorganismos comeam
a formar colnias as quais possvel fazer uma contagem.
11- Quais os cuidados a serem tomados durante uma inoculao por estrias em placas
de gar?
Assepsia do ambiente (passar lcool na bancada, manipular prximo chama);
Assepsia dos materiais (uso de vidrarias e meios estreis, incinerar ala ou agulha e
deixar esfriar um pouco antes da utilizao);
Deixar a chama entre o manipulador e os materiais para evitar contaminao de
ambos;
Inocular o meio estril com a mo leve para no rasgar o meio;
Na mudana de quadrante esterilizar a ala ou agulha e continuar de onde parou na
placa.
12- Quais os mtodos utilizados para isolamento em placas contendo gar? No seu
ponto de vista qual o mais eficiente? Justifique
Meios seletivos(inibe o crescimento de um determinado grupo ou espcie em detrimento de
outro) e/ou diferenciais (permite diferenciao entre grupos ou espcies). O seletivo ser mais
interessante pois ali s vai haver crescimento dos organismos desejados.
13- Por que as placas de Petri devem ser incubadas invertidas na estufa?
No ocorrer troca de tampas e para no ocorrer condensao na tampa e caia na amostra.
14- Ao trabalhar na manuteno de uma bacterioteca, o laboratorista responsvel
detectou duas culturas, que originalmente estavam puras, contaminadas. Quais
devem ser os cuidados a serem tomados, por ele, quando for reisolar as culturas?
Usar meios seletivos para retomar a bactria desejada, utilizar meios de estocagem e ter
cuidado para fazer ocorrer contaminao ou troca de tampas com outros microrganismos.
15- O que so meios de cultura seletivos?
So meios que inibem o crescimento de determinados microrganismos em detrimento de outros.
Num meio seletivo para Staphylococcus aureus ali s vai crescer este.

16- Para anlise bacteriolgica de uma amostra de leite foram preparados 220 mL do
meio gar contegem padro, com a seguinte composio:
Extrato de carne.................................................3,0 g
Peptona de casena.............................................5,0 g
Cloreto de sdio.................................................5,0 g
Agar-agar............................................................12,0 g
Depois de pronto constatou-se que os clculos haviam sido efetuados para 220
mL, mas por engano os ingrediente foram dissolvidos em 240 mL. Como voc
procederia para ajustar este meio de cultura? Apresente os clculos.
Componente
Extrato de carne
Peptona de casena
Cloreto de sdio
Agar-agar

3
5
5
12

Qtd
g/220mL
g/220mL
g/220mL
g/220mL

Adio (g p/ 20 mL)
Extrato de carne
Peptona de casena
Cloreto de sdio
Agar-agar

Clculo
3 x 20/220
5 x 20/220
5 x 20/220
12 x 20/220

Resultado
0,27
0,45
0,45
1,09

g
g
g
g

17- Quais as etapas envolvidas na preparao de um meio bacteriolgico?

Clculo das quantidades;
Misturar a soluo (se necessrio aquecer, como o gar);
Distribuio nas vidrarias.
18- Por que, quando se prepara um meio de cultura, o pH deve ser ajustado? Caso
voc desejasse o crescimento de Escherichia coli, que pH voc escolheria para o
seu controle? Justifique.
Deve-se ajustar o pH devido ser este um fator extrinseco importante ao crescimento timo
microbiano. No caso de bactrias, como a E. coli, o pH timo prximo a neutralidade, ou
seja, 7.
19- No preparo de um meio de cultura, o fabricante determina que seja pesado 34 g
para 1000 mL de meio, no entanto, ao final do preparo o meio estava com 1250
mL. Que correes devem ser feitas para que o meio fique correto? Determine
quantitativamente o erro.
20- Qual a diferena entre meio de cultura natural (complexo) e um meio sinttico
(quimicamente definido)? Defina-os e exemplifique.
Complexos: composio qumica no definida, tais como extratos de vegetais (malte,
tomate, amido de tubrculos, peptona de soja, etc.) de animais (carne, crebro, fgado,
casena, etc.) e de microrganismos (levedura);
Quimicamente definidos: composio qumica conhecida (usados para trabalhos de
pesquisa) e seus componentes servem para suprir as exigncias nutritivas dos
microrganismos, em fontes de carbono, nitrognio, vitaminas, energia, sais minerais,
dentre outros, quando ento so conhecidas as necessidades nutricionais especficas.
21- Aponte no mnimo cinco fontes de erro no preparo de um meio de cultura.
Pesagem de solutos incorreta, no aquecer o suficiente o gar levando ao endurecimento,
aquecer o gar demais levando a condensaso de gua na tampa, dissoluo incorreta ou no
aferir o pH.

22- Caso esteja trabalhando com uma espcie bacteriana fastidiosa, voc pode utilizar
o meio gar nutritivo para o isolamento da mesma? Explique.
Sim, ele vai auxiliar no convencimento das clulas a se nutrirem pela grande quantidade de
nutrientes e por serem especificamente ideais para a bactria se desenvolver mais.
23- Quais caractersticas culturais podem ser notadas no gar nutritivo em camada
alta?
Mobilidade e relao com o oxignio.