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TESIS DOCTORAL:
Dirigida por:
Marisol Vega Alegre
Da. Mara del Sol Vega Alegre, con D.N.I. n 10.190.648 S, profesora del
Departamento de Qumica Analtica, Facultad de Ciencias, como Directora de la Tesis
Doctoral titulada:
Validacin de mtodos de ensayo y estimacin de la incertidumbre de
medida conforme a la norma ISO/IEC 17025. Aplicacin al anlisis de aguas
residuales y continentales.
presentada por Da. MARTA HERNNDEZ REVILLA, alumna del Programa de
Doctorado QUMICA ANALTICA APLICADA. CONTAMINACIN Y MEDIO AMBIENTE
impartido por el DEPARTAMENTO DE QUMICA ANALTICA, autoriza la presentacin de
la misma, considerando que cumple todos los requisitos establecidos en la legislacin
vigente.
La Directora de la Tesis,
A mi familia.
Agradecimientos
Y por fin lleg el final Al contrario que para la mayora de los doctorandos, para m
esta Tesis ha sido muy dura, solitaria y plagada de inconvenientes de todo tipo:
cambios de laboratorio, falta de financiacin A pesar de ello, la persistencia (o
cabezonera) ha dado su fruto.
A los pocos que han estado a mi lado y caben en apenas tres prrafos, muchsimas
gracias:
En primer lugar mi ms sincero agradecimiento a mi directora de tesis, la doctora
Marisol Vega Alegre, por creer en la idea inicial que ha dado lugar a esta tesis, por su
paciencia y por el seguimiento y la supervisin de este trabajo. Hago extensivo mi
agradecimiento al Departamento de Qumica Analtica por el apoyo econmico y
humano que en todo momento me ha brindado.
En segundo lugar, a mis tres segundos analistas, Rafa Milln, ngel Calleja y Natalia
Garrote, y a los tcnicos de laboratorio del Dpto. de Qumica Analtica, Rosario Gmez
y Francisco de la Rosa. No es habitual incluir en los agradecimientos a comerciales o
servicios tcnicos, pero para m han sido de gran ayuda: Esther Esteban de Scharlab, el
servicio tcnico de Gomensoro e Ingeniera Analtica; muchsimas gracias por vuestro
tiempo.
Por ltimo, por lo que pudo haber sido y no fue: a mis ex-compaeros del Crtif, en
especial a Rubn Irusta por la idea que termin en Tesis Doctoral, y a los de la
Sedam. Gracias.
Resumen
Todos aquellos laboratorios que pretenden acreditarse de acuerdo a la norma ISO/IEC
17025, estn obligado cumplir unos requisitos tcnicos que incluyen la estimacin de
la incertidumbre de medida y la validacin de los mtodos de anlisis, es decir, deben
confirmar mediante examen y la aportacin de evidencias objetivas que se han
cumplido los requisitos particulares para la utilizacin especfica prevista. Para llevar a
cabo esta tarea el laboratorio debe realizar una serie de ensayos que confirmen las
caractersticas tcnicas del mtodo tales como veracidad, precisin (repetibilidad y
reproducibilidad), linealidad, incertidumbre...
En este trabajo se han desarrollado metodologas basadas en el empleo de muestras
de control junto con diseos de experimentos anidados para obtener la informacin
necesaria para evaluar las caractersticas tcnicas del mtodo. Esta combinacin nos
ha permitido obtener la mxima informacin requerida para la validacin, realizando
un mnimo nmero de medidas. Estas metodologas se han aplicado a la determinacin
de parmetros fsico-qumicos en aguas residuales: (i) determinacin de aniones
disueltos por cromatografa inica, (ii) determinacin de fenoles totales por
espectrofotometra UV-vis y (iii) determinacin de aceites y grasas mediante
extraccin en fase slida y gravimetra.
Previamente a la validacin se comprob, mediante su calibracin y/o verificacin, que
los equipos de medida estaban en perfecto uso, y que cumplan los requisitos
especficos para el desarrollo de los mtodos de anlisis en los que estaban implicados.
Paralelamente, se realizaron ensayos previos necesarios para establecer determinadas
condiciones experimentales tales como linealidad, requerimientos instrumentales, o
tiempos mximos de conservacin de muestras y patrones
Los resultados del diseo de experimentos anidado nos permitieron evaluar para cada
mtodo de ensayo los parmetros de validacin. El anlisis de varianza, ANOVA, de
dichos resultados nos ha permitido evaluar la repetibilidad de las medidas y las
precisiones intermedias relacionadas con factores que previsiblemente pueden afectar
a los resultados, tales como la realizacin de los anlisis en distintos das o el cambio
de analista. La incertidumbre de medida se estim a partir de la informacin obtenida
durante el proceso de validacin. Este modelo gener, funciones matemticas del tipo
I=k3xk4 que permitirn posteriormente estimar la incertidumbre asociada a la
concentracin, x, medida en una muestra en el laboratorio.
Finalmente, para comprobar la idoneidad del modelo de estimacin de la
incertidumbre se compar con otros modelos alternativos: (i) el modelo tradicional
bottom-up, que identifica, cuantifica y combina las fuentes de incertidumbre de cada
etapa del proceso analtico, y (ii) el modelo top-down, que estima la incertidumbre
de medida a partir de los resultados de ensayos de intercomparacin de laboratorios, y
que en este trabajo se extrapol a los resultados de los ensayos intralaboratorio.
Abstract
Chemical testing laboratories with a quality system accredited to ISO/IEC 17025 need
to have established quality systems covering the management and technical issues
specified in the standard. Technical issues include estimation of uncertainty of the test
results and validation of test methods which implies the confirmation by examination
and provision of objective evidence that the particular requirements for a specific
intended use are fulfilled. Validation studies for quantitative analytical methods
include the following parameters or technical characteristics: accuracy, scope,
specificity, sensitivity, precision (repeatability and reproducibility), bias, linearity,
detection limit, robustness, selectivity and uncertainty of the test results.
This work describes the design and application of methodologies based in the use of
nested experimental designs and control samples to obtain the information necessary
to validate analytical methods after evaluation of their technical characteristics while
performing a minimum amount of measurements. Different analytical methods for the
examination of wastewater and continental water have been selected for validation: (i)
determination of dissolved anions by ion chromatography, (ii) determination of total
phenols by UV-vis spectrometry and (iii) determination of total grease and oil by solid
phase extraction and gravimetry.
Prior to method validation, calibration and/or verification of the analytical instruments
was carried out to assess they were operative and in compliance with specific
requirements for their application in the analytical methods of interest.
Simultaneously, a series of experiments were performed to establish some
experimental conditions such as linearity, instrumental requirements, or maximum
period of conservation of samples and standard.
Results from the nested experimental designs have allowed the estimation of the
validation parameters of the three methods. From the Analysis of Variance, ANOVA, of
these results different contributions to total variance that likely affect the result of
measurement such as change of analyst and time elapsed from sample collection to
measurement, have been evaluated and quantified as repeatability and intermediate
precisions.
Measurement uncertainty was estimated from the data collected during the validation
experiments as a potential function, I=k3xk4, of analyte concentration, x. From this
function, it is possible to estimate the uncertainty associated to the measured
concentration for a given sample.
Finally, the model proposed in this work for estimation of measurement uncertainty
was compared with other available methods: (i) the classical bottom-up model which
identifies, quantifies and combines the sources of uncertainty acting on each step of
the analytical process, and (ii) the top-down method, which uses the results from
interlaboratory trials (proficiency testing, method performance studies) to estimate
measurement uncertainty, model that was extrapolated to results from
intralaboratory trials in this study.
NDICE
ndice
1. OBJETIVOS ........................................................................................................... 1
2. INTRODUCCIN TERICA ..................................................................................... 7
2.1. Introduccin ....................................................................................................................... 9
2.2. Seleccin de mtodos de ensayo ..................................................................................... 10
2.3. Parmetros de validacin................................................................................................. 11
2.3.1. Parmetros de gestin .............................................................................................. 13
2.3.2. Parmetros tcnicos.................................................................................................. 14
2.3.3. Incertidumbre ........................................................................................................... 46
2.3.4. Aseguramiento de la calidad de los resultados de los ensayos ................................ 71
2.4. Validaciones de equipos de medida y ensayo ................................................................. 77
2.4.1. Calibracin de equipos de medida ............................................................................ 78
2.4.2. Verificacin de equipos de medida y ensayo ............................................................ 85
2.4.3. Mantenimiento de equipos de medida y ensayo ..................................................... 86
2.5. Preparacin de disoluciones ............................................................................................ 87
ndice
4.1.4. Cromatgrafo inico ............................................................................................... 148
4.2. Validacin del mtodo analtico para la determinacin de aniones en aguas............... 150
4.2.1. Ensayos previos a la validacin ............................................................................... 150
4.2.2. Diseo experimental ............................................................................................... 166
4.2.3. Evaluacin de los parmetros de validacin ........................................................... 169
4.3. Validacin del mtodo analtico para la determinacin de fenol en aguas ................... 186
4.3.1. Ensayos previos a la validacin ............................................................................... 186
4.3.2. Diseo experimental ............................................................................................... 192
4.3.3. Evaluacin de los parmetros de validacin ........................................................... 193
4.4. Validacin del mtodo de anlisis para la determinacin de A&G en aguas ................. 200
4.4.1. Ensayos previos a la validacin ............................................................................... 201
4.4.2. Diseo experimental ............................................................................................... 206
4.4.3. Evaluacin de los parmetros de validacin ........................................................... 208
4.5. Anlisis del modelo de estimacin de la incertidumbre de medida propuesto............. 214
ii
1. OBJETIVOS
Captulo 1: Objetivos
Captulo 1: Objetivos
Necesidad de
informacin
Normativa
disponible
Principio y fin
Prevalidacin
Validacin
Resultados/conclusiones
Documento
Datos externos
Valoracin
econmica y
productiva
No
Viable
Procedimiento
Normalizado de
Trabajo, PNT
provisional
Operaciones previas
Si
Validacin equipos
instrumentos
No
No
Representatividad
Robustez
Si
Establecimiento de las
caractersticas tcnicas
Si
Objetivos de
calidad
Protocolo de
validacin
Experimentacin
Resultados
Comparacin
No
Si
PNT definitivo
Mtodo validado
Informe de
validacin
Fig. 1.1: Esquema del proceso de validacin de un mtodo de anlisis
El tercer captulo est dedicado a la aplicacin del proceso de validacin a los tres
mtodos de ensayo seleccionados. Para cada mtodo de ensayo se ha descrito
brevemente el Procedimiento Normalizado de Trabajo (PNT) que incluye la descripcin
y pasos a seguir para el desarrollo del mtodo, as como los materiales y equipamiento
5
2. INTRODUCCIN TERICA
2.1. INTRODUCCIN
Los laboratorios de anlisis desarrollan mtodos de ensayo para los anlisis
demandados, pero antes de poder ponerlos en prctica debe someterlos a un proceso
de validacin. De acuerdo a la norma UNE EN ISO 17025 (UNE EN ISO/IEC 17025, 2010)
validacin es la confirmacin mediante examen y la aportacin de evidencias objetivas
de que se han cumplido los requisitos particulares para la utilizacin especfica
prevista. Si esta definicin la llevamos al campo de los laboratorios de anlisis
qumicos, validar un mtodo de ensayo consiste en demostrar, mediante una serie de
experimentos, que el mtodo es idneo para el uso que se pretende hacer del mismo,
manteniendo su eficacia a lo largo del tiempo y cumpliendo unos requisitos de calidad
previamente establecidos. Estos requisitos de calidad son los que definen los criterios
de calidad o caractersticas tcnicas del mtodo de anlisis.
Como se mostr en la Fig. 1.1 podemos decir que la validacin de un mtodo de
ensayo se divide en las siguientes etapas:
Prevalidacin
El primer paso es seleccionar el mtodo de anlisis de acuerdo con los requisitos
impuestos, necesidades e infraestructura disponible. El mtodo seleccionado puede
estar descrito previamente en una norma o documento oficial, ser una modificacin, o
bien ser un nuevo mtodo desarrollado por el laboratorio. En todo caso el mtodo de
ensayo debe estar descrito en un Procedimiento Normalizado de Trabajo interno (PNT)
y aprobado por el laboratorio que lo va a poner en prctica (UNE EN ISO/IEC 17025,
2005).
Tambin se incluye en esta etapa la validacin de los instrumentos de medida y ensayo
implicados en el mtodo de anlisis. Esto supone el desarrollo de mtodos de
calibracin y verificacin de los equipos y aparatos empleados para el desarrollo del
mtodo de ensayo.
Validacin
La validacin implica el establecimiento de las caractersticas tcnicas que debe poseer
el mtodo seleccionado y sus objetivos o mrgenes permitidos. Estas caractersticas
pueden diferir segn el alcance del mtodo de ensayo a validar. En ocasiones, estos
valores se obtienen de la recopilacin de informacin bibliogrfica.
Se precisa elaborar un Protocolo de validacin que recoja el alcance de la validacin,
las caractersticas a determinar y sus valores objetivo, que describa la preparacin de
muestras, los equipos y materiales necesarios, las precauciones y limitaciones del
mtodo, el personal necesario, el diseo experimental del proceso de validacin, la
toma de datos, los clculos y la expresin de resultados, y toda la informacin
necesaria para la realizacin completa de la validacin.
10
del ensayo de manera detallada y sin ambigedad, con objeto de realizar las
mediciones de forma correcta, reproducible y trazable.
Parmetros tcnicos
Parmetros de gestin
Inversin inicial
Costes de puesta a punto del mtodo
Costes en funcin del n de muestras/da
Costes de formacin
Sueldo del personal cualificado
Costes generales de laboratorio
Rapidez,
Grado de automatizacin
Factores humanos: cualificacin del personal,
seguridad e higiene
Necesidades energticas y de espacio
Robustez
Representatividad
Selectividad/Especificidad
Intervalo de trabajo o rango de ensayo,
intervalo lineal y linealidad
Sensibilidad
Lmite de deteccin y cuantificacin
Exactitud: veracidad (sesgo) y precisin
(repetitibilidad, reproducibilidad)
Incertidumbre
Recuperacin
Intervalo de medida/Lmite superior
11
12
13
Robustez
La robustez (robustness) es una propiedad de un mtodo analtico que describe su
capacidad para permanecer inalterado ante las pequeas variaciones inevitables de las
condiciones experimentales, e indica la fiabilidad del mtodo durante su aplicacin
rutinaria. Es por tanto una propiedad que nos da idea de la estabilidad del mtodo de
anlisis cuando este se trasfiere a otro laboratorio, instrumento o analista (ICH,
2005).
El trmino ruggedness aplicado a un mtodo analtico, y usado con frecuencia como
sinnimo de robustez, se refiere al grado de reproducibilidad de los resultados de un
mtodo analtico obtenidos al analizar la misma muestra bajo condiciones
experimentales diferentes tales como diferente laboratorio, instrumento, analista, o
medidas separadas en el tiempo. Puede observarse que esta definicin es equivalente
a las definiciones de precisin intermedia y de reproducibilidad establecidas por las
normas UNE 82009-2 y UNE 82002-3 (USP 1225, 2010).
Se recomienda realizar el estudio de la robustez en una etapa previa a la validacin del
mtodo analtico para as identificar las variables que tienen un efecto ms
significativo, fijar sus niveles ptimos de forma que el mtodo sea robusto, y controlar
cuidadosamente aquellos factores que causan ms variabilidad en la respuesta cuando
se aplica el mtodo. Si la evaluacin de la robustez se realiza durante la validacin se
corre el riesgo de validar un mtodo poco robusto, dando lugar a resultados variables,
con la consiguiente prdida de tiempo y dinero (Vander Heyden et al., 2001).
Todos los mtodos de anlisis son susceptibles de ser sometidos a un estudio de
robustez. La forma de evaluar la robustez consiste en introducir deliberadamente
variaciones razonables en las condiciones experimentales y observar su influencia. El
esquema a seguir para la evaluacin de la robustez de un mtodo analtico es el
siguiente (Dejaegher et al., 2007):
En primer lugar, se seleccionan los factores que previsiblemente puedan afectar
al resultado al cambiar de laboratorio, analista o instrumento; estos factores
pueden ser tanto operacionales como medioambientales (Vander Heyden et al.,
1998).
Se establece el margen de variacin de los factores cuya influencia se quiere
investigar. El intervalo de fluctuacin de los factores a ensayar debera representar
14
15
Representatividad
La representatividad en qumica analtica es sinnimo de coherencia, concordancia y
consistencia de los resultados generados respecto a las muestras recibidas en el
laboratorio. A su vez las muestras deben ser representativas del objeto de estudio
(Cmara et al., 2002).
Durante la validacin se evaluarn las caractersticas tcnicas de un mtodo analtico
que posteriormente se aplicar a muestras con matrices analticas de complejidad
variable. Por tanto, para mantener la representatividad, los ensayos de validacin
debern ser realizados sobre muestras de control o patrones lo ms parecidos posible
a las muestras reales. Esto implica el empleo, durante los experimentos de validacin,
de muestras reales dopadas con el analito de inters o, preferentemente, de
materiales de referencia certificados.
Selectividad/especificidad
Selectividad es la capacidad de detectar, simultanea o separadamente, sustancias
qumicas diferentes presentes en una misma muestra. Frecuentemente el trmino
selectividad se utiliza como sinnimo de especificidad, siendo esta la capacidad de
detectar el analito sin interferencias de ningn otro compuesto. Como existen muy
pocos mtodos que den respuesta slo a un nico analito, el termino selectividad es
normalmente ms apropiado (Aboul-Enein, 2000; Boqu, 2005; Den Boef et al., 1983;
Vessman et al., 2001). Pero la realidad es que los mtodos no son selectivos y las
interferencias o perturbaciones alteran alguna, varias o todas las etapas del proceso de
anlisis dando lugar a errores en los resultados finales.
La selectividad de un mtodo de anlisis depende del tipo de muestra, del propio
mtodo por la complejidad de las operaciones que conlleva, de la capacidad de
discriminacin de la tcnica instrumental, etc. Su cuantificacin es compleja dada la
dificultad tcnica de realizar un estudio de todas las interferencias a diferentes niveles
de concentracin y en varias matrices. El diseo del proceso experimental para su
evaluacin depender del conocimiento de las interferencias que potencialmente
pueden perturbar el proceso analtico (qumicas, fsicas, instrumentales ...), del tipo de
muestra y del grado de veracidad requerido para la validacin del mtodo.
Las pruebas a realizar para asegurar cualitativamente la selectividad de un mtodo
podrn ser diferentes en funcin del tipo de muestra a analizar, la tcnica utilizada, la
informacin bibliogrfica disponible, etc. Usualmente, la selectividad de un mtodo se
investiga mediante el estudio de su capacidad para medir el analito de inters en
alcuotas de muestra a las cuales se aaden deliberadamente interferencias especficas
(aqullas que se cree probable estn presentes en las muestras). Si no se est seguro
de que las interferencias estn presentes, la selectividad de un mtodo se puede
investigar estudiando su capacidad de medir el analito mediante comparacin con
otros mtodos o tcnicas independientes insensibles a los interferentes potenciales
16
del mtodo a validar (Bagur et al., 2005; Gonzlez et al., 2007a; Eurachem/Citac, 1998;
AEFI, 2001).
La selectividad se puede cuantificar mediante la evaluacin de los siguientes
parmetros:
Relacin mxima tolerada de un interferente, RT, es la relacin entre la
concentracin mxima admisible de interferente para una concentracin dada de
analito por encima de la cual la perturbacin causada por el interferente hace que
la concentracin de analito determinada difiera significativamente de la
concentracin de analito obtenida en ausencia de interferente (Gonzlez et al.,
2007a; Thompson et al., 2002).
RT
Cint
Canal
ec. 2.1
S anal
S int
ec. 2.2
RTmtodo1
RTmtodo2
ec. 2.3
17
(y-y) = 0.03y
y
y
yLoQ
yLoD
10sB 3.29sB
yB
CLoQ
CLoD
Intervalo lineal
x =Concentracin
Intervalo de trabajo
Fig. 2.1: Representacin grfica seal/concentracin (Eurachem/Citac, 2011)
18
x
Fig. 2.2: Suposiciones hechas por el Modelo I para el anlisis de la regresin lineal
y bx
yi b xi
n
xi yi
( x i x) ( y i y) x i y i n
x i 2
( x i x) 2
2
x
i
n
ec. 2.4
ec. 2.5
donde xi e yi son cada par de puntos concentracin y respuesta, x e y son los valores
promedio de las concentraciones y respuestas y n el nmero de pares de puntos de la
lnea de calibrado.
Otros supuestos que se hacen habitualmente son: (i) si se realizan varias medidas
sobre un patrn, los valores resultantes de y tienen una distribucin de errores normal
o Gaussiana; (ii) la magnitud de los errores en los valores de y es independiente de la
concentracin del analito. Si es cierta esta segunda afirmacin, implica que todos los
puntos del grfico deberan tener en los clculos igual peso, es decir, que es
igualmente importante que la lnea pase cerca de los puntos con valores de y altos o
bajos. Sin embargo, en la prctica hay ejemplos donde los errores en el valor de y
20
x
Fig. 2.3: Suposiciones hechas por el Modelo II para el anlisis de regresin de distancia ortogonal
se
y i y i 2
n2
ec. 2.6
21
x i x i
100
xi
ec. 2.7
y i y (*)i
ec. 2.8
p s 2e
donde yi son los valores predichos con la lnea de regresin calculada con todos los
puntos, y(*)
i son los valores predichos con la lnea de regresin calculada
eliminando el sospechoso; p son los coeficientes del modelo de regresin (2 para
una recta). Cuanto mayor es CD2(*), mayor es la probabilidad de que el outlier no
sea representativo de la regresin, siendo 1 el valor mnimo para rechazar el
punto sospechoso. Este criterio es ms sensible a los valores sospechosos de la
lnea de calibrado que el anterior (Bonilla Campos et al., 2001; Henderson, 2006;
Massart et al., 1997).
El coeficiente de correlacin de Pearson, r, nos indica el grado de relacin entre la
variable x y la variable y.
x i x y i y
2
2
x i x y i y
xi yi
xi yi n
x i 2 2 y i 2
2
xi
yi
n
n
ec. 2.9
valores muy bajos o intermedios como falta de ella (Sonnergaard, 2006; Van Loco et
al., 2002), sino que debe ser demostrado aplicando por ejemplo una prueba estadstica
como t de Student adecuada (ver Tabla 2.2) para ver si la correlacin es significativa
(Miller et al., 2002).
El coeficiente de determinacin, r2, indica la proporcin de la varianza total de y que se
explica por el modelo de mnimos cuadrados. Puede expresarse en porcentaje.
Otra forma de demostrar que la relacin que liga las variables es correcta y no hay
falta de ajuste es mediante un anlisis de varianza, ANOVA (ANalysis Of VAriance).
Mediante este anlisis se compara la varianza debida a la falta de ajuste, con la
varianza experimental estimada a travs de medidas replicadas de la variable
observada, (Comisin Europea, 2009; Gonzlez et al., 2006; Massart et al., 1997).
La presencia de error residual implica errores aleatorios en la estimacin de la
pendiente y la ordenada en el origen de la recta de calibrado, sa y sb, que a su vez se
propagan al resultado final ya que la concentracin de las muestras se obtiene por
interpolacin en la recta de calibrado. Esos errores se estiman mediante las siguientes
ecuaciones:
se
sb
sa
x i x
ec. 2.10
x i2
2
n x i x
ec. 2.11
se
b r t sb
ec. 2.12
a r t sa
ec. 2.13
donde t es el valor de la distribucin t de Student para un test de dos colas con n-2
grados de libertad y nivel de significacin igual a 0.05 (De Beer et al., 2007a; Fustinonia
et al., 2010; Massart et al., 1997; Miller et al., 2002). A la vista de los resultados podr
decidirse la frecuencia del calibrado (cada da, cada semana).
23
Pendiente
Criterio
Prueba de significacin
0 b r t sb
Ordenada
0 a r t sa
Coeficiente
de
correlacin
rz0
f
Factores de
respuesta
%DER
t cal
t cal
t cal
yi
xi
ANOVA
sb
a
sa
Si b = 0 la recta es paralela al
eje de abscisas y no habra
correlacin. A mayor b
mayor sensibilidad
Si a difiere
significativamente de 0
evidencia errores
sistemticos (no aplicable al
MAP)
n 2
1 r
2
----
sf
100 10
f
Fcal
Falta de
ajuste
Observaciones
MSFdA
< Ftab (0,05,(n-2) y (k-n)
MSPE
MS: media cuadrtica
FdA: Falta de ajuste
PE: Puro error
Sensibilidad
Se define sensibilidad de un mtodo analtico como la capacidad para discriminar
concentraciones semejantes del analito a determinar. Una definicin ms general de
sensibilidad es la relacin entre la seal, y, y la concentracin, x, esto es, la variacin
de la seal analtica por unidad de concentracin. Por tanto, la sensibilidad es mayor
24
1D t (1E) s y 2
2
ec. 2.14
y LoD
y B k D sB
ec. 2.15
25
entre los errores D y E y el lmite de decisin. Para un D dado, E puede llegar a ser
hasta un 50% cuando la seal detectada coincida con el lmite de decisin.
Ld
Ld
Fig. 2.4: Relacin entre lmite de decisin y los errores D y E suponiendo que la seal analtica sigue una
distribucin normal
y Ld
y B k d sB
y B 1.645 sB
ec. 2.16
y LoD
y B 3.29 sB
1.645sB
ec. 2.17
3.29sB
Ld
LoD
y LoQ
y B k Q sB
y B 10 sB
ec. 2.18
( y LoD )
3.29 sB
ec. 2.19
10 sB
ec. 2.20
( y LoQ )
a 3.29 s e
ec. 2.21
a 10 s e
ec. 2.22
27
10
5
0
LoQ
Concentracin
10
28
Una vez obtenidos unos LoD y LoQ tericos resulta evidente la necesidad de hacer la
comprobacin experimental de que los valores obtenidos cumplen las condiciones de
exactitud requeridas.
A la hora informar de los lmites de deteccin y cuantificacin de un mtodo analtico
hay que tener en cuenta algunas consideraciones:
Cuando para una muestra se informa de un resultado negativo, no se est diciendo
que el analito no se encuentra en la muestra, sino que est en concentracin inferior al
lmite de deteccin del mtodo. El informe no debe decir no existe, sino no se
detecta, indicando al mismo tiempo tanto el lmite de deteccin como el lmite de
cuantificacin del mtodo (Ramis Ramos et al., 2001).
Con frecuencia estos lmites se expresan en unidades de masa para lo cual se
multiplican los lmites, en unidades de concentracin, por la masa o volumen de
muestra requerido por el mtodo.
Dado que en todos los casos los lmites de deteccin y cuantificacin se estiman a
partir de la seal del blanco y su varianza, y esta suele aumentar con la complejidad de
la matriz de la muestra y del mtodo analtico, debe indicarse el tipo de estndares o
muestras con las que se han medido los blancos (Ramis Ramos et al., 2001).
Una alta sensibilidad del mtodo analtico no siempre implica lmites de cuantificacin
y deteccin inferiores, ya que lo que definir estos lmites es la relacin entre la seal
debida al analito y el ruido; es decir, es preferible un sistema con bajo ruido de fondo a
costa de una menor sensibilidad.
Exactitud
El objetivo de un anlisis qumico es encontrar el valor verdadero, P. Sin embargo, esto
en la realidad no es posible ya que normalmente los resultados obtenidos, xi, estn
afectados por un error, ei, que es la diferencia entre el valor obtenido y el valor
verdadero, ei=xi-P. Este error es lo que la ISO llama exactitud y define como la
concordancia entre un resultado de un test o resultado de medicin y el valor
verdadero (en la prctica valor de referencia aceptado). En el caso de disponer de
varias medidas la concentracin de analito se estima mediante la media de las
medidas, x i pudiendo dividir la ecuacin en dos trminos:
ei
xi P
( x i x i ) ( x i P)
ec. 2.23
29
Veracidad
La veracidad es la concordancia entre el valor medio de una serie de medidas, x i y el
valor aceptado como referencia o valor verdadero, . Se relaciona con la ausencia de
sesgo o bias, , esto es, con la ausencia de error sistemtico. El sesgo se estima como
la diferencia entre el valor medio experimental y el valor verdadero. La ISO define el
valor verdadero como el valor que caracteriza una cantidad perfectamente definida en
las condiciones que existen en el momento en el que tal cantidad es observada (UNEISO 3534-1, 2006; UNE-ISO 3534-2, 2006).
Las desviaciones respecto al valor verdadero pueden ser tanto por exceso como por
defecto. Algunas fuentes de error que producen frecuentemente sesgo en el resultado
son: la presencia de interferencias analticas, prdidas de analito por extraccin
incompleta, volatilizacin o adsorcin, contaminacin de la muestra por los reactivos o
por el material empleado... (Magnusson et al., 2008).
El valor de referencia, , con el cual comparamos nuestro valor experimental se puede
obtener de las siguientes formas:
Analizando una muestra de referencia o muestra de control que puede ser: un
material de referencia certificado (MRC), un material de referencia (MR)/Patrn
Qumico (PQ) o una muestra obtenida a partir de un ejercicio interlaboratorio.
Estos materiales de referencia han de cumplir obligatoriamente una serie de
propiedades como son: (i) la concentracin del analito debe estar incluida en el
intervalo de concentracin indicado en nuestro mtodo de ensayo y cuya matriz
tenga una composicin similar a las de la muestras, (ii) siempre que sea posible, el
material de referencia debe poseer propiedades que se mantengan estables a lo
largo del experimento, (iii) cuando un material de referencia se subdivida, es
necesario tener cuidado para evitar la introduccin de cualquier error adicional y
para evitar la prdida de homogeneidad, (iv) la cantidad de material de referencia
debe ser suficiente para la evaluacin de la veracidad, incluyendo una cierta
cantidad de reserva (Funk et al., 2007; Valcrcel et al., 1992).
Cuando no se disponga de un material de referencia externo adecuado se puede
recurrir a una de las siguientes tcnicas (Daz-Guerra et al., 2000; Magnusson et al.,
2008):
Comparacin con un mtodo de referencia. Comparacin de los resultados
obtenidos para una muestra analizada por el mtodo a validar y por un mtodo de
referencia en el propio laboratorio. El mtodo de referencia debe haber sido
previamente validado y ser aplicable a nuestro tipo de muestras. El mtodo de
referencia elegido debe tener el mismo alcance que el mtodo a validar (De Beer
et al., 2007b; Eurachem/Citac, 1998; Kuttatharmmakul et al, 1999; Nguyen Minh
Nguyet et al., 2004; Sacr et al., 2011; UNE 82009-6, 1999).
Mediante la participacin en un ejercicio interlaboratorio, ya sea del tipo
colaborativo (AOAC, 2002a; Wells, 1998) o ensayos de aptitud (Boqu et al., 2002;
Willetts et al., 2000; Zeleny et al., 2009), donde el valor de referencia es el valor
consensuado por los participantes o bien un valor asignado por el organizador.
30
(b)
Paadido
Paadido
Fig. 2.7: Representacin grfica del anlisis de muestras dopadas a varias concentraciones: (a) En una
matriz ausente de analito (b) en una matriz conteniendo analito. R = Recuperacin
Paadido
Fig. 2.8: Relacin entre analito aadido y determinado: (a) ausencia de error sistemtico (b=1; a=0), (b)
presencia de error sistemtico constante(b=1; az0), (c) presencia de error sistemtico proporcional
(bz1; a=0), (d) combinacin de distintos errores (bz1; az0),
31
ec. 2.25
xi
100
P
ec. 2.26
xi
100
P aadida
ec. 2.27
x i x matriz
100
P aadida
ec. 2.28
%R
%R
ec. 2.24
xi P
100
P
%Er
%R
xi P
32
33
34
Anlisis de
muestras dopadas
Comparacin de
mtodos
MRC o muestras
provenientes de
ejercicios
interlaboratorio
Comparacin: Rectas de
calibrado patrn externo
y adiciones patrn
Concentracin observada
frente a aadida
Evaluacin en %R
Evaluacin en % Er
Valor de referencia
H1 : x z P
2
sb1
k , b 1 H1: a z k , b z 1
2
sb2
b 2 H1: b1 z b 2
comparables (Prueba F)
H0: b1
H0: a
Recta de regresin
(amplio rango de concentracin)
H0: a 0 , b 1 H1: a z 0 , b z 1
H0: x x ref
H1: x z x ref
2
2
s y sref no comparables
(Prueba F)
H1: x z x ref
H0: x x ref
2
2
s y sref comparables
(Prueba F)
H0 : %R 100 H1 : %R z 100
H0 : x
Hiptesis
t cal
t cal
sa
a0
100
2
(nref 1) sref
(n 1) s 2
nref n 2
t cal
t cal
sd
di
t cal
t cal
sa
ak
2
b1
s b22
b1 b 2
t cal
sb
b 1
sb
b 1
s ref
s 2
nref
n
s ref
s4
2
nref (nref 1) n (n 1)
s2
s%R
%R 100
s n
xP
t cal
d x x ref
2
s ref
s 2
n ref
n
x x ref
1
1
s 2
nref n
x x ref
t cal
t cal
Estadstico
Criterio aceptacin H0
36
x i x
s
i 1
ec. 2.29
n 1
x i x
i 1
ec. 2.30
%DER
s
x
s
100
x
ec. 2.31
ec. 2.32
n1 1 s12 n 2 1 s 22 ...
n1 1 n 2 1 ...
ec. 2.33
37
xi
Factor 2
Valor x ijk
1
x 11
j
x 1j
n
x 1n
1
x i1
j
x ij
x in
x p1
j
x pj
n
x pn
Fig. 2.9: Esquema del diseo experimental completamente anidado de dos factores para un
nivel de concentracin N
38
Media cuadrtica
x i x
Factor 1
Varianza
p-1
n V12 V 22
MS1 MS2
n
p(n-1)
V 22
MS2
p 1
x ij x i
Factor 2
Estimador de
i 1
MS1
gdL
MS2
i 1
j 1
p (n 1)
Diseo de experimentos anidado para tres factores, donde los niveles de cada
factor son q p y n niveles respectivamente
x
Factor
Factor 1
xi
Factor 2
1 . . j
x ij
Factor 3
Valor x ijk
x 1j1
x 1jk
x 1jn
x ij1
x ijk
x ijn
x qj1
x qjk
x qjn
Fig. 2.10: Esquema del diseo experimental completamente anidado de tres factores para un
nivel de concentracin N
Tabla 2.5: ANOVA para un diseo completamente anidado de tres factores
Factor 3
Factor 2
Factor 1
Fuente
Media cuadrtica
q
pn
x i x
Varianza
q-1
p n V12 n V 22 V32
MS1 MS2
pn
q(p-1)
n V 22 V 32
MS2 MS3
n
qp(n-1)
V 32
MS3
q 1
n
MS2
i 1
j 1
x ij x i
q (p 1)
x ijk x ij
MS3
Estimador de
i 1
MS1
gdL
i 1
j 1
j 1
q p (n 1)
39
xi
Factor 2
Factor 3
x ijkn
x mjk1
x mjkl
x mjkn
x ij
x ijk
Factor 4
x 1jk1
Valor x ijk
x 1jkl
x 1jkn
x ijk1
x ijkl
Fig. 2.11: Esquema del diseo experimental completamente anidado de cuatro factores para
cada nivel de concentracin N
Tabla 2.6: ANOVA para un diseo completamente anidado de 4 factores
Media cuadrtica
Factor 4
Factor 3
Factor 2
Factor 1
Fuente
qpn
gdL
x i x
m-1
i 1
MS1
m 1
pn
MS2
i 1
j 1
x ij x i
Varianza
q p n V12 p n V 22
MS1 MS2
qpn
n V 32
V 24
m(q-1)
p n V 22 n V32 V 24
MS2 MS3
pn
mq(p-1)
n V 32 V 24
MS3 MS4
n
mqp(n-1)
V 24
MS4
m (q 1)
n
MS3
i 1
j 1
k 1
x ijk x ij
m q (p 1)
x ijkl x ijk
MS4
Estimador de
i 1
j 1
k 1 n 1
m q p (n 1)
40
varianza (ASTM E691, 2009, SEQC, 2009; UNE 82009-2, 1999; Vander Heyden et al.,
2007).
Tabla 2.7: Clculos para la estimacin de la precisin segn la UNE 82009-2 para un ensayo
interlaboratorio
Reproducibilidad
interlaboratorio
Factor 1
Fuente
Media cuadrtica
gdL
Estimaciones insesgadas
Varianza
n VL2 Vr2
p
MSL
ni x i x
i 1
p-1
p 1
p
1
ni
p 1 i 1
ni2
MSL MSr
n
i 1
p
ni
Repetibilidad
Factor 2
MSr
p
ni
i 1
j 1
x ij x i
MSr
Np
V r2
N-p
ni
i 1
(ni 1) s i2
sr
i 1
(ni 1)
i 1
41
Una de las causas que dan lugar a varianzas negativas es, como hemos dicho, una
incorrecta situacin de los factores en el diseo anidado, pero tambin pueden darse
por la presencia de outliers, por un nmero de respuestas insuficiente para una
adecuada estimacin de la varianza, o que la variabilidad de las medidas sea muy
grande por haber omitido factores influyentes que actan como ruido.
Dado que valores negativos de la varianza carecen de sentido fsico, para tratar
estimaciones negativas de este estadstico existen varias opciones:
Detectar la presencia de outliers durante el desarrollo del diseo de
experimentos eliminndolos o repitiendo los anlisis si fuera posible.
Aceptar la estimacin negativa reconociendo que, para clculos subsecuentes,
los resultados pueden no tener sentido.
Suponer que el valor verdadero de la varianza del factor es cero, es decir, un
cambio en el nivel del factor produce una variacin insignificante en los
resultados; la varianza estimada para ese factor no estar, por tanto, incluida en la
varianza total de reproducibilidad (Boti et al., 2007; Kuttatharmmakul et al., 1999;
Nguyen Minh Nguyet et al, 2004; Maroto et al, 2001a; Prado et al., 2009).
Aplicar un modelo estadstico distinto, por ejemplo, combinando las varianzas
obtenidas o aplicando el modelo de mxima verosimilitud restringida (REML)
(Ellison et al., 2012; Vander Heyden et al., 1999).
Una opcin ms drstica supondra repetir de nuevo el diseo de experimentos,
recolocando los factores o aumentando el nmero de niveles de los factores y/o
rplicas para tener ms datos y estimar mejor las varianzas.
Cuando no se dispone de datos suficientes para una evaluacin fiable de la precisin se
puede hacer una estimacin a partir de la ecuacin de Horwitz (Horwitz, 1982). Esta
ecuacin modela una reproducibilidad terica, llamada de Horwitz, sH, en funcin de la
concentracin, ec. 2.34 y ec. 2.35, relacionando la variabilidad de los resultados
obtenidos en pruebas interlaboratorios en funcin de la concentracin del analito en
muestras. El modelo es independientemente del analito, de la matriz, del mtodo, y
del tiempo de anlisis (Albert, 1997). La curva es de gran ayuda en la interpretacin de
resultados permitiendo comparar la precisin estimada por el laboratorio y la predicha
por la ecuacin de Horwich o para fijar los objetivos de calidad.
%DERH
sH
2(10.5logC)
0.02 C0.8495
ec. 2.34
ec. 2.35
La concentracin, C, se expresa como fraccin decimal (p.e. para 1 mgL-1 = 10-6 gg-1)
Para un laboratorio concreto, suelen ser aceptables valores de reproducibilidad, como
deviacin estndar relativa, sR, de 0.5 a 2 veces el valor predicho por la ecuacin, sH. Se
ha encontrado, adems, que la variabilidad de laboratorio, sr, se espera que sea de 1/2
42
sHT
sHT
0.22 C
C 1.2 10 7
0.02 C0.8495
0.01 C0.5
C ! 0.138
ec. 2.36
t f 2 sRr
2.8 sr
2.8 sR
ec. 2.37
ec. 2.38
43
prximo con todo el intervalo. En la Tabla 2.8 se recogen las ecuaciones empleadas
para el clculo del estadstico, Q, dependiendo del tamao muestral. El valor Q
calculado se compara con un valor crtico, Qcrtico indicado en una tabla de dos colas
para un nivel de significacin D y un tamao muestral n (Massart et al., 1997; Miller et
al., 2002).
Tabla 2.8: Test de consistencia numrico Q de Dixon
Tamao
muestral, n
Valor
sospechoso
x1
Estadstico
Q10
3dnd7
xn
Q10
x1
Q11
xn
Q11
x1
Q 22
xn
Q 22
8 d n d 12
n t 13
Criterio de aceptacin
( x 2 x1 )
( x n x1 )
x n x n1
x n x1
x 2 x1
x n1 x1
x n x n1
x n x 2
x 3 x1
x n2 x1
x n x n2
x n x 3
Las normas UNE (UNE 82009-2, 1999) y ASTM (ASTM E691, 2009) recomiendan aplicar
test de consistencia grficos h y k y test numricos C y G para la deteccin de
resultados anmalos obtenidos durante la realizacin de los diseos de experimentos
(Dehouck et al., 2003b):
Aunque aplicados habitualmente a los resultados de los ensayos interlaboratorio, estos
estadsticos se pueden adaptar a medidas intralaboratorio cambiando el factor
laboratorio por el factor que se desea variar (analista, instrumento, tiempo...).
La Tabla 2.9 recoge las expresiones para el clculo de los estadsticos h y k de Mandel.
El estadstico h (entre-laboratorios) compara el valor medio para cada nivel de
concentracin con el valor asignado. A mayor valor absoluto, _h_, menor consistencia
entre los resultados medios de un laboratorio particular respecto al resto de
laboratorios. El estadstico k (intra-laboratorio) compara, en cambio, la desviacin
tpica de las rplicas con la desviacin tpica combinada o de repetibilidad. Si k = 1 la
variabilidad de ese laboratorio es igual a la del resto, si k > 1 su variabilidad es mayor y
por ltimo si k < 1 su variabilidad es menor. Valores altos de k representan variabilidad
intra-laboratorio mientras que valores pequeos pueden indicar escasa sensibilidad en
las escalas de medicin u otros problemas asociados a las mediciones (SEQC, 2009).
44
h, Entre-laboratorios
Estadstico
Criterio de aceptacin
Si h d hcrtico (0.05, p) el valor sospechoso se toma como correcto.
Si hcrtico (0.05, p) d h d hcrtico (0.01, p) el valor sospechoso se toma como
extrao
Si h > hcrtico (0.01, p) el valor sospechoso es anmalo
x ij x j
pj
x ij x j
i 1
pj 1
k, Intra-laboratorios
s ij p j
sij2
Cochran
2
s max
si2
i 1
Es un test de valores anmalos de una cola pues solo examina el valor ms alto
smax es la desviacin tpica de mayor valor del conjunto
p = n de laboratorios participantes
n = n de rplicas realizadas
1
xp
Gp
1
p 1
Grubbs
Criterio de aceptacin
G1
xi
i 1
x i x
i 1
x i x1
i 1
p 1
x i x
i 1
En este test los valores deben ser ordenados de forma ascendente x i = (i=1,2,3,....,p)
p el nmero de laboratorios participantes
45
En principio se asume que solo existen pequeas diferencias entre las varianzas interlaboratorio; la experiencia, no obstante, indica que no siempre es este el caso y que
debe incluirse el estadstico de Cochran para verificar la validez de esta hiptesis. Este
se refiere a la variabilidad intra-laboratorio y debera ser aplicado en primer lugar. El
estadstico de Grubbs es bsicamente un ensayo de la variabilidad inter-laboratorios
que detecta si las observaciones ms alejadas son incompatibles con el resto. Puede
ser utilizado solo si p > 2 y all donde el ensayo de Cochran haya detectado valores
anmalos que afectan a las varianzas (UNE 82009-2, 1999).
Estos test se aplican secuencialmente hasta la eliminacin de los outliers. En ningn
caso se deben eliminar ms de 2/9 de los valores y se deben mantener vlidos como
mnimo 8 valores (AOAC, 2002a; UNE 82009-1, 1998).
Rango de medida
Durante la validacin se debe comprobar que el mtodo se aplica adecuadamente
para el propsito que se quiere, en un rango de concentracin de analito definido o
rango de medida, definido como el intervalo comprendido entre el lmite de
cuantificacin y la mxima concentracin que se demuestre que se puede determinar
(Esters et al., 2006; FDA, 2000; FDA, 2001; ICH, 2005; Thompson et al., 2002). En el
caso de mtodos de ensayo en que no est permitido diluir, el lmite superior del
rango de medida coincidir con el lmite superior del intervalo de ensayo. En aquellos
ensayos en los que se permita la dilucin, se debe indicar la mxima dilucin permitida
(Damen et al., 2009; Khan et al., 2005; Patel et al., 2008).
Se establece inicialmente un lmite superior de cuantificacin (ULQ o LS) para el rango
de medida terico de acuerdo a las mximas concentraciones posibles a encontrar en
las muestras reales o a la bibliografa. Una vez establecido el lmite superior para el
rango de medida solo queda comprobar que es posible determinarlo con un grado de
confianza adecuado, es decir, la exactitud e incertidumbre estimadas a esta
concentracin deben estar por debajo del valor impuesto como objetivo de calidad y
no debe diferir mucho de los estimados a otras concentraciones menores (Findlay et
al., 2000; Hubert et al., 2004; Shewiyo et al., 2012).
Establecer lmites superiores para el rango de medida muy por encima de los que se
puedan encontrar comnmente en las muestras reales complica la validacin pues
obliga a hacer diluciones, pudindose incluso superar los objetivos de calidad en
cuanto a la veracidad, precisin o incertidumbre del mtodo de ensayo.
2.3.3. INCERTIDUMBRE
Un requisito fundamental del proceso de validacin es establecer la incertidumbre de
medida del mtodo de ensayo. Esta incertidumbre de medida viene definida en el
Vocabulario Internacional de Metrologa, VIM (BIMP, 2008) como la estimacin que
caracteriza el intervalo de valores en el que se sita, generalmente con una alta
probabilidad, el valor verdadero de la magnitud de medida. La estimacin de la
46
47
Desviacin tpica
experimental
Varianza
experimental
Varianza experimental de la
media aritmtica
Incertidumbre
tpica
48
Rectangular, cuando solo conocemos los lmites inferior, a-, y superior, a+, de la
magnitud medida, siendo cualquiera de los valores intermedios igualmente
probables. Un ejemplo de esta distribucin rectangular sera la temperatura de un
laboratorio sin aire acondicionado, si por ejemplo en el intervalo de un ao los
extremos de temperatura registrados son 18-25qC su incertidumbre tpica sera de
3.5/3 y cubrira el 58% de los valores.
Triangular, si igualmente conocemos los lmites inferior, a- y superior, a+, de la
magnitud medida, pero los valores centrales tienen una alta probabilidad. Si
seguimos con el mismo ejemplo de temperatura de un laboratorio, pero esta vez
con aire acondicionado, y sabemos que la temperatura en un intervalo de un ao
es 21r2.5qC su incertidumbre tpica sera de 2.5/6 y cubrira el 65% de los
valores.
La Fig. 2.13 representa esquemticamente las tres distribuciones anteriormente
mencionadas.
(a)
(b)
(c)
a
r2s = 95%
a
2a
u(xi)
u( xi )
I
2
u( xi )
a
3
a
a
a
2a
u(xi)
u( xi )
a
6
Fig. 2.13: Funciones de distribucin de datos (a) normal, (b) rectangular y (c) triangular
t D / 2,Q u c2
ec. 2.39
u c4
n
i 1
u( x i ) 4
Qi
ec. 2.40
Este estadstico suele ser sustituido por un factor de cobertura K = 2 asumiendo que se
trata de una distribucin normal de las varianzas. De esta forma la incertidumbre
expandida asociada a la medida se corresponde con una probabilidad de cobertura de,
aproximadamente, un 95% (JCGM 100, 2008).
Ms recientemente, distintos organismos internacionales como Eurolab (European
Federation of National Associations of Measurement, Testing and Analytical
Laboratories) (Eurolab 1/2002, 2002; Eurolab 1/2007, 2007), Eurachem, ILAC
(International Laboratory Accreditation Cooperation), EA (European Co-operation for
Accreditation) y la misma ISO han propuesto, en base a la GUM, otras normas y
documentos de ayuda para la estimacin de la incertidumbre asociada a las medidas
de anlisis qumicos. Dependiendo de la informacin disponible, por ejemplo, datos
obtenidos durante la validacin de un mtodo de ensayo, datos recopilados durante la
participacin en estudios colaborativos y/o ensayos de aptitud, datos obtenidos de los
controles de calidad, se diferencian distintos modelos para la estimacin de la
incertidumbre, algunos de los cuales se esquematizan en la Fig. 2.14.
La metodologa a seguir en la estimacin de la incertidumbre asociada a una medida
qumica es, para todos los modelos, la indicada anteriormente. Su diferencia es el
origen de la informacin para la cuantificacin de las fuentes de incertidumbre. A
continuacin se describen con detalle los modelos de estimacin de la incertidumbre
ms empleados e indicados en la Fig. 2.14.
A pesar de presentarlos de forma independiente, la tendencia actual es estimar la
incertidumbre de medida mediante la combinacin de varios modelos,
denominndolos modelos hbridos (Eurachem/Citac, 2012; Eurolab, 2007).
En la prctica, los valores de incertidumbre estimados por los distintos modelos son
diferentes por varias razones: (i) establecimiento de modelos matemticos
incompletos para la estimacin de la incertidumbre, por ejemplo efectos desconocidos
o, (ii) variaciones no representativas o incompletas de las fuentes de error durante su
evaluacin. La comparacin de dos estimaciones es, en consecuencia, til como
aseguramiento de la integridad del modelo. La forma ms habitual de corregir las
deficiencias de un modelo una vez identificadas es mediante la adicin de
50
Incertidumbre
Modelos
interlaboratorio
Modelos
intralaboratorio
SI
Propagacin de
distribuciones
Modelo Monte Carlo
Modelo
e
estadstico
Ensayos
de aptitud
Ensayos
programados
Evaluacin de
las incertidumbres
tpicas
Propagacin de
errores Modelo
bottom up
Ejercicios
colaborativos
NO
Modelo
matemtico
Evaluacin de
mtodos de anlisis
Evaluacin de
laboratorios
UNE EN 82009
ISO TS 21748
UNE EN ISO
17043
ISO 13528
Mtodo de validacin
EUR 18405
In-house
Modelos matemticos
Modelos empricos
Fig. 2.14 Esquema de los distintos modelos para la estimacin de la incertidumbre (Desenfant et al.,
2006)
f ( X1, X 2 , X 3 .....Xi ) y
f ( x1, x 2 , x 3 .....x i )
ec. 2.41
La primera funcin describe como se obtiene el valor del mensurando Y a partir de los
valores de las variables de las que depende Xi. Una estimacin individual y de dicho
51
V J u(T )
ec. 2.42
53
Medida de masa
Esta magnitud est afectada por contribuciones como la repetibilidad, falta de
linealidad en el rango de medida, sensibilidad, resolucin Normalmente las que ms
afectan a la incertidumbre de medida suelen estar incluidas en la incertidumbre de
calibracin de la balanza. De este modo, la forma ms eficiente de evaluar la
incertidumbre tpica de la medida de masa es a partir de la incertidumbre indicada en
el certificado de calibracin de la balanza. Es una contribucin que suele afectar
mnimamente a la incertidumbre total excepto cuando se pesan productos muy
voltiles o propensos a cargarse elctricamente. En este caso se deben realizar
experimentos adicionales de repetibilidad.
Pureza de reactivos y concentracin de disoluciones patrn
Cuando un reactivo qumico es empleado para elaborar una disolucin patrn se debe
tener en cuenta su pureza para obtener la cantidad real de sustancia pesada. La pureza
del reactivo, por tanto, es una contribucin a la incertidumbre final. Si la pureza
certificada por el fabricante del reactivo qumico viene expresada como un valor
central con un intervalo (por ejemplo 99.8%r0.1%), se considerar una distribucin
triangular, pero si se expresa como un rango de valores (por ejemplo 99.7%-99.8%)
entonces se considerar del tipo rectangular. Cuando el certificado del reactivo no
contiene informacin acerca de la incertidumbre pero indica que la pureza es superior
a un valor dado (por ejemplo t 99.8%) se considerar el intervalo desde el valor
mnimo hasta el 100% (99.8-100) como los lmites de una distribucin rectangular. Si el
certificado de anlisis solo indica un valor de pureza, por ejemplo 99.98, esto significa
que este valor estar centrado en un intervalo 99.98ra que el analista deber decidir,
por ejemplo, una o varias unidades de la ltima cifra significativa o un porcentaje del
valor certificado. Las disoluciones patrn comerciales suelen venir acompaadas de un
certificado que indica la concentracin y su error junto con un factor de cobertura por
lo que se asume una distribucin normal; de lo contrario, el error indicado se
corresponde con los lmites de una distribucin rectangular (Meyer, 2007; van Look et
al, 2002).
Masas atmicas y moleculares
Solo en algunas tcnicas analticas, como por ejemplo las volumetras, aparecen las
masas atmicas o moleculares en la ecuacin del mensurando, las cuales deben ser
consideradas como contribucin a la incertidumbre. Tambin aparecen en las
ecuaciones de clculo de concentracin cuando el analito es solo una parte del
compuesto qumico, por ejemplo en la concentracin de cloruro preparada a partir de
una sal sdica (Meyer, 2003). Para el clculo de esta incertidumbre la IUPAC publica
regularmente los pesos atmicos y sus incertidumbres, las cuales deben ser tomadas
como distribuciones rectangulares (Coplen, 2001; de Laeter et al., 2003; Wieser et al.,
2009; Wiese et al., 2011).
54
Recta de calibrado
En el apartado de linealidad se indic que se emplear la tcnica de regresin Modelo I
para generar la ecuacin que relaciona la respuesta analtica con la concentracin y as
obtener la concentracin x0 de analito en una muestra la cual origina una respuesta
observada en el instrumento, y0. Este modelo asume que la principal fuente de
incertidumbre a considerar para esta concentracin, x0, es la variacin de las
respuestas de los patrones de calibracin, yi. La determinacin del error en la
concentracin debido a estas variaciones, u(x0,y), es extremadamente compleja y
normalmente se emplea la siguiente frmula aproximada:
y 0 y
se
1 1
b
m n b2
x i x 2
2
u( x 0 , y )
se
1 1
b
m n
x 0 x 2
2
x i x
ec. 2.43
u( x i )
n
ec. 2.44
b(Modelo I)
2
1 s x
s 2x
donde s x2 es la varianza de x0 y s x2
0
2
x i x / n 1 .
ec. 2.45
Relaciones de las
c i u( x i )
ec. 2.46
wY
wX i
ec. 2.47
u c ( y, ( x 1, x 2 ,...))2
wY
wX i
u xi
u c2
ec. 2.48
La ec. 2.48 se puede simplificar dependiendo del tipo de funcin matemtica que
relaciona las variables de entrada. La Tabla 2.11 resume las ecuaciones simplificadas
para las funciones ms frecuentes encontradas en anlisis qumico (Eurolab, 2002).
y
y
k 0 k 1 x1 k 2 x 2 k 3 x 3
56
uc ( y, ( x1, x 2 ,...))2
f ( x1, x 2 , x 3 .....x i )
k1
x 1 x 2 ..
...x n1 x n
xn
ln x
u( x1 )2 u( x 2 )2 u( x 3 )2 ...
uc ( y)
2
uc ( y)
uc2
u( x )
u( x 2 )
u( x n1 )
u( x n )
y 1
...
x1
x2
x n1
xn
uc ( y)
y n
uc ( y)
u( x )
x
u( x )
x
uc
wY
wX i
u 2xi
u 2x
ec. 2.49
58
Vr
1 3 5 7 9 11 13 15
5 17 19 21 23 2
25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45
Resultado =
Errores aleatorios
Vserie
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45
Vlab
1
9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45
Error sistemtico
Fig. 2.15: Tipos de errores asociados a un resultado segn la aproximacin top down (Maroto, 2002)
ec. 2.50
2
V 2serie V lab
ec. 2.51
u 2 ( x) uc2
ec. 2.52
VL2 Vr2
ec. 2.53
uc2
ec. 2.54
u c2
u 2 ( G)
2
s lab
s2
s2
series r
p
pq
pqn
ec. 2.55
xP
ec. 2.56
u(G)
s G2 u P2
ec. 2.57
siendo sG la desviacin estndar del sesgo obtenido a partir de los resultados del
ensayo de aptitud (Ellison, 1998; ISO/TS 21748, 2004; UNE 82009-4, 1999):
60
sG
n 1 2
s R2
sr
n
p
ec. 2.58
El sesgo del mtodo ser significativo y se incluir en la ecuacin ec. 2.52 si se cumple
que (UNE 82009-6, 1999):
x P ! G critico
n 1
2 s R2 s r2
ec. 2.59
Otros autores indican el siguiente criterio para comprobar que el sesgo del mtodo es
significativo (Hund et al., 2001; Maroto, 2002):
x P ! G critico
2 u 2 (G)
ec. 2.60
61
desviacin estndar, desviacin robusta del PT, VPT, con la que se evala las
desviaciones de los participantes respecto al valor asignado. El desempeo de los
laboratorios se evala puntuando los resultados de los estadsticos obtenidos, (ver
Apartado 2.3.4.) que posteriormente son representados grficamente. Un punto
importante es la determinacin preliminar de la homogeneidad y estabilidad de la
muestra de ensayo con el fin de asegurar que el o los mensurandos no cambian
durante el trascurso del estudio.
Los resultados obtenidos por un laboratorio participante en diversos PTs pueden ser
una buena base para la estimacin de la incertidumbre de medida si cumplen las
siguientes condiciones: (i) las muestras de ensayo del PT sean razonablemente
representativas de las muestras de rutina en cuanto al tipo de material y rango de
valores del mensurando; (ii) los valores asignados tienen una apropiada incertidumbre;
(iii) el nmero de rondas de PTs en las que ha participado el laboratorio es lo
suficientemente elevado para obtener una estimacin fiable; es recomendable un
mnimo de seis ensayos diferentes en un perodo de tiempo adecuado; (iv) cuando se
emplean los valores de consenso, el nmero de laboratorios participantes debe ser
suficiente para la caracterizacin fiable del material objeto de estudio
(Eurachem/Citac, 2012).
Para este modelo an no hay acuerdo de cmo estimar la incertidumbre; sin embargo,
el ms difundido es el desarrollado por los pases nrdicos en la gua NORDTEST
(Eurolab, 2007; Magnusson et al., 2011). Segn esta gua las contribuciones de ms
peso a la incertidumbre son las debidas a la falta de veracidad y precisin. A partir de
las estadsticas de desempeo se obtiene si el sesgo obtenido es significativo y se
estima la incertidumbre asociada a ese error segn la siguiente ecuacin:
uG
G 2 uP2
N
ec. 2.61
siendo la diferencia entre el valor promedio de las medidas replicadas realizadas por
el laboratorio participante y el valor de referencia, , N el nmero de PTs y u es:
sPT
uP
ec. 2.62
62
uc
u G2 ur2
ec. 2.63
C cor
u(C cor )
u lab
u(r )
u(C)
C cor
C
ec. 2.64
C cor s ri
r
1
1
n
ec. 2.65
63
64
xi P
uveracidad
u(G)
s2
xi
n
u2
P
ec. 2.66
x i x ref
uveracidad
u(G)
s2
xi
n
s2x
ref
nref
ec. 2.67
xi
P
x i x matriz
P dopado
uveracidad
uveracidad
s2 uP 2
u(R) R xi 2
n xi P
u(R) R
2
s
2
x matriz uP
dopado
xi xmatriz 2 Pdopado
s2
xi
n
ec. 2.68
ec. 2.69
65
u(G)
G
3
ec. 2.70
Er
3
ec. 2.71
2
2
2
uprecisin
u 2veracidad upretratami
ento u otros
ec. 2.72
f ( X)
u 2y
x 3 u x3
wy
u 2x
w
x
i
u c2
y, uy
67
g x ( [1 )
1
0,15
0,1
0,08
0,07
0,06
0,05
0,05
0
0,04
0,03
g x ([ 2 )
0,02
f ( X)
0,01
Monte Carlo
0
0
g x ([ 3 )
g y (K)
y, uy
Fig. 2.17: Diagrama de la ley de propagacin de las distribuciones de tres variables independientes con
distintas funciones de densidad de probabilidad
Generacin de
n (>100)
f ( x1, x 2 .....x m ) valores vij para
cada variables
xi
Generacin
de n valores
de y
Estimacin de la
incertidumbre
como desviacin
estndar uy =
yrI
68
El resultado del mtodo Monte Carlo puede ser considerado como ms realista porque
no involucra aproximaciones ni suposiciones como, por ejemplo: ignorar la
incertidumbre de las concentraciones de los patrones en la curva de calibracin
obtenida mediante el regresin lineal, la asignacin de distribuciones normales a las
variables de entrada cuando no lo son, o la ausencia de correlacin entre las variables
de entrada.
El modelo Monte Carlo de evaluacin de la incertidumbre puede resultar
recomendable en las siguientes circunstancias (JCGM 101, 2008): (i) es difcil obtener
las derivadas parciales del modelo matemtico, tal como requiere la ley de
propagacin de la incertidumbre; (ii) la FDP de la magnitud de salida no es una
distribucin normal y (iii) las FDP de las magnitudes de entrada son asimtricas.
Los inconvenientes ms notorios de este modelo son que las incertidumbres estimadas
varan de una rplica a otra por la naturaleza aleatoria de la simulacin, y la dificultad
de identificar las contribuciones ms importantes a la incertidumbre total si no se
repite la simulacin (Eurachem/Citac, 2012).
Aunque las estimaciones pueden realizarse con una hoja de clculo, para mtodos de
anlisis con muchas etapas los clculos se complican extraordinariamente,
requirindose software especfico (Chew et al., 2012; Eurachem/Citac, 2012;
Solaguren-Beascoa et al., 2009).
uc
ec. 2.73
Incertidumbre
1.4
1.2
u(x)
(xs1)
s0
1.0
0.8
(i)
0.6
(ii)
(iii)
0.4
0.2
0.0
0
Concentracin
Fig. 2.19: Variacin de la incertidumbre con el resultado observado (Eurachem/Citac, 2012)
70
Pero este enfoque es prctico slo cuando es posible calcular un gran nmero de
valores. En caso de disponer de un nmero limitado de pares de valores
incertidumbre-concentracin (n=4-6) no ser posible establecer la relacin parablica
pertinente. En tales circunstancias, una aproximacin adecuada se puede conseguir
por regresin lineal simple de los valores incertidumbre-concentracin. Este nuevo
ajuste es una extrapolacin de las funciones empleadas para relacionar precisin y
concentracin en los estudios de reproducibilidad y repetibilidad indicadas en la
norma UNE 82009-2. Adems, en la mayora de los casos, la contribucin mayoritaria
es la debida a la imprecisin del mtodo.
La Tabla 2.12 muestra las tres formas de expresar la relacin entre la incertidumbre y
la concentracin indicadas en la norma UNE 82009-2.
Tabla 2.12: Tipos de relaciones incertidumbre vs magnitud medida
Tipo I: lnea recta que pasa por el origen
I k2 x
I k1 k 2 x
k 5 k 4 log x
(equivalente a I k 3 x 4 ) con 0 d k4 d 1
k
71
72
LSC
LAS
+kV
+kV
LC
-kV
LAI
LCI
-kV
N de muestra
Fig. 2.20: Grficos de control de Shewhart
Estas lneas se calculan a partir de datos tomados durante un periodo previo llamado
de aprendizaje en el cual el mtodo est bajo control, siendo el valor esperado. Los
grficos de control ms habituales son los llamados 3-sigma donde k suele ser 2 y k
igual a 3. Como se desconoce el valor de V este se sustituye por su estimacin s. Este
es un procedimiento sencillo de utilizar por los analistas, ya que las bases estadsticas
sobre las que se soporta son fciles de entender. Resultan tiles para detectar
pequeos cambios en la media y desviacin estndar del mtodo analtico y para tener
una visin histrica del comportamiento del mtodo analtico en cuanto veracidad y
precisin (Dincel et al., 2007; Ermer et al., 2005).
Los grficos de control de medias y de valores individuales se emplean para el control
de la veracidad aunque tambin aportan informacin sobre la precisin del mtodo.
Los grficos de control de rangos, de desviaciones estndar y de rangos mviles se
utilizan para controlar la precisin de los mtodos analticos. La Tabla 2.13 estn
recogidas las ecuaciones para estimar los lmites de control para este tipo de grficos
(Committe E-11 on Quality and Stadtistics, 2002; UNE 82009-6, 1999; Huertas et al.,
2007).
Tabla 2.13: Clculo de las lneas de los grficos de Shewhart
(X/R) (n > 1)
Grfico de media-desviacin estndar
(X/s) (n > 1)
LC
LCS
LCI
X A 2R
X A 2R
D4 R
D3 R
X A3s
X A3s
B4 s
B3 s
RM
RM
X/RM n =1
X
3
RM
d2
D 4 RM
X
3
RM
d2
D 3 RM
73
permite detectar y cuantificar el error o sesgo del laboratorio, que puede pasar
inadvertido en la validacin interna (G-ENAC-14, 2008).
Para la evaluacin de la eficacia de los participantes se emplean distintos mtodos:
Mtodo de la incertidumbre: el valor verdadero acordado por los organizadores
debe estar incluido dentro de la incertidumbre asignada al mtodo validado por el
laboratorio.
Mtodo de rangos: aplicable cuando los laboratorios participantes analizan
varias muestras. Los resultados de cada muestra se ordenan de forma decreciente
de forma que al valor ms grande se le asigna el rango 1, al siguiente el 2, y as
sucesivamente; si hay empates se resuelven por medio de la media. La puntuacin
de cada laboratorio se obtiene sumando los rangos obtenidos con las muestras
analizadas. Puntuaciones extremas (muy grandes o muy pequeas) son indicacin
de errores sistemticos o sesgos. Las puntuaciones se comparan con valores
crticos tabulados (Massart et al., 1997; Wernimont, 1993).
Mtodo de puntuacin Z-score: se estandarizan los resultados experimentales de
todos los participantes, xi, restando el valor medio asignado, P, y dividiendo entre
la desviacin estndar asignada, V. Si el valor Z obtenido por un laboratorio es
inferior a 2 se considera que el resultado de ese laboratorio es satisfactorio. Si el
valor Z est comprendido entre 2 y 3 se califica de cuestionable. Por el contrario,
si el valor Z es superior a 3 el resultado es insatisfactorio dado que difiere mucho
de la media (ISO 13528, 2005; UNE-EN ISO/IEC 17043, 2010).
Es habitual construir grficos de control para estos valores Z, cuya lnea central es
cero, los lmites de aviso se sitan en Z = r2, y los lmites de control Z = r3 (AlMasri et al., 2004; Al-Masri et al., 2005).
Mtodo de puntuacin Z-score II: cuando un laboratorio dispone de resultados
obtenidos en diversos ensayos interlaboratorio, puede emplear una puntuacin
compuesta que considere todas las muestras analizadas. La Tabla 2.14 resume las
distintas puntuaciones que se han propuesto (Agbenin et al., 2011; Medina Pastor
et al., 2011; Simonet, 2005).
Tabla 2.14: Interpretacin de Z-score II
SZ
SRZ
Z
Z
m
SSZ
Z2
SAZ
75
P
S
Total
76
Otros mtodos para evaluar los resultados de los ensayos de aptitud son los
estadsticos h y k de Mandel, descritos en el Apartado 2.3.2. (Svegl et al., 2006;
UNE 82009-2, 1999), y los grficos box-plot (Massart et al, 1997; Steinhoff et al.,
1999).
Controles
de
calidad de resultados
Verificacin de instrumentos
Validacin de mtodos analticos
Calibracin de instrumentos analticos
Fig. 2.22: Estructura jerarquizada de las actividades de la calidad de un laboratorio
77
1058, 2009). Desde el punto de vista funcional, los equipos de los laboratorios
qumicos se pueden clasificar en (Eurachem/Citac, 2002):
Instrumentos de medida como espectrofotmetros, cromatgrafos, balanzas,
medidores electroqumicos... Adems del uso correcto, mantenimiento, limpieza y
calibrado peridico, es necesaria la verificacin peridica de sus caractersticas
tcnicas como respuesta, estabilidad o linealidad.
Equipos auxiliares, los cuales no se utilizan para mediciones directas y cuya
influencia es mnima. Dentro de este grupo cabe incluir equipos calefactores,
agitadores... nicamente requieren ser mantenidos y verificados, pero se suelen
calibrar si sus caractersticas tcnicas afectan de forma significativa al resultado
del ensayo.
Material fungible, con especial nfasis en el material volumtrico (matraces
aforados, buretas, pipetas). Se verifican las especificaciones de calidad a su
recepcin, desechando el que no las cumpla. Se requiere un mantenimiento
adecuado ya que los errores asociados al uso de estos materiales suelen ser
debidos a suciedad o contaminacin, por tanto en muchos mtodos de anlisis se
incluyen protocolos especficos para la limpieza de este material. Dependiendo del
uso, algunos de estos equipos pueden requerir verificaciones ms frecuentes (UNE
400301/1M, 1999; UNE-EN ISO 4787, 2010).
Patrones fsicos que se corresponden con unidades bsicas del Sistema
Internacional. Son imprescindibles para la calibracin y verificacin de los equipos.
Suelen ser masas patrn, termmetros patrn, filtros de absorbancia... Se
denominan patrones primarios cuando estn calibrados por organismos
acreditados externos, y patrones secundarios cuando el propio laboratorio los
calibra a partir de los primarios (UNE 82133IN, 2004).
Tambin puede incluirse dentro del equipamiento del laboratorio los ordenadores y el
software empleado para captar, procesar y gestionar los datos recibidos de los
instrumentos. El sistema informtico de los laboratorios debe cumplir igualmente los
requisitos de calidad y seguridad que permitan su correcto funcionamiento de forma
ininterrumpida y aseguren la confidencialidad e inalterabilidad necesarias de los datos
contenidos en sus archivos.
Una vez clasificados los equipos de medida y ensayo e incluidos en el sistema de
gestin de la calidad, los laboratorios redactarn los procedimientos normalizados de
equipo, PNEs, que asegurarn su calibracin, verificacin y mantenimiento necesarios.
los mtodos de ensayo y que realizan medidas directas deben calibrarse antes de su
puesta en servicio y posteriormente de forma peridica de acuerdo a su uso (ILAC G24,
2007; UNE EN ISO/IEC 17025, 2010; UNE EN ISO 10012, 2003).
Se pueden distinguir dos contextos distintos a la hora de calibrar un equipo de medida
(Cuadros Rodrguez et al., 2001a). Por un lado, cuando el equipo de medida
proporciona valores absolutos del parmetro medido (temperatura, masa, longitud de
onda) y la magnitud medida por el equipo se expresa en las mismas unidades dadas
por el patrn. Este tipo de calibracin suele denominarse calibracin directa y es el
objeto de este apartado. Sin embargo, la mayora de instrumentos analticos no se
calibran de esta manera sino que el equipo mide una magnitud que se relaciona con
alguna propiedad del patrn. Es conocida tambin como calibracin analtica o
instrumental. Se refiere al establecimiento de la funcin que relaciona la seal
instrumental con la magnitud medida (normalmente concentracin de analito en la
muestra) y se ha descrito ampliamente en el Apartado 2.3.2. (Bedson et al., 1996).
Se pueden emplear diferentes mtodos de calibracin directa (Riu et al., 2001b; Riu et
al., 2002; Trujillo Jurez et al., 2007): (i) comparacin directa con un patrn (ej.
espectrofotmetro con filtros patrn de absorbancia); (ii) mtodo de punto cero (ej.
balanza de brazos); (iii) mtodo de sustitucin (ej. juego de pesas); (iv) mtodo de
reproduccin de la definicin de la magnitud, (ej. la calibracin de material
volumtrico); (v) mtodo de reproduccin del sistema de medida.
El objetivo de la calibracin directa es demostrar la coincidencia entre el valor de la
magnitud en el patrn y la magnitud medida por el instrumento. Por tanto, se debe
disponer de patrones con elevado nivel metrolgico (es decir, reducida incertidumbre
y elevada trazabilidad) que sirvan de referencia (UNE EN ISO 10012, 2003). Siempre
deben llevar un informe adjunto, emitido por un laboratorio de calibracin acreditado,
que asegure su trazabilidad a patrones nacionales o internacionales reconocidos y
contenga la informacin sobre las medidas realizadas, los valores nominales que se
han calibrado, sus valores reales, sus correcciones y la incertidumbre asociadas a los
mismos.
La calibracin de un equipo debe hacerse en las mismas condiciones ambientales en
que trabaja habitualmente, y se debe abarcar todo su rango de medida a intervalos
discretos (ILAC G24, 2007). Esto implica que deberemos disponer de patrones para
cada uno de estos intervalos.
La discrepancia entre el valor medido por el equipo y el valor real de la magnitud en el
patrn se debe a desviaciones sistemticas y a la variabilidad intrnseca del proceso de
medida. Las desviaciones sistemticas tienen gran influencia sobre la veracidad de la
medida y se evalan mediante la correccin o sesgo. Esta se puede expresar en forma
absoluta o relativa. En el primer caso se trata de una correccin constante en todo el
intervalo de valores de la magnitud a medir, mientras que en el segundo caso es una
correccin proporcional. En cualquier caso, es imprescindible que el intervalo de
aplicacin de la correccin quede perfectamente definido (Eurachem/Citac, 2012). La
79
cori
ec. 2.74
siendo el valor real del patrn, Vreal, el valor nominal, Vnominal, ms su correccin corpat
indicada en su certificado de calibracin.
Vreal
ec. 2.75
Derivaequipo
uequipos
Resolucinequipo
Derauxiliar
Calpatrn
Auxiliar
Corauxiliar
Otroscalibracin
Repeticinequipo
Repe
Patrn
Calauxiliar
Corpatrn
Derpat
patrn
Calibracin
Fig. 2.23: Contribuciones habituales a la incertidumbre de un equipo de medida
80
Variabilidad
patrn
Cuando la calibracin es directa con un patrn, la variabilidad del patrn se obtiene a partir de la
combinacin de las siguientes contribuciones.
upat
wf
wx i
u equipo
u 2x
2 3
u2x
dmcpat
Ipatrn
2 3
dmcpat = (upat)mx (upat)mn
corpat
u corpat
3
u der pat
u calpat
2
2
2
ucal
pat u der pat u corpat
upat
upat
ures
s
N
resolucin
urep
2
2
2
2
urep
ures
upat
uaux
Resolucin del
equipo
ucal
Tiene gran influencia sobre la precisin de las medidas realizadas. Se evala a partir de la
desviacin tpica de N medidas repetidas del patrn.
dmc
2 3
dmc = (uequipo) max (uequipo) min
u der
Estimacin
Repetibilidad
Debida a la propia variabilidad de las medidas dadas por el equipo en un momento dado. Se obtiene en cada punto
de calibracin como combinacin de las siguientes contribuciones:
Calibracin
Causada por el paso del tiempo, el uso, envejecimiento, deterioro, limpieza inadecuada, reacciones qumicas que
provocan un aumento de la variabilidad de las medidas con el tiempo. Esta incertidumbre tpica se evala como la
diferencia mxima entre incertidumbres de calibraciones anteriores de ese equipo.
Fuente de incertidumbre
Tabla 2.15: Cuantificacin de las fuentes que contribuyen a la incertidumbres de un equipo de medida en cada punto de calibracin i (EA-4/02, 1999)
81
82
Debida a la correccin de las medidas del equipo auxiliar, ucor-aux..
Otras
Tambin se puede estimar a partir de la diferencia entre los valores de la magnitud a calibrar, y,
correspondientes a los valores mximo y mnimo de la incertidumbre de la variable del equipo
auxiliar, x.
Otra forma de estimar esta contribucin consiste en aplicar la ecuacin de propagacin del error
aleatorio a la funcin que relaciona la magnitud a calibrar, y, con la medida del equipo auxiliar, x.
(Cowles et al., 2001).
En algunos casos la medida depende de otros factores no incluidos en las contribuciones anteriores. Por ejemplo, la
medida de absorbancia en un espectrofotmetro depende de la variabilidad en la anchura de la celda de medida. Se
estima a partir de la informacin suministrada por el fabricante, datos bibliogrficos
Equipo auxiliar
Debida a la dependencia de la medida realizada por el equipo de las medidas proporcionadas por
un equipo auxiliar, uaux. Por ejemplo, las medidas realizadas con pH-metros, conductivmetros,
material volumtrico, dependen de la temperatura y por tanto de la sondas de temperatura. Se
evala combinando las siguientes contribuciones:
Fuente de incertidumbre
y xmax
uaux
dmcaux
wy
u( x )
wx
coraux
K certificado
Iaux
uotros
2 3
y xmin
y x max y x min
f ( x auxmax )
u aux
u aux
u cor-aux
u cal-aux
f ( x auxmin )
2 3
dmcaux = (uaux)mx (uaux)mn
u der-aux
2
2
u2der aux ucal
aux ucoraux
Estimacin
Tabla 2.15 (cont.): Cuantificacin de las fuentes que contribuyen a la incertidumbres de un equipo de medida en cada punto de calibracin i (EA-4/02, 1999)
2
2
2
2
2
u 2der urep
ures
upat
u aux
u otros
ec. 2.76
K max u equipoi
Iequipo
ec. 2.77
K f u equipoi
ec. 2.78
En algunos casos hay incertidumbres tpicas que se pueden excluir si se demuestra que
su contribucin a la incertidumbre total es despreciable frente al resto de
contribuciones.
Una vez calculadas las correcciones del equipo en cada punto de calibracin y
estimada la incertidumbre total, la suma de ambos trminos se compara con la
tolerancia asignada al equipo, Tol, que representa el mximo error permitido. El
criterio para fijar el valor de esta tolerancia suele estar indicado en el mtodo de
anlisis; por ejemplo, la temperatura de una cabina de incubacin para el anlisis de la
demanda biolgica de oxgeno, BDO, debe ser 20 r 1qC (UNE-EN 1899-1, 1998).
Adems, el valor de la tolerancia debe estar entre tres y diez veces el intervalo de la
incertidumbre. Esta proporcin, denominada TUR, Tolerance Uncertainty Ratio, se fija
al comienzo de la vida til del equipo (ANSI/NCSL, 2006; Bennett, 2005; Macii et al.,
2003; Maroto et al., 2001b):
3d
Tol
I equipo
TUR d 10
ec. 2.79
83
1
0
Tolerancia
Correccin
Incertidumbre
Correccin r Incertidumbre
-1
-2
-3
-4
Fig. 2.24: Situaciones para declarar APTO o No APTO un equipo de medida para un TUR inicial = 4 (Bell,
2001; La Gua Metas, 2003)
Si el equipo demuestra ser apto en parte del rango de calibracin podr ser utilizado,
pero solo en ese intervalo (Riu et al., 2001b).
La Fig. 2.25 tal resume el proceso de calibracin de un equipo.
Tambin se suele comprobar que la veracidad y la reproducibilidad sean menores que
los valores nominales indicados en las especificaciones del equipo, fijados de acuerdo a
la normativa o por la experiencia. La falta de veracidad se puede corregir en aquellos
equipos con posibilidad de ajuste mientras que la falta de reproducibilidad
normalmente no se puede corregir, siendo necesaria la intervencin del servicio
tcnico.
La frecuencia de calibracin depende de la naturaleza del equipo, su robustez, la
frecuencia de uso, su entorno, si ha sufrido sobrecarga (ILAC G24, 2007).
84
Calibracin
SI
NO
NO
SI
_cor_+_Iequipo_ < Tol
Equipo con
posibilidad de ajuste
Equipo sin
posibilidad de ajuste
Ajuste
Correccin de las
lecturas
No reparacin
Reparacin
Servicio tcnico
NO APTO
Otras
aplicaciones
Informe de calibracin
____________________
________________
_________
____
Fig. 2.25: Diagrama del proceso de calibracin (MAGRAMA, 2008; UNE EN ISO 10012, 2003)
85
Vmedio Vreal
ec. 2.80
siendo el valor real del patrn, Vreal, su valor nominal, Vnominal, ms la correccin corpat
indicada en su certificado de calibracin, ec. 2.75.
Una vez calculadas las correcciones del equipo, si sumada a la incertidumbre calculada
durante la calibracin es menor que la tolerancia, el equipo sigue siendo apto. Por el
contrario, si es mayor, el equipo se considera no apto y se debe calibrar de nuevo.
Cuando no hay una calibracin previa, por ejemplo, en el caso de caractersticas
tcnicas de equipos de medida directa no calibradas, equipos de medida indirecta o
equipos auxiliares, se comprueba que las especificaciones estimadas son menores que
las nominales (indicadas por el fabricante) o que la correccin de la magnitud medida,
% cor, es menor una correccin nominal, % cornominal, fijada normalmente de acuerdo a
la experiencia.
Cuando un equipo est formado por distintos componentes o mdulos, la verificacin
se puede realizar comprobando las condiciones anteriores de forma independiente a
cada componente por separado. Este tipo de verificacin llamada modular sera el caso
de un cromatgrafo en el que se verifican por separado las especificaciones de
bombas, horno, inyector, detector (Bguena et al., 2006).
La verificacin de equipos de medida indirecta consiste en realizar un test de
idoneidad, tambin llamado System Suitability Test. Consiste en tratar al equipo a
verificar como una caja negra y realizar el anlisis de un analito, que no tiene porqu
formar parte del alcance mtodo, cuyos resultados deben cumplir una serie de
requisitos preestablecidos. Estos test suelen estar incluidos en los procedimientos de
anlisis de modo que se intercala el anlisis de la muestra conocida en cada lote de
muestras al inicio, cada cierto nmero de medidas y al final del lote de muestras. De
esta forma se garantiza el buen funcionamiento del equipo (Kaminski et al., 2010;
Kulikov et al., 2005; Mutton et al., 2011).
86
87
88
Est originada por la variacin en el llenado y enrase del material volumtrico. Se estima a partir
de la desviacin tpica de n medidas (n10) del volumen contenido.
Se estima a partir de la variacin del volumen, 'V, calculado a partir de las especificaciones del
material que indican su volumen nominal VN a la temperatura a la que fue calibrado, la variacin
-4
-1
de la temperatura del laboratorio y el coeficiente de expansin del disolvente (agua 2.1 10 qC ).
Repetibilidad del
enrase
Efecto de la
Temperatura
La incertidumbre debida a la masa molecular, Pm, de un compuesto AaBbCc se obtiene mediante la combinacin de las
incertidumbres de los masas atmicas, Im-at, de sus elementos constituyentes (de Laeter et al., 2003; Coplen, 2001).
Cuando solo interesa la concentracin respecto a una parte del compuesto se utiliza la masa molecular parcial del
soluto, PmParcial, por ejemplo la concentracin de un anin a partir de su sal.
Masa molecular
Calibracin del
material
volumtrico
Debida al volumen del soluto, Vs, y/o al volumen de disolucin, Vds. La incertidumbre asociada a este volumen est
formada por tres contribuciones:
Debida a la masa del soluto, Ms, y/o a la masa de la disolucin, Mds. Se estiman a partir de la incertidumbre de
calibracin de la balanza empleada para la medida de la masa, ubal.
Se estima a partir de la pureza del reactivo indicada en su certificado de anlisis, expresado en tanto por uno, rq-s. En el
caso ms frecuente de que solo se disponga de la pureza mnima se asume una distribucin rectangular. Para otros
casos ver Apartado 2.3.3.
Fuente de incertidumbre
umat A
a
3
Imat
umat B
b
3
umat C
c
u(Pm) u(Pmparcial )
um-at
tol
u cal V
VN 'T 2.1 10 4
urep-V
I Vol
K
2
2
2
ucal
V urep V u T
'V
u cal V
u( Vs ) u( Vds )
uT
(1 - rq-s )
u(rqs )
Estimacin
Tabla 2.16: Cuantificacin de las fuentes que contribuyen a la incertidumbre final de la concentracin de una disolucin (Eurachem/Citac, 2012)
Partes por
milln
Normalidad
ppm
-1
mgKg
ppm
-1
mgL
Molalidad
ppm
ppm
103
103
Vds Pms
Ms rqs
Ms rqs
103
Pms Mds
Ms rqs
Pms Vds
Ms rqs
Vds
Ms rqs
Vds Pms
Mds Pms
106
Mds
Ms rqs Pms(parcial)
ppm
ppm
v 103
106
106
Ms rqs 100
Vds
Vs rqs 100
Mds
Ms rqs 100
106
Vds
Ms rqs Pms(parcial)
Vds Peq
Ms rqs
%(M / V )
%(M/V)
%( V / V )
%(M / M)
Frmula
%(V/V)
%(M/M)
Smbolo
Molaridad
Porcentaje %
Unidades
uppm
uppm
uN
ppm
Ms Mds rqs Pms(parcial) Pms
N
Ms Vds rqs
m
Ms Mds rqs Pms
Ms Vds rqs Pms
%(M / V )
Ms Vds rqs
u( Vs ) u( Vds ) u(rqs )
%( V / V )
Vs Vds rqs
ppm
Ms Vds rqs Pms(parcial) Pms
um
uM
u%(M / V )
u%( V / V )
u%(M / M)
%(M / M)
Ms Mds rqs
Incertidumbre combinada, u
Tabla 2.17: Resumen de las expresiones para el clculo de la concentracin de disoluciones y su incertidumbre
89
-1
90
3. MATERIALES Y MTODOS
93
94
normalizados internacionales (APHA, 1998; ASTM D4327, 2011; UNE EN ISO 10304-1,
2009; USEPA Method 300.1, 1997).
95
(A )
Fluoruro
Cloruro
Nitrito
Bromuro
Nitrato
Ortofosfato
Sulfato
Reactivo
NaF
NaCl
NaNO2
NaBr
NaNO3
KH2PO4
Na2SO4
M molecular
-1
M molecular A
-1
Tiempo
Temp.
Masa
CA-1
(gmol-g )
(gmol-g )
desec. (h)
desec. (qC)
(g)
mgL
41.99
58.44
69.00
102.90
84.99
136.09
142.04
19.00
35.45
46.01
79.90
62.01
95.00
96.06
1
2
1
6
24
1
1
105
105
105
105
105
105
105
1.1050
0.8242
1.4998
0.6439
1.3707
1.4330
1.4790
500
500
1000
500
1000
1000
1000
Procedimiento analtico
Los multipatrones de calibracin y las muestras se almacenan refrigeradas a 4qC hasta
su anlisis.
Una vez atemperadas las disoluciones, se comprueba que el pH de las muestras est
dentro del rango admitido por la columna y precolumna; en caso de tener un pH cido
se ajusta eluyendo la muestra por un cartucho de extraccin IC-H. Si en las muestras
estn presentes altas concentracin de haluros, sulfatos o iones inorgnicos que
enmascaran la seal de alguno de los aniones a cuantificar se eluye la muestra por
el/los cartucho/s de extraccin adecuado/s, IC-H, IC-Ag, IC-Ba o IC-RP, para reducir la
concentracin de anin interferente.
96
Para obtener la lnea de calibrado se toma con una jeringuilla de 5-10 mL una porcin
homognea de multipatrn de calibracin y se pasa a travs de un filtro de nylon de
0.45 Pm acoplado a la salida de la jeringuilla para eliminar partculas suspendidas. El
filtrado es directamente introducido en el inyector del equipo. La cuantificacin se
realiza midiendo las reas de los picos.
Para proceder a la cuantificacin de los aniones en las muestras, se diluyen con agua
desionizada, si es necesario, a concentraciones dentro del rango de calibracin de cada
anin y se inyectan en las mismas condiciones que los patrones.
La concentracin de anin de la muestra se calcula interpolando en la ecuacin de la
recta de calibrado de la siguiente forma:
>
C A mg A L1
Ya
b
ec. 3.1
DETERMINACION DE ANIONES
Acondicionamiento instrumental
LNEA DE CALIBRADO
BLANCO
MUESTRAS
PATRONES
Concentracin
mg A-L-1
Ajustar pH
rea pico
Cuentas
Si
Cartucho de
extraccin
Concentracin
enmascarada
No
Filtrar 0.45m
Medir en IC
Fig. 3.1 Diagrama de flujo del procedimiento analtico de medida de aniones por IC
97
Parmetros instrumentales
Caudal: 1 mLmin
Tiempo de cromatograma 16 min
Presin mxima: 12 MPa
Presin mnima: 0 MPa
-1
Conductividad: 0 Scm
Propiedades de integracin
Condiciones de calibracin
tR (min)
3.6
5.07
Cl
NO2
Br
6.0
7.35
NO3
8.3
PO4
11.9
SO4
14
98
OH
H3C
K3Fe(CN) 6
H3C
H2O
NaOH
H3C
Fenol
NH 2
4-AAP
H3C
Imina
Agua
Fig. 3.2: Reaccin de los compuestos fenlicos con 4-AAP (Sousa et al., 2009)
99
Procedimiento analtico
Las interferencias se eliminan, o al menos se reducen, destilando la muestra. Para ello,
se toman volmenes de muestra ligeramente superiores a 500 mL y se ajusta el pH a
4.0 con la disolucin de cido fosfrico. A continuacin, se vierten en el matraz de
destilacin 500 mL de la muestra y, cuando han destilado aproximadamente 450 mL,
se detiene la destilacin. Cuando la muestra deja de hervir, se aade 50 mL de agua
desionizada caliente al matraz de destilacin y se continua destilando hasta recoger un
volumen total de 500 mL. Los destilados se almacenan refrigerados a 4qC hasta su
anlisis.
Para proceder a la cuantificacin de fenol en las muestras destiladas una vez
atemperadas stas, se toman 100 mL de destilado o una porcin que no contenga ms
de 5 mg de fenol, y se diluyen hasta 100 mL. Se prepara un blanco paralelamente.
Se tratan los patrones de la lnea de calibrado, las muestras y el blanco como sigue: se
aaden 2.5 mL de la solucin de amonaco y se ajusta inmediatamente a pH 7.9 con
unos 2 mL de tampn fosfato. Se aade a continuacin 1.0 mL de solucin 4-AAP, 1.0
mL de solucin K3Fe(CN)6 y se mezcla bien. Despus de 15 minutos, se transfiere la
disolucin coloreada a las cubetas de vidrio de 1 cm y se lee la absorbancia de
patrones y muestras a 506 nm introduciendo en la cubeta de referencia el blanco.
100
>
UA a
b
ec. 3.2
DETERMINACION DE FENOL
Acondicionamiento instrumental
LNEA DE CALIBRADO
BLANCO
MUESTRAS
Ajustar pH
PATRONES
Concentracin
mg fenolL-1
Respuesta
UAbs
Destilar 500 mL
101
102
Embudo
Posicin del
filtro de SPE
Soporte
A bomba de
vacio
Quitasato
Tubo Nessler
Fig. 3.4: Esquema del equipo de filtracin a vaco para la determinacin de A&G
103
Otros equipos empleados fueron: balanza analtica Sartorius 1601 AMP8-1, con 0.1 g
de resolucin y 110 g de fondo de escala; estufa de secado Memmert modelo UN160,
con un error de r 5qC; rotavapor Buchi modelo R-215; bomba de vaco de membrana
KNF Neuberger N811 KN.18 capaz de suministrar un caudal de 11.5 Lmin-1 y una
presin de vaco de 2 bar.
Otro material empleado fue: desecador con llave de vaco; papel de filtro de 15 cm de
dimetro Whatman n 40 o equivalente; papel indicador de pH; matraces redondos de
cuello corto de 250 mL de capacidad y peso inferior a 110 g; embudos de vidrio de 70
mm de dimetro; probetas graduadas con volmenes comprendidos entre 100 mL y
2000 mL.
Para el lavado del material volumtrico y para la preparacin de disoluciones se
emple agua bidestilada.
Los reactivos empleados para la realizacin de los anlisis fueron: cido clorhdrico 1:1
para acidificar las muestras, metanol, sulfato sdico anhidro secado a 200-250 C
durante 24 h y almacenado en desecador hasta su uso y n-hexano con una pureza
mnima de 85% y residuo seco < 0.0001% (USEPA Method 1664 revB, 2010).
Procedimiento analtico
A continuacin se describen detalladamente las etapas del procedimiento analtico
empleado para la determinacin de aceites y grasas en aguas residuales:
Preparacin de la muestra
A la llegada de la muestra al laboratorio, se marca el menisco en el recipiente que la
contiene. Se mide el pH de la muestra, se acidifica a pH < 2 con HCl 1:1 y se refrigera. El
volumen de muestra analizado se determina despus de su anlisis rellenando la
botella que contena la muestra con agua hasta la lnea marcada y midiendo el
volumen de agua empleado con una probeta.
Preparacin del matraz
Se secan los matraces redondos de 250 mL en una estufa a 105 r 5qC durante 2 horas y
se almacenan en un desecador. Antes de iniciar el anlisis se pesan en la balanza
analtica. Los matraces deben ser manipulados en todo momento con guantes o
pinzas.
Preparacin del equipo de filtracin
Se introduce un tubo Nessler dentro del quitasato y se coloca el filtro SPE con la cara
rugosa hacia arriba. A continuacin se lavan las paredes del embudo del equipo de
filtracin con una alcuota de 10 mL de n-hexano hasta que el filtro est totalmente
sumergido en el disolvente, se esperan 5 segundos y se aplica vaco recogiendo el
disolvente en el tubo Nessler. Se hace un segundo lavado con otros 10 mL de n-hexano
aplicando vaco durante 1 minuto hasta que el filtro est seco. Se recupera el n-hexano
por destilacin.
104
105
>
Pf Pi Pf B PiB
106
VM
ec. 3.3
Muestra
Blanco
Preparar el matraz
Acondicionar el filtro
Acondicionar el filtro
Extraccin de muestras
106
107
Mtodo
Tcnica analtica
Resultados
Uds.
ST
UNE 77030:2002
Gravimetra
3440
mg STL
SS
UNE 77032:2002
Volumetra
150
mL SSL
SST
UNE-EN 872:2006
Gravimetra
1200
mg SSTL
Turbidez
Turbidimetra
-1
-1
-1
UNT
mg F L
47
mg Cl L
34
mg NO3 L
mg Br L
8.7
mg NO2 L
2-
140
mg SO4 L
Cl
NO3
-
Br
Cromatografa inica
NO2
SO4
-1
-1
-1
-1
-1
-1
pH
Potenciometra
6.8
DQO
UNE 77004:2002
Volumetra redox
740
mg O2L
-1
DBO5
UNE-EN 1899-1:1989
Manomtrica
190
mg O2L
-1
P total
215
mg PL
SAAM
UNE-EN 903:1994
0.02
mg SAAML
NKT
UNE-EN 25663:1994
Mineralizacin +
Volumetra acido-base
61.35
mg NL
-1
N-NH4
UNE 77028:2002
Volumetra
28.2
mg NL
-1
A&G
UNE 77037:1983
Extraccin L-L +
Gravimetra
19
mg A&G L
AT
Volumetra cido-base
214
mg CaCO3L
Espectrofotometra UV-Vis
-1
-1
-1
-1
108
Aniones
Fenol
Aceites y grasas
Conservacin de la muestra.
Establecimiento de la linealidad.
Comparacin referencias bibliogrficas (APHA, 1998; ASTM 4281:95, 2005; UNE 77037, 1983; UNE 77038, 1983;
UNE-EN ISO 5667-3, 2004; USEPA Method 1664, revA, 2010).
Anlisis y prueba estadstica de los resultados tiempo/concentracin de una muestra compuesta dopada con A&G.
-1
Ensayos con muestras dopadas con SST a concentraciones comprendidas entre 50 y 2000 mg SSTL (UNE-EN 872,
2006).
-1
Establecimiento de la linealidad.
Ensayos con: aceite mineral, vegetal y patrn AE/H a concentraciones comprendidas entre 10 y 5000 mg A&GL .
Comparacin referencias bibliogrficas (APHA, 1998; ASTM D4327, 2011; UNE-EN ISO 5667-3, 2004; UNE-EN ISO
10304-1, 2009; USEPA Method 300.1, 1997).
Anlisis y representacin tiempo/concentracin de una muestra real.
Conservacin de la muestra.
Metodologa
109
110
-1
5-30 mgL
6250 mgL
Lmite superior LS
-1
Incertidumbre
Dilucin mxima
-1
5 mgL
-1
0.5 mgL
1:200
0.5-500 mgL
-1
-1
500 mgL
I d 25%
-1
-1
5-12500 mgL
12500 mgL
0.1:100
2.5 mgL
-1
%DER d 15 %
Precisin
Lmite de
cuantificacin
LoQ
-1
-1
0 b r t sb
0 a r t sa
0.55 mgL
Fenol
%Er d 15 %
-1
Selectivo
NO2 , NO3 ,
-3
2PO4 , SO4
r > 0.99
%DERf< 10%
2.5-15 mgL
F , Cl , Br
Aniones
Veracidad
Linealidad/
Sensibilidad
Rango de ensayo
Selectividad
Parmetros
de validacin
Mtodo de anlisis
No Aplica
10-5000 mgL
-1
-1
5000 mgL
10 mgL
No Aplica
-1
-1
105000 mgL
Aceites y
grasas
sreprod
sreprod
%Er
xi P
100
P
2
s 2da sanal
sr2
%DER
s reprod
b b r t sb
a a r t sa
100
%Er MAX
u otros
u trazabilidad
wx i
wy
u 2x
P
(ec. 3.4 y ec. 3.5)
u
s
100 precisin reproducibilidad
2
2
2
uprecisin
u2veracidad upretratami
ento uotros
upretratamiento = No aplica
u veracidad u(%Er )
uc2
2
s 2da sanal
s 2dest sr2
ANOVA
Sensibilidad S
a, b, s a , sb , s e , r 2
Estimacin
Tabla 3.6: Caractersticas tcnicas, objetivos de calidad perseguidos y su estimacin durante la validacin de la determinacin de aniones, fenoles y aceites y grasas
111
N1 = LoQ
N2
N3
N4
N5 =LS
2.5
12
125
1250
6250
25
250
2500
12500
Fenol
0.5
50
250
500
Aceites y grasas
10
50
250
1000
5000
Aniones
-1
F , Cl , Br
NO2 ,
NO3 ,
-3
PO4 ,
2SO4
Factor
anal., p=2
Factor
rplica, n=2
Valor yijk
y111
2
2
2..
2.
y112
.y221 y222
Fig. 3.6: Esquema del diseo experimental completamente anidado de tres factores para un nivel de
concentracin Ni
112
Factor
anal., q = 2
Factor
dest., p 2
1
1
2
2
Factor
1 2 1 2
rplica, n 2
y1111 y1112.
Valor yijkl
2..
2.
Fig. 3.7: Esquema del diseo experimental completamente anidado de cuatro factores para un nivel
de concentracin Ni
Para obtener los resultados experimentales del diseo, cada analista realiz dos
destilaciones de cada muestra de control un da a la semana durante cuatro semanas
consecutivas, midiendo por duplicado el fenol en cada destilado. La caducidad de las
muestras de control no fue en este caso un factor de ruido, puesto que las muestras de
control se prepararon el mismo da de su anlisis en la cantidad suficiente para la
realizacin de todas las rplicas dado que la mayora de fuentes consultadas
recomendaban la realizacin de los ensayos antes de 24 horas a partir de la recepcin
de las muestras en el laboratorio. Se aadi como factor de ruido al diseo de
experimentos la preparacin de lneas de calibrado distintas por cada destilado.
La Tabla 3.8 y la Tabla 3.10 presentan los formularios para la recopilacin y
tratamiento de datos de los diseos experimentales. En la Tabla 3.9 y en la Tabla 3.11
quedan reflejadas las ecuaciones para el ANOVA, incluyendo las varianzas intermedias
o varianzas asociadas a cada uno de los factores ensayados.
La precisin del mtodo de anlisis, expresada como reproducibilidad, se obtendr a
partir de las estimaciones de las varianzas obtenidas de los respectivos ANOVAs segn
113
la ec. 3.4 para la determinacin de aniones y aceites y grasas y la ec. 3.5 para la
determinacin de fenoles:
Tabla 3.8: Formulario y clculos estadsticos intermedios para un diseo de experimentos anidado de 3
factores para un nivel de concentracin Ni
Factor i,
Factor i,
Factor i,
da 1
da 2
da 3
da 4
Factor j
Factor j
Factor j
Factor j
analista 1
analista 2
anal. 1
anal. 2
Factor k
rplica=1
y ij1
Factor k
rplica=2
y ij2
yij
Factor i,
1
y ij1 y ij2
2
y ij
wij
w ij
yi
yi
y ij1 y ij2
1
y y i2
2 i1
y i1 y i2
wi
wi
yi
i
Tabla 3.9: ANOVA para un diseo completamente anidado de 3 factores para un nivel de concentracin
Ni
Fuente
Factor i
da
Suma de cuadrados
Total
Factor j SS
anal
analista
Factor k
rplica
SSda
4q y
gdL
Media cuadrtica
q-1
MSda = SSda/(q-1)
MSanal = SSanal/q
2q
MSrplica= Srplica/(2q)
y ij yi w i2
2
SSrplica
1
2
w ij2
i
s 2da
2
s anal
1
MSda MSanal
4
1
MSanal MSrplica
2
sr2
MSrplica
4q-1
Re producibilidad sreproducibilidad
114
Estimaciones de las
varianzas
2
s 2da s anal
sr2
ec. 3.4
y ijk1
Factor l
rplica 2
y ijk2
yijk
wijk
Factor k
destilacin 2
1
y ijk1 y ijk2
2
y ijkl
Factor j,
analista 2
Factor k
destilacin 1
Factor K
destilacin 2
..
Factor i,
da 4
y ijk1 y ijk2
w ijk
yij
y ij1 y ij2
w ij
wij
1
y y
2 ij1 ij2
y ij
yi
1
y y i2
2 i1
yi
wi
wi
y i1 y i2
1
yi
i
Tabla 3.11: ANOVA para un diseo completamente anidado de 4 factores para un nivel de concentracin Ni
Fuente
Factor i
da
Suma de cuadrados
SSda
m-1
MSda= SSda/(m-1)
w i2
MSanal= SSanal /m
w ij2
2m
w ijk2
4m
MSrplica= SSrplica/(4m)
SSanal
Factor k
destilacin
SSdestilacin
Total
Media cuadrtica
Factor j
analista
Factor l
Residuo
rplica
gdl
8m y
SSrplica
1
2
s 2dest
1
MSda MSanal
8
1
MSanal MSdest
4
1
MSdest MSrplica
2
sr2
MSrplica
Re producibilidad sreprod
8m-1
2
s 2da s anal
s 2dest sr2
ec. 3.5
115
Las balanzas analticas empleadas durante la realizacin de esta Tesis fueron las
siguientes: balanza analtica marca Sartorius modelo 1601 AMP8-1, con un rango de
trabajo de 0.0001 a 110 g; balanza analtica marca Sartorius modelo BP210S, con un
rango de trabajo de 0.0001 a 210 g. Estas dos balanzas se emplearon para preparar las
disoluciones necesarias para la realizacin de los ensayos de validacin. Otras balanzas
y granatarios empleadas para la calibracin y verificacin del material volumtrico
fueron: balanza de precisin marca Precisa modelo 610C, con un rango de trabajo de
0.5 a 610 g; balanza granatario marca Mettler-Toledo modelo BP3001, con un rango de
trabajo de 5 a 3100 g. Todas ellas se calibraron y verificaron como se describe a
continuacin.
Calibracin
Como cualquier otro instrumento, las medidas proporcionadas por las balanzas estn
sujetas a un error que depende del proceso de medida y de las condiciones de trabajo,
y que normalmente se estima como incertidumbre durante su calibracin. El mtodo
empleado para su calibracin es el de medida directa, comparando las lecturas
proporcionadas por la balanza con el valor nominal de un juego de masas patrn, clase
F1 (OILM, 2004). Se debe calibrar la balanza en todo el rango de medida.
Las balanzas deben estar limpias, niveladas y ubicadas en un sitio libre de vibraciones y
fuentes de calor. Se deposita el juego de masas patrn, clase F1, junto a la balanza al
menos 24 horas antes del inicio de la calibracin, asegurndose que las condiciones
ambientales en la sala de balanzas durante el periodo que dure la calibracin son
estables y estn dentro de los siguientes intervalos: 50 r 20 % de humedad relativa y
25 r 10qC de temperatura, con una variacin mxima de temperatura de 3 qC.
Se realizan 10 series de pesadas, inicialmente en orden ascendente de masa y
posteriormente descendente, variando la posicin de la masa en la balanza. De esta
forma, la variabilidad de los resultados recoge ms fuentes de variacin que si cada
masa se midiese de forma seguida.
Para la medida de la histresis se comprueba que la balanza recupera el valor de una
masa, M, despus de retirar otra de mayor masa, M*.
Para estimar la incertidumbre debida al tarado se tara la balanza a mitad de rango y se
van depositando masas patrn en orden creciente hasta superar el valor de la tara.
Clculo de la correccin
Se calcula la correccin para cada uno de los puntos de calibracin i, del siguiente
modo:
cori
Mreal
Mmedia Mreal
ec. 3.6
ec. 3.7
117
El valor medio de masa, Mmedia, debe ser corregido por el empuje del aire. Este efecto
es consecuencia directa del principio de Arqumedes (Gonzlez et al., 2005; Riu et al.,
2001a) y hace que los valores de masa proporcionados por la balanza sean inferiores a
su valor verdadero. Por tanto, la ecuacin anterior pasa a ser la siguiente:
cori
U
Mreal Mmedia 1 aire
U pesa
ec. 3.8
Derivabalanza
Ibal
Resolucinbalanza
Repeticinbalanza
Excentricidad
Histresis
Derivasensibilidad
Taradobalanza
Empujeaire
CalPatrn
Patrn
CorPatrn DerPatrn
Calibracin
118
dmc
desv.linealidad
Debida a la variacin por pesar en distintos puntos del platillo de la balanza. Se estima como la diferencia
entre el valor medio en el punto central, M11 y el mximo valor obtenido de los puntos ms alejados del
centro del platillo, Mmas-alejado, a de la mxima capacidad de la balanza (CEM ME-005; Gonzlez et al.,
2007b; Reichmuth, 2001; Reichmuth et al., 2004).
Excentricidad
Minicial Mfinal
2 3
resolucin
s masa
M11 Mmsalejado
uhiste
Debida al rozamiento o fricciones entre las piezas mviles de la balanza. Se evala como la diferencia entre
las lecturas inicial, Minicial y final Mfinal, despus de una medida, M* (Clarck, s.f.;Croarkin, 2010).
Histresis
u excen
u der sen
Deriva de la
sensibilidad
ures
Se obtiene a partir de las especificaciones tcnicas del equipo, resolucin (CEM ME-005; Reichmuth, 2001).
urep
2
u 2excen u 2tara u 2emp upat
2
2
2
ures
u 2der sen uhiste
urep
u der lineal
u der
Estimacin
Resolucin del
equipo
Repetibilidad de Se evala a partir de la desviacin tpica de N medidas repetidas del patrn (Gonzlez et al., 2005; Gonzlez
las medidas
et al., 2007b).
Debida a la propia variabilidad de las medidas dadas por el equipo en un momento dado. Se obtiene en cada punto de u cali
calibracin como combinacin de diversas fuentes de error.
Calibracin
La no linealidad define la anchura de la banda, dentro de la cual puede producirse una desviacin positiva o negativa del valor
medido a partir de la lnea caracterstica ideal. Se obtiene a partir de desviacin de la linealidad, desv.linealidad, indicada en
las especificaciones de cada balanza (Gonzlez et al., 2005; Mettler-Toledo, 2000; Reichmuth, 2001; Reichmuth et al., 2004).
Deriva de linealidad
Se evala a travs de la mxima diferencia entre la incertidumbre de los certificados de calibracin de la balanza
(CEM ME-005).
Deriva de la balanza
Fuente de incertidumbre
Tabla 3.12: Cuantificacin de las fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre final de una balanza en cada punto de calibracin, i
119
120
Variabilidad
patrn
(EURAMET/cg18/v.02,2009)
ubali
2
u 2der u 2der lineal ucal
i
Se evala a partir de la diferencia entre el valor certificado y el valor nominal del patrn
(CEM ME-005).
Correccin
del patrn
Deriva
patrn
2
2
2
ucal
pat ucorpat u der pat
Calibracin
del patrn
u emp
Es la debida al empuje del aire sobre la pesa, se evala mediante la siguiente aproximacin (CEM ME-005;
Gonzlez et al., 2007b).
u calpat
dmcpatrn
corpatrn
Ipatrn
ec. 3.9
u der pat
u corpat
dmcpatrn
upat
Tol
Mreal Mtara
4 Mpat 3
Mnominal tarado
Empuje de aire
Tara
u tara
Estimacin
Consiste en comprobar que la balanza recupera el valor de la tara despus de una medida. Para ello se tara
la balanza a un de su capacidad mxima, Mtara, y se realizan pesadas de masas crecientes, Mreal. Se evala
a partir de la diferencia entre el valor ledo, Mleida, y el valor nominal tarado, Mnominal tarado, siendo este ltimo
la diferencia entre el valor real, Mreal menos el valor de la tara Mtara.
Fuente de incertidumbre
Tabla 3.12 (cont.): Cuantificacin de las fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre final de una balanza en cada punto de calibracin, i
Tol
!3
Ibal
cori Ibali Tol
Veraci
Re pi
Tol
(g)
(g)
0.0001 a 110
0.0025
0.0001 a 210
0.0015
0.01 a 610
0.15
0.1 a 3100
0.35
Veracnominak
Repnominal
2 u resolucin
2 u resolucin
En Tabla A.I.1 del Anexo I se muestra la hoja de clculo empleada para recoger los
datos y realizar los clculos en la calibracin de las balanzas utilizadas en este trabajo.
Verificacin
La verificacin de las balanzas se realiza para comprobar que estas siguen siendo aptas
entre calibraciones. Se comparan las lecturas, en varios puntos de verificacin i, con el
valor nominal de las masas patrn secundario, clase M1 (OILM, 2004) depositadas al
lado de la balanza al menos 2 horas antes de verificar las balanzas. Al igual que la
calibracin, se realiza en todo el rango de medida. Para decidir si las balanzas siguen
siendo aptas para el uso, se realizan cinco medidas y se calcula la correccin para cada
valor nominal de las masas patrn utilizadas, de la siguiente manera:
121
corver i
Mmedia Mreal
ec. 3.10
Las balanzas siguen siendo aptas para el uso si se cumple, para cada punto de
verificacin, i, que la correccin, corver, ms la incertidumbre de la balanza, Ibal,
estimada durante su calibracin, es menor que la tolerancia, Tol, asignada a la balanza:
corver i Ibal Tol
ec. 3.11
Mantenimiento
El mantenimiento consta nicamente de operaciones de limpieza que se realizan
siguiendo las instrucciones del fabricante de la balanza.
Calibracin
Para la calibracin se emplea el mtodo gravimtrico que consiste en determinar el
valor de masa de un lquido de densidad conocida, normalmente agua destilada, que
puede contener el material volumtrico (UNE-EN ISO 3696, 1996; UNE-EN-ISO 8655-6,
2003). En el caso de pipetas y buretas se hace por vertido, esto es, se tara la balanza
con el recipiente colector y se pesa el volumen vertido. En el caso de matraces y
probetas se tara la balanza con el recipiente vaco y a continuacin se pesa lleno de
agua hasta la marca. La masa de agua pesada se relaciona con el volumen real
teniendo en cuenta la incertidumbre de la balanza, el empuje del aire, la dilatacin
trmica de los materiales (vidrio, plstico, acero) y la diferencia de temperatura
respecto a la temperatura de referencia (20qC) y la temperatura del recipiente durante
las mediciones (ASTM E542-01, 2007; Blaubrand, 2004; UNE-EN ISO 4787, 2010). En
caso de ser material volumtrico de volumen fijo el volumen de ensayo ser el
volumen nominal. Para el caso de material volumtrico de volumen variable se
ensayarn al menos en tres volmenes: el volumen nominal, aproximadamente al 50%
del volumen nominal y el lmite inferior del intervalo de volumen til (UNE-EN-ISO
8655-6, 2003).
122
Intervalo calibracin
Variacin permitido
T agua (qC), tw
15-25
0.5
d 0.2
T aire(qC), ta
18-28 0.5
2.5
d 0.2
Humedad, %H
30-90
10
d 10
Presin (mbar), p
930-1040
d5
Cuando se utiliza un segundo equipo para realizar calibraciones como es este caso, es
fundamental que este tenga la resolucin adecuada. En primer lugar para que est en
concordancia con el rango a medir y en segundo lugar, ya que si sta es demasiado alta
repercute en el valor de la incertidumbre. En este caso el equipo secundario empleado
es una balanza la cual debe estar calibrada, con resolucin 10 veces mejor que la
tolerancia del material a calibrar. Para microvolmenes, las caractersticas tcnicas de
la balanza debern estar de acuerdo a los siguientes requerimientos indicados en la
Tabla 3.16 (CENAM EMA., 2009; UNE-EN ISO 4787, 2010; UNE-EN-ISO 8655-6, 2003):
Tabla 3.16: Requisitos de las balanzas empleadas durante la calibracin del material volumtrico
Volumen seleccionado
V
Resolucin
(mg)
Repetibilidad y linealidad
(mg)
1 L V 10 L
0.001
0.002
0.002
10 L V 100 L
0.01
0.02
0.02
100 L V 1000 L
0.1
0.2
0.2
1 mL V 10 mL
0.1
0.2
0.2
10 mL V 200 mL
123
V20
Mmedia Z
ec. 3.12
donde Z es
U U
aire
w
U
1 aire 1 J t w 20
U pesa
ec. 3.13
ec. 3.14
-1
(qC )
9.910
-6
-6
Vidrio de soda, VS
2710
Poliestireno
210 10
Policarbonato
450 10
Polipropileno
240 10
-6
-6
-6
p M
z R T
1 x V
M
1 V
Ma
ec. 3.15
donde p es la presin atmosfrica en Pa, Ma es la masa molar del aire seco igual a
0.0289635 kgmol-1, R es la constante molar de los gases, 8.31451 JK-1mol-1, T es la
temperatura expresada en K, Mv es la masa molar del vapor de agua, 0.0180154
kgmol-1 y xv es la fraccin molar de vapor de agua; la frmula para su clculo es la
siguiente (Davis, 1992):
124
xV
%HR
1.0062 3.14 10 8 p 5.6 10 7 t a2
100
ec. 3.16
1
>
p
p2
a 0 a1 t a a 2 t a2 (b 0 b1 t a ) x V (c 0 c 1 t a ) x 2V 2 (d E x 2V )
T
T
ec. 3.17
siendo:
-6
a0 = 1.58123 10 K Pa
-6
b0 = 5.7070 10 K Pa
-6
c1 = -2.3760 10 Pa
-1
-1
-1
-8
a1 =-2.9331 10 Pa
-8
b1 = -2.05 10 Pa
d = 1.83 10
-11
-1
-1
K Pa
-2
a2 = 1.1043 10
-10
K Pa
-1
-8
-1
c0 = 1.9898 10 K Pa
-9
E = 7.65 10 K Pa
-1
-2
>
ec. 3.18
Tambin pueden emplearse las tablas incluidas en la norma UNE-EN ISO 4787, que
renen los valores del factor de correccin volumtrico, Z, as como densidades del
agua y del aire a distintas temperaturas y presin atmosfrica (UNE-EN ISO 4787,
2010).
La prdida por evaporacin puede ser un factor relevante cuando se trabaja con
volmenes reducidos. Para determinar la prdida de masa, se llena de agua el
recipiente a pesar, se observa la lectura obtenida y se pone en marcha un cronmetro.
Se comprueba como disminuyen los valores al cabo de 30 segundos comparando con
la lectura a tiempo cero. En caso de tapar el recipiente no es preciso, por lo general,
que se corrija la evaporacin (Batista et al., 2007; UNE-EN-ISO 8655-6, 2003).
Clculo de la correccin
Se calcula, para cada uno de los volmenes a calibrar, la correccin, cori, del siguiente
modo:
125
cori
ec. 3.19
Condiciones ambientales
Masa
IVol
Clase
Repeticin
Fig. 3.9: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre total del material volumtrico
Una vez identificadas las fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre final, la
siguiente etapa es estimarlas para cada uno de los volmenes a calibrar. La Tabla 3.18
muestra las ecuaciones empleadas para cuantificar cada una de estas fuentes de
incertidumbre. Se han incluido en esta tabla los coeficientes de sensibilidad por ser
distintos de la unidad para algunas contribuciones.
Por ltimo, se obtiene la incertidumbre combinada, uvol-i, aplicando la ley de
propagacin de errores descrita en la ec. 3.20, y se multiplica por el factor de
cobertura, K, para obtener la incertidumbre total expandida, Ivol-i.
126
Se obtiene considerando los valores mximos y mnimos que el parmetro Z puede tomar
durante la calibracin de acuerdo a la variacin de las variables tw, ta, %HR y p (Bailn
Prez et al., 2005; Muoz et al. 2003).
Zmax = cuando tw, ta y %HR son mximas y p es mnima
Zmin = cuando tw, ta y %HR son mnimas y p es mxima
Variacin de Z
V20
V20
V
2
2
2
u bal
u rep
20 u 2Z
u clase
M
Z
media
Mmedia
Equipos de volumen
variable
u vol i
V20
Mmedia
Ibal
K
tol
3
ec. 3.20
resolucin
2 3
uclase
uclase
smasa
N
Zmax Zmin
2 3
urep
uclase
uZ
ubal
V20
Mmedia
V20
uV 20
media
uM
Estimacin
Coeficiente de sensibilidad
Se estima de forma diferente dependiendo del tipo de material volumtrico (Bailn Prez et al., 2005; Muoz et al.
2003).
Se obtiene a partir de N medidas repetidas de la masa del agua contenida o dosificada por el material volumtrico
durante la calibracin.
Mmedia Z .
Variacin de la masa
Fuente de incertidumbre
Tabla 3.18: Cuantificacin de las fuentes de error que contribuyen a la incertidumbres del material volumtrico en cada punto de calibracin, i
127
Se considera que el material volumtrico es apto para el uso si se cumple, para cada
volumen calibrado, las condiciones reflejadas en la Tabla 3.19, y se le asignar la
incertidumbre mxima de las obtenidas para cada volumen como incertidumbre de
equipo, Ivol,:
Tabla 3.19: Condiciones de validez para la calibracin del material volumtrico
Tol
!3
3
cori I vol i Tol
Veraci
Re p i
Tolerancia
Veracnominak
Repnominal
Matraces
0.5% Vnominal
tol
tol/2
Probetas
0.5% Vnominal
tol
tol/2
Aforadas
0.5% Vnominal
tol
tol/2
Graduadas
resolucin
tol
tol/2
Pipetas
Micropipetas
Verac +2urep
Verificacin
De todo el material volumtrico solo es necesario verificar peridicamente aquel que
tenga partes mviles como las micropipetas, dosificadores...
Para ello se realizan cinco medidas de la misma forma que la calibracin y se calcula el
volumen, V20 segn la ec. 3.12. Para verificar la validez de los datos se calcula la
veracidad y repetibilidad y se comprueba que los resultados son menores que los
nominales especificados por la normas UNE-EN-ISO 8655 (UNE-EN-ISO 8655, 2003).
En el Anexo I se encuentra la tabla de toma de datos y clculos usada en la verificacin
del material volumtrico empleado en esta Tesis, Tabla A.I.6.
128
Calibracin
Las medidas proporcionadas por el espectrofotmetro estn sujetas a un error que
depende del proceso de medida y de las condiciones de trabajo, error que estimamos
anualmente como incertidumbre durante su calibracin. El mtodo empleado para su
calibracin es el de medida directa, comparando las lecturas proporcionadas por el
equipo con el valor nominal de un juego de filtros patrn.
Un espectrofotmetro de ultravioleta-visible, en funcin de su forma de trabajo,
puede realizar a determinadas longitudes de onda medidas directas de absorbancia
(por ejemplo, determinacin del color en aguas residuales (UNE-EN ISO 7887, 2012)) o
indirectas, por lo que requerir una calibracin con disoluciones patrn. En ambos
casos, los valores de absorbancia se registran a una longitud de onda determinada de
modo que el equipo debe estar calibrado en longitud de onda antes de ser calibrado
en absorbancia (Burke et al., 1983).
Para la realizacin de la calibracin, el espectrofotmetro deber estar estabilizado
durante 30 minutos. Las condiciones ambientales en la sala no son parmetros crticos
para la calibracin, pero durante el periodo que dure la calibracin deben ser estables
y estar dentro de los siguientes intervalos: 50 r 20 % Hr y 25 r 10qC.
En este caso los patrones empleados en la comprobacin de la longitud de onda
fueron filtros de holmio y didimio trazables al patrn SRM 930e de NIST (National
Institute of Standards and Technology) (Allen, 2007). Los filtros empleados en la
confirmacin de la absorbancia fueron de aproximadamente 0.25, 0.5 y 1 unidades de
absorbancia a distintas longitudes de onda (Clare, 2005).
Se realizan inicialmente 5 series de medida con los filtros de didimio y holmio y
posteriormente con los filtros de absorbancia alternando orden ascendente y
descendente con las siguientes condiciones instrumentales:
Tabla 3.21: Condiciones instrumentales de medida del espectrofotmetro UV-vis durante la calibracin
Longitud de onda
Absorbancia
Modo fotomtrico
Hacer un autocero al aire.
Seleccionar las siguientes longitud de onda:
O1 = 440, O2 = 465, O3 = 546, O4 = 590 y O5 = 635 nm
129
Clculo de la correccin
Se calcula la correccin, cori, para cada uno de los puntos de calibracin, tanto en
longitud de onda como en absorbancia, empleando las siguientes ecuaciones:
corUA i
UA media UA real
ec. 3.21
O media O real
ec. 3.22
corOi
Deriva equipo
IUV-vis
Resolucin
Estabilidadlnea-base
Derivalinea base
Repeticin equipo
CalPatrn
Patrn
Auxiliar
DerPatrn
CorPatrn
Calibracin
Fig. 3.10: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre final de un espectrofotmetro UV-vis: en
negro las que contribuyen a la incertidumbre en longitud de onda y absorbancia, en azul cuatro
contribuciones ms a la incertidumbre total de la absorbancia.
Una vez identificadas las fuentes de error la siguiente etapa es cuantificarlas en cada
punto de calibracin. En la Tabla 3.22 estn recogidas las contribuciones a la
incertidumbre en la longitud de onda y en la absorbancia. Se han omitido en esta tabla
los coeficientes de sensibilidad al ser para todas las contribuciones la unidad.
130
Variabilidad
patrn
Calibracin del
patrn
Omax Omin
3
ucalpat
Ipatrn
UA max UA min
3
2
2
2
ucal
pat ucor pat ucder pat
upat
resolucin
2 3
sUA
N
ures
urep
2
u2estLB u2O upat
2
2
urep
ures
u2der LB
tolcelda UA
ancho celda 3
ucali
ucelda
Resolucin
sO
N
2
2
2
urep
ures
upat
urep
dmc
u der
Absorbancia
ucali
No aplica
dmc
Longitud de onda
Cuantificacin
Repetibilidad
Calibracin
Se evala a partir de la tolerancia del ancho de celda, tolcelda, indicada por el fabricante, expresada en UA
(Hellma, 2010).
Ancho celda
Fuente de incertidumbre
Tabla 3.22: Cuantificacin de fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre final de un espectrofotmetro UV-vis en cada punto de calibracin, i
131
132
uUA i
ec. 3.24
2 3
UA IO UA IO
2 3
2
2
u 2der u celda
u cal
i
uO
UA t
UA max UA min
ec. 3.23
No aplica
Incertidumbre
Debida a la incertidumbre en la longitud de onda seleccionada
en O
uestLB
UA t
Absorbancia
uder LB
Cuantificacin
2
u 2der u cal
i
No aplica
Estabilidad de Se evala a partir de la variacin mxima de absorbancia durante el tiempo que dure las
la lnea base
medidas (Soovali el al., 2006)
u O i
No aplica
Longitud de onda
Deriva de la
lnea base
Fuente de incertidumbre
Tabla 3.22 (cont.): Cuantificacin de fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre final de un espectrofotmetro UV-vis en cada punto de calibracin, i
Tol
!3
IUA
Tol
!3
IO
corO i IO Tol
VeracUA i
VeracO i
Tolerancia
Veracnominak
Repnominal
De 0 a 0.25 UA
0.003
0.002
0.001
De 0.25 a 0.5 UA
0.005
0.002
0.001
De 0.5 a 1 UA
0.008
0.004
0.002
Filtro de holmio
1.5
0.5
0.1
Filtro de didimio
1.5
0.5
0.1
Verificacin
La verificacin del espectrofotmetro se realiza de forma alterna a la calibracin y
despus de alguna incidencia, verificndose las mismas especificaciones que en la
calibracin y, adems, el paso de banda espectral y la luz difusa, determinada con una
disolucin de NaNO2 al 5%.
La verificacin de la absorbancia y longitud de onda se realiza de la misma forma que
la calibracin.
133
UA media UA real
ec. 3.25
O media O real
ec. 3.26
corver O
El espectrofotmetro sigue siendo apto para el uso si se cumple, para cada punto de
verificacin, tanto en absorbancia como en longitud de onda, las siguientes
condiciones:
Tabla 3.25: Condiciones de validez para la verificacin del espectrofotmetro de UV-vis
corver UA i IUA i Tol
VeracUA i
Re pUA i
corUA i Veracnominal
corver O i IO i Tol
VeracO i
Re p O i
s O i Re p no minal
La Tabla A.I.9 y Tabla A.I.10 del Anexo I muestran un ejemplo de las tablas empleadas
para la toma de datos y realizacin de clculos durante la verificacin del
espectrofotmetro empleado en esta Tesis.
Mantenimiento
Peridicamente se realizan las siguientes operaciones de mantenimiento: limpieza del
compartimento de muestras y chequeo del desecante de gel de slice.
Calibracin
En el cromatgrafo inico empleado las calibraciones realizadas fueron analticas,
relacionando la concentracin de una especie qumica en disolucin con la magnitud
134
fsica que mide el equipo, conductividad en este caso. Una vez registradas las
respuestas al medir una serie de disoluciones de concentracin conocida se obtiene la
relacin entre respuesta y concentracin (CEM QU-004, 2000).
Verificacin
Dado que no se realiz calibracin del equipo, se opt por realizar operaciones
exhaustivas de verificacin de sus especificaciones consistentes en comprobaciones
peridicas del estado de la bomba, del detector y del inyector, comparando los
resultados obtenidos con las especificaciones indicadas por el fabricante. La
verificacin de los componentes del cromatgrafo se realiza en los rangos de
operacin empleados durante la aplicacin del mtodo de anlisis de determinacin
de aniones.
Todos los equipos auxiliares empleados durante la verificacin, en este caso balanza,
cronmetro y termmetro, estaban igualmente validados.
La verificacin del estado de las bombas consiste en realizar comprobaciones
peridicas de la estabilidad, veracidad y reproducibilidad del caudal que proporcionan.
Para la verificacin de la estabilidad de las bombas se comprobar que el flujo que
aportan es constante con el tiempo. Para ello se cambia la fase mvil por agua
destilada, se desconectan las bombas del sistema para que funcionen
autnomamente, se ajusta su caudal a un valor fijo, se recoge el lquido a la salida
durante un tiempo determinado, t, en un recipiente previamente tarado, Mi, y se pesa,
Mf. Se calcula el flujo real de las bombas, F, mediante la frmula ec. 3.27, teniendo en
cuenta la densidad del agua a la temperatura de realizacin del ensayo, Uw (Marinero
et al., 2003).
F
M f Mi
60
Uw t
ec. 3.27
%Er
%DER
Fno minal
100
sF
100
Fno minal
ec. 3.28
ec. 3.29
135
Verac
Re p
Verac
Mantenimiento
Otro de los elementos de un cromatgrafo a verificar es el inyector, pero al ser un
bucle de volumen fijo no es necesario ningn tipo de comprobacin, simplemente
mantenerlo limpio pasando agua ultrapura una vez terminada las medidas.
136
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCIN TERICA
3. MATERIALES Y MTODOS
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
En este captulo se discuten los resultados obtenidos en las validaciones de los tres
mtodos analticos estudiados, incluyendo previamente las validaciones de los equipos
de medida empleados.
4.1.1. BALANZAS
Todas las balanzas empleadas se calibraron peridicamente con juegos de pesas
calibrados y trazables Clase F1. En la Tabla 4.1 se detallan los valores certificados de las
masas patrn empleadas en la calibracin de una de las balanzas analticas (Sartorius
1601 AMP8-1).
Tabla 4.1: Masas patrn empleadas en la calibracin de la balanza analtica Sartorius 1601 AMP8-1, en g
Mnominal
0.01
0.1
10
100
Mreal
0.009998
0.099977
1.000000
10.00007
99.99992
Tolerancia
0.000025
0.00005
0.0001
0.0002
0.0005
Ipat
0.000008
0.000016
0.00003
0.00006
0.00016
corpat
0.000002
-0.000023
0.000000
0.000070
-0.000080
cor
Ibal
(g)
(g)
(g)
0.010
0.00005
0.0008
7.7
0.100
0.00003
0.0003
0.30
1.000
0.00002
0.0003
0.026
10.000
-0.00003
0.0003
0.0029
100.000
0.00018
0.0005
0.0005
%Ibal
139
3.0E-04
2.0E-04
1.0E-04
0.0E+00
0.01
0.1
10
Mnominal (g)
100
uder-sen
uder-equ
utara
ures
ucor-pat
urep
ucal-pat
uexcen
uder-lineal
uemp
Fig. 4.1 Contribuciones a la incertidumbre total de la balanza para cada punto de calibracin
Tabla 4.3: Masas patrn empleadas en la verificacin de la balanza analtica Sartorius 1601 AMP8-1, en g
140
Mnominal
0.02
0.1
10
100
cor
-0.000167
-0.000067
0.000181
0.000106
0.000865
Mreal
0.019833
0.099933
1.000181
10.000106
100.000865
Ipat
0.00010
0.00017
0.00033
0.00067
0.0017
Todas las balanzas empleadas han cumplido las condiciones de validez para la
calibracin y verificacin indicadas en las Tablas 3.13 y 3.14 y en la ec. 3.11.
Ivol
(mL)
(mL)
0.018
0.35
10
0.023
25
0.047
Matraces
Pipetas graduadas
Vnominal
Ivol
(mL)
(mL)
25
0.048
0.19
0.23
50
0.071
0.14
0.19
100
0.12
0.12
250
0.18
0.071
500
0.30
0.060
1000
0.47
0.047
2000
0.71
0.036
%Ivol
%I
Vnominal
Ivol
(mL)
(mL)
5
10
25
%Ivol
0.029
2.9
0.029
0.58
0.058
2.9
10
0.058
0.58
0.059
1.2
25
0.063
0.25
Probetas
Vnominal
Ivol
(mL)
(mL)
100
250
500
1000
2000
%Ivol
20
0.58
2.9
100
0.59
0.59
50
1.2
2.3
250
1.2
0.47
100
2.9
2.9
500
2.9
0.58
200
5.8
2.9
1000
5.8
0.58
400
12
2.9
2000
12
0.6
De acuerdo a los datos de la Tabla 4.4, podemos ver que al aumentar el volumen
nominal del material volumtrico la incertidumbre final aumenta en valor absoluto,
pero disminuye en valor relativo. Tambin se observa que, para el material graduado,
la incertidumbre en valor absoluto es constante independientemente del volumen
medido.
141
En las siguientes grficas vemos cmo influyen las distintas fuentes de error segn el
tipo de material volumtrico. Para el material volumtrico aforado como pipetas, Fig.
4.2 y matraces, Fig. 4.3, la fuente de error que ms contribuye a la incertidumbre total
es la clase y en menor medida la contribucin debida a la repetibilidad, mientras que
las contribuciones debidas a la balanza y las condiciones ambientales son mnimas por
regla general.
ui (y,xi)
0.025
0.020
uclase
urep
ubal
uZ
0.015
0.010
0.005
0.000
10
25
Vpipeta (mL)
Fig. 4.2: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre del volumen de las pipetas aforadas
ui (y,xi)
0.35
0.30
0.25
uclase
urep
ubal
uZ
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
25
50
100
250
500
1000
2000
Vmatraz (mL)
Fig. 4.3: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre del volumen de los matraces
142
uclase
urep
ubal
uZ
0.03
0.02
0.01
0.00
0-200 g
0-300 g
0-600 g
Rango de la balanza
uclase
urep
ubal
uZ
0.015
0.010
0.005
0.000
Pipeta 5 mL
10
Pipeta 10 mL
25
Pipeta 25 mL
Vpipeta
Fig. 4.5: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre del volumen de las pipetas graduadas
ui (y,xi)
6
5
4
uclase
urep
ubal
uZ
3
2
1
0
20
100
Probeta 100 mL
50
250
Probeta 250 mL
100
500
Probeta 500 mL
200
1000
Probeta 1000 mL
400
2000
Probeta 2000 mL
Vprobeta
Fig. 4.6: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre del volumen de las probetas
143
Resolucin
Vi
Ivol
(mL)
(mL)
(mL)
(mL)
0.01
0.00080
8.0
0.001
0.1
0.0001
0.2
0.001
0.001
0.0025
0.005
0.005
%Ivol
0.1
0.00080
0.80
0.01
0.00037
3.7
0.1
0.00040
0.40
0.020
0.00069
3.5
0.2
0.00076
0.38
0.1
0.00074
0.74
0.0012
0.12
0.1
0.0015
1.5
0.0021
0.21
0.1
0.0029
2.9
0.0035
0.35
0.5
0.0030
0.60
0.0047
0.094
1.2E-03
uclase
urep
ubal
uZ
8.0E-04
4.0E-04
0.0E+00
0.01
0.1
0.02
0.2
0.1
0.5
Micropipeta = 1 mL
Micropipeta= 5 mL
Fig. 4.7: Fuentes de error que contribuyen a la incertidumbre del volumen de las micropipetas
ui (y,xi)
1.6E-03
1.2E-03
uclase
urep
ubal
uZ
8.0E-04
4.0E-04
0.0E+00
0.1
1
res = 0.001
0.1
res = 0.0025
0.1
1
res = 0.005
Vmicropipeta = 1mL
279.28
360.88
453.46
536.32
637.54
Didimio (nm)
327.98
471.98
525.42
680.98
875.56
Filtro 2
Filtro 3
O
(nm)
Vnominal
(UA)
Ifiltro
(UA)
Vnominal
(UA)
Ifiltro
(UA)
Vnominal
(UA)
Ifiltro
(UA)
440
0.270
0.002
0.494
0.004
0.972
0.007
465
0.237
0.002
0.455
0.004
0.895
0.007
546
0.241
0.002
0.464
0.004
0.903
0.007
590
0.259
0.002
0.513
0.004
0.969
0.007
635
0.260
0.002
0.514
0.004
0.939
0.007
Con los resultados obtenidos de las cinco medidas replicadas realizadas se estim la
incertidumbre de la longitud de onda y absorbancia aplicando las expresiones
recogidas en la Tabla 3.22.
La Tabla 4.8 y la Tabla 4.9 muestran los resultados de incertidumbre absoluta y relativa
para longitud de onda y absorbancia, respectivamente. Se observa que la
incertidumbre absoluta permanece prcticamente invariable con la longitud de onda,
siendo ligeramente superior para el filtro de didimio. En el caso de la absorbancia la
incertidumbre aumenta con sta, permaneciendo la incertidumbre relativa
aproximadamente constante. En ningn caso la incertidumbre super el 1%.
Tabla 4.8: Incertidumbre de la longitud de onda del espectrofotmetro UV-vis
146
O
IUV-vis-O
O
IUV-vis-O
(nm)
(nm)
(nm)
(nm)
279.35
0.30
0.11
328.15
0.54
0.16
360.90
0.30
0.08
472.10
0.53
0.11
453.55
0.42
0.09
525.50
0.52
0.10
536.40
0.33
0.06
681.20
0.57
0.08
637.70
0.56
0.09
875.20
0.81
0.09
%IUV-vis-O
Filtro
Didimio
Holmio
Filtro
%IUV-vis-O
IUV-vis-UA
(UA)
(UA)
0.25
0.0024
0.96
0.50
0.0047
0.94
1.00
0.0074
0.74
%IUV-vis-UA
En la Fig. 4.9 y Fig. 4.10 se han representado las fuentes de error que contribuyen a la
incertidumbre total de la longitud de onda y de la absorbancia.
ui (y,xi)
0.35
0.30
0.25
urep
ures
ucal-pat
ucor-der-pat
uder-equ
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
279.35
360.9
453.55
536.4
637.7
328.15
472.1
Filtro Holmio
525.5
681.2
875.2
Filtro Didimio
ui (y,xi)
3.5E-03
3.0E-03
2.5E-03
2.0E-03
1.5E-03
1.0E-03
0.250 UA
0.500 UA
1.000 UA
0.939
0.969
0.903
0.895
0.972
0.514
0.513
0.464
0.455
0.494
0.260
0.259
0.241
0.237
0.270
5.0E-04
0.0E+00
urep
uder-equ
uest-LB
uder-LB
ures
uO
ucelda
ucor-der-pat
ucal-pat
Absorbancia
147
IUV-vis
0.9 nm
Absorbancia
0.007 UA
El equipo cumple, en ambos parmetros, con las condiciones de validez exigidas que se
indicaron en la Tabla 3.23 y Tabla 3.24. El espectrofotmetro UV-vis tambin ha
satisfecho las condiciones de validez para la verificacin indicadas en la Tabla. 3.25.
1.5000
1.4975
|0
10
20
30
40
50
60
70
Flujo
1.0050
Fnominal
Fmedido
Fnominal 0.5%
1.0000
0.9950
|0
10
20
30
40
50
60
70
10
20
30
40
50
60
70
0.5025
0.5000
0.4975
0
Tiempo (min)
148
%DER
0.15
0.10
0.05
0.00
0.5
1.5
-1
-0.05
-2
-0.10
-3
%Er
%DER
Especificaciones
-0.15
Caudal (mlmin-1)
/nominal
-1
/real
/medida
-1
-1
%Er
(qC)
(Scm )
(Scm )
(Scm )
15.3
15
11.92
12.03
19.6
84
74.43
73.69
0.99
24.3
147
145
146.25
-0.86
-0.92
La estabilidad del detector se comprob registrando, durante una hora, la lnea base
de la fase mvil. En la ampliacin del cromatograma mostrado en la Fig. 4.13 vemos
que tanto el ruido como la deriva de la seal estn dentro de las especificaciones del
fabricante (ruido | 2.4 nScm-1 y deriva | 1 nScm-1 en 20 min).
149
0.0025
0.0020
0.0015
0.0010 Cond
0.0005
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
min
LA
150
114
111
3.50
108
3.40
105
3.30
4.92
69
4.84
67
4.76
10 20 30 40 50 60 70 80 90
Nitrito
Bromuros
5.82
93
5.66
90
5.50
87
5.34
84
5.18
40
50
Da
60
70
80
90
7.64
5.98
30
5.00
Da
96
20
5.08
71
6.14
10
5.16
Da
99
5.24
73
10 20 30 40 50 60 70 80 90
tR (min)
5.32
tR (min)
3.60
3.70
117
tR (min)
120
Cloruros
75
3.80
30
7.52
7.40
29
7.28
7.16
28
tR (min)
Fluoruros
7.04
6.92
27
6.80
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90
Da
151
82
9.04
8.76
79
8.48
76
8.20
73
7.92
70
7.64
0
9.32
tR (min)
85
12.54
47
12.29
46
12.04
45
11.79
44
11.54
43
11.29
42
10 20 30 40 50 60 70 80 90
11.04
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90
Da
Da
Sulfatos
99
14.71
97
14.43
95
14.15
93
13.87
91
13.59
89
13.31
13.03
87
0
tR (min)
Fosfato
48
9.60
tR (min)
Nitrato
88
10 20 30 40 50 60 70 80 90
Da
Por su parte, las reas de pico de los aniones muestran variaciones inferiores al 5%
respecto del valor inicial durante el primer mes. Pasado ese tiempo siguen siendo
todos estables excepto el nitrito, que disminuye, y el nitrato, que aumenta,
probablemente debido a la oxidacin de nitrito a nitrato.
A la vista de los resultados se decidi establecer un tiempo mximo de conservacin
de tres meses para la fase mvil concentrada y de un mes para los multipatrones de
aniones. Estos tiempos de conservacin fueron incluidos en el procedimiento de
anlisis definitivo, PNT-aniones, descrito en el Anexo III.
Conservacin de la muestra
Debe conocerse la metodologa a seguir para la toma y conservacin de las muestras y
as evitar resultados errneos en la medida de la concentracin del analito de inters
debido a la reaccin de ste con otros compuestos presentes en las muestras o con el
propio recipiente. Para establecer las condiciones de conservacin de las muestras de
agua residual para la determinacin de aniones, se recopilaron datos de los periodos
de conservacin, el tipo de envase permitido, tcnica de llenado y temperatura de
conservacin, recomendados en distintas normas consultadas. Esta informacin se
resume en la Tabla 4.12 (APHA, 1998; ASTM D4327, 2011; UNE-EN ISO 5667-3, 2004;
UNE-EN ISO 10304-1, 2009; USEPA Method 300.1, 1997).
152
Normativa
A
-
F , Cl , Br
ASTM D 4327,
2011
Todos
Tamao de la
muestra
V, P
--
EPA 300.1,
1997
Envase
SO4
28 das
filtrar 0.45 m;
4qC
48 horas
28 das
filtrar 0.22 m;
4qC
Lo antes
posible
P, V
500
filtrar in situ;
1-5qC
24 horas
500
filtrar in situ;
-20qC
1 mes
P, no PTFE
200
--
1 mes
P, V
100
--
1 mes
P, V
200
1-5qC
24 horas
PV
100
1-5qC
1 mes
1-5qC
24 horas
7 das
-20qC
1 mes
Cl
NO2
Br
P, V
NO3
P, V
250
P
3-
PO4
V, VB, P
250
1-5qC
1 mes
250
-20qC
1 mes
-2
SO4
P, V
200
1-5qC
1 mes
Todos
Sin cmara de
aire para NO2
2-8qC; oscuridad;
filtrar 0.45 m
--
Todos
--
--
filtrar 0.2 m
--
V, P
300
--
28 das
V, P
50
--
28 das
V, P
100
--
Refrigerar, 4qC
48 horas
100
--
28 das
100
Lo antes posible;
refrigerar, 4qC
48 horas
Muestras cloradas
28 das
Cl
NO2
Standard Methods
APHA, 1998
filtrar 0.45 m
--
Tiempo
--
Todos
Conservacin
Br
V, P
-
NO3
V, P
3PO4
100
Refrigerar, 4qC
48 horas
-2
SO4
V, P
100
Refrigerar, 4qC
28 das
delimitado por la desviacin robusta respecto del valor asignado para cada analito
podemos observar que los resultados permanecen dentro de dicho intervalo durante
el periodo investigado.
Fluoruro
1.4
1.3
1.2
1.1
1.0
5
15
10
15
20
25
64
62
60
58
0
30
10
Da
Nitratos
Fosfato
20
25
30
20
25
30
4.0
14
3.0
13
2.0
12
1.0
11
0.0
10
0
10
15
20
25
30
10
Da
15
Da
Sulfatos
95
15
Da
Cloruros
66
1.5
90
85
80
75
Cloruros
44
42
40
38
36
34
32
10
15
20
25
30
10
Da
15
20
25
Da
Sulfatos
60
Valor asignado
50
i Valor obtenido
40
informe final
30
0
10
15
20
25
30
Da
Fig. 4.15: Variacin temporal de las concentraciones de distintos aniones en muestras reales
154
30
Por otro lado, la diferencia mxima entre medidas es menor del 10% para todos los
casos excepto para el fosfato, no observndose ninguna tendencia temporal en los
valores representados, por lo que esas desviaciones se pueden asignar a errores
experimentales y no a inestabilidad de las muestras.
A la vista de los resultados obtenidos con las muestras reales ensayadas, se decidi
establecer un periodo mximo de conservacin de las muestras de 28 das para el
anlisis de aniones por cromatografa ionica, siempre y cuando los recipientes estn
completamente llenos y se conserven refrigeradas. No obstante, dado que no se ha
comprobado experimentalmente la estabilidad de nitrito y bromuro en una muestra
real y solo se ha ensayado una nica matriz real, y a la vista de las recomendaciones de
las distintas normativas recogidas en la Tabla 4.12, para garantizar la integridad de las
muestras estas se analizarn lo antes posible. Estas condiciones de conservacin de las
muestras fueron incluidas en el procedimiento de anlisis (PNT-aniones, Anexo III).
Tambin se deben tener en cuenta las recomendaciones bibliogrficas encontradas
referentes a los envases para el almacenamiento. De este modo, las muestras se
deben almacenar en recipientes de politetrafluoretileno, PTFE, (excepto para el caso
del fluoruro), polietileno o vidrio, lavados y aclarados repetidamente con agua
ultrapura con objeto de minimizar los riesgos de contaminacin de las muestras; se
debe evitar utilizar soluciones de detergentes fuertemente alcalinas o cidos fuertes
minerales en las operaciones de limpieza de los recipientes (PNT-aniones, Anexo III).
0.05
0.1
0.15
0.3
0.4
0.5
1.5
0.1
0.2
0.3
0.6
0.8
V (mL)
10
11
12
13
14
15
16
17
18
2.5
7.5
10
15
20
30
50
75
10
15
20
30
40
60
100
150
C F, Cl, Br (mg L )
-1
-1
C F, Cl, Br (mg L )
-1
155
El establecimiento del rango lineal para cada anin se bas en el anlisis de los
residuales y el factor de respuesta, fi, calculado como la relacin entre rea de
pico/concentracin, para cada uno de los puntos de las lneas de calibrado.
La Fig. 4.16 muestra las lneas de calibrado obtenidas. En la grfica insertada se ha
ampliado el primer tramo de las lneas de calibrado para una mejor visualizacin de la
falta de linealidad provocada por la desviacin de la respuestas a altas
concentraciones, causada por el sistema de supresin qumica.
1200
1400
1000
800
600
400
200
50
40
30
20
10
0
0
0
0
25
50
75
100
125
150
CA (mg L-1)
175
CA (mgL-1)
-
3-
2-
U SO4
Residuos (Cuentas)
40
20
0
20
40
60
80
100
120
140
160
-20
-40
F
Cl
U NO2
| Br
NO3
3| PO4
2U SO4
-60
CA (mg L-1)
10
25
-
F
Cl
U NO2
| Br
NO3
3| PO4
2U SO4
fi (Cuentas Lmg-1)
20
15
10
5
0
0.01
0.1
10
100
Anin
-
F-, Cl , Br
NO2 ,
NO3 ,
3PO4 ,
-1
250
200
Cl
150
U NO2
100
| Br
NO3
50
3-
| PO4
2-
10
15
20
25
30
35
U SO4
CA (mgL-1)
157
En la Fig. 4.20 podemos ver cmo, en el rango de calibracin propuesto, los residuales
son mucho ms pequeos y los factores de respuesta son ms homogneos.
(a)
4
2
0
10
15
20
25
30
(b)
20
fi (Cuentas L mg A-1)
Residuos (Cuentas)
35
-2
-4
16
12
8
4
0
0
-6
10
20
30
CA (mg L-1)
CA (mgL-1)
-
3-
2-
U SO4
Fig. 4.20: (a) Representacin grfica de los residuales y( b) Representacin grfica de los factores de
respuesta para la lnea de calibrado propuesta en la determinacin de aniones
Cl
NO2
Br
NO3
PO4
3-
SO4
2-
15.2
9.3
6.3
3.8
4.9
3.2
6.2
%DERf
4.9
5.9
5.0
2.1
4.3
11.0
3.9
Eficaz
12
No eficaz
Eficaz
Res n, n+1
Asimetra
Res n, n+1
Asimetra
7.22
1.10
4.91
1,39
3.57
1.19
2.28
1.75
4.28
1.22
2.62
1.78
A
F
10
Cl
NO2
Br
Cl
NO2
2.47
1.42
1.25
1.96
NO3
6.46
1.87
3.65
2.33
3PO4
3.02
1.11
1.79
1.79
1.08
2.02
2-
SO4
NO3
SO4
-
PO4
Br
No eficaz
2-
3-
s9251747
sa081443
0
1
2
10
11
12
13
14
min
Fig. 4.21: Efecto del estado de la precolumna/columna sobre la forma de los picos cromatogrficos
Al inicio de cada sesin se debe comprobar que la seal de la lnea base no supera un
determinado valor preestablecido; valores superiores seran indicadores de
alteraciones de la fase mvil, del sistema supresor de conductividad, del detector o
incluso de la columna. Se estableci un valor mximo tolerable de conductividad para
la lnea base de 20 S cm-1.
Aquellos procedimientos de ensayo que requieren la preparacin de blancos deben
tener establecido el valor mximo de seal permisible que no afecte al resultado. En
este caso el blanco se evalu inyectando, antes de los patrones de calibracin, agua
desionizada filtrada, verificndose la ausencia de picos.
A partir de los cromatogramas registrados para un patrn de concentracin 5 mgL-1 de
F-, Cl- y Br- y 10 mgL-1 de NO2-, NO3- PO43- y SO42-, se fijaron los intervalos permitidos
para los tiempos de retencin, considerando una variacin mxima del 5%. Los
intervalos resultantes se muestran en la Tabla 4.17.
159
tR 5% (min)
3.55 0.20
5.01 0.25
A
F
Cl
NO2
Br
5.89 0.30
7.19 0.35
NO3
8.14 0.40
3PO4
11.97 0.60
2-
14.03 0.70
SO4
Los requisitos impuestos a los valores lmite de resolucin y asimetra de los picos, la
seal mxima admisible de la lnea base, la condicin de obtener un blanco con
ausencia de picos antes de empezar una nueva lnea de calibrado, y la variacin
mxima de los tiempos de retencin, fueron incluidos en el procedimiento analtico
(PNT-aniones, Anexo III).
160
Contrain
Grupo
funcional
IC-H
Estireno
divinil-beceno
Hidronio
cido
sulfnico
2.0
IC-Ag
Estireno
divinil-beceno
Plata
cido
sulfnico
1.7
IC-Ba
Estireno
divinil-beceno
Bario
cido
sulfnico
1.6
IC-RP
Poliestireno
--
--
Tipo
Relleno
(mequiv)
Aplicaciones
+
5
4
u6091850
u6091928
2
u6092003
1
u6101749
1
10
11
12
13
14
min
161
6
5
4
3 u6091850
2
1
u6101954
u6141827
u8231902
1
2
10
11
12
13
14
min
162
6
5
4
u6291914
3
u6301911
2
u6302003
1
u8301636
1
10
11
12
13
14
min
Como puede verse, la complejidad de las muestras es muy variada al igual que su
pretratamiento; en cualquier caso, se recomienda la realizacin de blancos con los
cartuchos a emplear en el pretratamiento de las muestras, especialmente cuando el
anin a cuantificar est en concentraciones prximas al LoQ.
163
1000, 2500, 5000 y 10000 mg O2 L-1. La Fig. 4.25 muestra los cromatogramas obtenidos
para las diferentes disoluciones de ftalato y glucosa.
(a)
0
5
(b)
u5261657
u5241851
u5241950
u5261731
0
5 u5251714
u5261827
0
u5251756
u5261845
5
u5251838
u5261941
0
5 u5251951
u5261959
10 11 12 13 14
min
10 11 12 13 14
min
-100 DQO -500 DQO -1000 DQO -2500 DQO -5000 DQO -10000 DQO
(a)
uS/cm
(b)
18
20
16
14
15
12
10
10
8
6
5
u6021845
u6021926
u6031730
u6031833
u6031920
u6071743
0 1
2
10 11 12 13 14
2 u5262034
u5262108
u5271635
u5271712
u5271754
u5271837
0 1 2 3
10 11 12 13 14
min
-100 DQO -500 DQO -1000 DQO -2500 DQO -5000 DQO -10000 DQO
164
(b)
19
16
18
14
12
10
8
6
17
15
13
11
9
7
4
0
100
500
1000
2500
mg O2 L-1
-
5000 10000
-
100
3-
500
1000
mg O2L-1
2500
5000 10000
2-
Fig. 4.27: Influencia de la concentracin de (a) ftalato y (b) glucosa en la determinacin de aniones
cl
u S/cm
3.0
2.5
2.0
no2
1.5
so4
no3
1.0
0.5
C on d
10
11
12
13
14
min
Fig. 4.29: Cromatograma ampliado de la matriz compuesta tratada con resina cambiadora de iones
166
167
168
1256.1
6363
2.527
12.702
N4
N5
N1
N2
11
1.1
0.2
N3
N4
LS = N5
13.594
N2
N2
2.563
N1
13.594
N2
LoQ = N1
2.563
N1
100
100
100
Vf
(mL)
6248
N5
Vi
(mL)
1250.3
N4
0.084
0.030
0.084
0.030
13
2.6
0.27
0.078
0.031
13
2.6
0.27
0.084
0.030
-1
12.5
13.75
13.75
12.5
2.5
F- Cl- Br-
13
0.033
2.8
0.31
0.10
0.033
Vi
(mL)
0.1
0.4
25
25.32
5.283
25.32
5.283
12520
2605.7
251.16
25.42
5.106
12468
2480.3
251.69
25.32
5.283
38
7.6
0.75
0.16
38
7.9
0.75
0.13
0.16
0.16
0.066
0.066
0.064
0.066
NO2
0.034
0.034
11
2.3
0.31
0.13
0.034
13.645 0.098
2.648
13.645 0.098
2.648
1261.5
6766
12
2.3
0.31
0.033
128.34
12.97
2.543
6915
1251.9
125.08
13.645 0.098
2.648
Br
28.01
5.273
28.01
5.273
12510
2494
250.2
25.12
5.092
12490
2515
248.0
28.01
5.273
100
50
50
50
Vf
(mL)
-1
6.25
10
10
6.25
2.5
F- Cl- Br-
12.5
20
20
12.5
Cfinal (mgL )
Da 2
0.1
0.3
Vi
(mL)
100
50
50
Vf
(mL)
110
23
2.3
0.26
0.30
-1
0.30
0.080
0.080
6.25
7.5
7.5
12.5
2.5
F- Cl- Br-
12.5
15
15
25
Cfinal (mgL )
Da 3
110
23
2.3
0.30
0.078
0.080
NO3
13.739 0.091
2.587
13.739 0.091
2.587
27.5
25
1250.6
6238
14
2.9
0.32
0.033
123.66
13.36
2.624
6330
1282.1
128.45
27.5
25
0.033
Cl
13.739 0.091
2.587
Cfinal (mgL )
Da 1
126.75
N3
125.25
13.594
N2
N3
2.563
N1
Nivel
Ni
Compuesta
Agua
Ftalato
Glucosa
Matriz
0.2
0.2
25
Vi
(mL)
25.41
5.061
25.41
5.061
12979
2498.5
252.82
25.41
5.061
12653
2490.1
249.54
27.50
5.127
27
5.4
0.53
0.16
28
5.5
0.54
0.13
0.13
100
50
50
50
25.58
5.419
12.5
6.25
2.5
F- Cl- Br-
21
4.2
0.40
0.15
20
4.3
0.40
0.12
0.12
25
10
10
12.5
0.12
0.062
0.062
0.062
0.066
SO4
Cfinal (mgL-1)
25.15
5.031
25.15
5.031
12119
2504.2
248.83
25.15
5.031
12532
2492.3
251.19
Da 4
0.13
Vf
(mL)
0.062
0.062
0.062
0.063
PO4
Selectividad
Se hizo una revisin bibliogrfica de todas las normas y publicaciones disponibles para
justificar la selectividad y eliminar posibles interferencias (APHA, 1998; ASTM D 4327,
2011; UNE-EN ISO 10304-1, 2009; USEPA Method 300.1, 1997). Estas interferencias
pueden deberse a diferentes causas:
Coelucin cromatogrfica. Por ejemplo, la determinacin de fluoruro y cloruro
est sujeta a la interferencia causada por la presencia de aniones de cidos
orgnicos de bajo peso molecular como el frmico o el actico, que aparecen a
tiempos de retencin muy prximos, y que interfieren incluso en concentraciones
bajas. Los aniones de otros cidos orgnicos como, por ejemplo, malnico, maleico
y mlico, pueden interferir en la determinacin de los aniones inorgnicos si se
encuentran presentes en concentraciones elevadas. Los aniones inorgnicos
fluoroborato y clorito tambin pueden interferir en la determinacin.
El pico de un analito vecino solapa al pico de inters. La existencia de diferencias
importantes en las concentraciones de los distintos aniones a analizar puede
originar fenmenos de sensibilidad cruzada (perdida de resolucin).
Los tiempos de retencin cambian debido al cambio de la fuerza inica y pH de
la fase mvil por lo que esta debe ser cuidadosamente controlada.
La contaminacin de los reactivos y/o del material de laboratorio empleados en
la preparacin de las muestras puede conducir a falsos positivos de los analitos de
inters o incrementar los lmites de deteccin debido a elevadas lneas base.
El sulfito puede causar un sesgo positivo para el sulfato, como consecuencia de
su oxidacin por el oxgeno disuelto, que es catalizada por cationes como Fe 3+ o
Cu2+. Estos cationes pueden ser enmascarados ajustando el pH de la muestra a 10.
Tambin puede aadirse una solucin de formaldehdo con objeto de estabilizar el
sulfito.
Se debe investigar la presencia de metales de transicin o pesados que puedan
formar complejos solubles con los aniones estudiados y eliminarlos con ayuda de
intercambiadoras de cationes, por ejemplo cartuchos acondicionados en forma H +
o Na+.
Linealidad/Rango de ensayo
Para la estimacin de los parmetros de linealidad se utilizaron los datos de las 16
lneas de calibrado realizadas durante el desarrollo del diseo experimental. Los
169
Cl
sb
sa
se
(cuentasLmg )
(cuentasL mg )
(cuentas)
(cuentas)
(--)
r
(--)
16.07
0.2190
-4.874
2.012
2.889
0.9991
-1
-1
10.10
0.2304
-4.349
2.140
3.074
0.9974
NO2
6.783
0.1160
-4.846
2.108
3.028
0.9985
Br
3.911
0.04344
-0.8365
0.4089
0.5874
0.9994
NO3
5.267
0.08558
-3.576
1.612
2.316
0.9986
3PO4
2.786
0.02902
4.673
0.5357
0.7695
0.9994
2SO4
6.823
0.1089
-4.142
2.018
2.899
0.9987
A partir de estos datos y teniendo en cuenta que el estadstico t de Student, tcrtico, para
=0.05 y para n-2=5 grados de libertad (n = puntos de la lnea de calibrado = 7) es
2.571, se establecieron los lmites de confianza de la pendiente y ordenada en el
origen, resultando los valores mostrados en la Tabla 4.22.
Tabla 4.22: Intervalos de confianza de los parmetros de
calibracin para la determinacin de aniones
-
a
-1
(cuentasLmg )
(cuentas)
Cl
NO2
Br
NO3
3PO4
2SO4
170
Sensibilidad
La sensibilidad del mtodo de anlisis para los aniones investigados, expresada como
la pendiente de las respectivas lneas de calibrado, queda recogida en la tabla
siguiente:
-1
Cl
Sensibilidad
16.07
10.10
NO2
Br
6.783
3.911
3-
2-
NO3
PO4
SO4
5.267
2.786
6.823
171
Se puede apreciar que los valores estimados para los lmites de cuantificacin son
inferiores a los valores objetivos propuestos en la Tabla 3.6 excepto para el anin
cloruro.
Tabla 4.24: LoD y LoQ obtenidos para cada anin
-
LoQestimado
LoQobjetivo
(mg A L )
(mg A L )
(mg A L )
0.59
1.80
2.5
Cl
LoDestimado
-1
-1
1.00
3.04
2.5
NO2
1.47
4.46
5.0
Br
0.49
1.50
2.5
NO3
1.45
4.40
5.0
3PO4
0.91
2.76
5.0
2SO4
1.40
4.25
5.0
-1
Veracidad
Se calcularon los errores relativos, %Er-i, de los valores obtenidos para cada analista y
da, respecto a los valores esperados. En el caso de las muestras de control preparadas
con matriz sinttica compuesta, se calcularon las concentraciones una vez restada a
cada anin el rea del blanco.
172
F-
2.563
2.563
2.594
2.463
2.548
2.508
2.532
2.514
2.530
2.529
2.675
2.768
2.855
2.749
2.888
2.750
2.859
2.724
2.511
2.432
2.491
2.477
2.480
2.451
2.453
2.463
Cpreparada Cmedida
2.527
Glucosa
Ftalato
Compuesta
NO2-
1.2
-3.9
-0.58
-2.2
-1.2
-1.9
-1.3
-1.3
5.9
9.6
13
8.8
14
8.8
13
7.8
-2.0
-5.1
-2.8
-3.4
-3.3
-4.4
-4.3
-3.9
2.587
2.624
2.587
2.742
2.678
2.669
2.613
2.702
2.662
2.639
2.658
2.742
2.651
2.665
2.672
2.837
2.719
2.714
2.685
2.884
2.700
2.852
2.760
2.844
2.913
2.771
2.764
6.0
3.5
3.2
1.0
4.4
2.9
2.0
2.7
4.5
1.0
1.6
1.8
8.1
3.6
3.4
2.3
11
4.4
10
6.7
9.9
13
7.1
6.8
5.283
5.106
5.283
Br2.743
2.725
2.725
2.660
2.716
2.718
2.843
2.712
2.607
2.615
2.544
2.675
2.750
2.593
2.632
2.582
2.747
2.701
2.730
2.695
2.732
2.696
2.851
2.705
5.421 2.6
5.352 1.3
5.456 3.3
5.271 -0.22
2.648
5.355 1.4
5.387 2.0
5.409 2.4
5.475 3.6
5.221 2.2
5.196 1.7
5.145 0.76
5.154 0.92
2.543
5.360 5.0
5.134 0.53
5.120 0.27
4.987 -2.3
5.506 4.2
5.380 1.8
5.550 5.1
5.429 2.8
2.648
5.470 3.5
5.483 3.8
5.512 4.3
5.538 4.8
Cl3.6
2.9
2.9
0.47
2.6
2.6
7.4
2.4
2.5
2.8
0.0
5.2
8.2
2.0
3.5
1.5
3.7
2.0
3.1
1.8
3.2
1.8
7.7
2.2
5.273
5.092
5.273
5.442
5.451
5.449
5.366
5.420
5.429
5.456
5.296
5.174
5.201
5.456
5.492
5.559
5.307
5.356
5.233
5.448
5.459
5.353
5.502
5.455
5.424
5.467
5.430
NO3-
PO433.2
3.4
3.3
1.8
2.8
2.9
3.5
0.43
1.6
2.1
7.1
7.8
9.2
4.2
5.2
2.8
3.3
3.5
1.5
4.3
3.4
2.9
3.7
3.0
5.127
5.061
5.127
5.136
5.080
4.978
4.766
5.046
4.852
4.897
4.998
3.924
3.872
3.677
3.888
3.971
3.732
3.881
3.035
3.051
3.339
3.020
2.856
3.051
3.399
3.427
3.048
0.18
-0.92
-2.9
-7.0
-1.6
-5.4
-4.5
-2.5
-23
-24
-27
-23
-22
-26
-23
-40
-41
-35
-41
-44
-41
-34
-33
-41
5.419
5.031
5.419
%Er
5.586 3.1
5.495 1.4
5.557 2.5
5.399 -0.38
5.481 1.1
5.415 -0.10
5.537 2.2
5.500 1.5
5.472 8.8
5.499 9.3
5.754 14
5.483 9.0
5.701 13
5.399 7.3
5.472 8.8
5.452 8.4
5.597 3.3
5.497 1.4
5.661 4.4
5.547 2.3
5.611 3.5
5.485 1.2
5.600 3.3
5.550 2.4
SO42-
173
Se calcul el porcentaje de error relativo medio, %Er MEDIO, y los porcentajes de error
relativo mximo y mnimo, %Er MAX y %Er MIN, para cada nivel de concentracin de cada
anin en las muestras de control. Para no alargar la presentacin de resultados, estos
se muestran de forma grfica en la Fig. 4.30, en la que se aprecia que, a niveles bajos
de concentracin, los errores son en general mayores. Para la mayora de aniones
ensayados, el rango de valores de error relativo para el nivel ms bajo de
concentracin no incluye al cero evidenciando la presencia de error sistemtico
positivo para este nivel de concentracin.
En el resto de niveles de concentracin se observa cierto grado de homogeneidad en
los valores obtenidos y se cumple el valor objetivo %Er < 15% para todos los aniones,
excepto en el caso del fosfato, para el que los errores son desmesurados a niveles
bajos de concentracin, no alcanzndose el valor objetivo.
La veracidad del mtodo, expresada como sesgo, se estim como el error relativo
mximo de cada nivel de concentracin, en valor absoluto, |%Er|MAX. Se tom el valor
de error mximo en lugar del valor promedio para reflejar los valores ms
desfavorables del sesgo y garantizar as el cumplimiento del objetivo de veracidad en
todos los casos (Eurolab, 2006). La Tabla 4.26 muestra dichos valores.
En general se observa que el sesgo aumenta a medida que disminuye la concentracin
de analito en la muestra y aumenta la complejidad de la matriz. La influencia de la
matriz en el sesgo es ms notable, adems, a concentraciones prximas al lmite de
cuantificacin. Una de las posibles causas es que, a altas concentraciones, la muestra
debe ser diluida previamente al anlisis, provocando una disminucin del efecto matriz
que redunda en una disminucin del error.
Precisin
La precisin se evalu por medio de la varianza de reproducibilidad, s2reproducibilidad,
obtenida del anlisis de varianza de los resultados del diseo de experimentos
totalmente anidado de tres factores, empleando la ec. 3.4. En la Tabla 4.27 estn
recogidos los valores de la precisin para cada nivel de concentracin, expresados
como porcentaje de desviacin estndar relativa, %DER. Estos valores se han
representado grficamente en la Fig. 4.31, en la que se observa que el valor obtenido
es menor que el valor objetivo propuesto, %DER. < 15%, en todos los niveles de
concentracin y para todas las matrices ensayadas. En la misma figura se puede
apreciar que, aunque la determinacin de fosfato es menos precisa, los valores
obtenidos estn por debajo del valor objetivo. Tambin se aprecia como la falta de
precisin aumenta con la complejidad de la muestra, siendo mayor a bajos niveles de
concentracin mientras que a altas concentraciones el efecto de la matriz analtica en
la precisin es menos evidente. Por ltimo, cabe destacar que el efecto matriz en las
muestras preparadas con la matriz sinttica compuesta no es muy significativo debido
a que la eliminacin de los aniones inicialmente presentes va previsiblemente
acompaada de la eliminacin de otros muchos interferentes.
174
Cl
NO2
Br
NO3
PO4
SO4
Cl
NO2
2
Br
NO3
PO4
SO4
F
3
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
4
Cl NO2 Br NO3PO4SO4
Valor objetivo
Valor medio
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c ag f c g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f
SO42-
PO4
3-
NO3
Br
NO2
Cl
Anin
4.5
13
3.6
6.4
3.7
5.6
2.0
N1
Agua
3.1
13
3.9
3.0
3.1
3.8
3.0
N2
3.1
5.4
3.5
7.4
3.6
6.0
3.9
N1
3.2
3.6
3.9
3.1
3.2
3.4
3.0
N2
3.6
1.9
3.2
2.6
3.4
4.1
3.0
N3
Glucosa
4.6
3.7
5.4
4.1
6.0
5.3
5.1
N4
5.3
3.8
3.1
3.7
5.0
5.6
3.6
N5
14
40
9.2
8.2
5.0
8.1
14
N1
3.9
12
7.7
3.3
11
6.4
5.9
N2
3.1
3.1
5.3
2.9
11
5.2
4.1
N3
Ftalato
3.8
6.2
5.3
3.4
7.9
5.9
3.8
N4
6.0
4.5
5.0
4.4
6.3
6.8
4.3
N5
Tabla 4.26: Estimacin de la veracidad para la determinacin de aniones, expresada como sesgo relativo mximo, |%Er|MAX
4.5
44
4.3
7.7
5.1
13
5.1
N1
3.8
26
5.7
3.9
4.6
8.2
5.0
N2
Compuesta
Fig. 4.30: Representacin grfica de la estimacin de la veracidad para la determinacin de aniones en las distintas matrices: agua glucosa ftalto compuesta
-50
-40
-30
-20
-10
10
20
%Er
175
176
2.7
1.8
1.6
7.5
1.1
Br
NO3
PO4
SO4
10
15
%DER
2.5
1.6
Cl
NO2
1.6
3.2
1.5
2.1
1.7
1.8
2.2
N1
2.7
2.9
2.7
2.2
1.9
2.4
2.2
N2
1.6
1.3
1.7
1.3
1.8
2.6
1.3
N3
Glucosa
2.3
3.0
3.2
3.1
2.5
2.3
2.0
N4
2.4
2.5
2.2
2.0
2.0
2.1
2.8
N5
2.6
9.5
2.8
2.9
2.1
2.3
3.2
N1
2.3
2.7
2.5
2.3
3.9
2.7
2.2
N2
2.0
2.2
1.9
2.0
4.7
3.0
1.9
N3
Ftalato
2.5
4.1
2.7
2.4
3.5
2.5
2.2
N4
2.5
2.1
2.4
2.4
2.8
2.8
2.2
N5
Valor objetivo
1.5
8.3
1.1
2.1
1.2
3.5
1.3
N1
2.3
9.3
3.0
2.3
2.2
3.8
1.9
N2
Compuesta
NO2
Br
NO3
PO4
SO4
Cl
NO2
2
Br
NO3
PO4
SO4
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
Cl NO2 Br NO3PO4SO4
Fig. 4.31 Representacin grfica de la precisin para la determinacin de aniones en distintas matrices: agua glucosa ftalato compuesta
Cl
ag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cag f cg f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f
2.6
6.5
2.4
2.3
1.7
1.9
1.4
N2
N1
Anin
Agua
Tabla 4.27: Estimacin de la precisin para la determinacin de aniones, expresada como %DER
sfactor
0.30
da
sfactor
SO4
PO4
NO3
Br
Cl
analista
NO2
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
Br
NO3
NO2
0.00
Cl
0.15
rplica
N2
2.5
2.0
1.5
1.0
NO3
PO4
SO4
PO4
SO4
sfactor
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
analista
NO3
da
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
0.0
Cl
0.5
rplica
N3
12
9
6
analista
Br
Cl
NO2
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
Br
da
NO3
NO2
Cl
rplica
177
sfactor
N4
90
60
NO3
PO4
SO4
PO4
SO4
sfactor
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
analista
NO3
da
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
30
rplica
N5
345
230
da
analista
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
Br
NO3
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
115
rplica
Incertidumbre
Se estim la incertidumbre para cada nivel de concentracin aplicando las ecuaciones
mostradas en la Tabla 3.6 y descritas en el Apartado 2.3.3. Se tuvieron en cuenta tres
contribuciones principales: la falta de veracidad, la falta de precisin y la falta de
trazabilidad durante la preparacin de las muestras de control. Como contribucin a la
falta de veracidad se tom el porcentaje de error relativo mximo, en valor absoluto,
para evitar subestimar la incertidumbre total en las muestras reales.
Los resultados de incertidumbre de cada una de las contribuciones, expresadas como
varianza, la incertidumbre combinada y la incertidumbre expandida se resumen las
Tablas A.II.15 a A.II.21 del Anexo II.
En la Fig. 4.33 se representan las incertidumbres individuales para cada nivel de
concentracin; en ella se puede comprobar que las contribuciones que ms afectan a
la incertidumbre total son las debidas a la veracidad y a la precisin, mientras que la
debida a la trazabilidad contribuye de forma casi inapreciable. Tambin se observa que
las contribuciones aumentan a medida que aumenta la complejidad de la muestra.
178
N1
1.5
1.2
0.9
0.6
veracidad
precisin
SO4
PO4
Br
NO3
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
Cl
NO2
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
0.3
trazabilidad
N2
u
5
4
3
2
PO4
SO4
PO4
SO4
SO4
Br
NO3
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
precisin
PO4
veracidad
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
trazabilidad
N3
u
16
12
8
veracidad
NO3
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
precisin
trazabilidad
N4
150
120
90
60
30
veracidad
precisin
Br
NO3
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
0
F
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
trazabilidad
179
u
500
400
300
200
100
veracidad
SO4
PO4
NO3
Br
Cl
precisin
NO2
SO4
PO4
Br
NO3
NO2
Cl
SO4
PO4
NO3
Br
NO2
Cl
trazabilidad
En la Tabla 4.28 podemos ver los resultados finales de incertidumbre expresados como
porcentaje de incertidumbre expandida, %I. Los valores obtenidos de la incertidumbre
total son homogneos y menores al propuesto en la Tabla 3.6 (%I < 25%) para todos
los niveles de concentracin de cada anin excepto para los dos primeros niveles del
fosfato, al igual que ocurra con la veracidad. La representacin grfica de estos valores
presentada en la Fig. 4.34 permite observar que la incertidumbre aumenta con la
complejidad de la muestra y que el efecto matriz en las muestras preparadas con la
matriz sinttica compuesta, al igual que ocurra en el caso de la veracidad, no es muy
significativo, probablemente debido a la eliminacin de interferentes durante la
preparacin de las muestras de control.
En la Fig. 4.35 se han representado los resultados de incertidumbre obtenidos para las
distintas muestras de control, diferenciando los resultados por matrices. Debido al
rango de medida tan amplio, para facilitar la visualizacin de la relacin incertidumbreconcentracin, se representaron grficamente en escala logartmica, pudindose
observar que a bajas concentraciones los valores estimados de incertidumbre estn
ms dispersos que a altas concentraciones. Esto es debido fundamentalmente al
efecto matriz que a altas concentraciones se minimiza debido al efecto de la dilucin.
Se ha incluido a ttulo informativo la representacin de los resultados para el anin
fosfato a pesar de no cumplir los objetivos para dos de las matrices sintticas
ensayadas a los dos primeros niveles de concentracin.
Una vez obtenida la incertidumbre para cada nivel de concentracin, se estableci la
relacin funcional entre ambas obtenindose para todos los aniones relaciones
potenciales del tipo I=k3xk4, que aparecen recogidas en la Fig. 4.35. Estas relaciones
funcionales se corresponden aparentemente con el Tipo III propuesto en la norma UNE
82009-2.
180
10
20
30
40
50
%I
SO4
6.1
52
5.7
9.9
6.5
17
6.5
N1
6.3
33
5.7
6.4
7.0
12
5.2
N2
4.9
10
5.3
9.7
5.6
7.9
6.3
N1
6.5
7.2
7.1
5.7
5.3
6.1
5.6
N2
5.2
3.3
5.0
4.0
5.2
7.0
4.3
N3
Glucosa
6.9
7.3
8.9
7.7
8.4
7.5
7.0
N4
7.7
6.7
5.8
5.8
7.0
7.7
7.0
N5
17
48
12
11
7.2
11
18
N1
6.6
15
10
6.0
14
9.2
8.3
N2
5.3
5.6
7.3
5.2
15
8.4
6.1
N3
Ftalato
7.2
11
8.0
6.2
11
8.4
6.2
N4
8.7
6.6
7.0
7.0
9.1
9.6
6.6
N5
Valor objetivo
5.8
21
5.6
8.3
5.4
7.4
3.8
N1
6.2
20
6.7
5.8
5.0
6.7
5.2
N2
Compuesta
Cl
Br
N1
NO3
PO4
SO4
Cl
NO2
Br
N2
NO3
PO4
SO4
NO2
N4
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
N3
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
N5
Cl NO2 Br NO3PO4SO4
2-
PO4
3-
NO3
Br
NO2
Cl
Anin
Agua
181
IF-
Fluoruro
1000
IF- =
1000
R = 0.9853
100
Cloruro
ICl-
0.0680(CF-)0.9889
ICl- = 0.0940(CCl-)0.9786
R = 0.9922
100
10
10
1
1
0.1
0.1
0.01
1
10
100
1000
10000
10
100
INO2-
IBr-
Nitrito
10000
10000
1000
10000
Bromuro
1000
INO2- = 0.0608(CNO2-)1.0459
R = 0.9879
1000
1000
CCl-
C F-
100
IBr- = 0.0807(CBr-)0.9573
R = 0.992
100
10
10
1
0.1
1
10
100
1000
10000
100000
0.1
1
CNO2-
Nitratos
INO3-
INO3- = 0.0729(CNO3-)0.9963
R = 0.9918
100
CBr
IPO4 = 0.3014(CPO4)0.8132
R = 0.9332
100
10
10
0.1
100-
Fosfato
IPO43-
1000
1000
10
0.1
1
10
100
1000
10000
100000
10
100
1000
10000
CPO43-
CNO3-
Sulfatos
ISO42-
10000
ISO4 = 0.0658(CSO4)1.0071
R = 0.9887
1000
U Agua
| Glucosa
Ftalato
Compuesta
100
10
1
0.1
1
10
100
1000
CSO42-
10000
100000
182
100000
183
Cl
NO2
Br
NO3
3-
PO4
2-
SO4
Cobjetivo
- -1
(mg A L )
|%Er|max
%DER
%IA
LoQ
2.5
14
3.2
18
LS
6250
4.3
2.8
LoQ
2.5
13
3.5
17
LS
6250
6.8
2.8
9.6
LoQ
5.1
2.7
7.2
LS
12500
6.3
2.8
9.1
LoQ
2.5
8.2
2.9
11
LS
6250
4.4
2.4
7.0
LoQ
9.2
3.0
12
LS
12500
5.0
2.4
7.0
LoQ
44
9.5
52
LS
12500
4.5
3.2
6.7
LoQ
14
2.6
17
LS
12500
2.5
8.7
D4
D3
1.88
3.267
Tabla 4.31: Valores de las lneas de los grficos de control para los dos niveles de
concentracin de aniones
Fluoruros
2.5 mgL
X-media
Lnea
X-media
2.518
0.031
LC
126.0
1.790
LCS
2.577
0.101
LCS
129.4
5.849
LCI
2.460
LCI
122.7
Cloruros
Nitritos
-1
125 mgL
0
-1
Lnea
X-media
Lnea
X-media
LC
2.716
0.055
LC
123.8
2.469
LCS
2.820
0.181
LCS
128.5
8.065
LCI
2.612
LCI
119.2
-1
250 mgL
0
-1
Lnea
X-media
Lnea
X-media
LC
5.362
0.029
LC
244.3
1.567
LCS
5.417
0.095
LCS
247.2
5.120
LCI
5.308
LCI
241.3
2.5 mgL
bromuros
-1
LC
5 mgL
-1
125 mgL
Lnea
X-media
0
-1
Lnea
X-media
LC
2.705
0.067
LC
125.4
1.774
LCS
2.832
0.220
LCS
128.8
5.797
LCI
2.578
LCI
122.1
5 mgL
Nitratos
125 mgL
Lnea
2.5 mgL
-1
250 mgL
0
-1
Lnea
X-media
Lnea
X-media
LC
5.400
0.029
LC
250.7
1.6445
LCS
5.453
0.094
LCS
253.8
5.373
LCI
5.346
LCI
247.7
5 mgL
Sulfatos
-1
-1
250 mgL
0
-1
Lnea
X-media
Lnea
X-media
LC
5.537
0.044
LC
248.0
1.674
LCS
5.620
0.144
LCS
251.1
5.470
LCI
5.454
LCI
244.8
Una vez construidos los grficos, se analizarn de forma replicada, con una
periodicidad preestablecida, muestras de control con uno de estos dos niveles de
concentracin. Se comprobar la validez del mtodo segn la tendencia de los valores
representados.
185
-1
(mg AL )
xlab
-1
(mg AL )
1.25
1.35
0.71
Anin
F
Cl
62.4
62.3
-0.02
NO3
12.8
11.7
-0.92
2PO4
2.14
3.16
0.73
2SO4
83.7
84.0
0.06
39
38.7
-0.10
46.1
45.8
-0.03
Cl
2-
SO4
PARA
LA
Conservacin de la muestra
Para establecer las condiciones de conservacin de las muestras de agua residual para
la determinacin de fenol, se recopilaron los periodos de conservacin, el tipo de
envase permitido y temperatura de conservacin, recomendados en distintas normas
consultadas (APHA, 1998; ASTM D1783, 2001; UNE 77053, 2002; UNE EN ISO 5667-3,
2004; USEPA Method 420.1, 1983).
Tabla 4.33: Condiciones para la conservacin de aguas en las que se va a determinar fenol
Normativa
Envase
Tamao y tcnica
de llenado
--
--
VB mbar tapn
PTFE;
No preaclarar con
muestra
1000 mL;
dejar cmara de
aire
Standard Methods
5530 D
Plstico, vidrio
500 mL
--
--
APHA, 1998
USEPA Method
420.1, 1983
Plstico
ASTM D1783, 2001
-Vidrio
Conservacin
Tiempo
< 4qC
4h
24 h
3 sema.
< 4qC
4h
pH < 2 H2SO4
< 4qC
28 d
24 h
--
4h
28 d
>
C fenol mg L1
MNa2S2O3 94111.24
VM 6
ec. 4.1
donde VNa 2 S 2O3 ( Bl ) y VNa 2 S 2O3 ( M ) son los volmenes, en mL, de tiosulfato empleados en
la valoracin del blanco y muestra respectivamente, MNa 2 S 2O3 es la concentracin
molar de la disolucin de tiosulfato en molL-1 y VM el volumen de muestra empleado,
en mL.
Los resultados obtenidos en la normalizacin aparecen tabulados a continuacin, Tabla
4.34. Para decidir si la diferencia entre las concentraciones tericas calculadas a partir
188
CObtenida (normalizacin)
-1
-1
(mg fenolL )
(mg fenolL )
1041
1011
1001
1010
1000
971
1002
1001
1030
994
Se obtuvo un valor del parmetro t de Student de 1.942 que, comparado con el valor
tcrtico (2.776 para =0.05; g.d.l.=n1=4), nos permite concluir, con un nivel de confianza
del 95%, que no existen diferencias significativas entre ambas series de valores. Se
demuestra pues que la concentracin obtenida en la normalizacin no es
significativamente diferente de la calculada a travs del peso, la riqueza y el volumen
de enrase por lo que en lo sucesivo no se normalizar el patrn de fenol.
350
400
450
500
550
600
650
700
189
Establecimiento de la linealidad
Para el establecimiento del rango lineal del mtodo de anlisis se tom de referencia
los valores bibliogrficos (APHA, 1998; ASTM D1783, 2001; UNE 77053, 2002; USEPA
Method 420.1, 1983), amplindolo tanto a concentraciones menores como mayores. A
partir de un patrn de fenol de concentracin aproximadamente 1000 mg fenolL-1 se
prepararon por dilucin los patrones cuyas concentraciones se muestran en la Tabla
4.35.
Tabla 4.35: Patrones ensayados para el establecimiento de la linealidad de la determinacin de fenol
Patrn
-1
10
11
12
13
0.15
0.2
0.3
0.4
0.5
10
UA
0.15
1
0.8
0.10
0.6
0.05
0.4
0.00
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00
Concentracin (mg fenolL-1)
0.2
0
0
10
12
La Fig. 4.38 (a) representa el grfico de residuales; se observa que estos se distribuyen
de forma aleatoria en torno a cero. La Fig. 4.38 (b) representa los factores de respuesta
frente a la concentracin, observndose una variabilidad mnima. Ambas
representaciones nos indican que la sensibilidad es aproximadamente constante
pudiendo interpretarse tambin como una expresin de linealidad.
190
(b)
(a)
0.140
0.010
0.005
0.000
0
10
12
-0.005
-0.010
fi (UALmg fenol-1)
0.015
0.135
0.130
0.125
0.120
0
-0.015
15
10
Fig. 4.38: (a) Representacin grfica de los residuales y (b) Representacin grfica de los factores de
respuesta de la lnea de calibrado para la determinacin de fenol
Dado que el lmite de cuantificacin objetivo era 0.5 mg fenolL-1, el lmite inferior de la
lnea de calibrado se fij en 0.25 mg fenolL-1 para asegurar que el lmite de
cuantificacin quedase dentro del rango de calibracin. El extremo opuesto se acot
en la concentracin que originaba una seal aproximadamente de 0.7 UA para
minimizar el error fotomtrico (Skoog et al., 2005). Con toda esta informacin se
estableci el rango lineal en el intervalo 0.25 a 5 mg fenolL-1 emplendose patrones de
fenol de concentracin 0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 mg fenolL-1
UA
0.8
0.6
0.4
0.2
0
Fig. 4.39: Representacin grfica de la lnea de calibrado propuesta para la determinacin de fenol
En las Fig. 4.40 (a) y Fig. 4.40 (b) podemos ver como la distribucin de los residuales y
factores de respuesta en el rango propuesto son ms homogneos.
El factor de respuesta medio de los patrones de calibracin y su desviacin estndar
relativa fueron respectivamente f = 0.1373 mg fenolL-1 y %DERf = 4.6% por tanto se
cumple el valor objetivo impuesto de %DERf < 10% (Tabla 3.6), lo que nos confirma la
linealidad del calibrado.
191
(a)
0.002
0
(b)
0.16
fi (UAL mg fenol-1)
0.004
-0.002
0.15
0.14
0.13
0.12
-0.004
Fig. 4.40: (a) Representacin grfica de los residuales y (b) Representacin grfica de los factores de
respuesta para la lnea de calibrado propuesta en la determinacin de fenol
Semana 1
Cfenol
Ifenol
Semana 2
Cfenol
Ifenol
Semana 3
Cfenol
Ifenol
Semana 4
Cfenol
Ifenol
N2
5.065
0.073
4.992
0.072
5.027
0.072
4.995
0.072
N3
51.26
0.38
49.82
0.38
51.91
0.39
50.21
0.38
N4
249.1
1.4
250.2
1.4
249.6
1.4
249.4
1.4
N5 = LS
499.1
2.7
498.6
2.7
500.3
2.8
501.5
2.8
Para evitar un sesgo debido a la dilucin de las muestras de control, estas se diluyeron
de forma controlada abarcando todo el rango de ensayo. La Tabla 4.37 muestra las
diluciones realizadas para los diferentes niveles y das de ensayo.
192
Semana 1
Semana 2
Semana 3
Semana 4
Cinicial
Cfinal
Cfinal
Cfinal
Cfinal
Vi
Vf
Vi
Vf
Vi
Vf
Vi
Vf
-1
-1
-1
-1
-1
(mgL ) (mL) (mL) (mgL ) (mL) (mL) (mgL ) (mL) (mL) (mgL ) (mL) (mL) (mgL )
N1 = LoQ
0.5
50
50
0.5
50
50
0.5
50
50
0.5
50
50
0.5
N2
25
50
2.5
25
50
2.5
50
50
50
50
N3
50
50
2.5
50
2.5
50
50
N4
250
0.5
50
2.5
0.5
50
2.5
0.8
50
50
N5 = LS
500
0.25
50
2.5
0.25
50
2.5
0.3
50
0.5
50
La Tabla A.II.22 del Anexo II muestra todos los resultados experimentales obtenidos.
Selectividad
Se hizo una revisin bibliogrfica de todas las normas y publicaciones disponibles para
verificar la selectividad y eliminar las posibles interferencias (APHA, 1998; ASTM
D1783, 2001; UNE 77053, 2002; USEPA Method 420.1, 1983). Segn esta normativa,
las principales interferencias a la hora de la determinacin de fenol en aguas residuales
se eliminan en las etapas de acidificacin y destilacin de la muestra. Otras
interferencias potenciales y su forma de eliminacin son las siguientes:
Sustancias oxidantes tales como cloro y aquellas capaces de oxidar el yoduro a
yodo al acidificar. Se deben eliminar inmediatamente despus de la toma de
muestra aadiendo un exceso de sulfato ferroso, FeSO4. Si no se eliminan las
sustancias oxidantes, los compuestos fenlicos se oxidarn parcialmente.
Especies reducidas de azufre. Se eliminan por acidificacin a pH = 4 con cido
fosfrico, aadiendo sulfato de cobre y aireando la muestra brevemente por
agitacin. De esta manera, se eliminan las interferencias debidas al sulfuro y al
sulfito.
Aceites y alquitranes: El aceite o alquitrn se extraen con 50 mL de cloroformo
de la solucin acuosa, alcalinizada a pH = 12 con hidrxido sdico. Se desecha la
fase orgnica que contiene el aceite o alquitrn y se elimina el exceso de
cloroformo de la fase acuosa calentando al bao Mara antes de proceder a la
destilacin.
Tambin pueden interferir concentraciones anormalmente altas de aminas
aromticas y formaldehdo, pero son eliminadas aadiendo sulfato de amonio e
193
Linealidad/Rango de ensayo
Para la estimacin de los parmetros de linealidad se emplearon las 80 lneas de
calibrado necesarias para el desarrollo del diseo experimental y obtenidas en
condiciones de reproducibilidad. Los resultados medios de los parmetros de
calibracin estn recogidos en la Tabla 4.38.
Tabla 4.38: Valores medios de los parmetros de calibracin
sb
sa
se
(UALmg fenol )
(UALmg fenol )
(UA)
(UA)
(--)
r
(--)
0.1353
0.0015
0.0028
0.0044
0.0057
0.9994
-1
-1
Sensibilidad
La sensibilidad del mtodo de anlisis, expresada como la pendiente media de las
lneas de calibrado para el fenol, fue de 0.1353 r 0.0038 UALmg fenol-1.
LoQ
3.29 s e
b
ec. 4.2
10 s e
b
ec. 4.3
Los valores obtenidos para LoD y LoQ fueron 0.14 mg fenolL-1 y 0.42 mg fenolL-1
respectivamente. El valor del LoQ ha resultado ser sensiblemente inferior al valor de
0.5 mg fenolL-1 propuesto como objetivo (Tabla 3.6).
El valor del LoQ se ha estimado a partir de la media de los parmetros de lneas de
calibrado realizadas con patrones de fenol, es decir, sin haberlos sometido a una
destilacin, tal y como se hace con las muestras. En el caso de muestras reales, los
interferentes propios de la matriz y el proceso de destilacin introducen un aumento
inevitable de este parmetro con respecto al estimado. Para demostrar la consecucin
del LoQ objetivo al analizar muestras reales, se compararon los resultados analticos de
las muestras de control preparadas con el primer nivel de concentracin,
correspondiente al LoQ objetivo, con los valores esperados (Tabla 4.39).
Tabla 4.39: Concentraciones de fenol en las muestras de control N1
Cesperada
Cobtenida
-1
-1
%Er
(mg fenolL )
(mg fenolL )
0.5065
0.5073
0.16
0.5065
0.5464
7.9
0.4995
0.5056
1.2
0.4995
0.5063
1.4
0.4989
0.5034
0.90
0.4989
0.4391
-12
0.4995
0.5018
0.46
0.4995
0.4866
-2.6
195
Veracidad
Se calcularon los errores relativos, %Er-i, de los valores reales respecto a los valores
obtenidos para cada destilacin, analista y da. La Tabla 4.40 muestra el porcentaje de
error relativo medio y los porcentajes de error relativo mximo y mnimo para cada
nivel de concentracin de las muestras de control.
Tabla 4.40: Estimacin de la veracidad para la determinacin de fenol
Nivel de
concentracin
Cesperada
Cobtenida
-1
-1
% Er MEDIO
%Er-MAX
%Er-MIN
Sesgo
|%Er|MAX
(mg fenolL )
(mg fenolL )
LoQ = 1
0.5011
0.5021
0.18
9.2
-11
11
5.018
5.017
-0.016
8.8
-9.0
9.0
50.66
49.92
-1.3
3.0
-8.2
8.2
249.6
249.0
-0.23
5.9
-3.7
5.9
LS = 5
499.6
496.5
-0.62
3.8
-4.5
4.5
Ni
Se puede ver que a niveles bajos de concentracin los valores mximos de error
relativo aumentan, siendo en todos los casos inferiores al valor objetivo propuesto
(%Er < 15%). A la vista de los resultados cabe aadir que el intervalo de valores de error
relativo obtenidos para cada nivel de concentracin incluye el cero.
La veracidad del mtodo, expresada como sesgo, se cuantific como el error relativo
mximo de cada nivel de concentracin, en valor absoluto, |%Er|MAX. Se tom el valor
de error mximo en lugar del valor promedio para reflejar los valores ms
desfavorables del sesgo y garantizar as el cumplimiento del objetivo de veracidad en
todos los casos (Eurolab, 2006).
Precisin
La precisin se evalu por medio de la varianza de reproducibilidad, s2reproducibilidad,
obtenida del anlisis de varianza de los resultados del diseo de experimentos
totalmente anidado de cuatro factores segn la ec. 3.5.
196
En la Tabla 4.41 estn recogidos los valores de la precisin obtenidos para cada nivel
de concentracin, expresados como porcentaje de desviacin estndar relativa, %DER.
Puede apreciarse que la precisin disminuye al disminuir la concentracin. En todos los
niveles de las muestras de control el valor obtenido es menor al propuesto,
%DER < 15% (ver Tabla 3.6)
Tabla 4.41: Estimacin de la precisin para
la determinacin de fenol
Nivel de concentracin
%DER
Ni
N1 = LoQ
7.1
N2
5.8
N3
3.3
N4
2.4
N5 = LS
2.8
sfactor
0.1
1.2
0.8
0.4
12
2
rplica
destilado
da
analista
rplica
destilado
da
0
analista
rplica
rplica
destilado
da
analista
rplica
destilado
da
analista
1.6
14
N5
sfactor
destilado
0.01
N4
10
0.2
0.02
sfactor
da
0.03
N3
sfactor
0.3
analista
N1
sfactor
197
Incertidumbre
Se estim la incertidumbre para cada nivel de concentracin, segn las ecuaciones
mostradas en la Tabla 3.6 y descritas en el Apartado 2.3.3. Se tuvieron en cuenta tres
contribuciones principales: la falta de veracidad, la falta de precisin y la falta de
trazabilidad en la preparacin de las muestras de control. Como contribucin a la falta
de veracidad se tom el porcentaje de error relativo mximo, en valor absoluto, para
evitar subestimar la incertidumbre total en las muestras reales.
Los resultados de incertidumbre de cada una de las contribuciones, expresadas como
varianza, la incertidumbre combinada y la incertidumbre expandida se resumen en la
Tabla A.II.24 del Anexo II. En la Fig. 4.42 se han representado las incertidumbres
individuales para cada nivel de concentracin, pudindose apreciar que la contribucin
que menos afecta a la incertidumbre total es la debida a la trazabilidad mientras que
las debidas a la veracidad y precisin contribuyen en mayor medida y son
aproximadamente del mismo orden de magnitud.
N1
N2
0.3
0.04
N3
N4
N5
12
2.0
0.03
15
2.5
0.2
1.5
0.02
1.0
0.1
0.01
0.5
0.00
0
verac preci traza
0.0
verac preci traza
198
%Ifenol
Ni
N1 = LoQ
19
N2
16
N3
12
N4
8.4
N5 = LS
7.7
Ifenol
100
10
Ifenol = 0.1820(Cfenol)0.8667
R = 0.9994
1
0.1
0.01
0.1
10
100
1000
Cfenol
(mg fenolL )
|%Er|max
%DER
%Ifenol
LoQ
0.5000
11
7.1
19
LS
500.0
4.5
2.8
7.7
199
D4
D3
1.128
3.267
En la Tabla 4.45 se recogen los valores de las lneas de control obtenidas, entre los que
deben estar los resultados de las muestras de control a analizar peridicamente.
Tabla 4.45: Valores de las lneas de los grficos de control para los dos
niveles de concentracin de fenol
0.5 mg fenolL
-1
5 mg fenolL
-1
Lnea
RM
Lnea
RM
LC
0.4996
0.0434
LC
5.015
0.1561
LCS
0.6150
0.1418
LCS
5.431
0.5101
LCI
0.3841
0.0000
LCI
4.600
0.0000
200
El fundamento del mtodo y las etapas bsicas del procedimiento analtico fueron
descritos en el Captulo 3. Las caractersticas tcnicas a determinar, as como los
objetivos perseguidos para este mtodo de anlisis, se han presentado en la Tabla 3.6.
201
120
110
60 mg AE/H
100 mg AM
250 mg AV
U 500 mg AE/H
U 750 mg AM
U 1000 mg AV
100
90
80
70
0
100
200
300
400
500
Volumen (mL)
202
105
AV
AM
U AE/H
100
95
0
250
500
750
1000
CA&G (mgL-1)
106
104
102
100
-1
50 mg SSTL
-1
1000 mg SSTL
-1
U 2000 mg SSTL
98
96
94
92
90
0
250
500
750
1000
CA&G (mgL-1)
En las grficas se observa que las mayores diferencias respecto del valor real se
cometen a bajas concentraciones de A&G para los tres niveles de SST, mientras que
para los dos niveles restantes se comete aproximadamente un error de r5%. Las
variaciones de recuperacin observadas parecen estar ms relacionadas con el nivel de
concentracin de A&G que con la concentracin de SST. En consecuencia, no es
necesario incluir en el procedimiento de ensayo ninguna restriccin referente a la
concentracin de SST presentes en la muestra, pero se deben extremar las
precauciones durante la determinacin de A&G a niveles bajos de concentracin.
permite concluir, con un nivel de confianza del 95%, que la concentracin del blanco
no difiere significativamente de cero.
Se detall en el procedimiento de anlisis la condicin de realizar un blanco antes de
cada serie de medidas cuyo valor debe ser menor de r5 mg (PNT-A&G, Anexo III).
Conservacin de la muestras
Para establecer las condiciones de conservacin de las muestras de agua residual para
la determinacin de A&G, se han recopilado los periodos de conservacin, el tipo de
envase permitido y la temperatura de conservacin, recomendados en distintas
normas consultadas (APHA, 1998; ASTM 4281:95, 2005; UNE 77038, 1983; UNE 77037,
1983; UNE EN ISO 5667-3, 2004; USEPA Method 1664, revA, 1999). Estos datos se
muestran en la Tabla 4.46:
Tabla 4.46: Condiciones para la conservacin de muestras en las que se van a determinar A&G
Normativa
Envase
Tamao y tcnica de
llenado
Conservacin
Tiempo
1000 mL
ASTM D 4281-95,
2001
28 das
UNE EN ISO
5667-3, 2004
vidrio enjuagado
con disolvente
1000 mL
1 mes
Standard Method
5520
APHA ,1998
vidrio de boca
ancha enjuagado
con disolvente
--
2h
1000
28 das
USEPA Method
1664, revB, 2010
Vidrio enjuagado
con disolvente
1000 mL;
menos si residuo > 500 mg
-1
A&G L
refrigerar 0-6qC
4h
28 das
205
con el valor tcrtico (3.18 para =0.05; g.d.l.=n1=3) nos permite concluir, con un nivel de
confianza del 95%, que no existen diferencias significativas entre ambas series de
valores, por lo que se deduce que las muestras son estables al menos durante un mes.
Tabla 4.47: Variacin temporal de la concentracin de A&G en una muestra real
i
xi
-1
-1
%R-i
(mg A&GL )
(mg A&GL )
Semana 1
94.3
92.2
-2.2
Semana 2
122.0
109.6
-10
Semana 3
122.0
106.4
-13
Semana 4
90.2
93.3
3.4
206
0.4
0.2
1000
5000
N5
N4
N3
N2
N1
53.3
55.8
248.2
253.0
1000
1020
4972
4970
13.51
CA&G
11.44
1000
400
237.5
55
0.175
0.3
0.64
0.8
1.75
(L)
875
300
160
40
17.5
(mg)
MAE+H
Da 2
17.5
30
64
80
175
(mg)
Mcelulosa
0.14
0.2
0.48
0.6
1.5
(L)
700
200
120
30
15
(mg)
MAE+H
Da 3
14
20
48
60
150
(mg)
Mcelulosa
11.92
13.51
49.8
50.7
264.6
254.2
1009
1006
5038
5078
r 0.76
r 0.75
r 2.7
r 2.7
r 4.5
r 4.5
r 14
r 14
r 70
r 70
r 71
r 70
r 14
r 14
r 4.5
r 4.6
r 2.7
r 2.9
r 0.75
r 0.76
r IA&G
Analista 2
CA&G
Da 1
4978
5013
1031
1003
254.3
246.4
56.3
49.4
10.92
12.95
CA&G
r 97
r 98
r 22
r 19
r 5.3
r 4.8
r 1.4
r 1.3
r 0.51
r 0.51
r IA&G
Analista 1
CA&G
4975
4982
991
997
251.1
251.5
56.7
51.1
13.40
r 98
r 97
r 22
r 21
r 5.2
r 5.0
r 1.5
r 1.4
r 0.61
r 0.59
r IA&G
Analista 2
11.75
Da 2
5006
4978
1001
1006
249.5
250.9
50.2
55.1
10.92
11.26
CA&G
r 62
r 61
r 12
r 12
r 3.2
r 3.3
r 1.6
r 1.6
r 0.58
r 0.58
r IA&G
Analista 1
5040
5022
1026
1021
249.7
251.9
58.7
53.1
11.99
11.71
62
12
12
r 110
r 3.2
r 3.2
r 1.8
r 1.8
r 0.51
r 0.51
r IA&G
Analista 2
CA&G
Da 3
20
40
95
110
200
(mg)
Mcelulosa
r IA&G
Analista 1
Rplica
0.95
250
Ni
1.1
50
20
(mg)
MAE+H
(L)
10
Ni
Da 1
5010
4982
1070
1073
253.7
254.1
49.6
50.8
12.38
10.79
CA&G
IA&G
110
96
22
23
5.5
5.6
1.2
1.2
r 0.47
11
10
25
35
125
(mg)
Mcelulosa
49.5
51.3
9.95
9.75
CA&G
5010
5012
990
1002
255.1
IA&G
100
10
21
22
5.4
5.8
1.4
1.2
r 0.44
r 0.45
Analista 2
259.7
Da 4
550
100
62.5
17.5
12.5
(mg)
MAE+H
r 0.45
Analista 1
0.11
0.1
0.25
0.35
1.25
(L)
Da 4
207
Una vez preparadas las muestras de control se seal en el envase de cada una de
ellas el nivel del menisco, se acidificaron a pH<2 con cido clorhdrico 1:1 y se
conservaron refrigeradas a 4qC. En la Tabla 4.49 se recogen las concentraciones reales
de cada una de las muestras de control preparadas junto con su incertidumbre
estimada mediante el mtodo bottom-up.
La Tabla A.II.25 del Anexo II muestra todos los resultados experimentales obtenidos del
anlisis de estas muestras.
Selectividad
Se hizo una revisin bibliogrfica de normas y publicaciones relacionadas con la
determinacin gravimtrica de A&G para verificar la selectividad y eliminar las posibles
interferencias (APHA, 1998; ASTM D 4281-95, 2005; UNE 77037, 1983; USEPA Method
1664, revB, 2010). De acuerdo a estas normas, el mtodo se aplica a la determinacin
de compuestos extrables con n-hexano. Este mtodo es apropiado para la mayora de
las aguas residuales urbanas e industriales o los efluentes tratados que contengan
A&G.
En la determinacin de aceites y grasas no se mide una cantidad absoluta de una
sustancia especfica sino que ms bien se determinan cuantitativamente grupos de
sustancias con caractersticas fsicas similares sobre la base de su solubilidad comn.
Los A&G que pueden ser determinados son hidrocarburos relativamente no voltiles,
aceites vegetales, sebos animales, ceras, jabones, grasas. El n-hexano, adems, tiene
la capacidad de disolver otras sustancias orgnicas tales como compuestos orgnicos
de azufre, ciertos tintes orgnicos, detergentes Por otro lado, los residuos ms
pesados del petrleo pueden contener una porcin significativa de materiales que no
son extrables con n-hexano.
El mtodo no es aplicable para medir fracciones de bajo punto de ebullicin que se
volatilizan a temperaturas por debajo de 70qC. Durante la eliminacin del disolvente se
tiene como resultado la prdida de los hidrocarburos de cadena corta y aromticos
sencillos, por volatilizacin.
Es importante que esta limitacin se entienda con toda claridad pues, a diferencia de
otros mtodos, el mtodo analtico para la determinacin de A&G es operativo, es
decir, el resultado depende fuertemente de las condiciones experimentales empleadas
para su determinacin.
208
Veracidad
Se calcularon los errores relativos de los valores obtenidos para cada analista y da,
%Er-i respecto de los valores esperados. La Tabla 4.50 muestra el porcentaje de error
relativo medio, %Er MEDIO, y los porcentajes de error relativo mximo y mnimo, %Er MAX
y %Er MIN, para cada nivel de concentracin de las muestras de control.
Tabla 4.50: Estimacin de la veracidad para la determinacin de A&G
Nivel de
concentracin
Cesperada
Cobtenida
-1
-1
%Er MEDIO
%Er MAX
%Er-MIN
Sesgo
|%Er|MAX
(mg A&GL )
(mg A&GL )
LoQ=N1
11.8
11.8
0.84
24
-11
24
N2
52.6
50.6
-3.7
1.8
-7.7
7.7
N3
252.7
243.4
-3.8
5.0
-13
13
N4
1014
991
-2.4
1.1
-9.5
9.5
LS=N5
4995
4854
-3.0
1.8
-5.9
5.9
Ni
Se puede ver que se cumple el valor objetivo propuesto (%Er < 15%) excepto al nivel de
concentracin N1, prximo al lmite de cuantificacin. Tambin se puede concluir que
el intervalo de valores de error relativo obtenidos para cada nivel de concentracin
incluye el cero.
La veracidad del mtodo, expresada como sesgo, se cuantific como el error relativo
mximo de cada nivel de concentracin en valor absoluto, |%Er|MAX. Se tom el valor
de error mximo en lugar del valor promedio para reflejar los valores ms
desfavorables del sesgo.
Precisin
La precisin se evalu por medio de la varianza de reproducibilidad, s2reproducibilidad,
obtenida del anlisis de varianza de los resultados del diseo de experimentos
totalmente anidado de tres factores segn la ec. 3.4.
Debido a la limitacin del procedimiento de ensayo que impide la divisin de las
muestras para la realizacin de rplicas, stas se realizaron analizando pares de
muestras de control con concentraciones muy similares de cada uno de los niveles de
ensayados. Para evitar que las diferencias de concentracin debidas a la preparacin
de las rplicas supusiera un aumento en la estimacin de la precisin, el anlisis de
varianza, ANOVA, se realiz a partir de los resultados obtenidos, medidos como
recuperaciones. Una vez obtenidas las estimaciones de la precisin global y las
precisiones intermedias estas se transformaron en las unidades habituales de
concentracin.
En la Tabla 4.51 estn recogidos los valores de la precisin, expresada como %DER,
para cada nivel de concentracin. Puede observarse como la falta de precisin
209
%DER
Ni
LoQ = N1
13
N2
5.2
N3
7.1
N4
4.3
LS = N5
3.8
sfactor
N4
sfactor
140
12
30
120
0.8
2.0
10
25
100
0.6
1.5
20
80
15
60
10
40
20
1.0
0.2
0.5
rplica
analista
rplica
analista
da
da
0.0
0.0
rplica
35
analista
14
da
2.5
rplica
1.0
analista
160
da
40
0.4
N5
sfactor
16
rplica
N2
3.0
analista
sfactor
da
N1
sfactor
1.2
da analista rplica
Fig. 4.47: Valores de precisin intermedia para la determinacin de A&G, expresadas como desviacin
estndar
210
Como el valor del blanco obtenido es cero, el valor sB se estim como la desviacin
estndar de los resultados obtenidos del anlisis del primer nivel de concentracin del
diseo de experimentos, que se recogen en la Tabla 4.52, obtenindose un valor de
0.65 mg A&GL-1. Los valores de LoD y LoQ resultantes fueron, respectivamente,
2.1 mg A&GL-1 y 6.5 mg A&GL-1, valor este ltimo ms bajo que el valor objetivo
propuesto, 10 mg A&GL-1.
Tabla 4.52: Concentraciones reales y obtenidas del nivel N1 de aceites y grasas, mg A&GL
Creal
-1
11.4 13.5 13.0 10.9 11.3 10.9 10.8 12.4 11.9 13.5 11.7 13.4 11.7 11.9 9.8
9.9
CObtenida 12.5 12.3 11.0 11.2 12.5 12.1 10.0 13.9 11.4 12.6 10.1 13.3 10.7 10.3 12.6 11.8
Incertidumbre
Se estim la incertidumbre para cada nivel de concentracin, segn las ecuaciones
mostradas en la Tabla 3.6 y descritas en el Apartado 2.3.3. Se tuvieron en cuenta tres
contribuciones principales: la falta de veracidad, la falta de precisin y la falta de
trazabilidad durante la preparacin de los patrones. Como contribucin a la falta de
veracidad se tom el porcentaje de error relativo mximo, en valor absoluto, para
evitar subestimar la incertidumbre total en las muestras reales.
Los resultados de incertidumbre de cada una de las contribuciones, expresadas como
varianza, la incertidumbre combinada y la incertidumbre expandida se resumen en la
Tabla A.II.27 del Anexo II. Como cabe esperar, la incertidumbre total absoluta aumenta
con la concentracin. En la Fig. 4.48 se han representado las incertidumbres
individuales para cada nivel de concentracin, pudindose apreciar que la contribucin
que menos afecta a la incertidumbre total es la debida a la trazabilidad mientras que
las debidas a la veracidad y precisin contribuyen en mayor medida, siendo
aproximadamente del mismo orden de magnitud.
En la Tabla 4.53 podemos ver los resultados finales de la incertidumbre expresados
como porcentaje de incertidumbre expandida, %I. Los valores obtenidos son menores
que el valor objetivo, propuesto en la Tabla 3.6 (%I < 25%), excepto para el primer
nivel de concentracin, coincidente con el LoQ. Esto significa que no se ha cumplido el
objetivo de validacin para ese nivel y, en consecuencia, se debera buscar un nivel
211
N1
1.8
N2
3.0
N3
20
N4
N5
60
200
50
160
18
1.6
2.5
1.4
1.2
16
14
2.0
40
120
12
1.0
10
1.5
0.8
30
80
0.6
1.0
0.4
0.5
0.2
20
40
10
0.0
0.0
verac preci traza
0
verac preci traza
0
verac preci traza
0
verac preci traza
%IA&G
LoQ = N1
39
N2
14
N3
20
N4
14
LS = N5
10
Una vez obtenidos los valores de incertidumbre para cada nivel de concentracin, se
estableci la relacin funcional entre ambas variables, excluyendo el nivel N1. Debido
al rango de medida tan amplio, y para facilitar la visualizacin de la relacin
incertidumbre-concentracin, se represent grficamente en escala logartmica
obtenindose una funcin potencial, I=k3xk4. La Fig. 4.49 muestra dicha relacin. En la
misma figura se ha incluido a modo informativo la incertidumbre expandida del nivel
N 1.
La relacin incertidumbre-concentracin obtenida se corresponde con el modelo Tipo
III propuesto en la norma UNE 82009-2 (Tabla 2.12).
212
IA&G = 0.2366(CA&G)0.9166
R = 0.9851
100
10
1
1
10
100
1000
10000
CA&G
(mg A&GL )
|%Er|max
%DER
%IA&G
LoQ
10
24
11
39
N2
50
7.7
5.7
14
N5=LS
5000
5.9
3.4
10
213
D4
D3
1.128
3.267
Tabla 4.56: Valores de las lneas de los grficos de control para los dos niveles de
concentracin de A&G
50 mg A&GL
-1
250 mg A&GL
-1
Lnea
RM
Lnea
RM
LC
50.6
2.88
LC
243.4
12.0
LCS
58.2
9.41
LCS
275.3
39.2
LCI
42.9
0.0
LCI
211.5
0.0
Una vez construidos los grficos, se analizarn de forma replicada, con una
periodicidad prestablecida, muestras de control con uno de estos dos niveles de
concentraciones. Se comprobar la validez del mtodo segn la tendencia de los
valores representados.
DE
ESTIMACION
DE
LA
215
216
25
50
75
100
%u2
25
50
75
100
%u2
N1
NO2
Br
N3
NO3
PO4
N4
SO4
Nivel de concentracin
N2
N1
N5
NO2
Br
N2
NO3
PO4
SO4
da
analista
destilado
repetibilidad
veracidad
trazabilidad
(b)
25
50
75
100
%u2
N1
N3
N3
N4
N4
N5
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
Nivel de concentracin
N2
Cl NO2 Br NO3PO4SO4 F
Cl
(c)
da
analista
repetibilidad
veracidad
trazabilidad
N5
Cl NO2 Br NO3PO4SO4
Fig. 4.50: Porcentaje de cada contribucin a la incertidumbre total para la determinacin de: (a) aniones, (b) fenol y (c) aceites y grasas
Cl
ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s ag f s g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f g f
(a)
217
1. OBJETIVO
2. INTRODUCCIN TERICA
3. MATERIALES Y MTODOS
4. RESULTADOS
5. OTROS MODELOS DE ESTIMACIN DE LA
INCERTIDUMBRE
Smbolo
Coeficiente de
sensibilidad, wX wx i
sr
1
n
-1
Incertidumbre tpica
u(x) = ux
p
Repetibilidad
Laboratorio
Mtodo
Sesgo
sL
umet
si2
sr
sL
p
s2
1
2
y i y r
p 1 i 1
2
umet
u(G)
sG
Otros
s G2 uP2
2
sR2 sr
2
p
2
siendo VR
Material de
referencia
Tabla 2.7
para ni=n=2
i 1
Tabla 2.7
para ni=n=2
ec. 2.57
ec. 2.58
para ni=n=2
VL2 Vr2
Modelo bottom-up
uotros
wX wx i
u( x i )
Modelo bottom-up
Apartado
2.5
Apartado
2.3.3
Una vez estimadas las contribuciones, se combinaron de acuerdo con las reglas de
propagacin de errores obtenindose as la incertidumbre combinada:
221
uc
2
sL2
umetodo
sr2
n
ec. 5.1
2
u2veracidad u2trazabilidad uprecisin
ec. 5.2
222
para las concentraciones del resto de aniones obtenidas por uno de los analistas en
cada una de las muestras de control.
En primer lugar se especific la ecuacin que liga la concentracin de aniones con las
magnitudes de las que depende. A esta ecuacin se le aadi un factor de dilucin, fdil,
cuando la concentracin de analito en las muestras estaba fuera del rango de ensayo.
CA
Ya
fdil
b
CA
0
fdil
ec. 5.3
IA
Calibracin
Repetibilidad
Calibracin
Temperatura
Temperatura
Repetibilidad
Vf
Vi
Dilucin
Fuente de
incertidumbre
Smbolo
Uds
Volumen: Vi ,Vf
u(Vi), u(Vf)
mL
Calibracin
ucal
mL
Repetibilidad
urep
mL
Temperatura
uT
mL
CA
Vi,f
Incertidumbre tpica
u(x) = ux
uVi,f
2
2
ucal
urep
u2T
u cal
urep
uT
I Vol
K
VN 'T 2.110 4
3
y 0 y
se
1 1
2
b
m n b x i x 2
2
Proceso
uregresin
mgL
-1
u( x 0 , y )
223
xi r I (k=2)
x0= CNO2 -0
(mg
- -1
NO2 L )
(mg
u(x0,xi) | u(xi)/n
- -1
NO2 L )
(mg
- -1
NO2 L )
u(x0,y)
(mg NO2 L )
-
5.193
5.029 r 0.066
0.0047
0.63
9.228
9.827 r 0.091
0.0065
0.57
11.40
14.74 r 0.57
0.041
0.53
14.13
16.04 r 0.62
0.045
0.45
20.33
20.33 r 0.60
0.043
0.54
24.83
25.14 r 0.60
0.043
0.62
28.55
30.17 r 0.60
0.043
0.74
-1
u CA -
C
C
2
A uregresin
A
C
Vi
A 0
C
u2 Vi A
u2 Vf
ec. 5.4
tres fuentes de error cuantificadas, que no se han incluido por brevedad. Sin embargo
pueden ser consultadas en la Fig. A.II.3 del Anexo II.
ui ( y, x i )
600
500
400
8
6
4
uVf
uVi
uregresin
300
2
200
0
100
N1
N2
N3
0
N1
N2
N3
N4
N5
En la Tabla 5.4 se han recogido los intervalos de incertidumbre en valor relativo, %IA-,
para los valores promedio de concentracin obtenidos de cada nivel.
Tabla 5.4: Intervalos de incertidumbre segn el modelo bottom-up para cada anin
CF
(mg F L )
-
-1
%IF
CCl
%ICl
(mg Cl L )
-
-1
CNO2
(mg NO2 L )
-
-1
%INO2
N1
2.57
18 24
2.70
27 42
5.3
24 28
N2
13.2
3.5 6.9
13.4
6.2 13
24.7
4.3 9.0
N3
125.8
4.4 9.0
123.4
7.0 19
242
5.5 12
N4
1226
4.2 9.8
1224
7.2 20
2454
5.6 12
N5
6224
4.2 - 7.5
6121
6.3 - 12
12140
4.7 9.4
Tabla 5.4 (cont.): Intervalos de incertidumbre segn el modelo bottom-up para cada anin
CBr
(mg Br L )
-
-1
%IBr
CNO3
(mg
- -1
NO3 L )
3-
CPO4
%INO3
(mg
3- -1
PO4 L )
2-
3-
%IPO4
CSO4
2-
(mg SO4 L )
2-
-1
%ISO4
N1
2.67
10 25
5.4
17- 36
4.07
9.2 32
5.5
16 28
N2
13.23
2.9 7.7
27.0
4.3 11
24.53
1.3 7.4
25.1
4.1 9.2
N3
124.8
3.8 8.5
249
5.4 - 12
250.9
2.3 10
246
5.2 13
N4
1229
3.3 9.1
2472
4.8 13
2452
1.8 10
2432
4.8 13
N5
6737
2.8 7.6
12379
4.1 - 12
12486
2.6 5.6
12297
3.9 8.9
225
ICl-
Fluoruro
1000
Cloruro
1000
100
100
10
10
0.1
0.1
1
10
100
1000
10000
10
100
C FINO2-
1000
10000
1000
10000
CClIBr-
Nitrito
10000
1000
1000
100
100
10
10
Bromuro
0.1
1
1
10
100
CNO2-
1000
10000
100000
100
CBr-
IPO43-
Nitrato
INO3-
10
Fosfato
1000
10000
1000
100
100
10
10
1
0.1
0.1
1
100
10000
CNO3ISO42-
10
100
1000
CPO43-
10000
100000
Sulfato
10000
1000
100
10
1
0.1
1
10
100
1000
CSO42-
10000
100000
Fig. 5.3: Relaciones incertidumbre-concentracin segn el modelo bottom-up para las distintas
determinaciones de aniones en cada muestra de control
Se puede observar que: (i) para los dos primeros niveles de concentracin la
incertidumbre, en valor absoluto, es muy similar, mientras que para los niveles de
226
C fenol
ec. 5.5
Vinicial-muestra
Destilacin
V100
Lnea calibrado
Temperatura
Te
(Regresin)
V500-i
Calibracin
Calibracin
Temperatura
V500-f
Temperatura
Temperatura
Repetibilidad
Calibracin
Calibracin
Repetibilida
d
Repetibilidad
Repetibilidad
Ifenol
Calibracin
Calibracin
Temperatura
Repetibilidad
VK3[Fe(CN)6]
Repetibilidad
Vtampn
Calibracin
Temperatura
Repetibilidad
V4-APP
Calibracin
Temperatura
Temperatura
Repetibilidad
VNH3
Reactivos aadidos
Fig. 5.4: Contribuciones a la incertidumbre de la concentracin de fenol
227
Smbolo
Volmenes
VNH3
VK3[Fe(CN)6]
VTampn
V4-AAP
V500-i
V500-f
V100
Vinicial-muestra
u(VNH3)
u(VK3[Fe(CN)6])
u(VTampn)
u(V4-AAP)
u(V500-i)
u(V500-f)
u(V100)
u(Vinicial-muestra)
Uds
Coeficiente de
sensibilidad, wX wx i
mL
C fenol
Vx
Calibracin
ucal
mL
Repetibilidad
urep
mL
Temperatura
uT
mL
Incertidumbre tpica
u(x) = ux
uV
2
2
ucal
urep
u 2T
u cal
urep
uT
I Vol
K
VN 'T 2.110 4
3
y 0 y
se
1 1
b
m n b 2 x i x 2
2
Proceso
uregresin
mgL
-1
u( x 0 , y )
xi r I (k=2)
-1
u(x0,xi) | u(xi)/n
-1
u(x0,y)
-1
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
0.5853
0.498 r 0.055
0.0046
0.043
0.9266
0.996 r 0.056
0.0046
0.035
2.560
2.993 r 0.058
0.0048
0.033
3.926
3.986 r 0.060
0.0050
0.033
4.837
4.981 r 0.062
0.0052
0.057
Una vez estimadas las contribuciones se combinaron de acuerdo con las reglas de
propagacin de errores obtenindose as la incertidumbre combinada:
228
Cfenol
Cfenol
u2 ( Vinicialmuestra )
u2regresin
V
C
inicialmuestra
fenol0
2
u(Cfenol )
C
fenol u2 ( V100 ) fenol
V100
V500 f
2
500 i
2
C
fenol
VK [Fe( CN)
6
3
ec. 5.6
Cfenol
2
u2 ( V
)
K 3 [Fe ( CN) 6
V
u ( V4 AAP )
4 AAP
u(V100 )
u(VNH3 )
u(Vtampom )
u(V500-i )
u(V500-f )
u(V4AAP )
u(Vferri )
u(Vinicial-muestra )
uregresion
6
0.06
5
4
0.04
0.02
0
N1
N2
1
0
N1
N2
N3
N4
N5
En la Tabla A.II.29 del Anexo II se muestran las incertidumbres estimadas para cada
una de las determinaciones de las muestras de control realizadas por uno de los
analistas durante los experimentos de validacin, segn el modelo bottom-up. Los
resultados obtenidos se han representado grficamente en la Fig. 5.6 empleando
escala logartmica para facilitar su visualizacin. En la Tabla 5.7 se han recogido los
intervalos de incertidumbre en valor relativo, %Ifenol, para los valores promedio de
concentracin obtenidos de cada nivel.
229
10
100
1000
Cfenol
%Ifenol
0.505
8.4 - 22
4.97
1.7 - 3.1
49.5
1.7 - 12
250
1.8 - 4.1
488
2.1 3.7
Se observa que: (i) para los dos primeros niveles de concentracin la incertidumbre, en
valor absoluto, es similar, mientras que para los niveles de concentracin restantes
aumenta proporcionalmente; (ii) la incertidumbre estimada, en valor relativo, es
bastante ms elevada para las muestras de control con la concentracin ms baja, que
para el resto de muestras de control para las cuales se mantiene prcticamente
constante; (iii) las variaciones obtenidas en la incertidumbre, estimadas segn el
modelo bottom-up, son debidas mayoritariamente al ajuste lineal y en menor
medida a los volmenes empleados durante el anlisis.
Pf Pi Pf B PiB
106
VM
ec. 5.7
Posteriormente se identificaron las posibles fuentes de error del mtodo analtico que
contribuyen a la incertidumbre total de la concentracin de aceites y grasas. Dichas
230
Pf
IA&G
T
Repetibilidad
Calibracin
VM
Pi-B
Pf-B
Las contribuciones debidas a las medidas de masa estn reflejadas en la Fig. 3.8, que
muestra el diagrama de Ishikawa de contribuciones a la incertidumbre de la balanza.
A continuacin se estimaron los valores de las componentes identificadas, expresadas
como desviaciones estndar, mediante las expresiones recogidas en la Tabla 5.8:
Tabla 5.8: Listado de fuentes de incertidumbre en la determiacin de A&G y su cuantificacin
Smbolo
Uds
Coeficiente de
sensibilidad, wX wx i
u(VM)
mL
C AG
VM
Calibracin
ucal
mL
Repetibilidad
urep
mL
Temperatura
uT
mL
uP = ubal
mg
1
VM
Fuente de
incertidumbre
Volumen: VM
Incertidumbre tpica
u(x) = ux
uVM
2
2
ucal
urep
u 2T
u cal
urep
uT
I Vol
K
VN 'T 2.110 4
3
ubal
Ibal
K
u(CA & G )
u 106 CA & G u( VM )
4 bal
V
VM
M
ec. 5.8
231
10
3
2
1
4umasa
uvolumen
0
N1
N2
N3
5
0
N1
N2
N3
N4
N5
Las incertidumbres estimadas segn el modelo bottom-up, para cada una de las
muestras de control analizadas durante la validacin, se han recogido en la Tabla
A.II.30 del Anexo II y se han representado grficamente en la Fig. 5.9.
IA&G
100
10
0.1
1
10
100
1000
10000
CA&G
Fig. 5.9: Relacin incertidumbre-concentracin segn el modelo bottom-up para la determinacin
de A&G
232
%IA&G
11.8
2.9-4.6
50.3
1.6-3.8
243
0.63-1.2
991
0.64-1.6
4854
0.60-1.3
%u2
(a)
Nitrito
100
75
uVf
uVi
uregresin
50
25
0
N1
N2
%u2
N3
N4
(b)
Fenol
100
N5
75
50
25
0
N1
N2
%u2
N3
N4
Aceites y grasas
100
N5
u(V100 )
u(VNH3 )
u(Vtampom )
u(V500-i )
u(V500-f )
u(V4AAP )
u(Vferri )
u(Vinicial-muestra )
uregresion
(c)
75
4umasa
uvolumen
50
25
0
N1
N2
N3
N4
N5
Fig. 5.10: Contribuciones a la incertidumbre en valor relativo para la determinacin de (a) aniones, (b)
fenoles y (c) A&G estimadas siguiendo el modelo bottom-up
Por otra parte, este modelo obliga al analista a comprender los detalles del
procedimiento de ensayo en cuestin y resulta, por tanto, una herramienta muy til
234
para identificar aquellos parmetros o etapas del mtodo de ensayo que contribuyen
mayoritariamente a la incertidumbre total, ofreciendo as la posibilidad de mejorarlos.
En los tres mtodos propuestos se puede actuar de la siguiente manera para minimizar
las contribuciones:
Para el caso de metodologas que incluyan calibracin instrumental, la
contribucin debida a la regresin se puede disminuir de varias formas: reducir la
varianza de los residuales, aumentar el nmero de puntos de la lnea de calibrado
o analizar las muestras en el centro de la lnea de calibrado donde el error es
menor. En el caso de la determinacin de aniones, dado que las lneas de calibrado
siguen una tendencia ligeramente curva, como se vio en el estudio de la linealidad
en el captulo anterior, otras opciones seran acortar el rango de calibracin o bien
emplear un mtodo de regresin no lineal.
Para mtodos de ensayo que incluyan la medida de volmenes, emplear material
volumtrico con incertidumbre menor.
En el caso de la medida de masas, emplear balanzas cuyo rango de trabajo se
ajuste a la magnitud de la masa que se va a medir, evitando medir masas prximas
a la resolucin de la balanza.
Alarma (D=0.01)
r2.06
2.25
2.274
0.794
Aviso (D=0.05)
r1.75
1.88
2.126
0.727
236
Estadstico h de Mandel
Estadstico k de Mandel
-3
-2
-1
agua
agua
glucosa
N1
N1
glucosa
ftalato
ftalato
agua
agua
N2
compuesta
Medidas
ftalato
glucosa
glucosa
N2
compuesta
Medidas
ftalato
glucosa
glucosa
N3
N3
ftalato
ftalato
glucosa
glucosa
Fig. 5.11: Aplicacin de los test de consistencia h y k de Mandel a los resultados de nitrito
compuesta
compuesta
N4
N4
ftalato
ftalato
glucosa
glucosa
N5
N5
ftalato
ftalato
NO2
NO2
Correcto
2.252
Resultado
G 1 cal
Correcto
Resultado
FALSO
0.07499
0.06579
0.02657
0.04228
0.17
3.3
sL
sG
umet
INO2
%INO2
0.1503
critico
0.006878
0.1275
sr
5.39
5.41
2.9
0.15
0.04017
0.02305
0.06579
0.03530
0.07750
FALSO
0.1304
0.1079
5.28
N1glucosa
5.28
>critico
1.172
N1compues.
1.821
0.381
0.529
Correcto Correcto
1.692
Correcto Correcto
1.859
N1ftalato
0.763
Correcto
0.917
Correcto
1.949
N2agua
1.640
N2ftalato
1.748
N2compues.
1.574
N3glucosa
1.598
N3ftalato
1.621
N4glucosa
1.541
N4ftalato
1.747
N5glucosa
1.506
N5ftalato
1.498
1.131
1.400
1.396
1.578
1.575
1.53
1.918
0.541
0.301
0.466
0.419
0.408
0.340
0.365
0.453
0.392
1.271
1.938
N2glucosa
4.5
0.23
0.04891
0.03714
0.06366
0.1046
0.01417
FALSO
0.2101
0.05788
5.16
5.11
N1ftalato
2.6
0.14
0.03851
0.02003
0.06579
0.05234
0.03067
SESGO
0.1133
0.2009
5.48
5.28
N1compuesta
3.5
0.89
0.1666
0.1459
0.1606
0.4034
0.1237
FALSO
0.8254
0.01806
25.30
25.32
N2agua
3.9
0.98
0.1798
0.1609
0.1606
0.4515
0.08122
FALSO
0.9103
0.06925
25.25
25.32
N2glucosa
7.4
1.9
0.3177
0.3108
0.1315
0.8779
0.06700
FALSO
1.758
1.351
24.1
25.4
N2ftalato
4.6
1.2
0.2100
0.1940
0.1606
0.5467
0.06741
FALSO
1.098
0.2075
25.5
25.3
N2compuesta
3.5
8.9
1.518
1.470
0.7543
4.109
0.8978
FALSO
8.316
2.621
249.1
251.7
N3glucosa
8.8
22
3.716
3.697
0.753
10.37
1.917
FALSO
20.91
11.68
240
251
N3ftalato
Tabla 5.12: Clculos intermedios para la estimacin de INO2 segn el modelo top-down
4.7
120
19.80
19.43
7.572
52.26
24.04
FALSO
109.9
61.35
2420
2480
N4glucosa
6.9
180
30.30
30.04
7.950
84.30
14.89
FALSO
169.9
72.48
2530
2610
N4ftalato
3.8
480
81.50
79.27
37.82
208.2
117.8
FALSO
448.4
280.9
12190
12470
N5glucosa
5.6
700
118.3
116.8
37.97
322.6
99.84
FALSO
660.5
149.3
12370
12520
N5ftalato
Anmalo (4) Correcto Correcto Extrao (4) Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
0.936
Correcto
1.834
Correcto
1.295
N1glucosa
N1agua
0.382
Ccal
0.882
G P cal
N1 agua
Tabla 5.11: Resultados de los test de consistencia de Grubbs y Cochran aplicados a las medidas de nitrito
237
238
ICl-
Fluoruro
1000
Cloruros
1000
100
100
10
10
0.1
0.1
0.01
0.01
1
10
100
C F-
INO2-
10
100
CCl-
1000
10000
1000
10000
Bromuro
IBr-
Nitrito
1000
10000
1000
1000
100
100
10
10
1
1
0.1
0.01
0.1
1
10
100
1000
10000
100000
10
100
CNO2INO3-
CBrIPO43-
Nitrato
1000
Fosfato
1000
100
100
10
10
0.1
0.1
1
10
100
1000
CNO3-
10000
100000
10
100
1000
CPO43-
10000
100000
Sulfato
ISO43-
1000
100
Ftalato
| Glucosa
U Agua
Compuesta
10
1
0.1
1
10
100
1000
CSO42-
10000
100000
Fig. 5.12: Relacin incertidumbre-concentracin segn el modelo top-down para cada anin
u
0.12
N2
1.0
0.10
0.8
0.08
0.6
0.06
0.4
0.04
0.2
0.02
0.0
0.00
agua
glucosa
N3
12
ftalato
N4
100
10
agua
compuesta
glucosa
ftalato
compuesta
N5
350
300
80
250
8
60
200
40
150
6
4
100
20
2
0
50
0
glucosa
ftalato
0
glucosa
ftalato
glucosa
ftalato
Alarma (D=0.01)
r 2.33
2.42
2.852
0.553
Aviso (D=0.05)
r 1.86
1.93
2.585
0.452
Estadstico h de Mandel
3
2
1
0
-1
-2
-3
N1
N2
N3
N4
N5
Medidas
Estadstico k de Mandel
4
3
2
1
0
N1
N2
N3
N4
N5
Medidas
Fig. 5.14. Aplicacin de los test de consistencia h y k de Mandel a los resultados de fenoles
Tabla 5.14: Resultados de los tests de consistencia de Grubbs y Cochran aplicados a las medidas de fenoles
Ni
Gp
Resultado
G1
Resultado
Ccalc
Resultado
N1
1.565
Correcto
1.713
Correcto
0.537
Extrao (7)
N2
1.882
Correcto
2.133
Correcto
0.572
Anmalo (16)
N3
1.308
Correcto
2.183
Correcto
0.800
Anmalo (16)
N4
2.539
Correcto
1.371
Correcto
0.452
Correcto
N5
1.963
Correcto
1.577
Correcto
0.495
Extrao (3)
241
Los resultados obtenidos al aplicar el test h de Mandel indican que solo hay diferencias
significativas en dos de las medias obtenidas para niveles de concentracin N3 y N4,
respectivamente. Por el contrario, los resultados del test de Grubbs no detectan
ningn valor medio anmalo. Cuando se aplica el test k de Mandel se encuentran
diferencias significativas entre un par de rplicas en cada nivel de concentracin. El
test de Cochran coincide en los mismos valores anmalos de los niveles del N 2 y N3,
considera los valores de los niveles N1 y N5 extraos y no encuentra diferencias
significativas en el nivel N4.
Si se evalan los resultados de los test de Mandel de forma conjunta para todos los
datos analticos de fenol, solo el 2.5% de las medidas presentan resultados medios
anmalos al superar su valor h el valor crtico, mientras que el 6.3% de las medidas
replicadas fueron anmalas por tener un valor k superior al crtico, indicando una
variabilidad anormalmente alta. No obstante, se mantuvieron todos los valores para
calcular la incertidumbre segn el mtodo top-down a fin de evitar subestimarla.
A partir de todos los resultados experimentales, y aplicando las ecuaciones para el
clculo de la incertidumbre segn el modelo top-down indicadas en la Tabla 5.1, se
cuantificaron cada una de las componentes de error intermedias y la incertidumbre
total. Se tuvo en cuenta la componente del sesgo para todos los niveles de
concentracin, a pesar de no ser significativa, para evitar subestimar la incertidumbre
final. Los resultados de incertidumbre calculados se muestran en la Tabla 5.15, en la
que se puede comprobar que la incertidumbre relativa disminuye con el aumento de
concentracin. Por ltimo, en la Fig. 5.15 se ha representado grficamente, en escala
logartmica, la incertidumbre obtenida mediante este modelo top-down frente a la
concentracin de fenol verdadera para cada nivel de concentracin ensayado.
Tabla 5.15: Clculos intermedios para la estimacin de Ifenoles segn el modelo top-down
N1
N2
N3
N4
N5
0.501
5.02
50.7
250
500
0.502
5.02
50.0
249
497
9.643E-04
7.685E-04
0.6733
0.5774
3.111
critico
0.06525
0.4421
2.973
11.69
22.12
>critico
FALSO
FALSO
FALSO
FALSO
FALSO
sr
0.01717
0.05248
0.4555
1.194
3.900
sL
0.03028
0.2179
1.451
5.786
10.71
0.002270
0.07197
0.3815
1.392
2.750
sG
0.008156
0.05526
0.3717
1.462
2.765
umet
0.008234
0.06594
0.4178
1.574
3.088
Ifenol
0.067
0.46
3.1
12
23
%Ifenol
13
9.2
6.1
4.9
4.6
242
Fenoles
100
10
1
0.1
0.01
0.1
10
100
1000
Cfenol
Fig. 5.15: Relacin entre la incertidumbre y la concentracin de fenol segn el modelo top-down
N1
0.04
N2
0.25
N3
1.6
1.4
0.20
0.03
1.2
1.0
0.15
0.8
0.02
0.10
0.01
0.6
0.4
0.05
0.2
0.00
0.00
s(r)
s(L)
s()
u()
s(r)
s()
0.0
u()
N4
s(L)
s(L)
s()
u()
N5
12
s(r)
10
4
6
3
4
1
0
s(r)
s(L)
s()
u()
s(r)
s(L)
s()
u()
243
Alarma (D=0.01)
r 2.06
2.25
2.274
0.794
Aviso (D=0.05)
r 1.75
1.88
2.126
0.727
En la Fig. 5.17 se han representado los valores de los test h y k de Mandel calculados
para los ocho resultados obtenidos para cada nivel de concentracin. Los resultados
obtenidos de la aplicacin de los test de Grubbs y Cochran se han recogido en la Tabla
5.17.
Test de consistencia entre-medidas
Estadstico h de Mandel
3
2
1
0
-1
-2
-3
N1
N2
N3
N4
N5
Medidas
0
N1
N2
N3
N4
N5
Medidas
Fig. 5.17. Aplicacin de los test de consistencia h y k de Mandel a los resultados de A&G
Los resultados obtenidos al aplicar los test de Grubbs y h de Mandel indican que
apenas hay valores anmalos; nicamente el test h de Mandel detecta un valor
244
anmalo para el nivel N4, valor que el test de Grubbs considera solo extrao. Ni el test
k de Mandel ni el de Cochran encuentran diferencias significativas entre las
desviaciones de los pares de valores obtenidos de cada medida.
Tabla 5.17: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a las medidas de A&G
Test de Grubbs
Ni
Test de Cochran
Gp-cal
Resultado
G1-cal
Resultado
Ccalc
Resultado
N1
0.948
Correcto
1.916
Correcto
0.536
Correcto
N2
1.527
Correcto
1.386
Correcto
0.300
Correcto
N3
1.684
Correcto
1.245
Correcto
0.466
Correcto
N4
0.800
Correcto
2.176
Extrao (1)
0.239
Correcto
N5
1.893
Correcto
1.368
Correcto
0.367
Correcto
Si se evalan los resultados de los test de Mandel de forma conjunta para todas las
medidas de aceites y grasas, solo el 2.5% de las medidas presentan resultados medios
anmalos al superar su valor h el valor crtico, mientras que ninguna medida replicada
fue anmala. No obstante, y a fin de evitar subestimar la incertidumbre, se
mantuvieron todos los valores para calcularla segn el mtodo top-down.
A partir de todos los resultados experimentales y aplicando las ecuaciones para el
clculo de la incertidumbre segn el modelo top-down indicadas en la Tabla 5.1, se
cuantificaron cada una de las componentes de error intermedias y la incertidumbre
total. Se tuvo en cuenta la componente del sesgo para todos los niveles de
concentracin, a pesar de no ser significativa en ningn caso. Los resultados obtenidos
se muestran en la Tabla 5.18 donde se observa que la incertidumbre relativa
permanece aproximadamente constante con el aumento de concentracin.
Tabla 5.18: Clculos intermedios para la estimacin de IA&G segn el modelo top-down
N1
N2
N3
N4
N5
11.8
52.6
253
1014
4990
11.8
50.6
243
991
4850
0.007022
2.031
9.285
23.41
140.6
critico
1.305
3.551
34.08
70.51
258.0
>critico
FALSO
FALSO
FALSO
FALSO
FALSO
sr
1.314
2.609
9.001
37.61
125.4
sL
0.0000
0.0000
15.81
23.14
93.67
0.5776
1.969
4.595
17.18
85.91
sG
0.3286
0.6524
6.025
12.46
45.61
umet
0.1914
1.395
41.58
229.2
3925
IA&G
2.1
4.4
36
77
290
%IA&G
17
8.3
14
7.6
5.7
245
1000
100
10
1
10
100
10000
1000
CA&G
Fig. 5.18: Relacin entre la incertidumbre y la concentracin de A&G segn el modelo top-down
N1
1.4
N2
u
3.0
1.2
N3
20
2.5
15
1.0
2.0
0.8
1.0
0.4
5
0.5
0.2
0.0
10
1.5
0.6
s(r)
s(L)
s()
0.0
u()
s(r)
s(L)
N4
40
s()
s(r)
s(L)
s()
u()
N5
140
35
u()
120
30
100
25
80
20
60
15
40
10
20
5
0
s(r)
s(L)
s()
u()
s(r)
s(L)
s()
u()
246
1.0152
Fluoruro
IF-
0.0346 CF
Cloruro
ICl-
0.0533 CCl
Nitrito
INO-
0.0346 CNO
Bromuro
IBr -
0.0421 CBr
Nitrato
INO-
Fosfato
IPO3 -
Sulfato
ISO2-
0.1016 C
0.0337 C
Fenol
IFenol
0.1186 CFenol
Aceites y grasas
IA&G
0.2271 CA&G
0.9954
1.0529
0.9910
0.0377 CNO
1.0254
PO34
SO24
0.8915
1.0309
0.8410
0.8470
247
Nitrito
100
75
50
N1
%u2
N3
%u2
75
75
50
50
25
25
ftalato
glucosa
ftalato
glucosa
N4
N5
Aceites y grasas
100
ftalato
glucosa
N2
Fenol
100
compues.
ftalato
glucosa
agua
compues.
ftalato
glucosa
agua
25
0
N1
N2
N3
N4
N5
N1
N2
N3
N4
N5
248
249
Fluoruro
1000
Cloruro
ICl-
1000
100
100
10
10
0.1
0.1
0.01
0.01
1
10
100
C F-
1000
10000
10
100
CCl-
Fig. 5.21: Incertidumbre para cada analito segn los modelos estudiados
250
1000
10000
Bromuro
IBr
Nitrito
10000
1000
1000
100
100
10
10
0.1
0.01
0.1
1
10
100
1000
10000
100000
10
100
INO3-
IPO43-
Nitrato
1000
10000
CBr-
CNO2-
Fosfato
1000
10000
1000
100
100
10
10
1
1
0.1
0.1
1
10
100
1000
10000
100000
10
100
Sulfato
ISO42-
1000
10000
100000
CPO43-
CNO3-
Fenol
Ifenol
100
10000
1000
10
100
1
10
0.1
1
0.1
0.01
10
100
1000
10000
100000
CSO42IA&G
0.1
10
100
1000
Cfenol
Aceites y grasas
1000
100
validacin
top-down
bottom-up
10
1
0.1
1
10
100
1000
10000
CA&G
Fig. 5.21 (cont.): Incertidumbre para cada analito segn los modelos estudiados
251
Nitrito
Fenol
252
Aceites y grasas
trazab.
0
preci.
preci.
preci.
verac.
N3
verac.
N3
verac.
N3
traza.
traza.
traza.
10
20
30
40
50
60
70
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
20
40
60
80
100
120
140
160
preci.
preci.
preci.
verac.
N4
verac.
N4
verac.
N4
traza.
traza.
traza.
50
100
150
200
10
12
14
16
100
200
300
400
500
600
preci.
preci.
preci.
verac.
N5
verac.
N5
verac.
N5
Fig. 5.22: Contribuciones a la incertidumbre para cada nivel de concentracin de acuerdo a los tres modelos estudiados
precisin verac.
0,0
0,0
traza.
1,0
0,5
verac.
10
2,0
1,0
preci.
15
3,0
25
1,5
N2
20
5,0
4,0
N1
2,0
2,5
traza.
0,0
0,5
1,0
1,5
0,15
0,10
2,0
0,20
3,5
2,5
verac.
traza.
0,25
N2
verac.
10
12
14
16
3,0
preci.
preci.
N2
0,30
0,35
0,0
0,00
traza.
traza.
0,00
verac.
N1
verac.
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
0,05
preci.
preci.
N1
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
traza.
traza.
traza.
bottom-up
top-down
validacin
6. CONCLUSIONES
Captulo 6: Conclusiones
Los laboratorios de anlisis deben validar los mtodos de ensayo antes de ponerlos en
prctica para demostrar que cumplen los requisitos particulares para su uso especfico
previsto. Para llevar a cabo esta tarea, el laboratorio debe realizar una serie de ensayos
que confirmen las caractersticas tcnicas del mtodo tales como veracidad, precisin,
incertidumbre... Este requisito es obligatorio para todos los laboratorios que
pretenden acreditarse de acuerdo a la norma ISO 17025, pero cualquier laboratorio
que aplique las Buenas Prcticas de Laboratorio tambin est obligado a validar sus
mtodos de ensayo.
En esta Tesis Doctoral se propone una metodologa para validar y estimar la
incertidumbre de los mtodos de ensayo. Dicha metodologa se ha aplicado a tres
mtodos para el anlisis rutinario de diversos contaminantes en aguas residuales y
continentales: determinacin de aniones disueltos mediante cromatografa inica,
determinacin de fenoles totales mediante espectrofotometra UV-vis y determinacin
de aceites y grasas mediante extraccin en fase slida y gravimetra.
Previamente a la validacin se comprob, mediante su calibracin y/o verificacin, que
los equipos de medida y ensayo estaban en perfecto uso, y que cumplan los requisitos
especficos para el desarrollo de los mtodos de anlisis en los que estaban implicados.
Paralelamente, se realizaron los ensayos previos necesarios para establecer
determinadas condiciones experimentales tales como linealidad, requerimientos
instrumentales, tiempos mximos de conservacin de muestras y patrones
A continuacin, se seleccionaron los parmetros tcnicos de validacin a evaluar para
cada mtodo de anlisis, y se establecieron los valores objetivo de cada parmetro de
validacin en base a la informacin bibliogrfica disponible (normas, manuales de
equipos, documentos cientficos...), y atendiendo a la matriz analtica y
concentraciones habituales de los analtos de inters. La Tabla 6.1 muestra la
recopilacin de los valores objetivo fijados para cada uno de los parmetros de
validacin.
Para estimar los parmetros de validacin indicados en la Tabla 6.1 para cada mtodo
de ensayo se emplearon muestras de control que, en combinacin con un diseo de
experimentos, permiten evaluar no solo la repetibilidad de las medidas, sino tambin
varias precisiones intermedias relacionadas con factores que previsiblemente pueden
afectar a la veracidad y reproducibilidad de los resultados, tales como el tiempo
(realizacin de los anlisis en distintos das) o el cambio de analista. Los diseos de
experimentos adecuados para simular de forma controlada la variacin de estos
factores fueron diseos completamente anidados. Los factores ensayados para los
mtodos de anlisis de aniones y de aceites y grasas fueron: tiempo, a cuatro niveles,
analista, a dos niveles, y rplica, a dos niveles. Para la determinacin de fenoles se
aadi un cuarto factor, la destilacin, a dos niveles.
255
Aniones
-
F , Cl , Br
Fenoles
NO2 , NO3 ,
-3
2PO4 , SO4
Selectividad
Rango de ensayo
2.5-15 mgL
-1
5-30 mgL
-1
0.55 mgL
r > 0.99
*
%DERf < 10%
Veracidad
%Er d 15 %
Precisin
%DER d 15 %
Lmite de
cuantificacin
LoQ
2.5 mgL
Lmite superior LS
6250 mgL
Rango de medida
2.5-6250 mgL
-1
5 mgL
-1
Dilucin mxima
-1
0.5 mgL
12500 mgL
-1
-1
105000 mgL
0 b r t sb
0 a r t sa
Linealidad/
Sensibilidad
-1
5-12500 mgL
-1
10 mgL
-1
5000 mgL
0.5-500 mgL
-1
No Aplica
-1
500 mgL
0.1:100
-1
-1
-1
10-5000 mgL
1:200
-1
No Aplica
I d 25%
Incertidumbre
*
Aceites y grasas
N1 = LoQ
N2
N3
N4
N5 = LS
2.5
12
125
1250
6250
25
250
2500
12500
Fenoles
0.5
50
250
500
Aceites y grasas
10
50
250
1000
5000
Aniones
256
F , Cl , Br
NO2 ,
NO3 ,
-3
PO4 ,
2SO4
Captulo 6: Conclusiones
2
uprecisin
u 2veracidad u 2trazabilidad
ec. 6.1
donde uprecisin se corresponde con sreproducibilidad del ANOVA de los resultados del
diseo de experimentos anidado; uveracidad se estima a partir del valor de la falta de
veracidad transformada en incertidumbre tpica de acuerdo a una contribucin
tipo B; y utrazabilidad es la componente debida a la incertidumbre de la
concentracin de muestra de control estimada segn el modelo de propagacin
del error (modelo bottom-up).
Los valores obtenidos para cada uno de los parmetros de validacin de los mtodos
de ensayo validados se muestran en las Tablas 6.3 (aniones) y 6.4 (fenoles y aceites y
grasas). Los valores estimados se han comparado con los valores propuestos en la
Tabla 6.1 para comprobar si se han alcanzado los objetivos de validacin.
257
258
Parmetros
I = 18%
6360 mgL
I = 17%
2.5-6250 mgL-1
6330 mgL
LoQensayado=2.59
LoQensayado=2.53
-1
LoQestimado=3.04
LoQestimado=1.80
-1
%DER = 3.8
|%Er|MAX =13%
I = 11%
6920 mgL
-1
LoQensayado=2.54
LoQestimado=1.50
%DER = 3.1
|%Er|MAX =8.2%
I = 15%
0.1:100
12520 mgL
-1
LoQensayado=5.11
LoQestimado=4.46
%DER = 4.7
|%Er|MAX =11
I = 12%
PO4-3
12980 mgL
I = 52%
-1
LoQensayado=5.06
LoQestimado=2.76
%DER = 9.3
|%Er|MAX =44%
5-12500 mgL-1
12510 mgL
-1
LoQensayado=5.09
LoQestimado=4.40
%DER = 3.2
|%Er|MAX =9.2%
1-30 mgL-1
NO3-
0.5-15 mgL-1
NO2-
5-30 mgL-1
Br-
-1
2.5-15 mgL
Cl-
%DER = 3.2
|%Er|MAX =14%
F-
I = 8.7%
12530 mgL-1
LoQensayado=5.03
LoQestimado=4.25
%DER = 2.7
|%Er|MAX =14%
SO42-
Incertidumbre
Dilucin mxima
Rango de medida
Lmite superior LS
Lmite de
cuantificacin, LoQb
Precisin
Veracidada
Linealidad/
Sensibilidad
Rango de ensayo
Selectividad
de validacin
Tabla 6.3: Resultados obtenidos para los parmetros de validacin del mtodo de anlisis de aniones
Captulo 6: Conclusiones
Fenoles
Selectividad
Aceites y grasas
Rango de ensayo
0.55 mgL
-1
0.255 mgL
|%Er|MAX = 11%
|%Er|MAX = 24%
%DER = 7.1
%DER = 13%
LoQestimado = 0.42
LoQestimado = 6.5
LoQensayado = 0.50
LoQensayado =11.75
Lmite de cuantificacin
b
LoQ
Lmite superior LS
502 mgL
-1
5080 mgL
-1
-1
Rango de medida
0.5-500 mgL
Dilucin mxima
1:200
No Aplica
I = 19%
I = 39%
Incertidumbre
a,b, c
No aplica
Veracidad
Precisin
-1
-1
Linealidad/
Sensibilidad
105000 mgL
10-5000 mgL
-1
0.0680 CF
0.9889
Fluoruro
IF
Cloruro
ICl-
Nitrito
INO
Bromuro
IBr
Nitrato
INO
Fosfato
IPO
Sulfato
ISO
0.3014 C
0.0658 C
Fenol
IFenol
0.1820 CFenol
Aceites y grasas
IA&G
0.2366 C A&G
0.0940 C Cl
0.9786
34
24
0.0608 CNO
2
1.0459
0.0807 CBr
0.9573
0.0729 CNO
3
PO34
SO24
0.9963
0.8132
1.0071
0.8667
0.9166
260
Captulo 6: Conclusiones
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1. OBJETIVO
2. INTRODUCCIN TERICA
3. MATERIALES Y MTODOS
4. RESULTADOS
5. OTROS MTODOS
6. CONCLUSIONES
ANEXOS
Anexos
A.I.1. BALANZA
Calibracin
Equipo
Linealidad
Balanza
0.0002
Modelo
g sen
Fecha
MNominal
Mreal
Tolerancia
Ipat
corpat
Resolucin
2.5
ppm Tol
0.0001
0.0025
%Hr
Masas patrn
0.01
0.1
0.009998
0.099977
0.000025
0.00005
0.00002
0.000016
-0.000002
-0.000023
1
1.00000
0.0001
0.00003
0
M pat
10
10.00007
0.0002
0.00006
0.000070
100
99.99992
0.0005
0.00016
-0.000080
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
0.0099
0.0100
0.0099
0.0099
0.0100
0.0099
0.0100
0.0099
0.0100
0.0100
Lecturas
0.0999
1.0000
0.0999
1.0000
0.0999
0.9999
0.1000
1.0000
0.1000
1.0000
0.0999
1.0000
0.1000
1.0000
0.0999
0.9999
0.1000
1.0000
0.1000
1.0000
10.0001
10.0001
10.0001
10.0001
10.0001
10.0001
10.0001
10.0000
10.0002
10.0001
99.9999
100.0003
100.0003
100.0001
99.9999
100.0001
99.9999
99.9999
100.0003
100.0003
Cargas plato
Medidas
Minicial
10.0001
M*
50.0003
M+M*
60.0006
Mfinal
10.0001
Minicial -Mfinal
0.00000
Mreal
0.009998
0.099977
1.00000
10.00007
99.99992
Mleida
-49.9903
-49.9003
-49.0002
-40.0002
49.9996
cortarado
-0.00002
0.00000
0.00008
0.00001
0.00004
Mtara
50.000277
Calculos
Mmedia
N
s
urep
0.0100
10
5.27E-05
1.67E-05
0.1000
10
5.27E-05
1.67E-05
1.0000
10
4.22E-05
1.33E-05
10.0001
10
4.71E-05
1.49E-05
100.0001
10
1.89E-04
5.96E-05
ures
2.89E-05
2.89E-05
2.89E-05
2.89E-05
2.89E-05
ulinea
1.15E-04
1.15E-04
1.15E-04
1.15E-04
1.15E-04
uder sen
1.15E-09
1.15E-08
1.15E-07
1.15E-06
1.15E-05
uempuje
3.61E-04
7.22E-05
1.44E-05
2.89E-06
7.22E-07
uhisteresis
0.00E+00
0.00E+00
0.00E+00
0.00E+00
0.00E+00
uexcentri
5.77E-05
5.77E-05
0.00E+00
5.77E-05
1.73E-04
utarado
1.21E-05
0.00E+00
4.45E-05
4.04E-06
2.48E-05
ucal-pat
1.00E-05
8.00E-06
1.50E-05
3.00E-05
8.00E-05
ucor-pat
-1.15E-06
1.33E-05
0.00E+00
4.04E-05
4.62E-05
8.50E-07
2.03E-06
1.31E-05
2.39E-05
7.80E-05
0.00039
0.00015
0.00013
0.00014
0.00005
0.00003
0.00002
-0.00003
0.00077
0.00030
0.00026
0.00029
Resultados validacion de la calibracion
0.00025
0.00018
0.00050
uder-pat
uder-equi
ubal
cor
Ibal
Tol
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Verac
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Rep
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
301
Verificacin
MNominal
corr
Mreal
0.02
-0.000167
0.019833
Ipat
0.0001
Ibal
Tol
0.000800
0.0025
0.00017
0.00033
Datos de la balanza
0.000800
0.000800
0.0025
0.0025
100
0.000865
100.000865
0.00067
0.0017
0.000800
0.0025
0.000800
0.0025
Vleido
Ibal
Fecha
Observaciones
Si
NO
302
Anexos
matraz 25
V N (m L)
25
Resol (m L)
Datos de partida
Tw (C)
Ta (C)
18
19
tol (m L)
0.04
Hum edad
Presion
45
918
48
18
19.5
19
923
920
nLote
dw (g/m L)
da (g/m L)
Balanza
Ibal
0.998564
0.001092
16
0.00033
Tol (m L)
0.125
VeracNominal (m L)
0.04
Rep Nominal (m L)
0.02
Rplica
24.953
24.9657
24.9404
24.9238
24.9525
24.9476
24.9502
24.9589
24.9413
24.9532
3
4
24.9473
24.9553
24.9884
24.9425
24.9516
24.9400
24.9702
24.9904
24.9594
24.9464
24.9255
24.9472
24.9827
24.9404
24.9547
24.9540
24.9857
24.9948
24.9384
24.9466
24.9790
24.9766
24.9758
24.9301
24.9499
24.9267
24.9779
24.9854
24.9242
24.9353
24.9394
24.9862
24.9839
24.9243
24.9568
10
24.9201
24.9483
24.9841
24.9293
24.9316
Fecha
08/04/2008
Con. am bien.
Valor m inim o
Lugar
Valor m xim o
18.3
uva
Prom edio
Operador
47
Lecturas
Clculos
m (g)
24.9433
24.9663
24.9785
24.9354
24.9479
1.002412
1.002412
1.002412
1.002412
1.002412
10
10
10
10
10
0.0172
0.0153
0.0166
0.0113
0.0083
V 20C
25.0034
25.0265
25.0387
24.9955
25.0080
u2bal
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
u2rep
2.97E-05
2.33E-05
2.75E-05
1.27E-05
6.90E-06
u 2m
2.97E-05
2.33E-05
2.75E-05
1.27E-05
6.92E-06
u 2z
1.48E-09
1.48E-09
1.48E-09
1.48E-09
1.48E-09
u2V20c
3.08E-05
2.44E-05
2.86E-05
1.37E-05
7.88E-06
u2clase
1.33E-04
1.33E-04
1.33E-04
1.33E-04
1.33E-04
uequi
0.013
0.013
0.013
0.012
0.012
cor
-0.003
-0.027
-0.039
0.004
-0.008
Iequi
0.026
0.025
0.025
0.024
0.024
Resultados calibracin
Tol
Verac
Rep
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Tabla A.I.3: Tabla de toma de datos empleada en la calibracin del material volumtrico aforado
303
pipeta 5
V N (m L)
Resol (m L)
0.05
Datos de partida
Tw (C)
Ta (C)
16.5
17.5
tol (m L)
0.03
Hum edad
Presion
52
936
47
16
17
17
935
936
nLote
dw (g/m L)
da (g/m L)
Balanza
Ibal
0.998899
0.001118
13
0.00033
Fecha
08/04/2008
Con. am bien.
Valor m inim o
Lugar
Valor m xim o
16
uva
Prom edio
Operador
50
V nominal
Veracnominal
0.03
0.03
0.03
0.03
0.03
Rep nominal
0.015
0.015
0.015
0.015
0.015
Tol
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
Lecturas
Rplica
5.0059
4.0103
3.0254
2.0053
1.0102
5.0017
4.0043
3.0068
2.0136
1.0106
3
4
4.9914
3.9977
3.0147
1.9933
0.999
4.9938
4.0116
2.999
2.0043
1.004
4.9944
4.0201
3.0103
2.0039
1.0271
5.0019
4.0074
3.009
2.0166
1.0176
4.9879
4.013
3.0176
2.0178
1.0116
4.9967
3.9955
2.9984
2.0194
1.0116
4.9999
4.0199
3.0134
2.0144
1.0156
10
4.990
4.0002
3.0103
2.0189
1.0152
Clculos
m (g)
4.9963
4.0080
3.0105
2.0108
1.0123
1.002118
1.002118
1.002118
1.002118
1.002118
10
10
10
10
10
0.0059
0.0086
0.0081
0.0086
0.0076
V 20C
5.0069
4.0165
3.0169
2.0150
1.0144
U2bal
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
U2rep
3.50E-06
7.43E-06
6.59E-06
7.44E-06
5.78E-06
U2m
3.53E-06
7.46E-06
6.62E-06
7.46E-06
5.81E-06
U2z
2.77E-09
2.77E-09
2.77E-09
2.77E-09
2.77E-09
U2V20c
3.61E-06
7.53E-06
6.67E-06
7.51E-06
5.84E-06
U2clase
7.50E-05
7.50E-05
7.50E-05
7.50E-05
7.50E-05
Ucal
0.009
0.009
0.009
0.009
0.009
cor
-0.007
-0.016
-0.017
-0.015
-0.014
Ical
0.018
0.018
0.018
0.018
0.018
Resultados calibracin
Tol
Verac
Rep
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Tabla A.I.4: Tabla de toma de datos empleada en la estimacin de la incertidumbre del material
volumtrico aforado
304
Anexos
Material volumtrico accionado mediante pistn
Equipo
Cd.:
micro 1
V N (m L)
Resol (m L)
0.001
Datos de partida
Tw (C)
Ta (C)
14
15
tol (m L)
Hum edad
Presion
50
933
50
14
15.5
15
936
935
nLote
dw (g/m L)
da (g/m L)
Balanza
Ibal
0.999206
0.001125
13.5
0.00033
Fecha
08/04/2008
Con. am bien.
Valor m inim o
Lugar
Valor m xim o
14.5
uva
Prom edio
Operador
50
V nominal
0.75
0.5
0.25
0.1
Veracnominal
0.008
0.008
0.008
0.008
0.008
Rep nominal
0.003
0.003
0.003
0.003
0.003
Tol
0.014
0.014
0.014
0.014
0.014
Lecturas
Rplica
0.9958
0.7459
0.4977
0.2499
0.1009
0.9949
0.7448
0.4986
0.25
0.1008
3
4
0.9936
0.7438
0.4957
0.2482
0.1007
0.9929
0.7469
0.4906
0.249
0.0993
0.9945
0.7429
0.4966
0.2507
0.1003
0.9948
0.7459
0.4996
0.25
0.1009
0.9928
0.7462
0.4978
0.2513
0.1004
0.9972
0.7468
0.4991
0.2494
0.1008
0.9943
0.7448
0.4969
0.2504
0.1007
10
0.9929
0.7445
0.4974
0.249
0.101
Clculos
m (g)
0.9944
0.7453
0.4970
0.2498
0.1006
1.004319
1.004319
1.004319
1.004319
1.004319
10
10
10
10
10
0.0014
0.0013
0.0025
0.0009
0.0005
V 20C
0.9987
0.7485
0.4991
0.2509
0.1010
U2bal
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
2.72E-08
U2rep
1.99E-07
1.72E-07
6.43E-07
8.34E-08
2.51E-08
U2m
2.26E-07
1.99E-07
6.70E-07
1.11E-07
5.23E-08
U2z
2.96E-08
2.96E-08
2.96E-08
2.96E-08
2.96E-08
U2V20c
2.58E-07
2.17E-07
6.83E-07
1.13E-07
5.30E-08
U2clase
8.33E-08
8.33E-08
8.33E-08
8.33E-08
8.33E-08
Uequi
0.0006
0.0005
0.0009
0.0004
0.0004
cor
0.0013
0.0015
0.0009
-0.0009
-0.0010
Iequi
0.0012
0.0011
0.0018
0.0009
0.0007
Resultados calibracin
Tol
Verac
Rep
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Tabla A.I.5: Tabla de toma de datos empleada en la calibracin del material volumtrico accionado
mediante pistn
305
Verificacin
Datos de partida
Tw (C)
Ta (C)
20
21
Hum edad
Presion
48
937
50
20
21.5
21
940
939
Lugar
dw (g/m L)
da (g/m L)
Balanza
Ibal
uva
0.998149
0.001106
15
0.00033
Codigo
micro1
Con. am bien.
Valor m inim o
Vn
Valor m xim o
20.5
Prom edio
Fecha
18/02/2008
49
V nominal
0.1
0.075
0.05
0.025
0.01
Veracnominal
0.0008
0.0008
0.0008
0.0008
0.0008
Repnominal
0.0003
0.0003
0.0003
0.0003
0.0003
Lecturas
Rplica
0.0998
0.0755
0.0497
0.0249
0.0102
0.0995
0.0757
0.0491
0.0247
0.0101
3
4
0.0995
0.0753
0.0492
0.0249
0.0098
0.0995
0.0752
0.0495
0.0251
0.0098
0.0999
0.0759
0.0495
0.0253
0.0102
Clculos
m (g)
0.0996
0.0755
0.0494
0.0250
0.0100
1.002713
1.002713
1.002713
1.002713
1.002713
0.0002
0.0003
0.0002
0.0002
0.0002
V 20C
0.0999
0.0757
0.0495
0.0250
0.0100
cor
0.0001
-0.0007
0.0005
0.0000
0.0000
Resultados calibracin
Verac
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Rep
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
VERDADERO
Tabla A.I.6: Tabla de toma de datos empleada en la verificacin del material volumtrico accionado
mediante pistn
306
Anexos
Espectrofotometro UV-vis
Modelo UV-1603
Fecha
6-6-02
%Hr
Tol
1.5
Veracnomina
Oreal
279.35
360.9
453.55
536.4
637.7
328.15
472.1
525.5
681.2
875.2
Ipat
0.25
0.25
0.25
0.25
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Repnominal
Operador
0.1
Veracnomina
Filtro de holm io
0.5
Repnominal
0.1
Filtro de didim io
Lecturas
1
279.10
361.40
453.10
536.60
637.50
328.10
471.90
525.20
680.70
875.10
279.00
361.30
453.10
536.60
637.50
328.20
471.90
525.20
680.70
875.10
279.00
361.30
453.10
536.60
637.50
328.20
471.90
525.20
680.70
875.10
279.10
361.30
453.10
536.60
637.50
328.20
472.00
525.30
680.70
875.10
279.00
361.40
453.10
536.60
637.50
328.10
472.00
525.30
680.70
875.10
Calculos
Omedia
279.04
361.34
453.1
536.6
637.5
328.16
471.94
525.24
680.7
875.1
0.0548
0.0548
0.0000
0.0000
0.0000
0.0548
0.0548
0.0548
0.0000
0.0000
urep
0.0245
0.0245
0.0000
0.0000
0.0000
0.0245
0.0245
0.0245
0.0000
0.0000
ures
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
0.0000
ucal-pat
0.1250
0.1250
0.1250
0.1250
0.2500
0.2500
0.2500
0.2500
0.2500
0.2500
ucor-der-pat
0.0693
0.0693
0.1674
0.1039
0.1212
0.0981
0.0693
0.0462
0.1270
0.3175
uder-equ
0.0014
0.0014
0.0036
0.0014
0.0018
0.0002
0.0007
0.0007
0.0005
0.0005
cor
0.31
0.29
-0.44
0.29
0.45
0.42
-0.20
0.33
0.20
0.56
-0.01
0.54
0.16
0.52
0.26
0.51
0.50
0.56
0.10
0.81
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
IUV-VIS-
Validacin de la calibracin
Tol
Verac
Rep
307
308
-0.0001
0.0024
APTO
APTO
APTO
5.77E-05
2.89E-04
2.89E-05
1.00E-03
5.77E-04
8.58E-07
0.0007
0.0024
APTO
APTO
APTO
ulonda
uestab
ucal-pat
ucor-der-pat
uder-equ
cor
IUV-v is-UA
Rep
Verac
Tol
2.89E-05
2.89E-05
ures
udrift
APTO
APTO
APTO
0.0005
0.0024
6.92E-07
5.77E-04
1.00E-03
2.89E-05
2.89E-04
5.77E-05
2.89E-05
4.00E-05
1.39E-04
8.94E-05
0.2405
0.2407
0.2405
0.2405
0.2405
0.2405
0.002
0.2410
0.2601
0.2601
0.2601
0.2601
0.2601
0.2601
0.002
0.2600
1.50E-04
APTO
APTO
APTO
0.0002
0.0024
4.62E-07
5.77E-04
1.00E-03
2.89E-05
2.89E-04
5.77E-05
2.89E-05
APTO
APTO
APTO
-0.0001
0.0023
4.62E-07
5.77E-04
1.00E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
0.00E+00 0.00E+00
1.50E-04
0.00E+00 0.00E+00
0.2588
0.2588
0.2588
0.2588
0.2588
0.2588
0.002
0.2590
0.001
APTO
APTO
APTO
APTO
0.002
Repnominal
0.004
0.4640
0.4633
0.4633
0.4633
0.4633
0.4633
0.0015
0.0042
5.77E-08
5.77E-04
2.00E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
2.00E-05
2.63E-04
4.47E-05
0.4535
0.0007
0.0042
5.77E-07
5.77E-04
2.00E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
0.00E+00
2.68E-04
0.00E+00
0.4633
Calculos
0.4535
0.4535
0.4536
0.4535
0.4535
Lecturas
0.004
0.4550
0.0007
0.0047
2.60E-07
1.15E-03
2.00E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
2.45E-05
2.96E-04
5.48E-05
0.5123
0.5123
0.5122
0.5123
0.5123
0.5122
0.004
0.5130
Veracnomina
0,01mm
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Validacin de la calibracin
0.0005
0.0042
5.77E-08
5.77E-04
2.00E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
2.78E-17
2.85E-04
6.21E-17
0.4935
0.4935
0.4935
0.4935
0.4935
0.4935
0.004
0.4940
Operador
Tolcelda
APTO
APTO
APTO
0.0007
0.0047
2.60E-07
1.15E-03
2.00E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
2.45E-05
2.97E-04
5.48E-05
0.5133
0.5132
0.5133
0.5133
0.5133
0.5132
0.004
0.5140
0.001
APTO
APTO
APTO
0.0004
0.0075
0.00E+00
1.15E-03
3.50E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
5.55E-17
5.61E-04
1.24E-16
0.9716
0.9716
0.9716
0.9716
0.9716
0.9716
0.007
0.9720
0.004
Repnominal
APTO
APTO
APTO
0.0000
0.0075
1.24E-06
1.15E-03
3.50E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
1.22E-04
5.17E-04
2.74E-04
0.8950
0.8948
0.8948
0.8953
0.8953
0.8948
0.007
0.8950
APTO
APTO
APTO
0.0003
0.0074
2.97E-07
1.15E-03
3.50E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
0.00E+00
5.21E-04
0.00E+00
0.9027
0.9027
0.9027
0.9027
0.9027
0.9027
0.007
0.9030
APTO
APTO
APTO
0.0020
0.0075
3.10E-06
1.15E-03
3.50E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
1.20E-04
5.59E-04
2.68E-04
0.9670
0.9669
0.9669
0.9675
0.9669
0.9669
0.007
0.969
Filtro de absorbancia 1 UA
Veracnomina
Tabla A.I.8: Tabla de toma de datos empleada en la calibracin de absorbancia de un espectrofotmetro UV-vis
1.73E-07
5.77E-04
1.00E-03
2.89E-05
2.89E-04
5.77E-05
1.37E-04
4.47E-05
0.2371
0.2372
2.00E-05
0.2693
0.2371
1.56E-04
0.2693
0.2371
0.00E+00
0.2693
0.2371
0.2371
urep
0.2693
ucelda
0.2693
0.002
0.2693
0.002
Ipat
0.2370
0.00E+00
0.2700
UAreal
Repnominal
0.002
Veracnomina
0.01
Tol
%Hr
Modelo UV-1603
UAmedia
6-6-02
Espectrofotometro UV-vis
Fecha
Equipo
APTO
APTO
APTO
0.0025
0.0075
0.00E+00
1.15E-03
3.50E-03
2.89E-05
1.15E-04
5.77E-05
2.89E-05
0.00E+00
5.42E-04
0.00E+00
0.9365
0.9365
0.9365
0.9365
0.9365
0.9365
0.007
0.939
0.002
Anexos
Verificacin
Equipo
Fecha
Tol
1.5
Modelo
UV-1603
%Hr
Veracnomina
0.5
Repnominal
Operador
0.1
V real
Ipat
279.35
0.25
Filtro de holm io
360.9
453.55
536.4
0.25
0.25
0.25
1
2
3
4
5
279.1
279.1
279.0
279.1
279.1
361.4
361.3
361.3
361.4
361.4
453.1
453.1
453.1
453.1
453.1
536.6
536.6
536.6
536.5
536.5
lm edia
s
cor v erif
279.08
0.045
0.270
361.36
0.055
-0.460
453.10
0.000
0.450
536.56
0.055
-0.160
IUV-VIS-OO
0.290
0.290
0.418
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Tol
Verac
Rep
Veracnomina
0.5
Repnominal
0.1
328.15
0.5
Filtro de didim io
472.1
525.5
681.2
0.5
0.5
0.5
875.2
0.5
328.1
328.2
328.2
328.2
328.1
471.9
471.9
471.9
472.0
472.0
525.2
525.2
525.2
525.3
525.3
680.7
680.7
680.7
680.8
680.7
875.1
875.1
875.1
875.1
875.1
328.16
0.055
-0.010
471.94
0.055
0.160
525.24
0.055
0.260
680.72
0.045
0.480
875.10
0.000
0.100
0.325
0.556
0.539
Validacion de la verificacin
APTO
APTO
APTO
0.521
0.511
0.561
0.808
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
637.7
0.5
Lecturas
637.5
637.5
637.5
637.5
637.5
Calculos
637.50
0.000
0.200
APTO
309
310
Veracnomina
Tol
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Rep
Verac
Tol
0.2373
0.0000
-0.0003
0.0024
0.2697
0.0000
0.0003
0.0024
Prom edio
s
cor v erif
IUV-v is-UA
APTO
APTO
APTO
0.2405
0.0000
0.0005
0.0024
0.2405
0.2405
0.2405
0.2405
0.2405
APTO
APTO
APTO
0.2584
0.0001
0.0006
0.0024
0.2584
0.2584
0.2583
0.2583
0.2584
APTO
APTO
APTO
APTO
0.2596
0.0000
0.0004
0.0023
0.2596
0.2596
0.2596
0.2596
0.2596
Veracnomina
0.002
Repnominal
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
APTO
Operador
APTO
APTO
APTO
0.5125
0.0000
0.0015
0.0047
0.5125
0.5125
0.5125
0.5125
0.5125
0.514
0.004
0.001
APTO
APTO
APTO
0.9716
0.0000
0.0004
0.0075
0.9716
0.9716
0.9716
0.9716
0.9716
0.972
0.007
0.004
Repnominal
APTO
APTO
APTO
0.8944
0.0002
0.0006
0.0075
0.8943
0.8948
0.8943
0.8943
0.8943
APTO
APTO
APTO
0.9022
0.0000
0.0008
0.0074
0.9022
0.9022
0.9022
0.9022
0.9022
APTO
APTO
APTO
0.9665
0.0000
0.0025
0.0075
0.9665
0.9665
0.9665
0.9665
0.9665
Filtro de absorbancia 1 UA
0.895
0.903
0.969
0.007
0.007
0.007
Veracnomina
Tabla A.I.10: Tabla de toma de datos empleada en la verificacin de la absorbancia de un espectrofotmetro UV-vis
0.2373
0.2373
0.2373
0.2373
0.2372
0.2697
0.2697
0.2697
0.2697
0.2697
1
2
3
4
5
0.26
0.002
0.27
0.002
V real
Ipat
UV-1603
0.001
%Hr
Modelo
Repnominal
0.002
Fecha
0.01
Espectrofotometro UV-vis
Equipo
APTO
APTO
APTO
0.9365
0.0000
0.0025
0.0075
0.9365
0.9365
0.9365
0.9365
0.9365
0.939
0.007
0.002
Anexos
Modelo
Fecha
%Hr
%ErNominal
r1
IC-Basic
Operador
r0.1
%DERNominal
Fnominal
Lecturas
tn
Pn+1
Pn
g mL-1 mL min-1
tn+1
tn+2
mg
seg
mg
seg
mL min-1
seg
Pn+2
mg
68.4
80.9
68.4
93.4
68.4
105.9
0
2062
0
2060
0
2061
70.9
83.3
73.4
98.5
75.9
113.5
301
2363
300
2364
300
2366
0.4982
0.4987
1.0019
1.0021
1.5003
1.5006
408
2481
405
2445
405
2461
73.4
85.8
78.4
103.5
83.4
120.8
18
0.99859
0.5
22
0.99777
1.0
22
0.997768
1.5
tn+3
tn+4
Pn+3
Lecturas
tn+5
F
tn+6
Pn+4
tn+7
seg
mL min-1
seg
mg
seg
mL min-1
seg
mg
seg
mL min-1
709
2781
705
2746
705
2752
0.4980
0.4988
1.0018
1.0015
1.5011
1.5017
816
2928
818
2867
811
2902
75.9
88.3
83.4
108.5
91.1
128.2
1117
3228
1119
3168
1118
3199
0.4990
0.4982
1.0020
1.0021
1.5010
1.5003
1218
3328
1242
3277
1233
3290
78.4
90.8
88.4
113.5
98.3
134.1
1519
3628
1542
3578
1525
3525
0.4989
0.4981
1.0020
1.0009
1.5003
1.5011
tn+8
Pn+5
tn+9
Lecturas
F
seg
mg
seg
mL min-1 mL min-1
1629
3689
1652
3639
1642
3626
80.9
93.3
93.4
118.5
105.8
142.9
1930
3989
1953
3939
1943
3980
0.4979
0.4991
1.0013
1.0012
1.5005
1.5016
Validacion equipo
Fm
%Er
%DER
Verac
Rep
0.4985
-0.30
0.093
APTO
APTO
1.0017
0.17
0.042
APTO
APTO
1.5006
0.04
0.035
APTO
APTO
/ Nominal
uS cm
11.92
74.43
145
/ real
uS cm
12.03
73.69
146.25
%Er
Verac
-0.92
0.99
-0.86
APTO
APTO
APTO
311
A.II. RESULTADOS
Anexos
A.II.1. EQUIPOS
Material volumtrico
Material volumtrico accionado mediante pistn
ui(y,xi)
Micropipeta 100PL
Micropipeta 200PL
ui(y,xi)
100
100
75
75
50
50
25
25
0
0.1
0.075
0.05
0.025
0.01
0.2
Volumen
ui(y,xi)
ui(y,xi)
Micropipeta 1000PL
100
100
75
75
50
50
25
25
0.15
0.1
0.05
Volumen
0.02
Micropipeta 5000PL
0
1
0.75
0.5
Volumen (mL)
0.25
0.1
0.5
Volumen (mL)
ui(y,xi)
100
100
75
75
50
50
25
25
0
0.01
0.02
0.1
0.5
0.1
0.2
A.II.2. ANIONES
Resultados analticos
315
316
Da 1
Analista1 Analista2
2.669
2.754
2.681
2.782
Da 1
Analista1 Analista2
13.426
13.203
13.486
13.222
Da 1
Analista1 Analista2
131.72
129.43
131.45
129.81
Da 1
Analista1 Analista2
1281.6
1248.5
1266.5
1249.4
Da 1
Analista1 Analista2
6409
6188
6352
6329
Da 1
Analista1 Analista2
2.619
2.434
2.569
2.492
Da 1
Analista1 Analista2
13.991
13.388
14.023
13.310
Da 1
Analista1 Analista2
125.71
123.34
126.20
124.45
Da 1
Analista1 Analista2
1281.5
1239.3
1258.5
1233.1
Da 1
Analista1 Analista2
6206
6469
6065
5898
Da 1
Analista1 Analista2
2.619
2.592
2.611
2.540
Da 1
Analista1 Analista2
13.974
13.388
14.021
13.398
Da 1
Analista1 Analista2
2.525
2.456
2.497
2.408
Da 1
Analista1 Analista2
13.661
13.176
13.653
13.176
Da 2
Analista1 Analista2
2.860
2.749
2.850
2.749
Da 2
Analista1 Analista2
13.198
12.822
13.484
13.150
Da 2
Analista1 Analista2
131.48
128.19
132.35
127.90
Da 2
Analista1 Analista2
1270.6
1243.1
1262.9
1248.4
Da 2
Analista1 Analista2
6302
6102
6251
6134
Da 2
Analista1 Analista2
2.547
2.563
2.549
2.452
Da 2
Analista1 Analista2
13.306
13.270
13.344
13.858
Da 2
Analista1 Analista2
124.01
123.39
124.33
123.53
Da 2
Analista1 Analista2
1244.0
1247.1
1240.6
1222.9
Da 2
Analista1 Analista2
6327
6289
6383
6325
Da 2
Analista1 Analista2
2.550
2.544
2.567
2.545
Da 2
Analista1 Analista2
13.312
13.436
13.404
13.104
Da 2
Analista1 Analista2
2.499
2.477
2.483
2.476
Da 2
Analista1 Analista2
12.992
12.910
13.122
12.910
Da 3
Analista1 Analista2
2.896
2.757
2.880
2.743
Da 3
Analista1 Analista2
13.384
12.932
13.376
12.940
Da 3
Analista1 Analista2
129.82
127.90
127.37
125.72
Da 3
Analista1 Analista2
1262.8
1207.5
1258.3
1224.8
Da 3
Analista1 Analista2
6242
6035
6325
5926
Da 3
Analista1 Analista2
2.543
2.510
2.521
2.517
Da 3
Analista1 Analista2
13.759
13.404
13.785
13.448
Da 3
Analista1 Analista2
122.35
122.58
121.80
122.10
Da 3
Analista1 Analista2
1235.8
1205.3
1244.7
1218.2
Da 3
Analista1 Analista2
6278
6088
6350
6178
Da 3
Analista1 Analista2
2.544
2.519
2.523
2.533
Da 3
Analista1 Analista2
13.729
13.446
13.801
13.430
Da 3
Analista1 Analista2
2.480
2.450
2.480
2.452
Da 3
Analista1 Analista2
13.369
13.021
13.405
13.017
Da 4
Analista1 Analista2
2.798
2.703
2.919
2.744
Da 4
Analista1 Analista2
13.400
12.920
13.460
12.962
Da 4
Analista1 Analista2
125.98
126.95
126.58
125.70
Da 4
Analista1 Analista2
1233.5
1197.0
1266.0
1207.8
Da 4
Analista1 Analista2
6329
6320
6288
6347
Da 4
Analista1 Analista2
2.530
2.535
2.530
2.523
Da 4
Analista1 Analista2
13.352
13.370
13.412
13.362
Da 4
Analista1 Analista2
120.83
122.60
122.13
125.83
Da 4
Analista1 Analista2
1196.3
1222.0
1189.0
1224.0
Da 4
Analista1 Analista2
6341
6413
6360
6462
Da 4
Analista1 Analista2
2.548
2.506
2.526
2.526
Da 4
Analista1 Analista2
13.304
13.348
13.404
13.378
Da 4
Analista1 Analista2
2.452
2.462
2.455
2.464
Da 4
Analista1 Analista2
12.979
13.086
12.992
12.997
Anexos
Tabla A.II.2: Resultados analticos del diseo de experimentos para la determinacin de cloruros
N1 =LC
ftalato
Rplica1
Rplica2
N2
ftalato
Rplica1
Rplica2
N3
ftalato
Rplica1
Rplica2
N4
ftalato
Rplica1
Rplica2
N5
ftalato
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
glucosa
Rplica1
Rplica2
N2
glucosa
Rplica1
Rplica2
N3
glucosa
Rplica1
Rplica2
N4
glucosa
Rplica1
Rplica2
N5
glucosa
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
agua
Rplica1
Rplica2
N2
agua
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
compuesta
Rplica1
Rplica2
N2
compuesta
Rplica1
Rplica2
Da 1
Analista1 Analista2
2.737
2.649
2.746
2.652
Da 1
Analista1 Analista2
13.47
13.20
13.64
13.23
Da 1
Analista1 Analista2
126.32
124.76
127.00
125.53
Da 1
Analista1 Analista2
1275.3
1249.3
1264.8
1229.2
Da 1
Analista1 Analista2
6345
6128
6340
6255
Da 1
Analista1 Analista2
2.770
2.682
2.713
2.674
Da 1
Analista1 Analista2
14.17
13.46
14.18
13.45
Da 1
Analista1 Analista2
129.25
127.54
129.19
128.33
Da 1
Analista1 Analista2
1308.3
1258.9
1289.4
1252.7
Da 1
Analista1 Analista2
6350
6227
6342
6082
Da 1
Analista1 Analista2
2.735
2.644
2.729
2.651
Da 1
Analista1 Analista2
14.20
13.44
14.33
13.42
Da 1
Analista1 Analista2
2.927
2.682
2.841
2.718
Da 1
Analista1 Analista2
14.78
14.24
14.95
14.38
Da 2
Analista1 Analista2
2.670
2.675
2.660
2.668
Da 2
Analista1 Analista2
13.08
12.77
13.09
12.87
Da 2
Analista1 Analista2
124.11
120.75
125.20
120.58
Da 2
Analista1 Analista2
1239.6
1221.4
1240.8
1229.4
Da 2
Analista1 Analista2
6188
5977
6133
6014
Da 2
Analista1 Analista2
2.666
2.683
2.672
2.542
Da 2
Analista1 Analista2
13.31
13.31
13.29
13.24
Da 2
Analista1 Analista2
125.40
124.20
125.60
124.81
Da 2
Analista1 Analista2
1256.1
1254.1
1244.3
1227.1
Da 2
Analista1 Analista2
6187
6069
6286
6111
Da 2
Analista1 Analista2
2.679
2.653
2.670
2.653
Da 2
Analista1 Analista2
13.34
13.70
13.37
13.22
Da 2
Analista1 Analista2
2.878
2.775
2.825
2.745
Da 2
Analista1 Analista2
13.62
13.45
13.92
13.49
Da 3
Analista1 Analista2
2.833
2.712
2.840
2.725
Da 3
Analista1 Analista2
13.49
12.79
13.50
12.84
Da 3
Analista1 Analista2
121.60
118.38
119.53
116.13
Da 3
Analista1 Analista2
1238.2
1170.8
1237.7
1183.2
Da 3
Analista1 Analista2
6173
5868
6194
5756
Da 3
Analista1 Analista2
2.707
2.654
2.696
2.669
Da 3
Analista1 Analista2
13.86
13.57
13.88
13.64
Da 3
Analista1 Analista2
123.57
124.23
122.75
123.43
Da 3
Analista1 Analista2
1241.0
1205.0
1246.0
1223.7
Da 3
Analista1 Analista2
6144
5941
6215
6015
Da 3
Analista1 Analista2
2.721
2.642
2.702
2.702
Da 3
Analista1 Analista2
13.91
13.60
13.90
13.60
Da 3
Analista1 Analista2
2.838
3.082
2.850
2.745
Da 3
Analista1 Analista2
14.53
14.27
14.67
14.20
Da 4
Analista1 Analista2
2.700
2.697
2.728
2.672
Da 4
Analista1 Analista2
13.05
12.50
13.16
12.51
Da 4
Analista1 Analista2
119.40
118.83
121.35
118.18
Da 4
Analista1 Analista2
1213.8
1185.0
1244.5
1193.8
Da 4
Analista1 Analista2
6254
6247
6242
6236
Da 4
Analista1 Analista2
2.634
2.662
2.644
2.653
Da 4
Analista1 Analista2
13.60
13.40
13.38
13.36
Da 4
Analista1 Analista2
122.60
124.48
124.40
134.73
Da 4
Analista1 Analista2
1213.5
1241.8
1219.5
1238.8
Da 4
Analista1 Analista2
6253
6318
6269
6355
Da 4
Analista1 Analista2
2.619
2.642
2.601
2.700
Da 4
Analista1 Analista2
13.33
13.37
13.32
13.37
Da 4
Analista1 Analista2
2.763
2.744
2.780
2.783
Da 4
Analista1 Analista2
13.65
13.85
13.67
13.65
317
318
Da 1
Analista1 Analista2
5.236
5.207
5.205
5.184
Da 1
Analista1 Analista2
25.58
24.90
25.43
24.80
Da 1
Analista1 Analista2
255.40
248.68
256.96
249.74
Da 1
Analista1 Analista2
2657.5
2593.6
2670.8
2580.7
Da 1
Analista1 Analista2
12901
12411
12835
12629
Da 1
Analista1 Analista2
5.443
5.351
5.399
5.352
Da 1
Analista1 Analista2
26.12
25.06
26.14
25.30
Da 1
Analista1 Analista2
254.55
252.91
256.69
254.21
Da 1
Analista1 Analista2
2536.1
2479.1
2480.0
2461.6
Da 1
Analista1 Analista2
12583
12499
12575
12182
Da 1
Analista1 Analista2
5.458
5.246
5.441
5.236
Da 1
Analista1 Analista2
26.06
25.05
26.15
25.25
Da 1
Analista1 Analista2
5.503
5.336
5.509
5.425
Da 1
Analista1 Analista2
26.45
25.27
26.51
25.45
Da 2
Analista1 Analista2
5.144
5.147
5.146
5.160
Da 2
Analista1 Analista2
24.35
23.82
24.27
23.78
Da 2
Analista1 Analista2
245.78
238.36
246.28
238.88
Da 2
Analista1 Analista2
2584.4
2532.5
2588.4
2540.5
Da 2
Analista1 Analista2
12562
12059
12425
12152
Da 2
Analista1 Analista2
5.469
5.421
5.442
5.121
Da 2
Analista1 Analista2
25.01
24.67
24.99
24.67
Da 2
Analista1 Analista2
250.96
246.76
251.34
247.73
Da 2
Analista1 Analista2
2447.4
2436.8
2442.5
2382.6
Da 2
Analista1 Analista2
12236
12024
12127
12052
Da 2
Analista1 Analista2
5.479
5.399
5.462
5.398
Da 2
Analista1 Analista2
25.11
25.19
25.06
24.76
Da 2
Analista1 Analista2
5.533
5.435
5.567
5.423
Da 2
Analista1 Analista2
25.19
24.98
25.26
24.82
Da 3
Analista1 Analista2
5.359
5.151
5.360
5.116
Da 3
Analista1 Analista2
24.36
23.47
24.42
23.44
Da 3
Analista1 Analista2
240.30
235.55
235.40
230.88
Da 3
Analista1 Analista2
2571.3
2446.3
2547.3
2472.5
Da 3
Analista1 Analista2
12388
11862
12495
11612
Da 3
Analista1 Analista2
5.364
5.379
5.345
5.395
Da 3
Analista1 Analista2
25.55
25.36
25.65
25.41
Da 3
Analista1 Analista2
243.23
247.77
243.27
247.47
Da 3
Analista1 Analista2
2400.7
2351.2
2403.3
2399.5
Da 3
Analista1 Analista2
11980
11750
12207
11938
Da 3
Analista1 Analista2
5.386
5.427
5.390
5.433
Da 3
Analista1 Analista2
25.69
25.39
25.69
25.44
Da 3
Analista1 Analista2
5.474
5.512
5.466
5.454
Da 3
Analista1 Analista2
26.02
25.83
26.02
25.84
Da 4
Analista1 Analista2
5.125
4.994
5.115
4.979
Da 4
Analista1 Analista2
23.41
22.82
23.50
22.68
Da 4
Analista1 Analista2
225.95
230.88
223.80
228.80
Da 4
Analista1 Analista2
2455.3
2387.5
2491.3
2411.3
Da 4
Analista1 Analista2
12408
12445
12349
12393
Da 4
Analista1 Analista2
5.418
5.500
5.400
5.450
Da 4
Analista1 Analista2
24.94
24.98
24.93
25.16
Da 4
Analista1 Analista2
244.13
248.95
246.45
248.75
Da 4
Analista1 Analista2
2343.3
2411.0
2321.3
2407.5
Da 4
Analista1 Analista2
12125
12254
12071
12391
Da 4
Analista1 Analista2
5.427
5.479
5.428
5.474
Da 4
Analista1 Analista2
24.93
25.02
24.91
25.07
Da 4
Analista1 Analista2
5.516
5.562
5.508
5.514
Da 4
Analista1 Analista2
24.92
25.39
24.97
25.45
Anexos
Tabla A.II.4: Resultados analticos del diseo de experimentos para la determinacin de bromuros
N1 =LC
ftalato
Rplica1
Rplica2
N2
ftalato
Rplica1
Rplica2
N3
ftalato
Rplica1
Rplica2
N4
ftalato
Rplica1
Rplica2
N5
ftalato
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
glucosa
Rplica1
Rplica2
N2
glucosa
Rplica1
Rplica2
N3
glucosa
Rplica1
Rplica2
N4
glucosa
Rplica1
Rplica2
N5
glucosa
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
agua
Rplica1
Rplica2
N2
agua
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
compuesta
Rplica1
Rplica2
N2
compuesta
Rplica1
Rplica2
Da 1
Analista1 Analista2
2.605
2.612
2.609
2.618
Da 1
Analista1 Analista2
13.04
12.92
13.07
12.91
Da 1
Analista1 Analista2
129.77
128.89
130.68
129.37
Da 1
Analista1 Analista2
1278
1259
1268
1243
Da 1
Analista1 Analista2
6891
6712
6901
6833
Da 1
Analista1 Analista2
2.747
2.719
2.738
2.731
Da 1
Analista1 Analista2
14.06
13.36
14.09
13.39
Da 1
Analista1 Analista2
125.76
122.88
125.95
123.85
Da 1
Analista1 Analista2
1282.8
1230.0
1253.4
1223.6
Da 1
Analista1 Analista2
7013
6869
7015
6677
Da 1
Analista1 Analista2
2.754
2.697
2.736
2.700
Da 1
Analista1 Analista2
14.06
13.32
14.06
13.35
Da 1
Analista1 Analista2
2.743
2.702
2.750
2.699
Da 1
Analista1 Analista2
14.13
13.41
14.22
13.44
Da 2
Analista1 Analista2
2.532
2.672
2.555
2.678
Da 2
Analista1 Analista2
13.03
12.81
13.06
12.85
Da 2
Analista1 Analista2
129.81
126.30
130.48
126.18
Da 2
Analista1 Analista2
1266
1238
1264
1248
Da 2
Analista1 Analista2
6869
6665
6818
6705
Da 2
Analista1 Analista2
2.722
2.731
2.727
2.589
Da 2
Analista1 Analista2
13.46
13.31
13.46
13.32
Da 2
Analista1 Analista2
122.91
121.91
123.40
121.74
Da 2
Analista1 Analista2
1239.1
1235.5
1229.5
1205.6
Da 2
Analista1 Analista2
6865
6770
6837
6806
Da 2
Analista1 Analista2
2.730
2.705
2.754
2.724
Da 2
Analista1 Analista2
13.46
13.46
13.51
13.27
Da 2
Analista1 Analista2
2.726
2.708
2.733
2.681
Da 2
Analista1 Analista2
13.49
13.35
13.51
13.35
Da 3
Analista1 Analista2
2.751
2.591
2.749
2.594
Da 3
Analista1 Analista2
13.12
12.57
13.17
12.55
Da 3
Analista1 Analista2
129.33
125.88
126.82
123.28
Da 3
Analista1 Analista2
1278
1212
1269
1226
Da 3
Analista1 Analista2
6833
6534
6894
6398
Da 3
Analista1 Analista2
2.713
2.726
2.719
2.709
Da 3
Analista1 Analista2
13.76
13.37
13.81
13.43
Da 3
Analista1 Analista2
122.55
122.38
122.08
121.78
Da 3
Analista1 Analista2
1240.7
1194.0
1249.0
1220.5
Da 3
Analista1 Analista2
6862
6608
6964
6709
Da 3
Analista1 Analista2
2.749
2.704
2.750
2.710
Da 3
Analista1 Analista2
13.82
13.38
13.82
13.39
Da 3
Analista1 Analista2
2.737
2.710
2.727
2.681
Da 3
Analista1 Analista2
13.94
13.56
13.93
13.53
Da 4
Analista1 Analista2
2.623
2.570
2.640
2.594
Da 4
Analista1 Analista2
13.05
12.54
13.10
12.54
Da 4
Analista1 Analista2
125.88
125.50
124.13
124.55
Da 4
Analista1 Analista2
1257
1216
1286
1221
Da 4
Analista1 Analista2
6808
6792
6826
6823
Da 4
Analista1 Analista2
2.850
2.724
2.836
2.700
Da 4
Analista1 Analista2
13.75
13.53
13.79
13.56
Da 4
Analista1 Analista2
125.00
124.28
126.05
124.30
Da 4
Analista1 Analista2
1243.0
1241.3
1362.5
1240.5
Da 4
Analista1 Analista2
6882
6955
6891
6996
Da 4
Analista1 Analista2
2.815
2.696
2.817
2.698
Da 4
Analista1 Analista2
13.71
13.64
13.69
13.54
Da 4
Analista1 Analista2
2.849
2.708
2.852
2.701
Da 4
Analista1 Analista2
13.73
13.65
13.86
13.66
319
320
Da 1
Analista1 Analista2
5.172
5.179
5.175
5.222
Da 1
Analista1 Analista2
25.21
25.45
25.42
25.48
Da 1
Analista1 Analista2
254.8
259.6
256.1
260.9
Da 1
Analista1 Analista2
2515
2514
2485
2487
Da 1
Analista1 Analista2
12603
12343
12637
12572
Da 1
Analista1 Analista2
5.437
5.434
5.447
5.468
Da 1
Analista1 Analista2
29.08
27.54
29.14
27.77
Da 1
Analista1 Analista2
251.1
246.7
251.4
247.6
Da 1
Analista1 Analista2
2753
2483
2547
2468
Da 1
Analista1 Analista2
12686
12362
12714
12147
Da 1
Analista1 Analista2
5.457
5.292
5.440
5.318
Da 1
Analista1 Analista2
29.08
27.52
29.12
27.74
Da 1
Analista1 Analista2
5.461
5.499
5.436
5.418
Da 1
Analista1 Analista2
29.54
27.98
29.68
28.04
Da 2
Analista1 Analista2
5.456
5.494
5.456
5.489
Da 2
Analista1 Analista2
26.10
25.60
26.06
25.71
Da 2
Analista1 Analista2
263.0
254.7
263.6
254.4
Da 2
Analista1 Analista2
2519
2462
2518
2505
Da 2
Analista1 Analista2
12609
12299
12486
12404
Da 2
Analista1 Analista2
5.449
5.506
5.448
5.225
Da 2
Analista1 Analista2
27.43
27.31
27.43
27.39
Da 2
Analista1 Analista2
243.6
242.1
244.0
242.5
Da 2
Analista1 Analista2
2495
2498
2491
2440
Da 2
Analista1 Analista2
12666
12255
12467
12339
Da 2
Analista1 Analista2
5.435
5.437
5.432
5.446
Da 2
Analista1 Analista2
27.44
27.82
27.41
27.25
Da 2
Analista1 Analista2
5.361
5.503
5.345
5.501
Da 2
Analista1 Analista2
27.31
27.50
27.25
27.61
Da 3
Analista1 Analista2
5.563
5.315
5.555
5.299
Da 3
Analista1 Analista2
27.05
25.78
27.06
25.80
Da 3
Analista1 Analista2
262.2
256.6
257.3
251.2
Da 3
Analista1 Analista2
2559
2425
2539
2455
Da 3
Analista1 Analista2
12623
12108
12716
11861
Da 3
Analista1 Analista2
5.432
5.416
5.408
5.441
Da 3
Analista1 Analista2
28.54
27.44
28.57
27.56
Da 3
Analista1 Analista2
242.2
240.3
241.1
239.8
Da 3
Analista1 Analista2
2516
2424
2534
2461
Da 3
Analista1 Analista2
12543
12005
12723
12193
Da 3
Analista1 Analista2
5.397
5.398
5.399
5.428
Da 3
Analista1 Analista2
28.51
27.44
28.62
27.52
Da 3
Analista1 Analista2
5.451
5.464
5.458
5.383
Da 3
Analista1 Analista2
29.00
28.36
29.06
28.13
Da 4
Analista1 Analista2
5.340
5.204
5.371
5.262
Da 4
Analista1 Analista2
26.76
25.63
26.81
25.48
Da 4
Analista1 Analista2
261.5
255.4
259.3
253.4
Da 4
Analista1 Analista2
2595
2456
2643
2494
Da 4
Analista1 Analista2
12905
12811
12922
12868
Da 4
Analista1 Analista2
5.457
5.308
5.455
5.284
Da 4
Analista1 Analista2
28.11
27.05
28.21
26.96
Da 4
Analista1 Analista2
242.1
239.4
244.9
241.3
Da 4
Analista1 Analista2
2481
2519
2468
2476
Da 4
Analista1 Analista2
12730
12558
12741
12657
Da 4
Analista1 Analista2
5.458
5.248
5.468
5.273
Da 4
Analista1 Analista2
27.70
27.73
27.82
27.08
Da 4
Analista1 Analista2
5.469
5.439
5.466
5.421
Da 4
Analista1 Analista2
28.31
29.15
29.27
27.82
Anexos
Tabla A.II.6: Resultados analticos del diseo de experimentos para la determinacin de fosfatos
N1 =LC
ftalato
Rplica1
Rplica2
N2
ftalato
Rplica1
Rplica2
N3
ftalato
Rplica1
Rplica2
N4
ftalato
Rplica1
Rplica2
N5
ftalato
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
glucosa
Rplica1
Rplica2
N2
glucosa
Rplica1
Rplica2
N3
glucosa
Rplica1
Rplica2
N4
glucosa
Rplica1
Rplica2
N5
glucosa
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
agua
Rplica1
Rplica2
N2
agua
Rplica1
Rplica2
N1 =LC
compuesta
Rplica1
Rplica2
N2
compuesta
Rplica1
Rplica2
Da 1
Analista1 Analista2
3.916
3.911
3.931
3.833
Da 1
Analista1 Analista2
23.49
23.48
23.86
23.81
Da 1
Analista1 Analista2
249.64
252.03
250.94
255.68
Da 1
Analista1 Analista2
2508.4
2303.7
2506.1
2460.2
Da 1
Analista1 Analista2
12569
12300
12518
12566
Da 1
Analista1 Analista2
5.234
4.899
5.038
5.260
Da 1
Analista1 Analista2
28.15
27.25
28.41
26.42
Da 1
Analista1 Analista2
250.98
247.05
252.74
252.20
Da 1
Analista1 Analista2
2555.8
2506.3
2493.9
2442.6
Da 1
Analista1 Analista2
12824
12714
12843
12365
Da 1
Analista1 Analista2
5.492
5.191
5.314
5.104
Da 1
Analista1 Analista2
27.61
27.59
28.33
27.45
Da 1
Analista1 Analista2
3.204
3.536
2.899
3.142
Da 1
Analista1 Analista2
25.72
24.46
25.25
24.12
Da 2
Analista1 Analista2
3.969
3.956
3.384
3.819
Da 2
Analista1 Analista2
22.44
23.56
22.89
23.45
Da 2
Analista1 Analista2
250.46
255.50
251.56
255.04
Da 2
Analista1 Analista2
2506.5
2461.8
2483.3
2494.1
Da 2
Analista1 Analista2
12463
12469
12320
12487
Da 2
Analista1 Analista2
4.993
4.779
4.962
4.753
Da 2
Analista1 Analista2
27.58
25.46
27.65
27.59
Da 2
Analista1 Analista2
246.49
245.43
249.71
244.44
Da 2
Analista1 Analista2
2513.5
2472.4
2491.6
2399.5
Da 2
Analista1 Analista2
12726
12450
12809
12549
Da 2
Analista1 Analista2
4.455
4.376
5.212
4.531
Da 2
Analista1 Analista2
27.26
26.80
27.75
21.00
Da 2
Analista1 Analista2
3.101
3.069
2.939
2.643
Da 2
Analista1 Analista2
21.41
20.78
21.41
21.07
Da 3
Analista1 Analista2
3.952
3.853
3.990
3.610
Da 3
Analista1 Analista2
24.14
23.39
24.04
23.34
Da 3
Analista1 Analista2
255.05
251.15
252.67
247.62
Da 3
Analista1 Analista2
2577.7
2480.7
2530.5
2453.2
Da 3
Analista1 Analista2
12878
12580
13334
12305
Da 3
Analista1 Analista2
5.153
4.947
4.938
4.756
Da 3
Analista1 Analista2
27.67
26.98
27.71
27.24
Da 3
Analista1 Analista2
251.38
246.90
251.43
249.18
Da 3
Analista1 Analista2
2516.2
2356.7
2528.2
2442.0
Da 3
Analista1 Analista2
12758
12419
12869
12026
Da 3
Analista1 Analista2
4.748
5.028
5.107
4.969
Da 3
Analista1 Analista2
27.86
27.46
28.09
27.19
Da 3
Analista1 Analista2
3.192
3.460
2.910
3.339
Da 3
Analista1 Analista2
24.25
23.65
24.34
23.35
Da 4
Analista1 Analista2
4.001
3.294
3.761
2.775
Da 4
Analista1 Analista2
22.89
22.23
23.47
22.31
Da 4
Analista1 Analista2
258.38
253.90
263.00
243.30
Da 4
Analista1 Analista2
2599.5
2372.5
2709.3
2512.8
Da 4
Analista1 Analista2
12787
12684
12591
12736
Da 4
Analista1 Analista2
4.840
4.938
4.953
5.057
Da 4
Analista1 Analista2
27.58
27.97
27.77
27.17
Da 4
Analista1 Analista2
250.45
256.45
250.08
250.60
Da 4
Analista1 Analista2
2453.8
2553.5
2374.8
2521.3
Da 4
Analista1 Analista2
12147
12618
12210
12698
Da 4
Analista1 Analista2
4.248
4.930
4.919
4.941
Da 4
Analista1 Analista2
27.54
28.53
27.35
28.72
Da 4
Analista1 Analista2
3.457
3.233
3.396
2.863
Da 4
Analista1 Analista2
20.88
20.66
20.76
20.23
321
322
Da 1
Analista1 Analista2
5.444
5.511
5.500
5.486
Da 1
Analista1 Analista2
25.87
25.40
26.00
25.39
Da 1
Analista1 Analista2
255.8
251.4
257.1
253.3
Da 1
Analista1 Analista2
2573.1
2492.3
2542.4
2460.8
Da 1
Analista1 Analista2
12845
12307
12850
12634
Da 1
Analista1 Analista2
5.588
5.474
5.583
5.516
Da 1
Analista1 Analista2
26.33
24.76
26.43
24.76
Da 1
Analista1 Analista2
254.05
246.61
255.26
248.62
Da 1
Analista1 Analista2
2560.5
2431.8
2507.0
2426.2
Da 1
Analista1 Analista2
12657
12343
12716
12016
Da 1
Analista1 Analista2
5.680
5.609
5.646
5.526
Da 1
Analista1 Analista2
26.19
24.82
26.33
24.76
Da 1
Analista1 Analista2
5.596
5.452
5.598
5.542
Da 1
Analista1 Analista2
26.55
25.60
26.52
25.40
Da 2
Analista1 Analista2
5.803
5.495
5.705
5.471
Da 2
Analista1 Analista2
25.71
25.30
25.78
25.48
Da 2
Analista1 Analista2
251.6
247.8
253.6
247.6
Da 2
Analista1 Analista2
2491.8
2471.9
2484.4
2487.5
Da 2
Analista1 Analista2
12602
12243
12478
12326
Da 2
Analista1 Analista2
5.562
5.537
5.552
5.261
Da 2
Analista1 Analista2
25.01
24.81
24.91
24.81
Da 2
Analista1 Analista2
246.64
244.21
247.10
245.20
Da 2
Analista1 Analista2
2455.1
2459.3
2439.5
2401.3
Da 2
Analista1 Analista2
12367
12221
12335
12317
Da 2
Analista1 Analista2
5.595
5.567
5.588
5.536
Da 2
Analista1 Analista2
24.96
25.17
25.05
24.65
Da 2
Analista1 Analista2
5.729
5.596
5.592
5.497
Da 2
Analista1 Analista2
25.06
24.84
25.24
24.87
Da 3
Analista1 Analista2
5.721
5.385
5.681
5.412
Da 3
Analista1 Analista2
26.14
24.90
26.14
24.96
Da 3
Analista1 Analista2
252.7
245.5
248.2
241.1
Da 3
Analista1 Analista2
2516.5
2400.0
2511.7
2417.5
Da 3
Analista1 Analista2
12652
12068
12741
11857
Da 3
Analista1 Analista2
5.489
5.403
5.472
5.426
Da 3
Analista1 Analista2
25.77
24.83
25.82
24.85
Da 3
Analista1 Analista2
245.12
242.15
244.53
242.02
Da 3
Analista1 Analista2
2455.5
2350.7
2470.3
2404.8
Da 3
Analista1 Analista2
12350
11775
12514
11966
Da 3
Analista1 Analista2
5.561
5.481
5.538
5.474
Da 3
Analista1 Analista2
25.80
24.85
26.05
24.93
Da 3
Analista1 Analista2
5.630
5.482
5.593
5.487
Da 3
Analista1 Analista2
25.98
25.28
26.14
25.17
Da 4
Analista1 Analista2
5.459
5.431
5.484
5.472
Da 4
Analista1 Analista2
25.79
24.80
25.71
24.77
Da 4
Analista1 Analista2
246.8
245.9
242.8
244.9
Da 4
Analista1 Analista2
2457.3
2382.8
2530.3
2398.3
Da 4
Analista1 Analista2
12610
12666
12681
12514
Da 4
Analista1 Analista2
5.531
5.497
5.542
5.502
Da 4
Analista1 Analista2
25.27
25.08
25.35
25.08
Da 4
Analista1 Analista2
244.90
247.68
246.75
247.68
Da 4
Analista1 Analista2
2403.5
2449.3
2390.0
2455.8
Da 4
Analista1 Analista2
12336
12552
12380
12619
Da 4
Analista1 Analista2
5.537
5.512
5.528
5.526
Da 4
Analista1 Analista2
25.05
25.09
25.09
25.14
Da 4
Analista1 Analista2
5.649
5.556
5.550
5.545
Da 4
Analista1 Analista2
25.08
25.58
25.06
25.24
Anexos
Precisin
Tabla A.II.8: Clculo de la precisin para el fluoruro
Matriz
ftalato
glucosa
compuesta
agua
Ni
2
Da
- -1 2
2
Analista
- -1 2
2
Replicas
- -1 2
2
precisn
- -1 2
%DER
(mg F L )
(mg F L )
(mg F L )
(mg F L )
(mg F L )
N1
-0.001738
0.006588
0.001113
0.007701
0.08775
3.2
N2
-0.03188
0.07148
0.01243
0.08391
0.2897
2.2
N3
2.622
2.324
0.8598
5.806
2.410
1.9
N4
-63.77
604.4
113.2
717.6
26.79
2.2
N5
477
15045
3004
18526
136.1
2.2
N1
-0.001188
0.001804
0.001179
0.002983
0.05461
2.2
N2
-0.01874
0.06499
0.02254
0.0875
0.2958
2.2
N3
0.6362
1.095
0.8883
2.619
1.618
1.3
N4
186.4
321.1
91.62
599.1
24.48
2.0
N5
8287
-5837
22892
31179
176.6
2.8
N1
-0.0003434
0.0008184
0.0002146
0.001033
0.03214
1.3
N2
0.01554
0.04810
0.001644
0.06529
0.2555
1.9
N1
0.0006746
0.0002437
0.0002862
0.001204
0.03471
1.4
N2
0.004258
0.05573
0.008584
0.06857
0.2619
1.9
-1
ftalato
glucosa
compuesta
agua
Ni
2
Da
- -1 2
2
Analista
- -1 2
2
Replicas
- -1 2
2
precisn
- -1 2
%DER
(mg Cl L )
(mg Cl L )
(mg Cl L )
(mg Cl L )
(mg Cl L )
N1
0.0007587
0.002831
0.0001166
0.003707
0.06088
2.3
N2
0.0002741
0.1242
0.003270
0.1278
0.3574
2.7
N3
8.445
3.593
0.9898
13.03
3.609
3.0
N4
93.04
752.7
109.5
955.3
30.91
2.5
N5
5192
22449
2104
29745
172.5
2.8
N1
0.0004407
0.0004034
0.001485
0.002329
0.04826
1.8
N2
0.02405
0.07361
0.003770
0.1014
0.3185
2.4
N3
2.207
1.582
6.915
10.70
3.272
2.6
N4
316.9
366.8
105.3
788.9
28.09
2.3
N5
2871
11678
2801
17350
131.7
2.1
N1
-0.0007
0.0019
0.008
0.0099
0.09935
3.5
N2
0.2072
0.0615
0.0123
0.281
0.5301
3.8
N1
-0.0002172
0.001366
0.0004884
0.001855
0.04307
1.6
N2
0.01161
0.09237
0.01556
0.1195
0.3457
2.5
-1
323
ftalato
glucosa
compuesta
agua
Ni
2
Da
- -1 2
NO2 L )
(mg
2
Analista
- -1 2
(mg NO2 L )
2
Replicas
- -1 2
(mg NO2 L )
2
precisn
- -1 2
(mg NO2 L )
(mg NO2 L )
s
-1
%DER
N1
0.002725
0.008599
0.0002009
0.01153
0.1074
2.1
N2
0.5997
0.2566
0.004489
0.8608
0.9278
3.9
N3
105.7
16.86
3.676
126.3
11.24
4.7
N4
4943
2870
221.6
8035
89.64
3.5
N5
15061
91176
9968
116205
340.9
2.8
N1
-0.001500
0.002532
0.006007
0.008539
0.09241
1.7
N2
0.08540
0.1307
0.006597
0.2227
0.4719
1.9
N3
12.70
6.005
0.8060
19.51
4.417
1.8
N4
2167
874
577.7
3619
60.16
2.5
N5
30943
16817
13867
61627
248.2
2.0
N1
-0.0008248
0.003469
0.0009313
0.004400
0.06633
1.2
N2
0.1143
0.2014
0.004455
0.3201
0.5658
2.2
N1
-0.001115
0.006579
0.00004731
0.006626
0.08140
2.7
N2
0.05200
0.1181
0.01530
0.1854
0.4306
1.7
ftalato
glucosa
compuesta
agua
324
Ni
2
Da
- -1 2
2
Analista
- -1 2
2
Replicas
- -1 2
2
precisn
- -1 2
%DER
(mg Br L )
(mg Br L )
(mg Br L )
(mg Br L )
(mg Br L )
N1
-0.001816
0.005530
0.00009344
0.005623
0.07499
2.9
N2
-0.03701
0.08658
0.0006097
0.08719
0.2953
2.3
N3
2.417
3.002
1.160
6.579
2.565
2.0
N4
-357.8
791.2
98.74
890
29.83
2.4
N5
-6757
23498
2652
26150
161.7
2.4
N1
-0.0000616
0.002031
0.001344
0.003376
0.05810
2.1
N2
-0.02267
0.08753
0.0006876
0.08822
0.2970
2.2
N3
1.370
1.107
0.1835
2.661
1.631
1.3
N4
14.04
362.1
1059
1435
37.89
3.1
N5
-4021
14938
3832
18770
137.0
2.0
N1
-0.0006659
0.003191
0.0001147
0.003306
0.05750
2.1
N2
-0.01875
0.09361
0.001595
0.09521
0.3086
2.3
N1
-0.0009397
0.002320
0.00008219
0.002402
0.04901
1.8
N2
-0.03202
0.09104
0.003101
0.09414
0.3068
2.3
-1
Anexos
ftalato
glucosa
compuesta
agua
Ni
2
Da
- -1 2
NO3 L )
(mg
2
Analista
- -1 2
(mg NO3 L )
2
Replicas
- -1 2
(mg NO3 L )
2
precisn
- -1 2
(mg NO3 L )
(mg NO3 L )
s
-1
%DER
N1
0.01225
0.009858
0.0004080
0.02252
0.1501
2.8
N2
-0.01091
0.4127
0.005286
0.4179
0.6465
2.5
N3
-9.824
19.21
4.086
23.29
4.826
1.9
N4
-1531
3973
534.5
4507
67.14
2.7
N5
21743
62652
9559
93954
306.5
2.4
N1
-0.001156
0.001518
0.005125
0.006643
0.0815
1.5
N2
-0.08652
0.5675
0.005670
0.5731
0.7571
2.7
N3
12.03
3.477
0.9003
16.40
4.050
1.7
N4
-822.4
3248
3110
6358
79.74
3.2
N5
-18511
66191
10706
76897
277.3
2.2
N1
-0.001416
0.002651
0.0008873
0.003538
0.05948
1.1
N2
0.2052
0.3302
0.1747
0.7101
0.8427
3.0
N1
-0.002750
0.007652
0.0001677
0.007820
0.08843
1.6
N2
-0.04952
0.4090
0.05186
0.4609
0.6789
2.4
ftalato
glucosa
compuesta
agua
Ni
2
Da
3- -1 2
PO4 L )
(mg
2
Analista
3- -1 2
PO4 L )
2
Replicas
3- -1 2
PO4 L )
2
precisn
3- -1 2
PO4 L )
(mg
(mg
(mg
s
(mg PO4 L )
3-
-1
%DER
N1
-0.01182
0.07905
0.04717
0.1262
0.3553
9.5
N2
0.09939
0.2323
0.05151
0.3832
0.619
2.7
N3
-10.51
19.37
10.52
29.89
5.467
2.2
N4
-2379
6653
3798
10451
102.2
4.1
N5
-2080
44471
26164
70634
265.8
2.1
N1
0.003886
0.003220
0.01750
0.02461
0.1569
3.2
N2
-0.1678
0.2673
0.3775
0.6448
0.803
2.9
N3
3.033
2.109
5.035
10.18
3.190
1.3
N4
-2048
3767
1774
5540
74.43
3.0
N5
-31734
82308
19749
102057
319.5
2.5
N1
-0.003323
0.02521
0.04315
0.06835
0.2614
8.3
N2
4.122
0.2825
0.0443
4.449
2.109
9.3
N1
0.05547
0.004233
0.07619
0.1359
0.3686
7.5
N2
0.1965
0.7983
2.161
3.156
1.777
6.5
325
ftalato
glucosa
compuesta
agua
2
Da
2- -1 2
SO4 L )
Ni
(mg
2
Analista
2- -1 2
SO4 L )
s
(mg
2
Replicas
2- -1 2
(mg SO4 L )
u
(mg
2
precisn
2- -1 2
SO4 L )
s
(mg SO4 L )
2-
-1
%DER
N1
-0.005408
0.02018
0.001161
0.02134
0.1461
2.6
N2
-0.1477
0.3509
0.003994
0.3549
0.5958
2.3
N3
10.92
9.455
4.179
24.55
4.955
2.0
N4
-737.9
3298
508.2
3806
61.69
2.5
N5
-21625
87106
13113
100219
316.6
2.5
N1
-0.0007239
0.002390
0.004939
0.007330
0.0856
1.6
N2
-0.1452
0.4505
0.001819
0.4523
0.6725
2.7
N3
6.258
7.823
0.6554
14.74
3.839
1.6
N4
-574.9
2394
617.2
3011
54.87
2.3
N5
-18630
72905
11900
84805
291.2
2.4
N1
-0.001877
0.003688
0.003001
0.006689
0.08178
1.5
N2
0.07828
0.2384
0.01399
0.3306
0.5750
2.3
N1
0.001152
0.001701
0.0006194
0.003472
0.0589
1.1
N2
-0.1332
0.3946
0.02304
0.4176
0.6462
2.6
Incertidumbre
Tabla A.II.15: Estimacin de la incertidumbre en la determinacin de fluoruro
Matriz
ftalato
glucosa
agua
compuesta
326
Nivel
uexa
uprecision
utraz
uc
IF
%IF
(mg F L )
(mg F L )
(mg F L )
(mg F L )
(mg F L )
0.04349
0.007701
0.0002464
0.2268
0.45
18
0.1897
0.08391
0.001510
0.5245
1.0
8.3
8.898
5.806
0.01791
3.837
7.7
6.1
765.0
717.6
1.671
38.53
77.
6.2
23782
18526
39.60
205.8
410
6.6
0.003329
0.002983
0.0002186
0.08081
0.16
6.3
0.05674
0.08753
0.001752
0.3821
0.76
5.6
4.761
2.619
0.01762
2.720
5.4
4.3
1341
599.1
1.686
44.07
88.
7.0
17600
31179
41.07
221.0
440
6.9
0.0009034
0.001204
0.0002186
0.04823
0.096
3.8
0.05415
0.06857
0.001752
0.3528
0.71
5.2
0.005723
0.001033
0.0002186
0.08351
0.17
6.5
0.1561
0.06529
0.001752
0.4724
0.94
7.0
-1 2
-1 2
-1 2
-1 2
-1 2
Anexos
Tabla A.II.16: Estimacin de la incertidumbre en la determinacin de cloruro
Matriz
uexa
Nivel
ftalato
glucosa
agua
compuesta
uprecision
utraz
uc
ICl
%ICl
(mg Cl L )
(mg Cl L )
(mg Cl L )
(mg Cl L )
(mg Cl L )
0.01512
0.003707
0.0002766
0.1382
0.28
11
0.2437
0.1278
0.002657
0.6117
1.2
9.2
13.68
13.03
0.02400
5.170
10
8.4
1805
955.3
1.973
52.55
110
8.4
60520
29745
45.27
300.5
600
9.6
0.007937
0.002329
0.0002697
0.1026
0.21
7.9
0.07294
0.1014
0.002087
0.4201
0.84
6.1
9.337
10.70
0.02511
4.479
9.0
7.0
1530
788.9
2.065
48.18
96
7.5
41233
17350
46.61
242.1
480
7.7
0.006990
0.001855
0.0002697
0.09547
0.19
7.4
0.09213
0.1195
0.002087
0.4623
0.92
6.7
0.03547
0.009870
0.0002697
0.2136
0.43
17
0.4240
0.2810
0.002087
0.8409
1.7
12
-1 2
-1 2
-1 2
-1
-1
ftalato
glucosa
agua
compuesta
Nivel
uexa
(mg
- -1 2
NO2 L )
uprecision
(mg
- -1 2
NO2 L )
utraz
(mg
- -1 2
NO2 L )
uc
(mg
- -1
NO2 L )
INO2
(mg NO2 L )
-
-1
%INO2
0.02136
0.01153
0.001013
0.1841
0.37
7.2
2.373
0.8608
0.004323
1.800
3.6
14
230.3
126.3
0.1417
18.89
38
15
14187
8035
15.80
149.1
300
11
204131
116205
360.5
566.3
1100
9.0
0.01233
0.008539
0.001082
0.1482
0.30
5.6
0.2203
0.2227
0.006449
0.6704
1.3
5.3
23.76
19.51
0.1422
6.588
13
5.2
7309
3618
14.33
104.6
210
8.4
129761
61626.
357.5
437.9
880
7.0
0.01252
0.006626
0.001082
0.1422
0.28
5.4
0.2061
0.1854
0.006449
0.6309
1.3
5.0
0.02384
0.004400
0.001082
0.1712
0.34
6.5
0.4536
0.3201
0.006449
0.8833
1.8
7.0
327
uexa
Nivel
ftalato
glucosa
agua
compuesta
uprecision
utraz
uc
IBr
%IBr
(mg Br L )
(mg Br L )
(mg Br L )
(mg Br L )
(mg Br L )
0.01432
0.005623
0.0002744
0.1422
0.28
11
0.05967
0.08719
0.004174
0.3886
0.78
6.0
4.707
6.579
0.02379
3.363
6.7
5.2
624.0
890.0
1.363
38.93
78
6.2
29993
26150
31.92
237.0
470
7.0
0.01273
0.003376
0.0002940
0.1281
0.26
9.7
0.06093
0.08822
0.002381
0.3893
0.78
5.7
3.532
2.661
0.02342
2.493
5.0
4.0
862.3
1435
1.346
47.95
100
7.7
21937
18769
33.33
201.8
400
5.8
0.009457
0.002402
0.0002940
0.1102
0.22
8.3
0.05742
0.09414
0.002381
0.3924
0.78
5.8
0.01373
0.003306
0.0002940
0.1316
0.26
9.9
0.09224
0.09521
0.002381
0.4357
0.87
6.4
-1 2
-1 2
-1 2
-1
-1
ftalato
glucosa
agua
compuesta
328
Nivel
uexa
(mg
- -1 2
NO3 L )
uprecision
(mg
- -1 2
NO3 L )
utraz
(mg
- -1 2
NO3 L )
uc
(mg
- -1
NO3 L )
INO3
(mg NO3 L )
-
-1
%INO3
0.07266
0.02252
0.001505
0.3109
0.62
12
1.254
0.4179
0.01682
1.300
2.6
10
57.66
23.29
1.331
9.071
18
7.3
5200
4507
132.6
99.20
200
8.0
91851
93954
3329
434.9
870
7.0
0.01116
0.006643
0.001611
0.1393
0.28
5.3
0.3997
0.5731
0.02276
0.9978
2.0
7.1
20.97
16.40
1.308
6.220
12
5.0
6048
6358
134.9
112.0
220
8.9
51422
76897
3320
362.8
730
5.8
0.01203
0.007820
0.001611
0.1465
0.29
5.6
0.3949
0.4609
0.02276
0.9373
1.9
6.7
0.01750
0.003538
0.001611
0.1505
0.30
5.7
0.8485
0.7101
0.02276
1.258
2.5
9.0
Anexos
Tabla A.II.20: Estimacin de la incertidumbre en la determinacin de fosfato
Matriz
ftalato
glucosa
agua
compuesta
Nivel
uexa
uprecision
utraz
-3
uc
IPO4
-3
(mg PO4 L )
(mg PO4 L )
1.368
0.1144
0.0009692
1.223
2.4
48
3.272
0.3832
0.003880
1.913
3.8
15
20.65
29.89
0.07179
7.114
14
5.6
8101
10451
7.448
136.2
270
11
115024
70634
195.5
431.1
860
6.6
0.04338
0.02461
0.0009939
0.2626
0.53
10
0.3171
0.6448
0.006685
0.9842
2.0
7.2
7.084
10.18
0.07026
4.163
8.3
3.3
2747
5540
7.400
91.08
180
7.3
74959
102057
185.8
421.0
840
6.7
0.1511
0.1359
0.0009939
0.5366
1.1
21
4.318
3.156
0.006685
2.735
5.5
20
1.719
0.06835
0.00009939
1.337
2.7
52
16.59
4.449
0.006685
4.587
9.2
33
3-
-1 2
-1 2
3-
3-
-1 2
%IPO4
(mg PO4 L )
3-
-1
3-
-1
ftalato
glucosa
agua
compuesta
Nivel
uexa
uprecision
utraz
-2
uc
ISO4
-2
(mg SO4 L )
(mg SO4 L )
0.1744
0.02134
0.0009444
0.4435
0.89
18
0.3239
0.3549
0.003378
0.8260
1.7
6.6
19.41
24.55
0.04019
6.634
13
5.3
4311
3806
4.536
90.12
180
7.2
176805
100219
101.8
526.4
1100
8.7
0.009193
0.007330
0.001091
0.1327
0.26
4.9
0.2218
0.4523
0.005540
0.8244
1.6
6.4
27.67
14.74
0.04072
6.515
13
5.2
4376
3011
4.494
85.98
170
6.9
145729
84804
108.8
480.3
960
7.7
0.01978
0.003472
0.001091
0.1560
0.31
5.8
0.2056
0.4176
0.005540
0.7929
1.6
6.2
0.01937
0.006689
0.001091
0.1648
0.33
6.1
0.3061
0.3306
0.005540
0.8014
1.6
6.3
2-
-1 2
2-
-1 2
2-
-1 2
%ISO4
(mg SO4 L )
2-
-1
2-
-1
A.II.3. FENOLES
Resultados analticos
329
330
50.20
51.37
50.31
50.25
51.65
50.32
Da 1
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
257.0
258.7
264.4
246.6
250.7
263.3
247.8
249.9
Dia 1
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
485.0
485.8
Replica 1
Replica 2
Replica 1
Replica 2
N5 = LS
N4
518.2
518.2
52.31
52.13
Replica 1
Replica 2
N3
520.3
504.8
5.142
5.041
5.092
5.204
5.016
4.961
Da 1
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
Replica 1
Replica 2
486.1
485.5
5.137
5.145
Replica 1
Replica 2
N2
Da 1
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
0.5090 0.5300 0.5155 0.5543
0.5108 0.4794 0.5318 0.5519
Da 1
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
N1 =LC
494.1
495.0
498.5
498.2
501.5
501.5
492.9
505.6
241.9
251.4
242.0
241.6
252.7
240.0
Dia 2
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
248.3
247.7
48.87
49.97
51.27
48.81
50.11
51.31
Da 2
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
49.15
48.77
5.132
4.851
4.780
5.122
4.838
4.800
Da 2
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
5.120
5.081
Da 2
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
0.5163 0.4896 0.4818 0.4600
0.5368 0.4797 0.4106 0.4508
Da 2
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
485.1
484.8
494.0
499.4
504.7
501.7
505.0
503.4
241.0
248.6
250.5
241.5
253.2
248.2
Dia 3
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
245.4
247.8
48.02
50.65
50.27
48.13
50.54
50.95
Da 3
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
50.59
50.50
4.949
4.994
5.032
4.926
5.002
5.035
Da 3
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
4.897
4.874
Da 3
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
0.4705 0.5565 0.4796 0.4795
0.4543 0.5322 0.4855 0.4736
Da 3
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
483.7
477.7
479.3
478.9
496.5
498.5
502.1
502.7
249.8
246.6
247.5
249.6
246.5
246.4
Dia 4
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
250.4
250.9
46.33
49.23
48.76
45.82
49.69
51.06
Da 4
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
50.98
51.27
4.543
5.411
5.273
4.549
5.456
5.498
Da 4
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
4.876
4.772
Da 4
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
0.5200 0.4862 0.5201 0.5388
0.5164 0.4847 0.5209 0.5388
Da 4
Analista 1
Analista 2
Desti 1 Desti 2 Desti 1 Desti 2
Tabla A.II.22: Resultados analticos del diseo de experimentos para la determinacin de fenoles
Anexos
Precisin
Tabla A.II.23: Clculo de la precisin para la determinacin de fenoles
2
Da
2
Analista
Nivel
2
Replicas
s
-1 2
s
-1 2
u
-1 2
2
precisn
s
-1 2
-1
%DER
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
N1
0.0001015
0.0003229
0.0005343
0.0002949
0.001254
7.1
N2
0.0000
0.07729
0.004150
0.002754
0.08419
5.8
N3
0.2628
0.0000
2.321
0.2075
2.792
3.3
N4
3.804
17.41
14.18
1.426
36.83
2.4
N5
0.0000
177.3
5.972
15.21
198.5
2.8
Incertidumbre
Tabla A.II.24: Estimacin de la incertidumbre en la determinacin de fenoles
Nivel
uexa
urep
-1 2
utraz
-1 2
uc
-1 2
Ifenol
-1 2
-1
%I rel
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
(mg fenolL )
N1
0.009551
0.001254
1,29E-03
0.04701
0.094
19
N2
0.06802
0.08419
0.001295
0.3918
0.78
16
N3
5.808
2.792
0.03639
2.939
5.9
12
N4
72.96
36.83
0.4846
10.50
21
8.4
N5
166.0
198.5
1.891
19.14
38
7.7
Da 1
Analista 1 Analista 2
12.5
11.4
12.3
12.6
Da 1
Analista 1 Analista 2
53.1
52.6
50.7
49.7
Da 1
Analista 1 Analista 2
241.5
268.0
252.4
276.2
Da 1
Analista 1 Analista 2
891.9
964.5
936.0
1027.9
Da 1
Analista 1 Analista 2
4677.5
4779.1
4678.2
4896.4
Da 2
Analista 1 Analista 2
11.0
10.1
11.2
13.3
Da 2
Analista 1 Analista 2
47.8
51.1
51.3
55.4
Da 2
Analista 1 Analista 2
255.4
228.9
252.7
237.2
Da 2
Analista 1 Analista 2
965.3
968.1
1038.7
1021.4
Da 2
Analista 1 Analista 2
4748.6
4914.4
4917.7
4660.0
Da 3
Analista 1 Analista 2
12.5
10.7
12.1
10.3
Da 3
Analista 1 Analista 2
53.2
52.1
48.0
50.8
Da 3
Analista 1 Analista 2
232.6
241.5
231.8
216.9
Da 3
Analista 1 Analista 2
1042.0
981.0
987.0
1054.5
Da 3
Analista 1 Analista 2
4760.7
4738.4
4791.4
4961.5
Da 4
Analista 1 Analista 2
10.0
12.6
13.9
11.8
Da 4
Analista 1 Analista 2
47.1
51.3
49.1
45.5
Da 4
Analista 1 Analista 2
218.4
247.8
225.9
267.1
Da 4
Analista 1 Analista 2
1019.7
965.4
1018.0
969.2
Da 4
Analista 1 Analista 2
4954.7
4946.5
4993.6
5250.5
331
Precisin
Tabla A.II.26: Calculo de la precisin para la determinacin de A&G
2
Da
2
Analista
Nivel
2
Replicas
s
-1 2
s
-1 2
u
-1 2
2
precisn
s
-1 2
%DER
-1
(mg A&GL )
(mg A&GL )
(mg A&GL )
(mg A&GL )
(mg A&GL )
N1
0.2424
1.046
10159
2.447
1.564
13
N2
0.000
0.000
7.018
7.018
2.649
5.2
N3
0.000
189.6
106.8
296.4
17.22
7.1
N4
120.6
518.7
1141
1781
42.20
4.3
N5
18982
0.00
15723
34705
186.3
3.8
Incertidumbre
Tabla A.II.27: Estimacin de la incertidumbre en la determinacin de A&G
uexa
Nivel
urep
-1 2
utraz
-1 2
uc
-1 2
IA&G
-1
%I rel
-1
(mg A&GL )
(mg A&GL )
(mg A&GL )
(mg A&GL )
(mg A&GL )
N1
2.597
2.447
0.08340
2.264
4.5
39
N2
5.466
7.018
0.7962
3.644
7.3
14
N3
333.7
296.4
5.279
25.21
50
20
N4
3105
1781
73.82
70.42
140
14
N5
29074
34705
1845
256.2
510
10
F
Ni
N2
Dia 1
Ftalato
N1
N3
N4
332
Cl
I
NO2
I
Br
5.2
1.3
5.2
1.3
3-
NO3
I
2-
PO4
2.61 0.40
5.2
1.1
2.62 0.40
5.2
1.1
-1
SO4
I
3.91 0.37
5.5
1.2
3.83 0.38
5.5
1.2
1.1
1.1
249
14 128.9 4.7
260
14
252.0 6.2
253
13
250
14 129.4 4.7
261
14
255.6 6.3
255
13
1249
51
1251
90
41
44
2503 120
1250
51
1230
88
40
48
2472 120
Anexos
Tabla A.II.28 (cont.): Incertidumbre de las muestras de aplicando el modelo bottom-up, en mgL
-
F
Ni
N5
N1
Dia 2
N2
N3
N4
N5
N1
Dia 3
N2
N3
N4
N5
N1
Dia 4
N2
N3
N4
N5
Cl
I
NO2
I
Br
I
3-
NO3
I
2-
PO4
I
-1
SO4
I
6190 300 6434 460 12420 730 6710 290 12350 680 12300 420 12630 670
6330 310 6260 470 12640 750 6840 290 12580 690 12560 430 12690 690
2.74 0.52 2.66 0.88
5.1
1.4
2.67 0.66
5.5
1.9
3.95 0.78
5.5
1.3
5.1
1.4
2.67 0.66
5.5
1.9
3.81 0.79
5.5
1.3
1.3
23.8
2.1
12.8
1.0
25.6
3.0
23.6
1.1
25.3
1.9
1.3
23.8
2.1
12.8
1.0
25.7
3.0
23.4
1.1
25.5
1.9
238
13 126.3 6.0
255
17
255.5 8.2
248
13
239
13 126.2 6.0
254
17
255.0 8.2
248
13
1248
55
1230
88
61
84
2490 130
1243
55
1222
88
61
83
2480 130
6130 410 6010 680 12100 1100 6700 510 12400 1500 12480 580 12320 970
6100 410 5970 680 12100 1100 6660 510 12300 1500 12460 580 12240 970
2.75 0.49 2.70 0.96
5.1
1.3
2.59 0.41
5.3
1.3
3.85 0.67
5.4
1.2
5.1
1.3
2.59 0.41
5.3
1.3
3.60 0.68
5.4
1.2
1.1
1.1
127.9 6.5
118
12
236
16 125.9 5.5
257
16
251.1 9.2
245
16
125.7 6.5
116
12
231
16 123.3 5.5
251
16
247.5 9.2
241
16
1207
62
51
81
2400 150
1225
62
51
82
2420 150
6030 390 5860 750 11860 970 6530 310 12100 990 12580 510 12060 950
5920 390 5750 760 16010 980 6400 310 11850 990 12300 510 11850 960
2.70 0.55
2.8
1.1
5.0
1.4
2.57 0.52
5.1
1.5
3.0
1.3
5.4
1.5
2.74 0.55
2.8
1.1
5.0
1.4
2.59 0.51
5.2
1.5
3.5
1.3
5.5
1.5
1.7
22.8
2.2
22.4
1.8
24.8
2.3
1.7
22.7
2.2
22.5
1.8
24.8
2.3
127
11
123
24
231
29
125
11
254
31
257
24
246
32
126
11
122
24
229
29
125
11
252
31
246
24
245
32
1200 120 1230 240 2390 290 1220 110 2450 320 2400 250 2380 330
1210 120 1230 240 2410 290 1220 110 2490 320 2540 250 2400 320
6320 340 6460 540 12540 800 6800 340 12820 800 12670 700 12670 820
6350 340 6450 540 12400 790 3830 340 12890 800 12720 710 12520 800
333
F
Ni
N1
Dia1
N2
N3
N4
N5
N1
Dia2
glucosa
N2
N3
N4
N5
N1
Dia3
N2
N3
N4
N5
334
Cl
I
NO2
I
Br
5.4
1.5
5.1
1.5
1.4
24.7
1.4
3-
NO3
I
2-
PO4
2.73 0.54
5.5
1.5
2.58 0.55
5.2
1.5
-1
SO4
I
4.78 0.45
5.5
1.4
4.75 0.45
5.2
1.4
2.2
24.7
2.2
247
16 121.9 5.7
242
15
245.4 5.7
244
15
248
16 121.8 5.7
243
15
244.4 5.7
245
15
1247
63
1255
99
59
62
2460 150
1223
63
1228
98
58
60
2400 150
6290 460 6070 730 12020 1100 6770 410 12200 1200 12450 380 12200 1100
6320 460 6110 730 12050 1100 6810 410 12300 1200 12550 380 12300 1100
2.51 0.51 2.64 0.84
5.4
1.3
2.72 0.44
5.4
1.3
4.94 0.81
5.4
1.1
5.4
1.3
2.71 0.44
5.4
1.3
4.75 0.82
5.4
1.1
1.0
1.0
122.6 6.5
124
10
248
17 122.4 5.9
240
17
247
11
242
14
122.1 6.5
123
10
247
17 121.8 5.9
240
17
249
11
242
14
1205
65
59
1218
65
59
6090 390 5940 650 11700 1000 6610 340 12000 1000 12410 630 11770 840
6180 390 6010 640 11900 1000 6710 340 12200 1000 12020 630 11960 840
2.53 0.47 2.65 0.74
5.5
1.3
5.4
1.3
1.1
25.0
1.4
1.1
25.2
1.4
123
10
124
16
249
27 124.3 6.6
240
20
256
14
248
20
126
10
135
15
249
27 124.3 6.6
242
20
250
14
248
20
66
66
6410 260 6320 390 12260 580 6960 190 12600 510 12620 320 12560 490
6460 260 6360 390 12400 580 7000 190 12700 520 12700 330 12620 490
Anexos
Tabla A.II.28 (cont.): Incertidumbre de las muestras de aplicando el modelo bottom-up, en mgL
-
F
Ni
Dia1
N1
N2
Dia2
agua
N1
N2
Dia3
N1
N2
Dia1
Dia2
N1
N2
N1
Dia3
compuesta
N2
N2
NO2
I
Br
5.4
1.5
5.4
1.5
1.4
24.7
1.1
3-
NO3
I
2-
PO4
2.70 0.55
5.4
1.5
2.72 0.54
5.4
1.5
SO4
C
4.37 0.46
5.6
1.4
4.53 0.46
5.5
1.4
2.2
25.2
1.5
5.4
1.3
2.71 0.44
5.4
1.3
4.96 0.81
5.5
1.1
5.4
1.3
2.70 0.44
5.4
1.3
5.02 0.81
5.5
1.1
1.0
1.0
5.5
1.3
5.5
1.3
1.1
25.0
1.4
1.1
25.1
1.4
5.4
1.5
2.70 0.55
5.5
1.5
3.07 0.49
5.6
1.4
5.4
1.5
2.68 0.55
5.5
1.5
2.64 0.50
5.5
1.4
1.4
25.0
2.2
1.4
24.8
2.2
5.5
1.3
2.71 0.44
5.5
1.3
3.46 0.87
5.5
1.1
5.5
1.3
2.68 0.44
5.4
1.3
3.34 0.88
5.5
1.1
N1
Cl
-1
1.0
1.0
5.6
1.3
5.5
1.3
1.1
25.4
1.4
1.1
25.4
1.4
335
ui ( y, x i )
Cloruro
ui ( y, x i )
Fluoruros
250
400
5
200
300
150
100
200
1
0
0
N1
50
N2
N3
N1
100
N2
N3
0
N1
N2
N3
N4
Bromuro
ui ( y, x i )
N1
N5
N2
N3
N5
N4
N5
N4
N5
Nitrato
ui ( y, x i )
300
N4
800
3
250
10
600
200
150
100
8
6
4
400
2
N1
N2
200
N3
N1
N2
N3
50
0
0
N1
N2
N3
N4
N5
Fosfato
ui ( y, x i )
200
100
N3
Sulfatos
500
4
400
8
6
300
150
N2
ui ( y, x i )
300
250
N1
200
4
2
0
0
N1
N2
N3
N1
100
50
N2
N3
0
N1
N2
N3
N4
N5
N1
N2
N3
336
Anexos
N2
N3
N4
-1
N5
Cfenol
Ifenol
Cfenol
Ifenol
Cfenol
Ifenol
Cfenol
Ifenol
Cfenol
Ifenol
0.509
0.093
5.14
0.21
52.3
1.9
264.4
9.9
485
21
0.511
0.093
5.20
0.21
52.1
1.9
263.3
9.9
486
21
0.53
0.10
5.14
0.20
50.2
1.3
257
13
486
20
0.48
0.10
5.15
0.20
50.3
1.3
258.7
13
486
20
0.516
0.092
5.12
0.27
49.2
2.4
248.3
14
499
18
0.537
0.092
5.08
0.26
48.8
2.4
247.7
14
498
18
0.49
0.10
5.13
0.22
48.9
2.2
241.9
9.9
494
29
0.48
0.10
5.12
0.22
48.8
2.2
241.6
9.9
495
29
0.47
0.11
4.95
0.18
50.6
1.8
245.4
8.9
485
20
0.45
0.11
4.93
0.18
50.5
1.8
247.8
9.0
485
20
0.557
0.096
4.90
0.17
48.0
1.7
241
16
494
17
0.532
0.095
4.87
0.17
48.1
1.7
241.5
16
499
17
0.52
0.12
4.54
0.19
46.3
4.8
249.8
6.8
479
20
0.52
0.12
4.55
0.19
45.8
4.8
249.6
6.8
479
20
0.49
0.11
4.88
0.11
51.0
7.1
250.4
12
484
21
0.48
0.11
4.77
0.11
51.3
7.1
250.9
12
478
21
337
N2
N3
N4
N5
CA&G
IA&G
CA&G
IA&G
CA&G
IA&G
CA&G
IA&G
CA&G
IA&G
12.48
0.55
53.1
1.9
241.5
2.8
892
13
4677
60
12.28
0.54
50.7
1.9
252.4
2.9
936
13
4678
60
11.44
0.54
52.6
1.9
268.0
3.0
965
14
4779
62
12.64
0.55
49.7
1.9
276.2
3.0
1028
15
4896
63
10.98
0.39
47.85
0.91
255.4
2.6
965
10
4749
39
11.17
0.38
51.27
0.92
252.7
2.6
1039
11
4918
41
10.07
0.45
51.12
0.91
228.9
2.3
968.1
9.8
4914
39
13.27
0.45
55.40
0.92
237.2
2.4
1021
11
4660
37
12.47
0.45
53.2
1.2
232.6
1.9
1042.1
7.0
4761
49
12.07
0.45
48.0
1.2
231.8
1.9
987.0
6.7
4791
49
10.74
0.38
52.1
1.2
241.5
2.0
981.0
6.3
4738
47
10.29
0.38
50.9
1.1
216.9
1.9
1054.6
7.1
4961
53
10.05
0.34
47.09
0.84
218.4
1.5
1019.8
7.9
4955
29
13.90
0.34
49.09
0.85
225.9
1.6
1018.0
7.8
4994
29
12.60
0.34
51.26
0.87
247.8
1.7
965.4
7.4
4947
29
11.77
0.34
45.55
0.82
267.1
1.8
969.2
7.5
5250
30
338
Anexos
Estadstico h de Mandel
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
-2.0
-2.5
agua
N1
N2
N3
N4
N5
Estadstico k de Mandel
Medidas
Test de consistencia intra-medidas fluoruro
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
agua
N3
N4
N5
Medidas
Test de consistencia entre-medidas Cloruro
Estadstico h de Mandel
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
-2.0
-2.5
agua
N3
N4
N5
Medida
Fig. A.II.4: Test de consistencia h y k de Mandel aplicados a las resultado de los aniones
339
Estadstico k de Mandel
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
agua
N3
N4
N5
Estadstico h de Mandel
Medidas
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
-2.0
-2.5
agua
Estadstico k de Mandel
N1
Medidas
N3
N4
N5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
agua
N3
N4
N5
Medidas
Fig. A.II.4 (cont.): Test de consistencia h y k de Mandel aplicados a las resultado de los aniones
340
Anexos
Estadstico h de Mandel
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
-2.0
-2.5
agua
Estadstico k de Mandel
N1
Medidas
N3
N4
N5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
agua
N3
N4
N5
Estadstico h de Mandel
Medidas
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
-2.0
-2.5
agua
N3
N4
N5
Medidas
Fig. A.II.4 (cont.): Test de consistencia h y k de Mandel aplicados a las resultado de los aniones
341
Estadistico k de Mandel
0.5
0.0
agua
N3
N4
N5
Medidas
Estadstico h Mandel
agua
N1
N2
Medidas
N3
N4
N5
Estadstico k de Mandel
agua
Medidas
N3
N4
N5
Fig. A.II.4 (cont.): Test de consistencia h y k de Mandel aplicados a las resultado de los aniones
342
Cl
2.106
1.500
N1glucosa
1.391
N1 ftalato
1.650
N1compuesta
2.002
N2agua
1.969
N2glucosa
2.015
N2compuesta
1.095
N2 ftalato
1.737
N3 glucosa
1.46
N3 ftalato
1.684
N4 glucosa
1.157
N4 ftalato
1.421
N5 glucosa
1.058
N5 ftalato
1.08
0.501
1.441
1.506
0.881
0.811
0.978
1.222
1.366
1.060
1.689
1.753
1.276
2.010
1.605
0.6423
0.5411
0.7318
0.4363
0.4011
0.5831
1.830
N1glucosa
2.122
N1 ftalato
1.404
N1compuesta
0.8901
0.4166
2.039
N2agua
1.950
N2glucosa
1.345
N2 ftalato
1.584
N2compuesta
1.403
N3 glucosa
1.465
N3 ftalato
2.047
N4 glucosa
1.478
N4 ftalato
1.190
N5 glucosa
1.168
N5 ftalato
1.628
1.475
1.004
1.518
0.7868
0.9574
1.605
1.245
1.044
1.328
1.167
1.646
1.762
2.002
0.4607
0.8368
0.4202
0.8870
0.9252
0.8023
0.5204
0.4352
0.9496
0.3197
0.4328
0.5395
0.4691
0.4754
Resultado Correcto Anmalo Correcto Anmalo Anmalo Anmalo Correcto Correcto Anmalo Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
Ccal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G 1 cal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G P cal
N1 agua
0.9589
Anmalo Anmalo Correcto Correcto Extrao Correcto Correcto Correcto Anmalo Correcto
0.8026
Tabla A.II.32: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a la determinacin de cloruro
Extrao
0.9985
0.6830
0.5905
0.8224
Ccal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G 1 cal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G P cal
N1 agua
Tabla A.II.31: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a la determinacin de fluoruro
Anexos
343
344
2.193
1.978
N1 ftalato
2.296
N1compuesta
1.839
N2agua
1.846
N2glucosa
1.061
N2 ftalato
1.786
N2compuesta
0.9221
1.501
1.149
Extrao
0.7353
0.3331
0.5833
0.3164
1.981
N4 glucosa
0.9312
N4 ftalato
0.7657
N1glucosa
1.478
N1 ftalato
1.382
N1compuesta
1.976
N2agua
1.792
N2glucosa
1.714
N2 ftalato
1.121
1.144
1.195
1.449
1.716
0.9224
N5 ftalato
0.3641
0.8427
0.5324
0.6012
0.4359
Extrao
2.195
1.982
N3 glucosa
1.555
N3 ftalato
2.294
N4 glucosa
1.995
N4 ftalato
1.054
N5 glucosa
1.245
N5 ftalato
0.3755
N2compuesta
1.599
1.349
N5 glucosa
1.839
2.113
1.210
2.060
0.7322
1.192
1.015
1.424
0.9803
1.071
0.9479
1.313
1.642
1.920
0.3353
0.9630
0.5153
0.4571
0.5123
0.5531
0.5165
0.6327
0.5540
0.4515
0.8551
0.2722
0.2699
0.3989
Resultado Correcto Anmalo Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Anmalo Correcto Correcto Correcto
Ccal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G 1 cal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Anmalo Correcto Correcto Correcto
G P cal
1.047
1.230
N3 ftalato
1.498
N3 glucosa
Tabla A.II.34: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a la determinacin de nitrato
Correcto
N1 agua
0.9974
0.7186
0.4583
0.9374
Correcto
1.279
0.3853
0.4380
Extrao
Resultado Correcto
Ccal
1.361
G 1 cal
0.9303
NO3
Br
2.087
N1glucosa
G P cal
N1 agua
Tabla A.II.33: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a la determinacin de bromuro
3-
SO4
2-
PO4
1.643
1.352
N1glucosa
0.7359
N1 ftalato
1.325
N1compuesta
0.9391
N2agua
1.557
N2glucosa
1.351
N2 ftalato
1.448
N2compuesta
1.416
N3 glucosa
1.978
N3 ftalato
1.133
N4 glucosa
1.944
N4 ftalato
1.055
N5 glucosa
2.147
N5 ftalato
1.524
1.639
2.343
1.397
2.364
1.589
1.75
1.124
1.781
1.080
1.431
1.432
1.512
0.8788
0.4701
0.4654
0.4534
0.2618
0.9721
0.7511
0.4053
0.3059
0.4248
0.6674
0.2566
0.4028
0.4888
0.4967
1.945
1.376
N1glucosa
1.774
N1 ftalato
1.540
N1compuesta
1.879
N2agua
1.987
N2glucosa
1.324
N2 ftalato
1.895
N2compuesta
1.443
1.489
1.026
1.401
0.8428
0.8433
1.522
1.112
1.603
N3 ftalato
1.967
N4 glucosa
1.51
N4 ftalato
1.375
N5 glucosa
1.250
N5 ftalato
1.278
1.272
1.351
1.585
1.878
1.977
2.142
N3 glucosa
Resultado
Ccal
0.9639
0.5170
0.3916
0.6952
0.3575
0.4848
0.4972
0.3846
0.3073
0.3406
0.6545
0.5616
0.5097
Extrao Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
0.7250
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G 1 cal
G P cal
N1 agua
Tabla A.II.36: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a la determinacin de sulfato
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Anmalo Extrao Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
Ccal
Resultado Correcto Correcto Anmalo Correcto Anmalo Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto
G 1 cal
Resultado Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Correcto Extrao
G P cal
N1 agua
Tabla A.II.35: Resultados de los test de consistencia de Cochran y Grubbs aplicados a la determinacin de fosfato
Anexos
345
346
FALSO
0.01692
0.02867
0.02957
0.01098
0.01842
0.072
>critico
sr
sL
sG
umet
IF
2.8
0.01311
0.06213
critico
%IF
0.02957
0.01338
2.527
2.550
3.3
0.084
0.01976
0.02803
0.03434
FALSO
0.07417
0.03582
2.563
2.563
N1glucosa
N1 agua
6.4
0.16
0.03087
0.02659
0.03139
0.07140
0.03336
sesgo
0.1504
0.2566
2.78
2.53
N1 ftalato
2.4
0.061
0.01723
0.008854
0.02957
0.02285
0.01450
sesgo
0.05009
0.09319
2.470
2.563
N1compuesta
4.0
0.54
0.09855
0.08921
0.08372
0.2437
0.09265
FALSO
0.5047
0.1021
13.49
13.59
N2agua
3.9
0.53
0.09631
0.08674
0.08372
0.2212
0.1501
FALSO
0.4907
0.07056
13.52
13.59
N2glucosa
3.8
0.48
0.08835
0.07935
0.07772
0.2101
0.11148
sesgo
0.4489
0.5086
13.21
12.70
N2 ftalato
3.9
0.54
0.09766
0.08824
0.08372
0.2479
0.04059
FALSO
0.4991
0.4403
13.15
13.59
N2compuesta
2.5
3.1
0.5274
0.5104
0.2655
1.281
0.9425
FALSO
2.887
1.807
123.4
125.3
N3 glucosa
3.7
4.8
0.8019
0.7907
0.2677
2.138
0.9272
FALSO
4.473
1.899
128.6
126.7
N3 ftalato
3.9
49
8.217
8.114
2.597
21.93
9.572
FALSO
45.90
24.67
1231
1256
N4 glucosa
Tabla A.II.37: Clculos intermedios para la estimacin de IF segn el modelo top down
4.2
52
8.801
8.706
2.585
23.45
10.64
FALSO
49.25
4.735
1246
1250
N4 ftalato
3.8
240
40.37
39.86
12.82
35.58
151.3
FALSO
225.5
85.97
6280
6360
N5 glucosa
4.4
280
46.47
46.04
12.58
124.3
54.81
FALSO
260.4
5.329
6240
6250
N5 ftalato
Cl
2.67
2.671
0.08425
0.07548
sesgo
0.02210
0.03774
0.03284
0.01334
0.02116
0.092
3.6
critico
>critico
sr
sL
sG
umet
INO2
%ICl
4.0
0.10
0.02145
0.01380
0.03284
0.03903
0.03853
sesgo
0.07807
0.08287
2.59
2.587
N1glucosa
N1 agua
5.0
0.13
0.02668
0.02086
0.03326
0.05901
0.01080
FALSO
0.1180
0.08670
2.71
2.62
N1 ftalato
7.8
0.20
0.03059
0.02581
0.03284
0.07300
0.08942
sesgo
0.1460
0.2238
2.81
2.59
N1compuesta
5.3
0.73
0.1259
0.1173
0.09137
0.3318
0.1247
FALSO
0.6636
0.1507
13.59
13.74
N2agua
4.9
0.67
0.1187
0.1096
0.09137
0.3100
0.06140
FALSO
0.6200
0.1710
13.57
13.74
N2glucosa
5.7
0.76
0.1357
0.1255
0.1031
0.3551
0.05718
FALSO
0.7101
0.2851
13.08
13.36
N2 ftalato
7.8
1.1
0.1810
0.1751
0.09137
0.4953
0.1132
FALSO
0.9905
0.3437
14.1
13.7
N2compuesta
5.2
6.7
0.9442
0.9308
0.3169
2.633
2.630
FALSO
5.265
2.544
125.9
128.5
N3 glucosa
5.9
7.3
1.200
1.190
0.3098
3.365
0.9949
FALSO
6.731
1.936
121.7
123.7
N3 ftalato
4.5
58
9.404
9.294
2.874
26.29
10.26
FALSO
52.57
37.08
1245
1282
N4 glucosa
Tabla A.II.38: Clculos intermedios para la estimacin de ICl segn el modelo top down
5.2
65
10.62
10.53
2.809
29.79
10.47
FALSO
59.57
24.55
1226
1251
N4 ftalato
4.3
280
44.60
44.07
13.65
124.7
52.9
FALSO
249.3
132.1
6200
6330
N5 glucosa
5.8
360
59.49
59.11
13.46
167.2
45.87
FALSO
334.4
91.41
6150
6240
N5 ftalato
Anexos
347
348
Br
sesgo
>critico
%IBr
IBr
2
umet
sG
sL
3.4
0.090
4.884E-04
1.944E-04
0.03429
0.001514
8.219E-05
0.07887
critico
sr
0.08612
2.73
2.734
4.3
0.11
6.254E-04
3.314E-04
0.03429
0.001979
0.001344
FALSO
0.1030
0.08250
2.65
2.648
N1glucosa
N1 agua
5.4
0.14
7.768E-04
5.025E-04
0.03313
0.003973
9.344E-05
FALSO
0.1268
0.08181
2.63
2.54
N1 ftalato
4.3
0.12
6.287E-04
3.347E-04
0.03429
0.002621
1.147E-04
FALSO
0.1035
0.08412
2.73
2.65
N1compuesta
4.0
0.55
0.01052
8.143E-03
0.09760
0.06359
0.003101
FALSO
0.5105
0.05439
13.59
13.65
N2agua
4.1
0.56
0.01094
8.555E-03
0.09760
0.06810
6.876E-04
FALSO
0.5232
0.05545
13.59
13.65
N2glucosa
4.0
0.51
0.01106
6.888E-03
0.1292
0.05480
6.097E-04
FALSO
0.4695
0.07065
12.90
12.97
N2 ftalato
4.4
0.60
0.01217
9.792E-03
0.09760
0.07754
0.001595
FALSO
0.5598
0.02624
13.67
13.65
N2compuesta
2.6
3.3
0.3201
0.2967
0.3061
2.282
0.1835
FALSO
3.081
1.528
123.6
125.1
3.9
5.1
0.7305
0.7067
0.3085
5.074
1.160
FALSO
4.756
1.038
127.3
128.3
5.1
64
114.3
113.0
2.321
374.2
1059
FALSO
60.12
8.701
1243
1252
3.9
49
68.11
66.74
2.335
484.6
98.74
FALSO
46.22
9.782
1252
1262
3.6
250
1709
1676
11.55
11491
3832
FALSO
231.6
57.79
6860
6920
4.3
290
2411
2379
11.30
17706
2652
FALSO
275.9
2.780
6770
6770
Tabla A.II.39: Clculos intermedios para la estimacin de IBr segn el modelo top down
NO3
FALSO
>critico
2.284E-03
0.18
3.3
INO3
%INO3
6.724E-04
0.08029
0.005295
2
umet
sG
sL
1.677E-04
0.1467
critico
sr
0.1223
5.41
5.40
2.7
0.14
1.998E-03
3.862E-04
0.08029
5.271E-04
0.0051249
sesgo
0.1112
0.1404
5.27
5.27
N1glucosa
N1 agua
6.2
0.31
4.076E-03
2.570E-03
0.07759
0.02036
4.080E-04
FALSO
0.2868
0.2549
5.35
5.09
N1 ftalato
2.3
0.12
1.847E-03
2.352E-04
0.08029
0.001438
0.0008873
sesgo
0.08675
0.1692
5.44
5.27
N1compuesta
4.9
1.4
0.07182
0.04906
0.3017
0.3666
0.05186
FALSO
1.253
0.1493
27.9
28.0
N2agua
5.4
1.5
0.08478
0.06202
0.3017
0.4933
0.005670
FALSO
1.409
0.1672
27.8
28.0
N2glucosa
5.5
1.4
0.06756
0.05074
0.2594
0.4033
0.005286
FALSO
1.274
0.8477
26.0
25.1
N2 ftalato
5.9
1.7
0.09693
0.07418
0.3017
0.5061
0.1747
FALSO
1.541
0.3633
28.4
28.0
3.4
8.3
3.087
1.779
2.287
13.78
0.9003
FALSO
7.546
4.234
243.7
248.0
N2compuesta N3 glucosa
3.2
7.9
2.934
1.604
2.307
10.79
4.086
sesgo
7.164
7.584
257.7
250.2
N3 ftalato
Tabla A.II.40: Clculos intermedios para la estimacin de INO3 segn el modelo top down
5.5
140
647.1
512.3
23.23
2543
3110
FALSO
128.0
12.17
2500
2520
N4 glucosa
4.7
120
498.5
365.9
23.03
2660
534.5
FALSO
108.2
16.96
2510
2490
N4 ftalato
4.1
510
10280
6960
115.2
50325
10706
FALSO
471.9
5.208
12490
12490
N5 glucosa
5.1
630
14089
10759
115.4
81289
9559
FALSO
586.7
38.44
12550
12510
N5 ftalato
Anexos
349
350
3-
PO4
FALSO
>critico
0.01223
0.64
12
INO2
%INO2
0.01123
0.06305
0.05177
2
umet
sG
sL
0.07619
0.5996
critico
sr
0.2164
4.97
4.91
5.3
0.27
2.906E-03
1.913E-03
0.06305
0.006551
0.01750
FALSO
0.2474
0.1580
5.13
5.13
N1glucosa
N1 agua
13
0.65
0.01253
0.01156
0.06226
0.06892
0.04717
sesgo
0.6083
1.313
3.75
5.06
N1 ftalato
8.8
0.45
6.485E-03
5.491E-03
0.06305
0.02236
0.04315
sesgo
0.4192
1.978
3.15
5.13
N1compuesta
11.1
3.0
0.2626
0.2559
0.1635
0.9667
2.161
FALSO
2.862
0.2161
27.3
27.5
N2agua
4.4
1.2
0.04572
0.03904
0.1635
0.1235
0.3775
FALSO
1.118
0.08732
27.4
27.5
N2glucosa
4.9
1.2
0.04678
0.04290
0.1246
0.3175
0.05151
sesgo
1.172
2.108
23.3
25.4
N2 ftalato
15.1
4.2
0.4864
0.4797
0.1635
3.816
0.04434
sesgo
3.918
4.853
22.7
27.5
N2compuesta
2.3
5.7
0.9735
0.9032
0.5301
4.708
5.035
FALSO
5.376
0.1779
249.7
249.5
N3 glucosa
3.3
8.4
2.024
1.952
0.5358
10.36
10.52
FALSO
7.904
0.05210
252.9
252.8
N3 ftalato
4.6
110
369.7
362.3
5.441
2012
1774
FALSO
107.7
13.75
2480
2490
N4 glucosa
Tabla A.II.41: Clculos intermedios para la estimacin de IPO4 segn el modelo top down
6.9
170
821.6
814.2
5.458
4614
3798
FALSO
161.4
0.9796
2500
2500
N4 ftalato
4.3
540
8309
8123
27.26
55108
19749
FALSO
509.8
88.87
12560
12650
N5 glucosa
3.9
500
7167
6971
27.96
42688
26164
FALSO
472.3
379.9
12600
12980
N5 ftalato
2-
SO4
sesgo
>critico
2%ISO4
ISO4
2-
2
umet
sG
sL
2.5
0.13
1.466E-03
3.747E-04
0.06606
0.002688
6.194E-04
0.1095
critico
sr
0.1371
5.50
5.56
2.8
0.15
1.621E-03
5.299E-04
0.06606
0.001770
0.004939
FALSO
0.1302
0.07651
5.42
5.42
N1glucosa
N1 agua
5.5
0.28
2.960E-03
2.015E-03
0.06146
0.01554
0.001161
sesgo
0.2539
0.4981
5.53
5.03
N1 ftalato
2.6
0.14
1.538E-03
4.475E-04
0.06606
0.002079
0.003001
sesgo
0.1197
0.1489
5.57
5.42
N1compuesta
4.5
1.2
0.04203
0.03649
0.1489
0.2804
0.02304
FALSO
1.081
0.3299
25.3
25.6
N2agua
4.8
1.2
0.04640
0.04086
0.1489
0.3260
0.001819
FALSO
1.144
0.3336
25.2
25.6
N2glucosa
4.0
1.0
0.03167
0.02829
0.1162
0.2243
0.003994
FALSO
0.9515
0.3559
25.5
25.2
N2 ftalato
4.7
1.2
0.04460
0.03906
0.1489
0.3055
0.01399
FALSO
1.118
0.1012
25.5
25.6
3.1
7.8
1.730
1.689
0.4036
13.19
0.6554
FALSO
7.352
4.413
246.8
251.2
N2compuesta N3 glucosa
3.9
9.7
2.653
2.613
0.4009
18.81
4.179
FALSO
9.144
0.3045
249.1
248.8
N3 ftalato
Tabla A.II.42: Clculos intermedios para la estimacin de ISO4 segn el modelo top down
4.0
100
280.7
276.2
4.240
1901
617.2
FALSO
94.02
51.05
2440
2490
N4 glucosa
4.6
110
369.5
364.9
4.259
2665
508.2
FALSO
108.1
28.09
2480
2500
N4 ftalato
4.2
530
7970
7861
20.86
56936
11900
FALSO
501.5
190.4
12340
12530
N5 glucosa
4.8
580
9493
9391
20.17
68571
13113
FALSO
548.2
385.7
12500
12120
N5 ftalato
Anexos
351
Fecha: dd/mm/aa
Pg.: 1 de 12
Elaborado por:
Nombre Apellido Apellido
Revisado por:
Nombre Apellido Apellido
Aprobado por:
Nombre Apellido Apellido
Fecha: dd/mm/aa
Fecha: dd/mm/aa
Fecha: dd/mm/aa
Cd.: PNT-Aniones
Rev.: 1
Fecha: dd/mm/aa
Pg.: 2 de 12
NDICE
1. OBJETO ...................................................................................................................................... 3
2. ALCANCE .................................................................................................................................... 3
3. REFERENCIAS ............................................................................................................................. 3
4. FUNDAMENTO ........................................................................................................................... 4
5. METODOLOGA .......................................................................................................................... 4
5.1. MEDIDAS DE SEGURIDAD .................................................................................................. 4
5.2. INTERFERENCIAS ............................................................................................................... 4
5.3. TOMA Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA ....................................................................... 5
5.4. INSTRUMENTAL ................................................................................................................. 5
5.5. REACTIVOS......................................................................................................................... 6
5.6. OPERACIONES PREVIAS ..................................................................................................... 8
5.7. PROCEDIMIENTO ............................................................................................................... 8
5.7.1. PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRADO ............................................................ 8
5.7.2. ANLISIS DE LAS MUESTRAS ..................................................................................... 8
6. CLCULOS Y EXPRESIN DE RESULTADOS ................................................................................ 9
6.1. CURVA DE CALIBRADO ...................................................................................................... 9
6.2. CONCENTRACIN DE LA MUESTRA ................................................................................. 10
6.3. CRITERIOS DE ACEPTACIN Y RECHAZO ......................................................................... 10
6.4. ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE ............................................................................. 10
6.5. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS .................................................................................... 11
ANEXOS ....................................................................................................................................... 11
A.I: CONDICIONES INSTRUMENTALES .................................................................................... 11
A.II: DIAGRAMA DE FLUJO DEL ENSAYO ................................................................................. 12
Cd.: PNT-Aniones
Rev.: 1
Fecha: dd/mm/aa
Pg.: 3 de 12
1. OBJETO
El objeto de este PNT es describir el ensayo para la determinacin en agua de iones
fluoruro, cloruro, nitrito, bromuro, nitrato y sulfato por cromatografa inica en fase
lquida.
2. ALCANCE
Este PNT se aplica para la determinacin de aniones fluoruro, cloruro, nitrito, nitrato y
sulfato disueltos en aguas residuales y continentales no tratadas. Los rangos de
aplicacin y la dilucin mxima permitida para cada anin son los siguientes:
Tabla 1: Alcance del procedimiento
Anin
Rango de ensayo
Rango de medida
mg A L
mg A L
-1
-1
2.5-15
2.5-6250
2.5-15
2.5-6250
5-30
5-12500
2.5-15
2.5-6250
NO2
5-30
5-12500
2SO4
5-30
5-12500
Cl
NO3
Br
Dilucin mxima
0.1:100
3. REFERENCIAS
American Public Health Association. (1998). Standard methods for examination of
water and wastewater. 20th ed. APHA-AWWA-WPCF, Washington DC.
ASTM D4327 (2003). Standard Test Method for anions in water by Chemically
Suppressed Ion Chromatography. American Society for Testing and Materials, ASTM.
UNE-EN ISO 10304-1 (2009). Calidad del agua. Determinacin de aniones disueltos
por cromatografa de iones en fase lquida. Parte 1. Determinacin de bromuro,
cloruro, fluoruro, nitrato, nitrito, fosfato y sulfato. Asociacin Espaola de
Normalizacin y Certificacin, AENOR.
USEPA Method 300.1 (1997). Anions in Water by IC: Determination of inorganic
anions in drinking water by ion chromatography, rev 1.0. United States Environmental
Protection Agency, EPA.
Cd.: PNT-Aniones
Rev.: 1
Fecha: dd/mm/aa
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4. FUNDAMENTO
La determinacin se basa en la separacin de los iones por cromatografa en fase
lquida. En la cromatografa aninica, la fase estacionaria es un intercambiador
aninico de baja capacidad, mientras que como fase mvil suelen utilizarse
disoluciones acuosas de sales de cidos dbiles mono o dibsicos. La deteccin de los
iones se realiza mediante conductimetra. El detector de conductividad se combina
habitualmente con un sistema supresor postcolumna, consistente en un
intercambiador catinico protonado que disminuye la conductividad de la fase mvil,
transformando los aniones de dicha fase mvil en sus correspondientes formas cida y
neutra, y reteniendo los cationes. Los iones se identifican a partir de sus tiempos de
retencin, mediante comparacin con los patrones de calibracin. La determinacin
cuantitativa se realiza midiendo la altura o rea del pico.
5. METODOLOGA
A continuacin se describen las actividades a desarrollar, as como los medios
necesarios para llevar a cabo este PNT.
5.2. INTERFERENCIAS
Las interferencias pueden deberse a diferentes causas:
Coelucin cromatogrfica, es decir, cuando otro analito eluye al mismo tiempo de
retencin que el analito de inters. Por ejemplo, la determinacin de fluoruros y
cloruros est sujeta a la interferencia causada por la presencia de aniones de cidos
orgnicos de bajo peso molecular como el frmico o el actico, que aparecen a
tiempos de retencin muy prximos, y que interfieren incluso en concentraciones
bajas. Los aniones de otros cidos orgnicos como, por ejemplo, malnico, maleico y
mlico, pueden interferir en la determinacin de los aniones inorgnicos si se
encuentran presentes en concentraciones elevadas. Los aniones inorgnicos
fluoroborato y clorito tambin pueden interferir en la determinacin.
El pico de un analito vecino es tan alto que solapa al analito de inters. La existencia
de diferencias importantes en las concentraciones de los distintos aniones a analizar
puede originar fenmenos de sensibilidad cruzada (perdida de resolucin).
Los tiempos de retencin cambian debido al cambio de la fuerza inica y pH de la
fase mvil por lo que esta debe ser cuidadosamente controlada.
Universidad de Valladolid - Dpto. Qumica Analtica 2013
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5.4. INSTRUMENTAL
El instrumental necesario para llevar a cabo este PNT es el siguiente:
Material general de laboratorio.
Estufa a 105 r 5 qC.
Balanza analtica, con 0.1 mg de resolucin.
pH-metro.
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Ultrasonidos.
Jeringuillas con salida tipo Luer.
Filtros de jeringa de nylon de 0.45 Pm de tamao de poro y 13 mm de dimetro.
Membranas de filtracin de nylon de 0.45 Pm de tamao de poro y 47 mm de
dimetro.
Equipo de filtracin a vaco de 47 mm de dimetro.
Cromatgrafo inico Methrom 792 IC BASIC equipado con un detector de
conductividad, bomba peristltica, mdulo de supresin qumica e interface.
Columna Metrosep A Supp 4, de 250 mm de longitud y 4.0 mm de dimetro interno,
empaquetada con partculas de alcohol polivinilico de 9 Pm de dimetro recubiertas
de grupos amonio cuaternario.
Precolumna Metrosep A Supp 4/5 Guard de 5 mm de longitud, 4.0 mm de dimetro
interno y partculas de 5 Pm de dimetro.
Cartuchos de extraccin en fase slida, SPE, de 0.5 mL de volumen Grace Davison
Discovery o similar:
Tabla 2: Descripcin de los cartuchos SPE empleados
Tipo de cartucho
Funcin
IC-H
IC-Ag
IC-Ba
IC-RP
5.5. REACTIVOS
Los reactivos que se utilizan durante el desarrollo de este PNT se indican a
continuacin. Todos ellos deben ser de calidad analtica para cromatografa.
Fase mvil concentrada 180 mM Na2CO3/170 mM NaHCO3. Se pesan 1.9078
0.0001 g de Na2CO3 y 1.4281 0.0001 g de NaHCO3, se disuelven en un matraz de 100
mL con aproximadamente 25 mL de agua ultrapura y se enrasa hasta 100 mL con agua
ultrapura. Almacenar refrigerada (caducidad, 3 meses).
Fase mvil diluida 1.8 mM Na2CO3/1.7 mM NaHCO3. Se diluyen 10 mL de la fase
mvil concentrada a 1000 mL con agua ultrapura. Se filtra a travs de membranas de
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(A )
Fluoruro
Cloruro
Nitrito
Bromuro
Nitrato
Sulfato
Reactivo
NaF
NaCl
NaNO2
NaBr
NaNO3
Na2SO4
M molecular
M molecular A
Tiempo
Masa
CA-
(gmol-g )
(gmol-g )
desec. (h)
(g)
mgL
41.99
58.44
69.00
102.90
84.99
142.04
19.00
35.45
46.01
79.90
62.01
96.06
1
2
1
6
24
1
1.1050
0.8242
1.4998
0.6439
1.3707
1.4790
500
500
1000
500
1000
1000
-1
-1
-1
Anin
F , Cl , Br
CCI2
NO2 ,
NO3 ,
2SO4
F , Cl , Br
0.5 mL
2.5 mgL
-1
5 mgL
2-
-1
125 mgL
-1
250 mgL
-1
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5.7. PROCEDIMIENTO
5.7.1. PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRADO
Se realiza el calibrado instrumental mensualmente o cada 500 inyecciones.
Se preparan los patrones de calibrado de forma que se cubra el rango de trabajo
mediante dilucin de la solucin multipatrn de aniones concentrada, ver Tabla 5
(caducidad, 1 da).
Tabla 5: Concentracin de los patrones de calibracin seleccionados
F-, Cl , Br
NO2 ,
NO3 ,
Concentracin
Anin
-
2SO4
(mg A L )
-
-1
Se toma, con una jeringuilla de 5-10 mL con salida tipo Luer-Lock, agua ultrapura y se
pasa a travs de un filtro de nylon de 0.45 Pm acoplado a la salida de la jeringuilla para
eliminar partculas suspendidas. El filtrado es directamente introducido en el inyector
del equipo para comprobar la ausencia de seal.
Para obtener la lnea de calibrado se inyectan sucesivamente de la misma forma
porciones homogneas de los multipatrones de calibrado. La identificacin de los
aniones se hace en base a los tiempos de retencin y la cuantificacin se realiza
midiendo el rea de picos de cada anin.
Para asegurar la validez de las lneas de calibrado se deber medir uno de los
multipatrones de calibracin al inicio de la sesin de trabajo, cada diez muestras o al
finalizar la serie de muestras.
5.7.2. ANLISIS DE LAS MUESTRAS
Se analiza uno de los CCI, introduciendo una rplica al inicio y otra al final de cada
sesin de trabajo.
Una vez atemperadas las disoluciones, se comprueba que el pH de las muestras est
dentro del rango admitido por la columna y precolumna; en caso de tener un pH cido
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a bC
ec. 1
A
a
-1
(cuentasLmg )
(cuentas)
Cl
NO2
Br
NO3
2SO4
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Fecha: dd/mm/aa
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A los patrones de control del calibrado se les permitir un error respecto al valor real
d 5%. En caso contrario, no se dar por buena la lnea de calibrado almacenada y se
recalibrar de nuevo.
>
C A mg A - L-1
Ya
b
ec. 2
IF
Cloruro
ICl
Nitrito
INO
Bromuro
IBr
Nitrato
INO
Sulfato
ISO2
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NO2
u 0.3043
u 3.2882
o N-NO2 o NO2
NO3
u 0.2259
u 4.4267
o N-NO3 o NO3
ANEXOS
A.I: CONDICIONES INSTRUMENTALES
Tabla 9: Condiciones instrumentales del cromatgrafo inico
-1
Parmetros instrumentales
Caudal: 1 mLmin
Tiempo de cromatograma 16 min
Presin mxima: 12 MPa
Presin mnima: 0 MPa
-1
Conductividad: 0 Scm
Propiedades de integracin
Condiciones de calibracin
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tR (min)
Cl
3.6
5.1
-
NO2
6.0
7.4
Br
NO3
8.3
2SO4
14.0
Acondicionamiento instrumental
LNEA DE CALIBRADO
BLANCO
MUESTRAS
PATRONES
Concentracin
mg A-L-1
Ajustar pH
rea pico
Cuentas
Si
Cartucho de
extraccin
Filtrar 0.45m
Medir en IC
Concentracin
enmascarada
No
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Elaborado por:
Nombre Apellido Apellido
Revisado por:
Nombre Apellido Apellido
Aprobado por:
Nombre Apellido Apellido
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DETERMINACIN DE FENOL EN AGUAS. MTODO
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ESPECTROFOTOMTRICO DIRECTO DE LA
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4-AMINOANTIPIRINA
NDICE
1. OBJETO ...................................................................................................................................... 3
2. ALCANCE .................................................................................................................................... 3
3. REFERENCIAS ............................................................................................................................. 3
4. FUNDAMENTO ........................................................................................................................... 3
5. METODOLOGA .......................................................................................................................... 3
5.1. MEDIDAS DE SEGURIDAD .................................................................................................. 4
5.2. INTERFERENCIAS ............................................................................................................... 4
5.3. TOMA Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA ....................................................................... 4
5.4. INSTRUMENTAL ................................................................................................................. 4
5.5. REACTIVOS......................................................................................................................... 5
5.6. OPERACIONES PREVIAS ..................................................................................................... 5
5.7. PROCEDIMIENTO ............................................................................................................... 6
5.7.1. PREPARACIN DE LA MUESTRA ................................................................................ 6
5.7.2. PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRADO ............................................................ 6
5.7.3. ANLISIS DE LAS MUESTRAS ..................................................................................... 6
6. CLCULOS Y EXPRESIN DE RESULTADOS ................................................................................ 7
6.1. CURVA DE CALIBRADO ...................................................................................................... 7
6.2. CONCENTRACIN DE LA MUESTRA ................................................................................... 7
6.3. CRITERIOS DE ACEPTACIN Y RECHAZO ........................................................................... 7
6.4. ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE ............................................................................... 8
6.5. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS ...................................................................................... 8
ANEXO: DIAGRAMA DE FLUJO DEL ENSAYO.................................................................................. 8
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DETERMINACIN DE FENOL EN AGUAS. MTODO
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ESPECTROFOTOMTRICO DIRECTO DE LA
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4-AMINOANTIPIRINA
1. OBJETO
El objeto de este PNT es describir el ensayo para la determinacin de fenol en agua
mediante el mtodo espectrofotomtrico directo de la 4-aminoantipirina.
2. ALCANCE
Este PNT se aplica a la determinacin de fenol en aguas residuales y continentales no
tratadas.
El rango de trabajo es de 0.5 a 5 mg fenolL-1 y el de medida de 0.5 a 500 mg fenolL-1,
siendo la dilucin mxima permitida 1:200.
3. REFERENCIAS
American Public Health Association. (1998). Standard methods for examination of
water and wastewater. 20th ed. APHA-AWWA-WPCF, Washington DC.
ASTM D1783-01. (2012). Standard test methods for phenolic compounds in water.
American Society for Testing and Materials, ASTM.
UNE 77053 (2002). Calidad del agua. Determinacin de fenoles. Asociacin Espaola
de Normalizacin y Certificacin, AENOR.
USEPA Method 420.1 (1983). Phenolics (Spectrophotometric, Manual 4-AAP With
Distillation). United States Environmental Protection Agency, EPA.
4. FUNDAMENTO
Este mtodo es sensible a los fenoles orto- y meta- sustituidos y, en condiciones
adecuadas de pH, los sustituidos en posicin para- por grupos carboxilo, halgeno,
metoxilo o cido sulfnico.
Los compuestos fenlicos destilados reaccionan con la 4-AAP a pH 7.9 en presencia de
ferricianuro potsico para formar un compuesto coloreado de antipirina. Este
colorante es estable en solucin acuosa y susceptible de medida fotomtrica a una
longitud de onda de 506 nm.
5. METODOLOGA
A continuacin se describen las actividades a desarrollar, as como los medios
necesarios para llevar a cabo este PNT.
Cd.: PNT-Fenol
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DETERMINACIN DE FENOL EN AGUAS. MTODO
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ESPECTROFOTOMTRICO DIRECTO DE LA
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4-AMINOANTIPIRINA
5.2. INTERFERENCIAS
Las interferencias potenciales del mtodo pueden deberse a diferentes causas:
Sustancias oxidantes tales como cloro y aquellas capaces de oxidar el yoduro a yodo
al acidificar. Se deben eliminar inmediatamente despus de la toma de muestra
aadiendo un exceso de sulfato ferroso, FeSO4. Si no se eliminan las sustancias
oxidantes, los compuestos fenlicos se oxidarn parcialmente.
Especies reducidas de azufre. Se eliminan por acidificacin a pH = 4 con cido
fosfrico, aadiendo sulfato de cobre y aireando la muestra brevemente por agitacin.
De esta manera, se eliminan las interferencias debidas al sulfuro y al sulfito.
Aceites y alquitranes: El aceite o alquitrn se extraen con 50 mL de cloroformo de la
solucin acuosa, alcalinizada a pH = 12 con hidrxido sdico. Se desecha la fase
orgnica que contiene el aceite o alquitrn y se elimina el exceso de cloroformo de la
fase acuosa calentando al bao Mara antes de proceder a la fase de destilacin.
Tambin pueden interferir concentraciones anormalmente altas de aminas
aromticas y formaldehdo que son eliminadas aadiendo sulfato de amonio e
hidrxido de sodio. En ambos casos posteriormente se acidifica y se procede a destilar.
5.4. INSTRUMENTAL
El instrumental necesario para llevar a cabo este PNT es el siguiente:
Material general de laboratorio.
Manta calefactora elctrica para matraces de 500 mL con T regulable hasta 450qC.
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DETERMINACIN DE FENOL EN AGUAS. MTODO
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ESPECTROFOTOMTRICO DIRECTO DE LA
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4-AMINOANTIPIRINA
Equipo de destilacin compuesto por: matraz de 500 mL, pieza acodada de 75q para
destilacin, refrigerante Dimroth encamisado de 300 mm de longitud y colector de
105q.
pH-metro.
Espectrofotmetro UV-visible con las siguientes especificaciones: ancho de cubeta
10 mm y longitud de onda 506 r 1 nm.
5.5. REACTIVOS
Los reactivos que se utilizan durante el desarrollo de este PNT se indican a
continuacin. Todos ellos deben ser de calidad analtica.
Agua ultrapura (caducidad, 1 da).
cido fosfrico (1:10). Diluir 10 mL de H3PO4 al 85% hasta 100 mL con agua
ultrapura.
Amoniaco 0.5 M. Diluir 31.6 mL de NH3 al 30% hasta 1 litro (caducidad, 2 meses).
Solucin tampn fosfato. Diluir 104.5 0.1 g de K2HPO4 y 72.3 0.1 g de KH2PO4 en
agua ultrapura hasta 1000 mL. El pH ha de ser 6.8 (caducidad, 2 meses).
Solucin de 4-aminoantipiridina al 2%. Disolver la cantidad necesaria de reactivo
0.01 g en el volumen adecuado con agua ultrapura para el anlisis diario (caducidad,
1 da).
Solucin de ferricianuro potsico al 4%. Disolver la cantidad necesaria de reactivo
0.01 g en el volumen adecuado con agua ultrapura para el anlisis diario. Almacenar
en frasco topacio (caducidad, 1 da).
Patrn concentrado de fenol, 1000 mg fenolL-1. Pesar 0.5000 0.0001 g de fenol y
diluir a 500 mL con agua ultrapura recin hervida y fra (caducidad, 3 meses).
Muestras para el control de calidad interno, CCI. Se prepara una de las siguientes
disoluciones a partir de un patrn concentrado de fenol distinto al empleado en la
calibracin del equipo (caducidad, 1 da):
Tabla 1: Concentraciones de las muestras para el control de calidad interno
CCI1
CCI2
0.5 mL
5 mL
Concentracin final
0.5 mg fenolL
-1
5 mg fenolL
-1
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5.7. PROCEDIMIENTO
5.7.1. PREPARACIN DE LA MUESTRA
Los fenoles se pueden separar de la matriz no voltil por destilacin. Para ello, se
toman volmenes de muestra ligeramente superiores a 500 mL y se ajusta el pH a
aproximadamente 4.0 con la disolucin de cido fosfrico. Omitir la etapa de ajuste de
pH si la muestra se conserva como se describe en el apartado 5.3. A continuacin, se
vierten en el matraz de destilacin 500 mL de la muestra y cuando han destilado
aproximadamente 450 mL, se detiene la destilacin. Cuando la muestra deja de hervir,
se aade 50 mL de agua desionizada caliente al matraz de destilacin y se continua
destilando hasta recoger un volumen total de 500 mL. Los destilados se almacenan
refrigerados a 4qC hasta su anlisis
5.7.2. PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRADO
Se realiza el calibrado instrumental diariamente.
Se preparan los patrones de calibrado de forma que se cubra el rango de trabajo
mediante dilucin de la solucin patrn de fenol concentrado. Se toman los siguientes
volmenes de patrn concentrado de fenol: 0 (blanco), 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 y
0.5 mL, y se diluyen a 100 mL con agua ultrapura obtenindose patrones de 0, 0.25,
0.5, 1, 2, 3, 4 y 5 mg fenolL-1 (caducidad, 1 da).
Para asegurar la validez de las lneas de calibrado se deber medir uno de los patrones
de calibracin al inicio de la sesin de trabajo, cada diez muestras o al finalizar la serie
de muestras.
5.7.3. ANLISIS DE LAS MUESTRAS
Se analiza dos rplicas de uno de los CCI, al inicio de cada sesin de trabajo y al final.
Se realizan dos rplicas de cada muestra.
Se toman 100 mL de destilado de muestra o de CCI, o una porcin que contenga no
ms de 5 mg de fenol y se diluye hasta 100 mL. Se realiza un blanco paralelamente.
Se tratan los patrones de la lnea de calibrado, las muestras, el CCI y el blanco como
sigue: se aaden 2.5 mL de la disolucin de amonaco y 2 mL de tampn fosfato (pH
final aproximadamente 7.9). Se aade a continuacin 1.0 mL de disolucin 4-AAP, 1.0
mL de disolucin K3Fe(CN)6 y se mezcla bien. Despus de 15 minutos, se transfiere la
disolucin coloreada a las cubetas de vidrio de 1 cm y se lee la absorbancia de
patrones y muestras a 506 nm introduciendo en la cubeta de referencia el blanco.
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4-AMINOANTIPIRINA
a b C fenol
ec. 1
>
UA a
b
ec. 2
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ec. 3
Acondicionamiento instrumental
LNEA DE CALIBRADO
BLANCO
PATRONES
Concentracin
mg fenolL-1
MUESTRAS
Ajustar pH
Respuesta
UAbs
Destilar 500 mL
100 mL de muestra o patrn + 2.5 mL de amoniaco + 2 mL aprox. de tampn hasta pH 7.9 + 1 mL 4AAP + 1 mL ferricianuro
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NDICE
1. OBJETO ...................................................................................................................................... 3
2. ALCANCE .................................................................................................................................... 3
3. REFERENCIAS ............................................................................................................................. 3
4. FUNDAMENTO ........................................................................................................................... 3
5. METODOLOGA .......................................................................................................................... 4
5.1. MEDIDAS DE SEGURIDAD .................................................................................................... 4
5.2. INTERFERENCIAS .................................................................................................................. 4
5.3. TOMA Y CONSERVACIN DE LA MUESTRA .......................................................................... 4
5.4. INSTRUMENTAL ................................................................................................................... 5
5.5. REACTIVOS ........................................................................................................................... 5
5.6. PROCEDIMIENTO ................................................................................................................. 6
6. CLCULOS Y EXPRESIN DE RESULTADOS ................................................................................ 8
6.1. CONCENTRACIN DE LA MUESTRA ................................................................................... 8
6.2. CRITERIOS DE ACEPTACIN Y RECHAZO ........................................................................... 8
6.3. ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE ............................................................................... 8
6.4. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS ...................................................................................... 8
ANEXO ........................................................................................................................................... 9
A.I: ESQUEMA DEL EQUIPO DE FILTRACIN A VACO .............................................................. 9
A.II: DIAGRAMA DE FLUJO DEL ENSAYO ................................................................................... 9
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1. OBJETO
El objeto de este PNT es describir el ensayo para la determinacin gravimtrica de
aceites y grasas, A&G, en aguas mediante extraccin en fase slida con n-hexano.
2. ALCANCE
Este PNT se aplica para la determinacin de A&G en aguas residuales y continentales
no tratadas.
El rango de ensayo y de medida es de 50 a 4000 mg A&GL-1.
Este PNT es aplicable a la determinacin de hidrocarburos relativamente no voltiles,
aceites vegetales, grasas animales, ceras, jabones, grasas y materias relacionadas. No
es aplicable a hidrocarburos ligeros (productos derivados del petrleo desde la
gasolina al fuel-oil) que se volatilizan a temperaturas por debajo de 70qC o aceites y
grasas poco viscosos que no se separen por filtracin.
3. REFERENCIAS
American Public Health Association. (1998). Standard methods for examination of
water and wastewater, 20th ed. APHA-AWWA-WPCF, Washington DC.
ASTM D4281-95 (2005). Standard Test Method for Oil and Grease (Fluorocarbon
Extractable Substances) by Gravimetric Determination. American Society for Testing
and Materials, ASTM.
UNE 77037 (1983). Mtodo de anlisis de agua en vertidos industriales.
Determinacin de aceite y grasa total recuperable. Mtodo de extraccin de Soxhlet.
Asociacin Espaola de Normalizacin y Certificacin, AENOR.
USEPA Method 1664, revision B (2010). N-hexane extractable material (HEM; oil
and grease) and silica gel treated n-hexane extractable material (SGT-HEM; non-polar
material) by extraction and gravimetry. United States Environmental Protection
Agency, EPA.
4. FUNDAMENTO
El proceso de medida consiste en extraer los aceites y grasas del medio acuoso a un
medio orgnico de la forma siguiente: la muestra, una vez acidificada a pH < 2 para
evitar la saponificacin y la formacin de emulsiones inestables, se filtra a travs de un
filtro especfico para la determinacin de A&G en el cual quedan retenidos los aceites y
grasas que son posteriormente eluidos con n-hexano. El extracto final se filtra a travs
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5. METODOLOGA
A continuacin se describen las actividades a desarrollar, as como los medios
necesarios para llevar a cabo este PNT.
5.2. INTERFERENCIAS
Estas interferencias pueden deberse a diferentes causas:
En la determinacin de aceites y grasas no se mide una cantidad absoluta de una
sustancia especfica. Ms bien, se determinan cuantitativamente grupos de sustancias
con caractersticas fsicas similares sobre la base de su solubilidad comn. Los A&G que
pueden ser determinados son hidrocarburos relativamente no voltiles, aceites
vegetales, sebos animales, ceras, jabones, grasas y compuestos similares como lpidos
biolgicos y los hidrocarburos minerales. El n-hexano, adems, tiene la capacidad de
disolver otras sustancias orgnicas tales como compuestos orgnicos de azufre, ciertos
tintes orgnicos, detergentes Por otro lado, los residuos ms pesados del petrleo
pueden contener una porcin significativa de materiales que no son extrables con nhexano.
El mtodo no es aplicable para medir fracciones de bajo punto de ebullicin que se
volatilizan a temperaturas por debajo de 70qC durante la eliminacin del disolvente,
como hidrocarburos de cadena corta y aromticos sencillos.
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5.4. INSTRUMENTAL
El instrumental necesario para llevar a cabo este PNT es el siguiente:
Material general de laboratorio.
Equipo de filtracin a vaco para filtros de 47 mm de dimetro, marca Scharlab (ver
Anexo AI).
Tubos Nessler de vidrio de 100 mL de capacidad y 28 mm de dimetro.
Filtros SPE Pacific TM O&G Disk 1664-47-HT de Horizon Technologies de 47 mm de
dimetro especficamente diseados para este mtodo.
Desecador con llave de vaco.
Papel de filtro de 15 cm de dimetro Whatman n 40 o equivalente.
Matraces redondos de cuello corto de 250 mL de capacidad y peso inferior a 110 g.
Embudos de vidrio de 70 mm de dimetro.
Probetas graduadas con volmenes comprendidos entre 100 mL y 2000 mL.
Balanza analtica con 0.0001 g de resolucin y 110 g de fondo de escala.
Rotavapor a 70 r 5qC.
Bomba de vaco de membrana.
pH-metro o papel indicador de pH.
Estufa de aire forzado a 105 r 5qC.
5.5. REACTIVOS
Los reactivos que se utilizan durante el desarrollo de este PNT se indican a
continuacin. Todos ellos deben ser de calidad analtica.
Agua bidestilada (caducidad, 1 da).
Solucin cido clorhdrico (1:1). Aadir lentamente y mientras se agita HCl
concentrado sobre agua bidestilada, mezclando volmenes iguales. Alternativamente
se puede utilizar H2SO4, preparado de la misma manera.
Metanol (caducidad, ver envase).
Sulfato sdico anhidro secado a 200-250 C durante 24 h y almacenado en
desecador hasta su uso (caducidad, ver envase).
n-hexano con una pureza mnima de 85% y menos de 0.0001% de residuo seco
(caducidad, ver envase).
Muestras para el control de calidad interno, CCI. Se prepara una de las siguientes
mezclas:
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5.6. PROCEDIMIENTO
Se analiza una rplica de uno de los CCI al inicio de cada sesin de trabajo.
Realizar dos rplicas de cada muestra y un blanco paralelamente.
Preparacin de la muestra
A la llegada de la muestra al laboratorio, se marca el menisco en el recipiente que la
contiene. Se mide el pH y se acidifica la muestra a pH < 2 con HCl 1:1 y se refrigera. El
volumen de muestra analizado se determina despus de su anlisis rellenando la
botella que contena la muestra con agua hasta la lnea marcada antes de la
acidificacin y midiendo el volumen de agua empleado con una probeta.
Preparacin del matraz
Se secan los matraces redondos de 250 mL en la estufa a 105qC durante 2 horas y se
almacenan en un desecador. Antes de iniciar el anlisis se pesan en la balanza
analtica. Los matraces deben ser manipulados en todo momento con guantes o
pinzas.
Preparar el equipo de filtracin
Se introduce un tubo Nessler dentro del quitasato y se coloca el filtro SPE con la cara
rugosa hacia arriba. A continuacin se lavan las paredes del embudo el equipo de
filtracin con una alcuota de 10 mL de n-hexano hasta que el filtro est totalmente
empapado por el disolvente; se esperan 5 segundos y se aplica vaco recogiendo el
disolvente en el tubo Nessler. Se hace un segundo lavado con otros 10 mL de n-hexano
aplicando vaco durante 1 minuto hasta que el filtro est seco. Se recupera el n-hexano
por destilacin.
Si la muestra contiene elevada cantidad de slidos en suspensin puede ser
recomendable colocar sobre el filtro de aceites y grasas un prefiltro de fibra de vidrio
para evitar la colmatacin del filtro SPE y reducir el tiempo de filtracin.
Acondicionamiento del filtro
Se humedece el filtro SPE con 10 mL de metanol hasta que el filtro est totalmente
sumergido, evitando que se seque; se espera 5 segundos y se aplica vaco nuevamente
recogiendo el metanol en el tubo Nessler, y descartndolo a continuacin.
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>
C AG mg AG L-1
Pf Pi Pf -B PiB
106
VM
ec. 1
donde CA&G es la concentracin de A&G en la muestra, mgL-1, Pi y Pf son las masas del
matraz antes y despus de la determinacin de A&G, medidas en g, Pi-B y Pf-B, son las
masas del matraz antes y despus de la determinacin del blanco, medidas en g y VM el
volumen de muestra, mL.
ec. 2
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ANEXOS
A.I: ESQUEMA DEL EQUIPO DE FILTRACIN A VACO
Embudo
Posicin del
filtro de SPE
Soporte
A bomba de
vacio
Quitasato
Tubo Nessler
Blanco
Preparar el matraz
Preparar el matraz
Acondicionar el filtro
Acondicionar el filtro
Extraccin de muestras
Elucin del analito