Universidad Tecnolgica de Puebla

Carrera de Qumica rea Tecnologa Ambiental

Asignatura: Microbiologa Ambiental
Prctica No. 2 Uso del microscopio
Objetivo: Identificar los componentes del microscopio y su funcin.
Introduccin: El microscopio es el aparato ms importante e indispensable en el Laboratorio de
Microbiologa; su funcin es permitir observar la imagen de un objeto u organismo considerablemente
aumentada. La palabra microscopio proviene de dos races griega: micros, que quiere decir pequeo, y
scopein que significa observar.
Antonie Van Leeuwenhoek, que vivi en Delft, Holanda, de 1632 a 1723, fue el primero en comunicar
sus observaciones con descripciones y dibujos precisos. Leewuenhoek tuvo los medios y la oportunidad
de proseguir su pasatiempo favorito de tallar lentes y hacer un microscopio. Durante su vida hizo ms de
250 microscopios que consistan en lentes de tallado casero montadas en latn y plata, aumentando los
ms poderosos de ellos unas 200 a 300 veces. Los microscopios de luz de hoy tienen una capacidad de
aumento de 1000 a 1300 veces.
Actualmente el microscopio electrnico es el ms evolucionado, recibiendo da a da aditamentos que le
proporcionan mayor potencia y efectividad; este tipo de microscopio utiliza como fuente luminosa
radiaciones electrnicas de una longitud de onda sumamente corta. Las lentes de cristal de un
microscopio ptico compuesto han sido sustituidas por lentes electromagnticas, siendo necesario para
que opere un alto vaco, esta condicin no permite observar microorganismos vivos, siendo esta un gran
inconveniente; no obstante el microscopio electrnico ha permitido grandes avances y descubrimientos.

Microscopio ptico compuesto

Partes de un microscopio ptico

Sistema ptico
o OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del
objetivo.
o OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.

o
o
o

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecnico
o SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
o PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
o CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular, ..
o REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar
los objetivos.
o TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y
micromtrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO

Materiales y Reactivos:
Material:
1 Vidrio de reloj
4 Portaobjetos
4 Cubreobjetos
3 pipetas Pasteur
1 pizeta
1 esptula
1 asa bacteriolgica
1 soporte para tincin
Aparato:
Microscopio

Material biolgico:
Infusin de hierbas
Agua de charco
Solucin de levadura
Lodos del reactor biolgico
Reactivos:
Lugol
Solucin salina fisiolgica
Rojo neutro
Agua destilada
Material que deber traer el alumno:
Algodn
Abatelenguas
Levadura de panadera
Pasto
Guantes de ltex

Manejo del microscopio

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina
completamente (si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya
debera estar en esas condiciones).
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 40x, o colocar el de 10 aumentos (10x) si la
preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin
pudindose daar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo
de la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la
muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar
de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy
poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo
con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo
de inmersin.
6. Empleo del objetivo de inmersin:
. Bajar totalmente la platina.
a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
b. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre
ste y el de x40.
c. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de
inmersin.
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente
toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se
adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x
por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de
aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir
la operacin desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca
el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se
puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo
de inmersin en posicin de observacin.
i. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para
ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin
de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada,
se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este
tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las

6.
7.

8.

9.

lentes y su sujecin.
No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico,
platina, revlver y condensador).
El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a
travs del ocular.
Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn
lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido
en xilol.
Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica
y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

1. Sealar los componentes del microscopio y anotar su funcin y a qu sistema pertenece.

2. Observar cada objetivo y los oculares y explicar qu significan las cifras que tienen grabadas
3. Enfocar una preparacin, empezando con el objetivo de menor aumento y pasando a los de mayor
aumento, anotando el nmero de aumentos que logra de la imagen en cada caso.
Preparacin de infusiones previas a la prctica:
A. Colocar un puado de pasto en un frasco y verter agua destilada en l y agitar. Enrollar un poco de
algodn absorbente formando una bola e insertarla en la boca del frasco, procurando que no se moje.
Colocar el frasco en un lugar oscuro a una temperatura de 25C a 30C durante 3 das. Esto facilita que
se forme un medio biolgico y como consecuencia el desarrollo de microorganismos.
4. Tomar una gota de infusin con un asa bacteriolgica y colocarla en un portaobjetos, agregar una
gota de solucin salina fisiolgica y colocar inmediatamente un cubreobjetos y observar a seco dbil,
una vez enfocada la muestra puede pasar a un mayor aumento. Anotar observaciones.
5. Tomar una gota de infusin y colocarla en un portaobjetos que contenga una gota de solucin salina
fisiolgica, agregar una gota de rojo neutro o azul de metileno. Anotar observaciones.
B. Mezclar 25 g de levadura de panadera en 50 ml de agua y dejar reposar durante 24 h, calentar la
mezcla y agregar 0.1g de polvo de rojo neutro, seguir calentando a fuego lento durante 8 minutos, pero
sin hervir, teniendo cuidado de no quemar la levadura, dejar enfriar la mezcla.
6. Colocar una gota de la infusin en un portaobjetos y observar al microscopio.
C. Tomar una muestra de agua proveniente del reactor biolgico de la planta de tratamiento de aguas
residuales y colocar una gota en el portaobjetos, cubrir con el cubreobjetos y observar.
D. Tomar una muestra de un charco y repetir la operacin del punto C.
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.

Cules son los sistemas que componen un microscopio?

Cul es la diferencia entre objetivos y oculares?
Cul es la importancia y aplicacin del microscopio en la Tecnologa Ambiental?
Cules son las medidas de seguridad e higiene en la manipulacin del microscopio?

BIBLIOGRAFA
1. Microbiologa. Michael J. Pelczar, Jr. Roger D. Reid. Edit. McGraw-Hill
2. Biologa celular. Estructura, bioqumica y funcin. Sheeler. Editorial Limusa.
3. Biologa de los microorganismos. Thomas D. Brock, Madigan, Martinko, Parker. Edit. Prentice- Hall