Carbohidratos Totales Disponibles (Clegg-Anthrone).

Este mtodo determina la cantidad de carbohidratos totales,

basndose en su contenido de almidones hidrolizables y
azcares solubles.
Reactivos
Solucin de cido perclrico al 52 %. 279ml de cido
perclorico (grado especfico 1.70) en 100 ml de agua
destilada; deje enfriar antes de usar.
Solucin de cido sulfrico. 760ml de H2SO4(grado
especfico 1.84) en 330ml de agua destilada; deje enfriar
antes de usar.
Reactivo Anthrone. Prepare suficiente reactivo Anthrone
preparando una solucin de cido sulfrico al 0.1 % con el
fin de usarla el mismo da.
Solucin estndar de glucosa. Disuelva 100mg de glucosa en
100ml de agua.
Solucin estndar de glucosa diluida. Diluya 10ml del
estndar de glucosa a 100 ml de agua destilada (1ml =

Procedimiento
Extraccin:
Pese con aproximacin de 0.001g 1.0g de muestra seca
2.5g de muestra hmeda conteniendo aproximadamente de
60 a 300 mg de carbohidratos totales disponibles.
Transfiera cuantitativamente a una probeta graduada de
100 ml con tapn.
Adicione 10 ml de agua y agite con una varilla de vidrio para
dispersar la muestra.
Adicione 13 ml de la solucin de cido perclrico. Agite
constantemente con la varilla de vidrio durante 20 minutos.
Enjuague la varilla con agua destilada y lleve el volumen a
100 ml. Mezcle y filtre a un matraz volumtrico de 250 ml.
Enjuague la probeta graduada con agua destilada y adicione

Determinacin:
Diluya 10 ml del extracto a 100 ml con agua
destilada. Con una pipeta pase a un tubo de ensaye
1 ml del filtrado diluido.
Tome con la pipeta dos muestras de 1 ml de agua
destilada que servirn como blancos por duplicado y
coloque cada uno de ellos en un tubo de ensaye.
Tome dos blancos duplicados de 1 ml usando la
solucin de glucosa diluida.
Agregue rpidamente a todos los tubos 5ml de
reactivo de anthrone recin preparado. Tape los
tubos y mezcle vigorosamente. Colquelos en un
bao mara y caliente durante 12 minutos.
Enfre
rpidamente
a
temperatura
ambiente.
Transfiera
la
solucin
a
celdas
para
espectrofotmetro de 1 cm. El color verde es estable
slo por 2 horas.
Lea la absorvancia a 630 nm contra el blanco.

Clculos
Carbohidratos totales disponibles (% de glucosa)
= (25 b)/(a W)
Donde
W = Peso en g de la muestra.
a = Absorvancia del estndar diluido1.
b = Absorvancia de la muestra diluida.

Determinacin de carbohidratos totales disponibles