Ao de la consolidacin del Mar de Grau.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS

ASIGNATURA: BIOQUIMICA

TEMA: REUNIN DE LABORATORIO N 1

ALUMNO(A):

ARANDA ULLOA, JHOSLEY MARILID

GRUPO: 1

AO DE ESTUDIO: 3

PROMOCIN: LIII

ASESOR:

DR. JORGE HUAMAN SAAVEDRA

TRUJILLO PER

I UNIDAD
REUNION DE LABORATORIO N1
PRACTICA N01
DEMOSTRACION DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LAS ENZIMAS
I.

INTRODUCCION:
La vida depende de una serie ordenada de reacciones qumicas que son catalizadas por
enzimas formadas para este fin. Las enzimas, salvo los ribozimas, son protenas
relativamente frgiles con tendencia a sufrir desnaturalizacin e inactivacin, es decir
alteraciones en su conformacin, por efecto de diversos agentes fsicos y qumicos
como: temperatura, cidos y lcalis fuertes, sales pesadas, pH, etc.
Las enzimas se encuentran en muy pequeas concentraciones en los materiales
biolgicos, resulta un trabajo arduo y complicado individualizarlas o purificarlas. Para
poder verificar directamente las propiedades comunes o similares a la naturaleza
proteica que las caracterizan , desde el punto de vista experimental se pueden utilizar
las propiedades de catalizadores especficos que tienen las enzimas, como indicador de
las alteraciones que pueden sufrir stas cuando son sometidas a la accin de diferentes
agentes fsicos y qumicos . De esta manera, sin necesidad de individualizar o purificar
una determinada enzima se pueden verificar cmo afectan los agentes fsicos y
qumicos la naturaleza proteica de las enzimas, disminuyendo su actividad.
La finalidad de la presente prctica, es poner en evidencia las caractersticas proteicas
de las enzimas que gozan de propiedades comunes y que expuestas a la accin de
diversos agentes fsicos y qumicos hacen variar su comportamiento y actividad
cataltica.

II.
REACTIVOS A UTILIZAR:
NaOH 1N
- Amilasa
salival 1.0%
SO4 Cu 20%
- Solucin iodada
-

NaCl 0.15M

III.

Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6

cido tricloro actico (A.T.C.A.) al
20%

HCl 3N y 0.05N

PROCEDIMIENTO E INTERPRETACIN

SISTEMA A

TUBOS

COMPONENTES
(en ml)
Amilasa al 1%
NaOH 1N
HCl 3N
cido
Tricloro
actico 20%
Sulfato de Cobre al
20%
Buffer

fosfato

0.1M / pH 6.6

II

III

IV

VI

1.0
-

1.0
2.4
-

1.0
2.4

1.0
-

1.0
-

1.0
-

2.4

2.4

2.4

2.4

El contenido
del tubo se
mantiene
transparente,
la
enzima
Observar e est en el
interpretar medio ptimo
para
reaccionar.

SISTEMA B:

La enzima es
desnaturaliza
da al agregar
el
NaOH
(base fuerte)
pues
esta
cambia el PH
del medio.

La enzima es
desnaturaliza
da al agregar
el HCl (cido
fuerte) pues
este cambia
el PH del
medio.

La enzima es
desnaturalizad
a al agregar el
cido Tricloro
actico
pues
este cambia el
PH del medio.

La enzima es
desnaturalizad
a al agregar el
Sulfato
de
Cobre
(sal
pesada)

El conten
del tubo
mantiene
transparen
la
enz
est en
medio pt
para
reaccionar
pero
enzima
desnatural
da
por
calor.

TUBOS

COMPONENTES I
(en ml)
Almidn al 1.0% 1.0

II

III

IV

VI

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

en solucin acuosa
Buffer fosfato 0.1 5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

M / pH 6.6
NaCl 0.15 M
Agua Destilada

1.4
2.0

1.4
2.0

1.4
2.0

1.4
2.0

1.4
2.0

1.4
2.0

Agregar 0.6 ml. de la enzima tratada, de cada uno de los tubos del sistema (A) a su
correspondiente tubo del ltimo sistema (B), dejar en incubacin a 37 por 20 min.

Observar
e
interpreta
r

SISTEMA C:

Todos los tubos del sistema B contienen el sustrato(almidn), buffer fosfato/ PH 6.6 , NaCl y
agua destilada; este sistema constituye un medio ptimo para la accin de la enzima. Al
agregar la solucin del primer sistema que contiene amilasa a cada tubo correspondiente del al
segundo y luego dejarlo en incubacin a 37 por 20 min, se consigue que haya una reaccin
enzima(amilasa) sustrato(almidn) siendo la temperatura un factor que aumenta la actividad
de la enzima y el NaCl cofactor de esta.

TUBOS

COMPONENTES (en ml)

II

III

IV

VI

HCl 0.05N

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

De los tubos de reaccin del 0.5

sistema (B), agregar:
Solucin yodada

Observar
e
interpreta
r

0.5

La actividad enzimtica se evidencia en el tubo 1, dado que al agregar la solucin iodada a

solucin esta viro de ser transparente a amarillenta, lo que indica que la amilasa degrado
almidn es decir hubo reaccin enzimtica; esto no sucede en los otros tubos en los que
solucin se torn azul oscura, dado que al estar desnaturalizada la enzima, el almidn no f
degradado por lo que no puede ser marcado por el yodo.

La actividad enzimtica se puede ver afectada por mecanismos desnaturalizantes lo qu

Conclusi

demuestra la naturaleza proteica de las enzimas.

I.

CUESTIONARIO:
1

Cul es el mecanismo de accin de las sales pesadas sobre la protena (enzima)?

Las sales son compuestos qumicos que se forman tras reaccionar un cido y una base,
por ello constan de una parte catinica y otra aninica. Al encontrarse en solucin estos
dos componentes se separan en el caso del sulfato de cobre, se separa el ion sulfato y el
cobre (ambos en estado ionizado, es decir inestables) por lo que pueden reaccionar
fcilmente con otros grupos qumicos, en este caso con el grupo carboxilo de las
cadenas laterales de las protenas (coo-), razn por la cual cambia la configuracin
qumica de la enzima y afecta su actividad.
2

Cmo actan los cidos y bases fuertes sobre la protena (enzima)?

Los acidos y bases cuando estn en solucin tienden a ionizarse liberando asi iones
hidrogeniones u oxidrilos, esto hace variar el PH lo que causa variacin en el grado de
ionizacin de distintos grupos funcionales (carboxilo, amino, hidroxilo, etc.)
implicados en interacciones dbiles que estabilizan la conformacin proteica. Estas
variaciones provocan la rotura de dichas interacciones (sobre todo enlaces inicos y
tambin puentes de hidrgeno) y por lo tanto la desnaturalizan.
Ejemplos:
*El HCl mantiene adecuado el Ph acido del estmago adecuado para la actividad
enzimtica de la pepsina.

Cmo acta la temperatura sobre la estructura proteica de la enzima?

Bajo ciertas condiciones de temperatura cada poli pptido asume una conformacin
especfica
Corresponde a una estructura termodinmicamente estable y un sistema organizado con
mnima energa libre. Los aumentos de temperatura provocan una mayor agitacin
molecular que hace que las interacciones dbiles que mantienen estable la
conformacin de la protena terminen por ceder con la consiguiente desnaturalizacin.

Cmo repercute la modificacin de la estructura proteica, producida por los

agentes?
Todas las protenas dada su naturaleza y configuracin necesitan de condiciones de Ph
y temperatura adecuadas que no alteren las interacciones ni fuerzas entre molculas
que mantienen la estructura proteica estable, por ello al existir modificar la estructura
proteica se ver alterada su actividad y funcin.

PRACTICA N02
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOLCTRICO DE LAS PROTENAS
I. INTRODUCCION

El punto isoelctrico es la concentracin de iones hidrgeno en el cual la protena es

elctricamente neutra, porque el nmero de cargas positivas es igual al nmero total de
cargas negativas es igual al nmero total de cargas negativas contenidas en la protena. Por
tanto cada protena posee un determinado punto isoelctrico (PI).
Cuando una protena se encuentra en diferentes soluciones que tienen valores de pH
menores, iguales o mayores al PI, la protena sufre variaciones en la constitucin de sus
grupos qumicos, producindose en consecuencia variaciones en la estructura terciaria o
cuaternaria y por tanto en su funcin biolgica. Cuando se encuentran en su PI las protenas
son menos solubles y precipitan. Aprovechando este comportamiento, se puede determinar
el PI de una protena observando los cambios de solubilidad que se producen cuando la
protena se encuentra en varias soluciones que tienen pH conocidos.
La presente prctica tiene por finalidad demostrar que el punto isoelctrico de las enzimas
es caracterstica fsico qumica comn de estas molculas, que precipitan porque la
solubilidad en estas condiciones disminuye al mnimo.
II. REACTIVOS A UTILIZAR
- NaOH al 10 %
- Acido actico 1 N
- Indicador de pH: papel indicador o pH metro
- Solucin de casena en Acetato de Sodio 0.1 N
III. PROCEDIMIENTO
Preparar el siguiente sistema
TUBOS
Reactivos(en I
II
III
IV
V
VI
VII
VIII
IX
ml)
Acido
3.2
Actico 1 N
Agua
6.8
5
5
5
5
5
5
5
5
destilada
a Mezclar el tubo N 1
b Extraer 5 ml de solucin del tubo N1 y agregar al tubo N2. Mezclar
c Extraer 5 ml del tubo N2 y trasferir al tubo N 3. Completando del mismo modo
hasta completar la serie.
d En el tubo N9 una vez efectuada la mezcla se extrae 5 ml de solucin y se elimina
e Al contenido anterior del sistema agregar rpidamente 1 ml de casena en acetato de
sodio 0.1 N en cada tubo.

Reactivos(e
n ml)
Contenido
anterior

TUBOS
I
II

III

IV

VI

VII

VIII

IX

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

Casena 0.1N 1.0

(sal)
f
g

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

el

cuadro que se da a continuacin

Observar despus de 30 minutos de reposo y anotar tambin en el cuadro respectivo
TUBOS
N

EFECTO
INMEDIATO

EFECTO
CALCULO
DESPUES DE DEL
30 MINUTOS
pH

I
II
III
IV
V
VI
VII
VIII
IX

O
+
++
+++
++
+
O
O
O

O
+
XX
XXX
X
+
O
O
O

Emplear los smbolos siguientes:

O= No cambia += opalescente
j

1.0

Mezclar al instante por inversin.

Observar el efecto inmediato que se produce en la solubilidad de la protena en los
diferentes tubos.

h
Anotar

1.0

3
4
4.25
4.5
4.75
5
6
6.5
7

CALCULO
BAJO
FORMUL
A
3.495
3.796
4.097
4.398
4.7
5.001
5.302
5.603
5.904

X= precipitado

Determinar el tubo que presenta el mximo de precipitacin, lo cual se producir en

el tubo que tiene pH prximo a la solubilidad mnima de la protena.

Luego de transcurridos los 30 minutos de reposo, verificar el pH de cada uno de los

tubos con el indicador de pH. Anotar los resultados en la columna respectiva del
cuadro anterior

Observar
e
interpreta
r

EL efecto inmediato al agregar casena a los tubos con la dilucin de cido actico a
diferentes concentraciones nos muestra que el tubo III se volvi ms opalescente; luego de
los 30 min de reposo la mayor formacin de precipitado, por lo tanto mayor insolubilidad
tambin la verificamos en el tubo III; esto ocurre debido a la diferencia de concentracin
inica y PH de cada tubo con dilucin. La formacin de precipitado responde a la
inexistencia de repulsin electrosttica lo que nos indica que la protena se encuentra en su
punto isoelctrico.

Conclusi
n

*La casena pierde solubilidad y forma mayor cantidad de precipitado a un PH de 4.5 lo que
indica el punto isoelctrico de esta protena.

IV.CUESTIONARIO
1 Seale el PI aproximado de la protena que encontr en su experimento.
El PI aproximado encontrado para la casina fue de 4.5
2 Cmo interpreta el resultado obtenido del punto isoelctrico?
Cuando el PH de la solucin es tal que la carga neta de la protena es cero, es decir
cuando el nmero total cargas negativas iguala al nmero total de cargas positivas
presentes en la molcula, se llama a este valor de punto isoelctrico, en este estado la
protena se encuentra como un zwitterion.
El indicador que nos permiti determinarlo fue la precipitacin de la protena dada por la
inexistencia de repulsin electrosttica.
3 Qu es el pK?
Es la descripcin del grado de acidez o basicidad en trminos de pH que tiene la enorme
ventaja de evitar operaciones con potencias decimales de exponentes negativos. Dado que
las constantes de equilibrio vienen dadas, por lo general, como potencias de diez, es
posible extender la idea recogida en la definicin de pH al caso de los valores de K. As,
se define el pK, para una reaccin en equilibrio, en la forma:
pK = -log K
El pK es la constante de disociacin (ionizacin) de un cido (pKa) o una base (pKb) y
mediante estos valores se puede obtener el valor del PI.
Por ejemplo:
Si consideramos un aa sencillo, este puede adoptar tres formas inicas diferentes:

El primer grupo que se disocia es el carboxilo (pK1 ) .Por la proximidad del grupo NH3+,
el COOH se comporta como un cido moderadamente fuerte y El segundo grupo en
disociarse es el NH3+. (pK2) .El pI es el pH en el que la molcula se disocia por igual en
ambos sentidos, y como equidista de los dos valores de pK, puede obtenerse por su
semisuma:

Es igual pH neutro que pK? Explique.

No, ya que el pK hace referencia a la constante de disociacin, es decir un valor en

relacin a las concentraciones inicas de los reactantes y productos en el que la reaccin
esta en equilibrio; por el contrario el Ph neutro est determinado segn la disociacin del
agua, el cual adquiere un valor de 7
5

Qu importancia tiene el PI en la purificacin de una protena?

La importancia radica en que si se conoce el PI de una protena, esta puede ser identificada
y aislada de una solucin, por ejemplo mediante la tcnica electroforesis de soporte.Esta
tcnica, consiste en crear un gradiente de pH lineal en un capilar con pared tratada que
contiene un anftero. Cada compuesto migra y se enfoca al pH que tenga igual valor que su
punto isoelctrico (al pI su carga neta es nula). Seguidamente, bajo el efecto de una presin
hidrosttica y manteniendo el campo elctrico, se desplazan las especies separadas hacia el
detector. Las altas eficiencias obtenidas con este procedimiento permiten separar pptidos
con pI que apenas difieren entre s 0.02 unidades de pH.
PRCTICA N 3
DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
I

INTRODUCCIN
Las enzimas son biocatalizadores que tienen un alto grado de especificidad y
eficiencia haciendo posible que las reacciones qumicas ocurran rpidamente
dentro de la clula a travs de vas bien definidas. Su naturaleza es proteica en el
mayor nmero de casos, salvo los ribozimas.
Para poder mostrar la actividad enzimtica se debe tener presente
fundamentalmente que cada reaccin qumica debe ser catalizada por una
enzima. El reactante o substancia qumica que reacciona para dar un producto en
un sistema enzimtico se llama sustrato.
En general, la actividad de cualquier sistema enzimtico puede ser demostrada
de dos maneras

II

III

Por el SUSTRATO RESIDUAL .Verificando el sustrato no transformado o

residual despus de un tiempo determinado de incubacin en condiciones
especficas de pH y temperatura.
2 Por los PRODUCTOS FORMADOS. Verificando los productos liberados
despus de un tiempo determinado de incubacin en condiciones especficas
de pH y temperatura
REACTIVOS A UTILIZAR
- Solucin a de almidn pH6.0 al 1 %
- Cloruro de sodio solucin 0.1 M
- Enzima al 1% (amilasa salival)
- cido Clorhdrico 0.05N
- Solucin yodada
- Reactivo de Folin Wu:
a Solucin Cprico alcalina
b Solucin fosfomolbdica
PROCEDIMIENTO
Armar el siguiente sistema:

ETAPA A:
COMPONENTES

TUBOS
I

Solucin de almidn pH 5 ml
6.0 al 1 %
Solucin de cloruro de 1 ml
sodio 0.1 M
Agua destilada
4 ml

II
5ml
1 ml
3

ml

Colocar los tubos al bao de agua a 37C por 5 minutos

- Agregar 1 ml de enzima al tubo II
- Volverlos a colocar al bao de agua a 37C durante 10 minutos

Observar
e
interpreta
r

La solucin de almidn vendr a actuar como sustrato en la reaccin cataltica que va a se

inducida, el cloruro de Sodio 0.1 M en solucin tiende a disociarse en sus iones Na + y Cl-, est
ltimo actuar como cofactor de la enzima, por ltimo el agua destilada proporciona un
ambiente acuoso para la amilasa (protena hidrosoluble).

Los tubos en bao mara adquieren una temperatura ideal para asegurar la actividad enzimtic
de la amilasa, la cual hidroliza los enlaces glucosdicos ( 1-4) del componente -Amilosa qu
unen residuos de glucosa en el almidn, forma maltosa , isomaltosa y glucosa.

ETAPA B: CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR LOS PRODUCTOS

RESIDUALES.
-Inmediatamente cumplidos los 10 minutos, armar este nuevo sistema
COMPONENTES

TUBOS
I
clorhdrico 5 ml

cido
0.05 N
De los tubos I y II 0.5 ml
de Etapa A
Solucin yodada
0.5 ml

II
5 ml
0.5 ml
0.5 ml

En esta etapa se controla la actividad enzimtica por los productos residuales.

Al agregar cido Clorhdrico se crea un ambiente cido el cual es desfavorable para la
accin enzimtica que se indujo en la etapa anterior, una vez que se agreg un volumen de los
tubos del sistema A, se suma Solucin Yodada que ser un indicados de la reaccin enzimtica:
TUBO I: Tom una coloracin azul negruzco
TUBO II: Tom una coloracin amarillo
Observar
e
interpreta
r

Conclusi
n

Los cambios en el color de cada solucin es el resultado de la formacin de cadenas de

poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo. En el primer tubo que contiene
almidn al agregar la solucin de yodo se torn a una coloracin azul negruzco esto se debe a
que en esta reaccin el yodo entra a la estructura helicoidal del almidn, es decir, que los
tomos de yodo se introduce entre las espirales provocando la absorcin o fijacin de yodo en
las molculas del almidn (amilosa). La amilosa, forma hlices donde se juntan las molculas
de yodo, un color azul oscuro.
El segundo tubo, en el que se inducimos la reaccin cataltica, tom una coloracin amarillenta
transparente, debido a que el almidn ha sido degradado por la enzima a maltosa, isomaltosa y
glucosa.

*El mtodo de control de la actividad enzimtica por productos residuales permite verificar,
valorar y determinar la catlisis de una enzima teniendo como indicador el cambio de color
de la solucin.

ETAPA C: CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMATICO POR LOS PRODUCTOS

FORMADOS
Armar el siguiente sistema:
COMPONENTES

TUBOS
I

II

De los tubos I y II etapa A

1 ml

1 ml

Solucin Cprico Alcalina

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

2 ml

2 ml

Hervir 8 minutos

Enfriar

Solucin fosfomolbdica

Agua destilada

Mezclar, observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante

*En el tubo I se agreg el producto I mas solucin cprico alcalina, esto se puso hervir y
a enfriar y nos dio un producto V de color celeste, luego se le aadi solucin
fosfomolibdica +H2O y nos dio un producto VI de color claro
*En el tubo II de le agrego el producto II ms solucin cprica alcalina, esto se puso hervir
y a enfriar y nos dio un producto VII de color naranja, luego se le aadi solucin
fosfomolibdica +H2O y nos dio un producto VIII de color azul.
*La presencia de azucares reductores como la glucosa y la maltosa reducirn al ion
cprico a cuproso el cual da una coloracin naranja; y la solucin fosfomolibdica es un
indicador de la presencia de este ion cuproso al tornar el producto a una coloracin azulada
la cual puede cuantificarse para el anlisis de glucosa.

Observar
e
interpreta
r

En el tubo I no hubo reaccin, debido a que el almidn no fue degradado hasta azucares
reductores por la nula cantidad de enzima, por ende, no hubo una reduccin del ion cprico
a cuproso siendo esto indicado por el mantenimiento del color turquesa de la solucin
cprico alcalina.
En el tubo II si hubo reaccin debido que se le aadi el producto I, el cual posee glucosa
y maltosa(degradacin del almidn por la enzima amilasa); estos reducirn el ion cprico a
cuproso tornando a la solucin a una coloracin naranja.

Conclusin

IV

*El control de la actividad enzimtica por los productos finales permite determinar el
final de una hidrlisis teniendo como indicador el color que adopta la solucin.

CUESTIONARIO

1. Qu mtodos conoce para determinar la actividad enzimtica?

La actividad enzimtica se mide por mtodos continuos y discontinuos, la presencia
de una enzima es determinada por la medida de la reaccin que cataliza, pudindose
estimar la cantidad de enzima por la velocidad de la reaccin.
TECNICAS DE ANLISIS
La tcnica analtica especfica ms empleada es la espectrofotometra ultravioleta
visible (UV-V). En la fase de retardo, inmediatamente despus de mezclar los
reactivos con la muestra biolgica no se debe medir la absorbancia, ya que es una
fase de encuentro y acoplamiento de sustrato y enzima. Puede durar de unos segundos

a varios minutos. En los productos comerciales nos indican el tiempo que dura este
perodo de retardo.
Al finalizar esta fase, comienza la fase lineal, donde la velocidad de formacin del
producto permanece constante y es en esta etapa donde se determina la actividad
enzimtica.
A medida que va transcurriendo la reaccin, llega un momento en que la velocidad
comienza a disminuir, debido a factores como el agotamiento de sustrato, el equilibrio
entre sustrato y producto y / o variaciones de pH que no han podido ser amortiguadas
por el tampn, a efectos de inhibicin del enzima, etc.

MTODOS ANALTICOS DE DETERMINACIN ENZIMTICA

En estos mtodos, no es importante un dato puntual de absorbancia sino la variacin
de la absorbancia por unidad de tiempo ocasionada por la actividad de la enzima que
se pretende analizar su actividad.
Hablamos de dos mtodos de anlisis:
- mtodos a punto final: se mide la absorbancia tras un tiempo determinado, en el
cual se estima ha tenido lugar la reaccin
- mtodo cintico: consisten en medir la absorbancia varias veces, con intervalos de
minutos; permiten comprobar que se encuentra en la zona lineal de la curva, ideal
para la determinacin; si se detectan desvos de la linealidad, de desprecian alguna de
las medidas finales de absorbancia.
Muchos mtodos de determinacin se basan en la medida de absorbancia de
cofactores, que median en la reaccin: complejos NAD-NADH; o NADP-NADPH.
2. Explique la accin bioqumica de cada uno de los componentes en los pasos
seguidos para determinar la actividad enzimtica.
ETAPA A:
1. ALMIDN (SUSTRATO): Es un polisacrido de reserva ms abundante en
vegetales y constituye la principal fuente de nutricin glicdica para la
humanidad. Los almidones estn constituidos por una mezcla de dos
componentes:

Amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas

por enlaces (1,4).

Amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo

(1,4) con numerosas ramificaciones (1,6). El polmero contiene
unas 1000 unidades de glucosa.

2. CLORURO DE SODIO (COFACTOR): La -amilasa contiene cloro en los

restos aminoacdicos de su sitio activo, y por ello, al agregar NaCl, los aniones
cloruro se unen al sitio activo aumentando la actividad enzimtica. Es decir, el
cloro acta como cofactor de la enzima.
3. AGUA DESTILADA: Es empleada es para lograr un medio acuoso favorable
para la actividad enzimtica.
4. AMILASA SALIVAL (ENZIMA): Es una protena enzimtica presente en la
saliva. La alfa-amilasa cataliza la hidrlisis de la cadena lineal de la amilosa y
la amilopectina del almidn, rompiendo al azar los enlaces (1,4) del interior
de la cadena (endoamilasa) para formar una mezcla de dextrinas; ya que no
ataca los enlaces (1,6) de la amilopectina, por ello se la conoce como
enzima dextrinognica (mezcla de amilodextrina, eritrodextrina, acrodextrina y
maltodextrina) con poca produccin de maltosa.

ETAPA B: CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMTICA POR EL SUSTRATO

RESIDUAL

5. CIDO CLORHDRICO: Crear un ambiente cido que inhibir la accin de

la enzima y detendr la reaccin cataltica, pues el pH para que la enzima
catalice la reaccin vara entre 6,7 y 7,2 entonces al bajar el pH la accin
enzimtica se inhibir , incluso pudiendo desnaturalizarse la enzima si el pH se
vuelve muy cido.
6.SOLUCIN YODADA: Solucin de iodo/ioduro de potasio (I 2/IK. El iodo se
coloca en el interior de la hlice que forma la amilosa (en las regiones
hidrofbicas), formando un complejo de color azul. Cuando la -amilasa acta,
degrada la amilosa, se desintegra la hlice y por tanto en presencia de I2/IK ya
no dar una coloracin azul y por ello no se produce cambio de color y se
observa amarillo.

ETAPA C: CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMTICA POR LOS PRODUCTOS

FORMADOS ( FOLIN WU)

1. SOLUCIN CPRICA ALCALINA: Los azcares reductores, en medio

alcalino, son capaces de reducir el ion Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo.
Para ello el grupo carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo. En medio
fuertemente bsico como en nuestro caso el NaOH el in Cu2+ formara Cu
(OH)2 insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+. El ion cprico es reducido a
Cu1+ por compuestos reductores(azucares) con formacin de hidrxido cuproso
amarillo o de xido cuproso rojo. El cambio de coloracin o la formacin de
un precipitado rojo-ladrillo (Cu2O) indica la presencia de un compuesto
reductor.
2. SOLUCIN FOSFOMOLBDICA: La cual tambin nos indicar si es que
hay reduccin del Cu2+ siempre y cuando haya producto. El cido
fosfomolbdico ser reducido por el xido cuproso a cido fosfomolbdoso, que
es de color azul, lo que confirmar que hay presencia de producto.
3. Elabore una grfica de la accin de una enzima sobre su sustrato, con la energa
de activacin y el estado de transicin.

ALMIDON
AZUCARES REDUCTORES

4. Haga una lista de todos los componentes de un sistema enzimtico y defnalos

SUSTRATO:

Es cualquier compuesto qumico sobre la cual acta una enzima, se une al sitio
activo de la enzima, y se forma un complejo enzima-sustrato,dicho de otra forma, las
enzimas se encargan de catalizar las reacciones qumicas que involucran a su sustrato.
PRODUCTO:
Es la molcula o molculas finales de una ruta metablica, se forman tras la accin
cataltica de la enzima sobre el sustrato.

APOENZIMA:
Parte proteica de una enzima sin ninguno de los cofactores o grupos prostticos
orgnicos o inorgnicos que puede modificar la actividad cataltica
ENZIMAS:
Son protenas complejas que producen cambios qumicos especficos en algunas
sustancias, sin que exista un cambio en ellas mismas. Como por ejemplo: las enzimas
pueden convertir los almidones y azucares en sustancias que el cuerpo pueda utilizar.

COFACTORES:

COENZIMA:
Son cofactores orgnicos no proteicos, termoestables, que unidos a una apoenzima
constituyen la holoenzima o forma catalticamente activa de la enzima.
GRUPO PROSTETICO:
Molcula que se une de manera estable a una enzima mediante fuerzas covalentes, los
ms comunes son los metales.
COFACTORES:
Molcula que se une de manera transitoria y disociable a la enzima, los ms comunes
son los iones metlicos.
5.- Cul es la importancia clnica de la medicin de la actividad enzimtica? De
ejemplo
En el laboratorio es mucho ms prctico medir la actividad de una enzima que medir su
cantidad en el suero. Revela mucho mejor la presencia y el accionar de esta. Por este

motivo la medicin de la actividad enzimtica constituye un poderoso mtodo para

diagnosticar algunas patologas, pero tambin sirve para evaluar el proceso en una
enfermedad y brindar un posible tratamiento.
Las mediciones de enzimas son importantes para el diagnstico y monitoreo de
enfermedades del hgado, pncreas, msculo esqueltico y hueso entre otras,
Por ejemplo:
En el caso de intolerancia a la lactosa, se realiza Test sanguneo de sobrecarga de
lactosa
Primero al paciente se le hace una extraccin de sangre para conocer su glucemia basal
(nivel de glucosa en sangre inicial). Despus,se le suministran 100 gramos de lactosa
en una solucin con agua. Seguidamente pasados 60 y 120 minutos se toman de nuevo
muestras de sangre. Si no se produce la liberacin de la glucosa -por la ausencia de la
accin de la lactasa que debera estar en el intestino- no se produce una absorcin de
la glucosa al torrente sanguneo a travs de la pared intestinal y por tanto no se
incrementa el nivel de glucosa en la sangre y por tanto se puede decir que existe una
intolerancia a la lactosa. Se puede afirmar que existe intolerancia a la lactosa si la
glucemia (nivel de glucosa en sangre) despus de la toma de la lactosa no sube ms de
14,4mg/dl (0,8mmol/l) respecto al valor basal (inicial).
Otro ejemplo que podemos citar es la deficiencia de la enzima glucosa 6 fosfato
deshidrogenasa, en este caso se puede realizar el estudio de dicha enzima en
suspensin eritrocitaria, utilizamos el mtodo de breger que se fundamenta en la
reduccin del azul de metileno por la mencionada enzima, el resultado es la prdida
del color azul en el colorante al final de la reaccin lo que ocurre si hay integridad en
dicha enzima.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

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