Ao de la consolidacin del Mar de Grau

ESTUDIANTE

NICANOR URIBE LOAYZA

FACULTAD

MEDICINA HUMANA

ESCUELA

CIENCIAS DE LA SALUD

SEMESTRE ACADMICO :

CDIGO

DOCENTE

CURSO

2016-0

141140599U
:

JACK SLIM GARCIA

BIOQUIMICA Y NUTRICION

Per Ica
2016

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

URIBE LOAYZA NICANOR

PRACTICA N 9
PERFIL LIPIDICO: COLESTEROL TOTAL Y
FRACCIONADO

OBJETIVOS:
Determinar lo valores de Colesterol Total, HDL y LDL
con fines diagnstico.
Interpretar los resultados de un perfil lipdico.
Determinar los rangos y valores ms recomendados en
el balance de colesterol por las lipoprotenas.

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MARCO TEORICO:
Por medio de un anlisis denominado "perfil lipdico", el
mdico podr ver los diferentes tipos de grasas presentes
en la sangre. El perfil lipdico mide lo siguiente: El
colesterol total, que es la suma de los diferentes tipos de
colesterol.
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) colesterol, que
suelen recibir el nombre de colesterol "bueno". Las
lipoprotenas pueden considerarse el sistema de transporte
de la sangre de su hijo. Las lipoprotenas de alta densidad
transportan colesterol al hgado para su eliminacin.
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) colesterol,
generalmente conocidas como colesterol "malo". Las
lipoprotenas LDL que se acumulan en el torrente sanguneo
pueden tapar los vasos sanguneos e incrementar el riesgo
de afecciones cardacas. Los triglicridos, que almacenan
energa hasta que el organismo la necesita. Si el cuerpo
acumula demasiados triglicridos, los vasos sanguneos se
pueden tapar y provocar problemas de salud. Un perfil
lipdico ms extenso puede tambin incluir:
* Colesterol VLDL
* Colesterol no-HDL
A veces, el informe incluye algunos clculos adicionales
como el cociente entre colesterol total y colesterol HDL, o
un ndice de riesgo establecido a partir de los resultados del
perfil lipdico, la edad, el sexo y otros factores de riesgo. El
mdico le informar acerca de lo que pueden significar
estos
resultados.
-El perfil lipdico permite verificar los niveles de lpidos en la
sangre, que pueden indicar el riesgo de una persona de
padecer enfermedades cardacas o arterosclerosis (el
endurecimiento, estrechamiento o bloqueo de las arterias).
Algunos expertos consideran que el colesterol elevado en
nios es un gran problema de salud pblica que en muchos
casos pasa desapercibido. Por lo tanto, es importante estar
atento a los niveles de colesterol de su hijo, en especial si
alguno de los padres sufre de colesterol elevado.

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El nivel srico de colesterol ha sido objeto en los ltimos

aos de numerosas investigaciones tanto en individuos
sanos como enfermos.
Desde un punto de vista mdico la determinacin de
colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnstica
limitada. Sin embargo, su concentracin vara de manera
ms o menos predecible en un gran nmero de condiciones
clnicas. Se ha visto que el colesterol es uno de los factores
contribuyentes a la formacin de ateromas dado que las
complicaciones arterioesclerticas prevalecen en individuos
hipercolesterolemicos.
Diversos estudios epidemiolgicos han permitido observar
adems, que el riesgo de contraer enfermedad cardaca
coronaria (ECC) para los individuos (varones de ms de 40
aos) con colesterolemia menor igual a 200 mg% es 3
veces menor que entre individuos con ms de 230 mg% y 6
veces menor que entre individuos con ms de 260mg%.
Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario
conocer adems la distribucin de las lipoprotenas
encargadas del transporte: HDL (lipoprotenas de alta
densidad), considerada como el factor protector y LDL
(lipoprotenas de baja densidad), consideradas como el
verdadero factor de riesgo. Las funciones biolgicas
inherentes a los distintos grupos de lipoprotenas, las
variaciones en su composicin y los resultados de los
diversos estudios epidemiolgicos, indican que los valores
aislados de colesterol HDL y colesterol LDL no pueden
tomarse como ndices predicativos de riesgo, sino que es
necesario conformar un perfil Lipdico con los valores de
colesterol total, colesterol LDL y colesterol HDL.

FUNDAMENTO:

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Las lipoprotenas de baja densidad (LDL o -lipoprotenas)

se separan del suero precipitndolas selectivamente
mediante el agregado de polmeros de alto peso molecular.
Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las dems
lipoprotenas (HDL y VLDL); el colesterol ligado a las
mismas se determina empleando el sistema enzimtico
Colesterol oxidasa/Peroxidasa con colorimetra segn
Trinder (Fenol/4-AF).
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en
el sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL

Metabolismo del colesterol

Biosntesis del colesterol
La biosntesis del colesterol tiene lugar en el retculo
endoplasmtico liso de prcticamente todas las clulas de
los
animales
vertebrados.
Mediante
estudios
de
marcaje isotpico, Rittenberg y Bloch demostraron que
todos los tomos de carbono del colesterol proceden, en
ltima instancia, del acetato, en forma de acetil coenzima
A. Se requirieron aproximadamente otros 30 aos
de investigacin para describir las lneas generales de la
biosntesis del colesterol, desconocindose.

Degradacin del colesterol

El ser humano no puede metabolizar la estructura del colesterol hasta CO 2 y
H2O. El ncleo intacto de esterol se elimina del cuerpo convirtindose en cidos
y sales biliares las cuales son secretadas en la bilis hacia el intestino para
desecharse por heces fecales. Parte de colesterol intacto es secretado en la
bilis hacia el intestino el cual es convertido por las bacterias
en esteroides neutros como coprostanol y colestanol

Funciones del colesterol

El colesterol es imprescindible para la vida animal por sus
numerosas funciones:

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Estructural: el colesterol es un componente muy

importante de las membranas plasmticas de las
clulas animales (en vegetales esa funcin es anloga
a la del Fitoesterol). Aunque el colesterol se encuentra
en pequea cantidad en las membranas celulares, en
la membrana citoplasmtica lo hallamos en una
proporcin molar 1:1 con relacin a los fosfolpidos,
regulando sus propiedades fsico-qumicas, en
particular la fluidez. Sin embargo, el colesterol se
encuentra en muy
baja proporcin
o
est
prcticamente
ausente
en
las
membranas
subcelulares.
Precursor de la vitamina D: esencial en
el metabolismo del calcio.
Precursor de las hormonas sexuales:
progesterona, estrgenos y testosterona.
Precursor de las hormonas corticoesteroidales:
cortisol y aldosterona.

Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorcin de algunos

nutrientes lipdicos y va principal para la excrecin de colesterol
corporal.

Precursor de las balsas de lpidos.

MATERIALES USADOS EN LA PRCTICA:

Muestra de sangre
Tubos de ensayo
Reactivos

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Micropipetas
Centrfuga
Espectrofotmetro
Reloj
Pipetas
Pera de goma

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Experimento A: DETERMINACIN DE COLESTEROL EN
SUERO
FUNDAMENTOS DEL METODO:
El colesterol es oxidado enzimticamente por la colesterol
oxidasa (CHOD), previa hidrlisis enzimtica de los esteres
mediante una lipasa de origen fungal. El agua oxigenada
generada en la oxidacin, produce la copulacin oxidativa
del fenol con la 4aminofenazona (4-AF) mediante una
reaccin catalizada por la peroxidasa.
El producto es una quinonaimina roja con absorbancia
mxima a 505 nm.

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REACTIVOS:
Standard: solucin de colesterol 200 mg%
Enzimas: suspensin conteniendo lipasa fungal (300 U/ml),
colesterol oxidasa (3 U/ml) y peroxidasa (20 U/l).
Reactivo 4-AF: solucin de 4-aminofenazona (25 mmol/l).
Reactivo Fenol: solucin de fenol (55 mmol/l).
Reactivo de trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo
colocar en una probeta 50 partes de agua destilada, 5
partes de reactivo 4-AF, 5 partes de reactivo fenol y llevar a
100 partes con agua destilada. Agregar 2 partes de enzimas
previamente homogenizadas. Mezclar por inversin, sin
agitar.

PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en Bao Mara a 37C.

Leer en el espectrofotmetro a 505 nm.

CALCULO DE RESULTADOS:
Calcular la concentracin de colesterol total en suero,
aplicando el mtodo del factor de calibracin.

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Recordar que la concentracin

colesterol es de 200 mg%

del

standard

de

VALORES DE REFERENCIA:
Los valores de colesterol en sangre fluctan segn edad,
sexo y hbitos de dieta y de ejercicio. Sin embargo, es
preferible no hacer referencia a valores normales, pues la
norma promedio de una poblacin no necesariamente
refleja ausencia de riesgo patolgico en el caso de
colesterol.
Menos de 200 mg%
valor deseable
200
a 239 mg%
valor frontera
Mayor de 240 mg%

valor alto

RESULTADO:
Abs. Estndar (S) = 0,533
Abs. Muestra (D) = 0,477
F = 200
S

F = 200
0.553

= 361.663

D*F =?
D*F = 0.477*0.477 = 172.51

Experimento B: DETERMINACIN DE
COLESTEROL HDL EN SUERO
FUNDAMENTOS DEL METODO:
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL)
se separan
precipitando selectivamente las lipoprotenas de baja y muy
baja densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de
Sulfato de Dextrn de PM 500,000 en presencia de iones
Mg++.

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En el sobrenadante separado por centrifugacin, quedan las

HDL y se realiza la determinacin del colesterol ligado a las
mismas, empleando el sistema ms conveniente.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Contiene una solucin de Sulfato
de Dextrn y de Cl2 Mg.H2O
PROCEDIMIENTO:
En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml (50
ul) de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 30-40 minutos en refrigeracin (4-10C). No colocar
en el congelador.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en Bao Mara a 37C.

Leer en el espectrofotmetro a 505 nm.

CALCULOS:
De acuerdo al mtodo del factor de calibracin,
considerando que la concentracin del standard es de
45.7 mg%.
VALORES NORMALES:
40 65 mg%

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RESULTADO:
LDL = Colesterol total = (D*F), D = 2.414 y S = 0,748
F = 0,624
S

0.624
0.748

= 0.834

LDL = 2.414 * 0.834 = 1.478

Experimento C: DETERMINACIN DE
COLESTEROL LDL EN SUERO
FUNDAMENTOS DEL METODO:
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) se separan del
suero precipitndolas selectivamente mediante el agregado
de polmeros de alto peso molecular. Luego de centrifugar,
en el sobrenadante quedan las dems lipoprotenas (HDL y
VLDL), el colesterol ligado a las mismas se determina
empleando el sistema ms conveniente.
Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en
el sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las LDL.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Solucin de sulfato de polivinilo
disuelto en
polietilenglicol (PM 600).
PROCEDIMIENTO:
En un tubo, colocar 0.2 ml (200 ul) de suero problema y
aadir 0.1 ml (100 ul) de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 15 minutos en un bao de agua a 20-25C.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos. Usar el
sobrenadante como muestra.

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En tres tubos colocar:

Incubar 15 minutos en bao de agua a 37C.

Leer en el espectrofotmetro a 505 nm.

CALCULOS:
LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x
factor de calibracin) La concentracin del standard es de
62.4 mg%.
VALORES NORMALES:
Riesgo bajo o nulo: Menor de 140 mg%
Riesgo moderado: 140 a 190 mg%
Riesgo elevado
: Mayor de 190 mg%
Abs. Estndar (S) = 0.780
Abs. Muestra (D) = 0.576
Factor de calibracin (F) = 0.624

F = 0.624 = 0.8
0.780
D*F = 0.780 * 0.8 = 0.624 mg% / L

CUESTIONARIO:
1.-

Qu es RIESGO CORONARIO y como se calcula?

Es un grupo de exmenes de sangre utilizados para medir

los niveles de colesterol y triglicridos. El perfil puede
ayudar a determinar su riesgo de cardiopata. Algunos tipos

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de colesterol se consideran "buenos" y algunos son

considerados "malos". Se necesitan exmenes de sangre
diferentes para medir cada tipo de colesterol.
Se calcula dividiendo el colesterol total y el colesterol HDL.
2.Explique qu diferencias hay
arterioesclerosis y la ateroesclerosis?

entre

la

La arterioesclerosis, es el endurecimiento, la prdida de

elasticidad de las arterias y la ateroesclerosis es el acmulo
de ateromas en las paredes de las arterias. La formacin de
la placa de ateroma se da por gran cantidad de grasa
circundando en el torrente sanguneo y va achicando cada
vez ms la luz arterial.
La arteriosclerosis es una enfermedad que se caracteriza
por modificaciones estructurales que consisten en
engrosamiento de la capa ntima, duplicacin de la lmina
elstica interna y cambio de colgeno en lugar de clulas
musculares lisas y fibras elsticas en la tnica media.
3.Describa como se produce la biosntesis de
colesterol dentro del organismo.
BIOSNTESIS DEL COLESTEROL
Un poco menos de la mitad del colesterol en el cuerpo se
deriva de la biosntesis de novo. Cada da aproximadamente
el 10% de la biosntesis del colesterol se hace en el hgado,
y aproximadamente el 15 % en el intestino. La sntesis del
colesterol se hace en el citoplasma y los microsomas a
partir del grupo acetato de dos carbonos la Acetil-CoA.

La Acetil-CoA que se utiliza para la biosntesis del colesterol

se deriva de una reaccin de oxidacin en las mitocondrias
y es transportada al citoplasma la oxidacin del etanol, que

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se inicia por el alcohol deshidrogenasa citoplasmtica

(ADH3). Todas las reacciones de la reduccin de la
biosntesis del colesterol utilizan NADPH como cofactor. Los
intermediarios isoprenoides de la biosntesis del colesterol
pueden ser dirigidos a otras reacciones de sntesis, tal como
para el dolicol o la cadena lateral heme-. Adems stos
intermediarios se utilizan en la modificacin con lpidos de
algunas protenas.
El proceso tiene 5 pasos importantes:
Las Acetil-CoAs se convierten
metilglutaril-CoA (HMG-CoA)

en

hidroxi-3-

Las HMG-CoA se convierten en mevalonato.

El mevalonato se convierte en l molcula isopreno, el
isopentenil
pirofosfato
(IPP),
con
la
prdida
concomitante de CO2.
El IPP se convierte en escualeeno.
El escualeno se convierte en colesterol.

4.Explique que es el colesterol VLDL y como se

calcula.

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VLDL es la sigla en ingls que corresponde a lipoprotena de

muy baja densidad (LMBD en espaol). No hay ninguna
manera sencilla para medir directamente el VLDL. Por lo
general se infiere de los dems nmeros de colesterol
srico. Aunque los resultados de laboratorio no suelen dar
un nmero de VLDL, puedes fcilmente calcularlo tomando
la cantidad total de colesterol y restar tanto el LDL y HDL.
Este clculo es una buena estimacin, pero no es exacto.
Esto se debe a las VLDL puede transformarse en algunos
otros tipos menos conocidos de colesterol. Estos incluyen el
IDL (lipoprotenas de densidad intermedia), los residuos de
VLDL nacientes y VLDL, que a veces se incluyen en el
nmero de LDL. La primera frmula bsica para crear una
estimacin VLDL es como sigue: El colesterol total - HDL LDL = VLDL.
5.Que rol cumplen los triglicridos y como se
realiza su metabolismo.
Constituyen la principal reserva energtica del organismo
animal (como grasas) y en los vegetales (aceites). El exceso
de lpidos se almacena en grandes depsitos en los
animales, en tejidos adiposos.
Son buenos aislantes trmicos que se almacenan en los
tejidos adiposos subcutneos de los animales de climas
fros como, por ejemplo, las ballenas, el oso polar, etc.
Son productores de calor metablico, durante su
degradacin. Un gramo de grasa produce 9,4 kilocaloras.
En las reacciones metablicas de oxidacin, los prtidos y
glcidos producen 4.1 Kcal.
Dan proteccin mecnica, como los constituyentes de los
tejidos adiposos que estn situados en la planta del pie, en
la palma de la mano y rodeando el rin (acolchndolo y
evitando su desprendimiento).

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CONCLUCIONES:
Se logr determinar los calores de Colesterol Total, LDL
y HDL con fines diagnstico.
Se identific los valores del Colesterol Total.
Se identific los valores de HDL Colesterol.
Se identific los valores de LDL Colesterol

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BIBLIOGRAFIA:

Mundo Bioanlisis (2010). LDL Colesterol Reactivo

Precipitante. Recuperado de:
http://www.mundobioanalisis.com/fabricante/wiener/el
ectrolitos/descarga/1220104.pdf
http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/blood
_test_lipid_panel_esp.html
http://www.uco.es/dptos/bioquimicabiolmol/pdfs/25%20PERFIL%20LIP%C3%8DDICO.pdf