AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE

GRAU

INFORME N 1 FUNDAMENTO DE AYUDA DIAGNOSTICA I

DOCENTE VILELA DESPOSORIO, CARLOS DAVID

COORDINADOR

DE

FUNDAMENTOS

DE

AYUDA

DIAGNOSTICA I

TITULO

: COLORACIN GRAM EN EL USO DE LA IDENTIFICACIN

DE BACTERIAS Y COMO HERRAMIENTA DE APOYO PARA
AYUDA DIAGNOSTICA

REFERENCIA

FECHA

CLASE DESARROLLADA EN LABORATORIO (514)

TRUJILLO 31 DE MARZO DE 2016

INTRODUCCION

Gracias al aporte cientfico del bacterilogo Hans Christian Joachim Gram,

Mientras analizaba los tejidos de los fallecidos por pulmona descubri que algunas mantenan la
coloracin y otras no. Fue entonces que en su afn de descubrir las diferencias realizo
innumerables pruebas con el fin de hallar una manera de poder diferenciarlas, y as fue que logro
llegar a una secuencia de pocos pasos que le llevaran a descubrir la manera de colorear a la
bacteria Realiz la tincin con violeta de genciana, despus la fij con lugol; luego las lav con
etanol. Haba bacterias que retenan el color y aparecan de color violeta al microscopio y otras
que no1.
Gracias a su mtodo de tincin ahora podemos apoyarnos en este mtodo cientfico que nos
ayuda en la diferenciacin de las bacterias; es as que hoy se aplica a diferentes secreciones.
Es as pues que recogemos este principio para transportarlos a las secreciones vaginales, lquido
cefalorraqudeo y secreciones farngeas para identificar la forma de la bacteria y su afinidad por
las soluciones tintreas que la llevaran a su coloracin final.
De este modo resulta una gran ayuda en la diferenciacin de las bacterias y proceder con una
adecuada teraputica la eliminacin exitosa de la bacteria

OBJETIVOS:

1.
2.
3.
4.
5.

CONOCER EL PRINCIPIO DE LA TINCION DE GRAM

DOMINAR LA TECNICA Y DESARROLLO DE LA TINCION
OBSERBAR Y DIFERENCIAR LAS BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS
CONOCER LAS APLICACINES DE LA TECNICA PARA DIFERENTES FLUIDOS
CONOCER Y APRENDER A DIFERENCIAR LAS CARACTERISTICAS ENTRE AMBOS

GRUPOS DE BACTERIAS
6. DETERMINAR LA TERAPEUTICA MEDICA PARA CADA GRUPO DE BACTERIAS.

MATERIALES: 2
Equipos:
1. Mechero
instrumento

de
que

alcohol.proporciona

calor Se utiliza cuando no se necesita

gran

poder

calorfico. Poseen

un

una

mecha impregnada de alcohol, que es

la

que arde. Adems de mantener un

radio de calor capaz de eliminar las
bacterias recogidas en el hisopo.

2. Guantes de ltex.- Barrera efectiva frente a agentes patgenos

sanguneos y otros agentes infecciosos.
Buena resistencia a la rotura y a los
pinchazos accidentales. Pueden ser con
polvo o sin polvo, y estriles o no estriles

3.

Puente de tincin.- estructura utilizada para el soporte y

apoyo de la muestra a coloracin (portaobjetos); se sita sobre

una superficie de drenaje o contencin a modo de mantener limpio el

rea de trabajo

4.

Portaobjetos.Lamina

de

vidrio

rectangular de color transparente utilizada para almacenar muestras

y objetos con el fin de observarlas bajo el microscopio. Las
dimensiones tpicas de un portaobjeto son de 75mm x 25mm, sin
embargo estn pueden variar dependiendo del tipo de objeto o
muestra.

normalmente

empleados,

una

vez

son

listos para el uso y pueden ser

alcanzados

la

temperatura

ambiente,

inmediatamente y sin adicionales preparativos

5.

Piseta con agua.La

Peseta

es

un

recipiente cilndrico sellado con tapa rosca, el cual posee un pequeo

tubo con una abertura capaz de entregar agua o cualquier lquido que
se encuentre contenido en su interior, en pequeas cantidades.
Normalmente esta hecho de plstico y su funcin principal en el
laboratorio

es

lavado

materiales

de

vidrio.

de

recipientes

6. Hisopo.-

instrumento desechable fabricado de plstico o madera con

recubrimiento de algodn a forma mota en uno de sus extremos utilizado para

recoger muestras, para su posterior estudio, normalmente en medicina se usa para
saber que germen afecta a una infeccin

7. Baja lengua.-

es una paleta de madera usada para deprimir la

lengua y facilitar la toma de muestra o examen mdico de la cavidad

oral y tejidos circulantes, normalmente de madera blanca de
superficie lisa, uniforme
sabor,

libre

de

astillas

de bordes externos ovalados sin olor ni

perforaciones

manchas

su

medida

aproximada es de 150mm +/- 2mm por 20 mm +/- 2mm con un

espesor de 2.30mm3 +/- 2mm

8. Microscopio.- instrumentos pticos de precisin para la observacin

de estructuras y detalles del material biolgico que no pueden ser
percibidos a simple vista cuenta de las siguientes partes:
a. Sistema ptico:
Ocular.- lente situado cerca al ojo del observador, amplia la
imagen del objetivo
Objetivo.- lente situado cerca de la preparacin. Amplia la
imagen de sta
Condensador.- lente que concentra los rayos luminosos sobre
la preparacin

Diafragma.- regula la cantidad de luz que entra en el

condensador
Foco.- dirige los rayos luminosos hacia el condensador
b. Sistema mecnico:
Soporte: mantiene la parte ptica, tiene dos partes; el pie o
base y el brazo
Platina: lugar donde se deposita la preparacin
Cabezal. Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser
monoculares, binocular
Revolver: contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite,
al girar, cambiar los objetivos
Tornillos de enfoque: macro mtrico que aproxima el
enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto

9. Reactivos:
1.

Violeta de genciana.- es una preparacin de cloruro de

pararosanilina hexametil y agua en solucin. e s un

antisptico local que pertenece al grupo de las tinturas

bsicas bactericidas n la forma pura, el cristal violeta se
presenta como cristales de color azul verdoso brillante.
Su punto de fusin esta entre 194-189C. Los violeta
de metilo son solubles en agua, etanol, dietilenglicol, y
dipropilenglicol. En particular, el violeta de metilo 6B es
soluble en agua al 2,93% y soluble en etanol al 15,21%. 4
2. Solucin de lugol.- Tambin denominado solucin de
yoduro de potasio yodado o Lugoln, la solucin de Lugol
est formada por di - yodo (I2) y yoduro de potasio (KI)
diluido en agua. Descubierta por el mdico francs Jean
Lugol, de donde proviene su nombre, esta solucin se utiliza
en muchas circunstancias, sobre todo por sus propiedades
antispticas y bactericidas.

3.

Alcohol de acetona.- Mezcla de alcohol acetona en

proporcin 3:1 para la coloracin de Gram. Lquido

inflamable y muy voltil, manjese con precaucin
y utilizando los elementos de seguridad en el
laboratorio su composicin es Metanol: 75% y
Acetona: 25%5

4.

Safranina.-

Es

un

colorante

biolgico

tambin

conocido como dimetil safranina y rojo bsico 2, Al

ser una molcula cargada positivamente (catin)
es capaz de combinarse con elementos celulares
de cargas negativas.6

5. Aceite de inmersin.- solucin oleosa con propiedades

refractantes que permite ampliar el campo de visin del
microscopio dando una mejor visin al observador, generalmente
est compuesto por aceite refinado de cedro pero en la
actualidad est fabricado con materiales artificiales

METODOS
.
1. Se disponen todos los implementos en el rea de trabajo con ya antes
mencionados, este debe estar en lugar estable con
buena iluminacin y una fuente de desecho para lavar los
artculos posteriormente.
2. Se toman medidas de bioseguridad cuya utilizacin nos
permitir un adecuado desarrollo de la prctica, y nos
asegurara

adecuado

manejo

de

los

equipos

sin

exponernos

3. Se calienta el portaobjetos de forma ligera y se deja

enfriar antes de la recoleccin de la muestra, esto con el
fin de volatilizar elementos hmedos o partculas que se
pudieran haber adherido a la superficie previa a la
muestra.
4. Con ayuda del baja lengua y del hisopo se procede a tomar la muestra de la
cavidad farngea, teniendo cuidado de no tocar la
campanilla ya que esto provocara el estmulo de nausea o
arcada, ni de la lengua ya que esta podra contener restos de
alimentos u otras bacterias.
5. Se realiza la extensin de la muestra recogida en el hisopo sobre la lmina porta
objeto haciendo leves movimientos circulares en el centro de la
misma.

6. Se fija la muestra al fuego con el objetivo de hacer una

mejor adherencia.

7. Se acerca al fuego el hisopo con el fin de que no escapen

las bacterias y mantener un ambiente lo menos posible de
bacterias; y se procede a desecharlo conjuntamente con el
baja lenguas en un lugar seguro.
8. Cuando la lmina este fra de 5 a 8 segundos se coloca sobre el puente de tincin
preparndolo para la tincin

9. Se

procede

incorporar

cristal

de

violeta

aproximadamente 1 minuto, esto teir las bacterias gram

positivas, lavar la muestra teniendo en cuenta de no
exponer el chorro de agua directamente sobre la muestra.

10. Se fija con la muestra con lugol aproximadamente 1 minuto esto

asegura una fijacin de la tintura con la superficie de las
bacterias y luego se lava.

11. Se decolora con la mezcla de alcohol de acetona con el fin

de eliminar excesos de tintura sobre la muestra

12. Se procede a incorporar la safranina por 1 minuto con el fin

de que se tian las bacterias gram negativas y generar un
contraste entre la afinidad de las dos tipos de bacterias y
lavar.

13. Se espera a que desaparezca cualquier rasgo de agua en

portaobjetos.

el

14. Se procede a observar en el microscopio bajo el objetivo

de 100X (para ubicar el campo de visin.

15. Se cambia al objetivo de 4X en conjunto con el aceite de

inmersin (teniendo cuenta de no manchar los dems objetivos
con el aceite al momento de girar el revolver).

RESULTADOS
La muestra de secrecin farngea dio como resultado una amplia gama de estructuras en diversas
agrupaciones como se muestra a continuacin la ms predominante es la formacin en racimo y
bastoncillo como se muestra en la figura

MUESTRA DE LA FIJACION DE HISOPADO FARINGEO VISTA EN EL MICHOSCOPIO

MUESTRA EN AUMENTO DE 10X

MUESTRA EN AUMENTO DE 4X

En vista que los cocos en disposiciones diversas se muestran en coloracin rojiza debido a la
safranina podemos deducir que son bacterias gram negativas lo cual nos orienta a la teraputica
del tratamiento debido a conocimientos previos que las bacterias gram negativas presentan una
doble membrana una externa y otra citoplasmtica7

DISCUSION
Cuando se aade el alcohol de acetona a la mezcla de clulas Gram positivas y Gram negativas
teidas con cristal violeta, las clulas Gram positivas quedan teidas de violeta esto porque no
puede atravesar la gruesa capa de (peptidoglicano) murena, en cambio. La pared de las bacterias
Gram negativas debe su rigidez a una capa de murena ms delgada, a travs de la cual el
alcohol extrae el cristal violeta de estas clulas. Su citoplasma queda incoloro y puede teirse de
color rosa con el colorante de contraste de la safranina

CONCLUSION

La tincin de Gram Es una herramienta sumamente til en el apoyo del diagnstico clnico y de
Microbiologa As Como en lo es conocer su fundamento y Procedimiento, para Poder Tener Una
Correcta Interpretacin de los Datos Que Nos otorga la diferenciacin de Gram positiva y negativa
concluyendo que debido a la Estructura de Sus paredes celulares tendrn o sin propiedades
patolgicas Diferentes.

BIBLIOGRAFA

1Javier Sebastian Mazana Casanova: Bacteria and their Dyes: Hans

Christian Joachim Gram Historia de la Inmunologia. 2002, p. 140-150
(Lebenslauf ab S. 144) https://es.wikipedia.org/wiki/Hans_Christian_Gram
http://www.encyclopedia.com/topic/Hans_Christian_Joachim_Gram.aspx .
2 Centers for Disease Control and Prevention. Personal protective equipment. Available
at: http://www.cdc.gov/niosh/ppe.Accessed February 28, 2014.Centers for Disease Control and
Prevention. Personal protective equipment. Available at: http://www.cdc.gov/niosh/ppe.
Accessed February 28, 2014.
3

http://www.dares.minsa.gob.pe/portal/upload/doc/programacion/2014/Dispositivos
Medicos/19BajalenguaDeMadera_Adulto_Uni.pdf
4
Acid
Base
Indicators - ifs.massey.ac.nz (en
https://es.wikipedia.org/wiki/Cristal_violeta

ingls)

5 inserto de laboratorio LABSAR.

http://www.labsar.com/archivos/fichastecnicas/DECOLORANTE%20DE%20GRAM.pdf
6 tecnologa en salud http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2012/ir122f.pdf
7 https://es.wikipedia.org/wiki/Peptidoglucano