Cultivoinvitrodehongosenagar:experimento

Esteeselprimerexperimentodepreparacindemediodecultivoestndarparacultivodehongos:
ElAgarPapaDextrosaoAgarPDAyunAgarconunaditivodepruebaoAgarTest .
SepreparAgarPDAsiguiendolasindicacionesdelaentradadelblog:Mediodecultivoparahongos.
AdemssepreparunAgarespecialalqueseleaadieroningredientesdeprueba(AgarPDATest).
Objetivos
ElAgarPDAeselmedio(ounodelosmedios)decultivouniversaldehongos.Elazcarproporcionalaenerga
necesariaparaqueelhongosedesarrolle.
Sinembargolaintencindecultivodeloshongosenestecasonoesotraqueladelaimplantacindesemillas
deorqudea.Lagerminacinydesarrollodelassemillasesunprocesoquepuededurarvariosmeses.Se
pretendealargarlavidadeloshongosdelmediodeAgarPDA,deformaqueseasegureunamayor
permanenciadeloshongosaadidoshastaqueelembrinalcanceundesarrolloptimoymsavanzado.
Materialnecesario
EldescritoenlaentradaMediodecultivoparahongos
6botesdecristalde8x9cmconsustapas
8PlacasdePetrideplsticode10cmdedimetro
IngredientesparaelAgarTest

Preparacindelosfrascos
1.Delos1000mldesolucinresultantedelapreparacin,seprepararon3botesdecristalcontapaamarilla
conAgarPDA,unos3a4cmdealturadelbote.
2.A300mldelamezcladeAgarPDAseleaadieronlosingredientesdelAgarTest.
Estamezclaserepartientre3botescontaparoja,unos3cmdealtura.
3.Losbotessecolocaronenollasemitapadaenconstanteebullicinunos30min,conlatapasincerrardel
todoyuntrozodepapeldealuminiorecubrindola.
4.Sedejaronenfriarligeramenteyseretirarondelaolla.Sedejaronenfriarunos30minutostrasrociarloscon
alcoholde96Cytaparlosligeramenteconunahojadepapeldealuminioparadificultarsucontaminacin
hastaelcierredelastapas.
5.Secerrporcompletolatapatrasunratodeenfriamientoatemperaturaambiente,unos3045minutos,yse
dejaronenfriarhastasuutilizacin.
6.ElrestoseutilizenlasPlacasdePetri.

PreparacindelasPlacasdePetri
Todoelprocesoserealiztrashaberselavadolasmanosymuecas,conguantesymascarilla.Elespaciose
rociconalcoholde96.Debecasihumedecerselassuperficiesdetrabajoalcaerelalcoholpulverizado.
Normmalmentetras1015segundosdepulverizaciones.(Sueleproducirseunatosquenosrecuerdaqueelser
humanonorespiraalcohol,eindicativadequeessuficienteXD).
Elvapordelaguaalfuegoeraapreciableenlaestancialoquesugierebuenascondicionesdeasepsia.

Lasplacasseprepararonparacomprobarlafacilidaddesuproduccinencasasinqueexistacontaminaciny
parasuposteriorexperimentacinconsiembrayreproduccindehongosdeTrichodermayotroshongos
beneficiosos.
1.Lasplacasserociaronvariasvecesensuinteriorconalcohol96.
2.Luegosecolocaronalvapordelaollasobreunarejillaunos3060segundos.
3.SellenarondeAgarPDAseytaparonencimadelvapor.
4.Sedejaronenfriarunos60minatemperaturaambiente.
5.Seapilaronlas8placassobrepapeldealuminiorociadoconalcoholde96ysehizounpaquetepara
facilitarmoverlaseimpedirlacontaminacin.
6.Serefrigerarondurante4horas.
7.Sesacaronderefrigeracinysedejanatemperaturaambientehastasuuso.
MediodecultivoAgarPDA

Elmedioresultantetieneuncolorblanquecino,turbio,lechoso,vidrioso,gelatinoso.
MediodecultivoAgarTest

Elmediodecultivoposeeunaspectocompacto,denso,grumoso,apelmazado.Elcoloresblanquecinopero
msoscuro,conmanchasmarrones(incorrectohomogeneizado?).

Actualizacin:21/01/12.
Sesiembran5mldesolucindejeringuillaestrilendosbotesconsimilarcantidaddeagar,unoAgarPDAyotro
Agartest.
Sedejantapadosdelaluzenunahabitacinatemperaturaquenosuelesermenorde20C(porquesoymuy
frioleroXD)
Actualizacin:01/02/12.
Losbotesnoparecenavanzar.Creoquehaydemasiadoagua/lquidoenlapartesuperior.EldeagarPDAseha
subido(??)ysecadoextraamente.Quizsiestncreciendohongos.
Tampocosmuybienquepintatienen.
PreparounexperimentoconTrichodermaharzaniumaisladacomercial,asqueprontosabrqupintatieneysi
separeceonoaalgunodelosquetena.
Actualizacin:08/02/12.
Demomentonohaycambios.
Elagarnormalseharesecadoyresquebrajadoporvariaszonas,peronoseveningunamodificacinquehaga
sospecharcrecimientodenada.Hayquizdemasiadolquido...
Elagartestsiguesiendounpequeomazacotetambinsinaparenteaspectodecrecimientodenada.
Actualizacin:16/02/12.
Todoigual.Oseanadavisible.
Losbotesdeavenaalmacenadossehancontaminado:(Laideadedoscapasdepapeldealuminioenvezde
tapaesunamuymalaidea,secontaminanmuuuyfcil.