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Lo primero que realizamos para llevar a cabo el experimento era ordenar el espacio donde debamos
trabajar y organizar el procedimiento y materiales que bamos a utilizar. Luego, lemos la gua y
anotamos los datos importantes para el experimento, entre sos datos se encuentra los diferentes
reactivos y el tiempo en que se realizaba cada procedimiento.
Establecimos el objetivo del experimento que es extraer la nucleoprotena de la levadura a travs de
ciertos mtodos de separacin.
El procedimiento se llev a cabo as:
1. Usamos una esptula metlica pequea para extraer la masa de la levadura indicada. Tarareamos
la balanza con el mortero que bamos a utilizar. Y le aadimos levadura hasta que alcanzara 5
gramos. Despus trituramos la levadura hasta alcanzar una textura ms polvosa.
2. En otro mortero agregamos de 10 a 12 portaobjetos y los trituramos hasta lograr un polvo de vidrio.
3. Aadimos 10 gotas de ter y 10 gotas de agua con un gotero; y adems le aadimos una
cucharadita de arena de vidrio, y trituramos durante 15 minutos.
4. Agregamos 30 ml de la solucin: hidrxido de sodio concentrado al 0,4%. Seguimos triturando la
mezcla con el piln durante 15 minutos ms.
5. Al terminar de triturar, observamos que la textura de la mezcla era ms uniforme. Repartimos la
mezcla en 3 tubos de ensayo, y lo colocamos en la gradilla para movilizarlo a la mquina de
centrifugacin.
6. Al movilizarnos y localizar la mquina, seguimos el consejo de la profesora de laboratorio, que
consista en mantener estable el soporte en donde colocamos los 3 tubos de ensayos junto a otro
grupo, es decir haban 6 tubos de ensayo y lo alineamos de manera que consigamos estabilidad en
el soporte. Ajustamos el tiempo en 10 minutos a 2500 r.p.m y esperamos. Mientras algunos
miembros del grupo esperamos hasta que se finalizara de centrifugar, el resto del grupo preparaba
12ml de solucin de cido actico al 5% con ayuda de una probeta graduada.
7. Al pasar los 10 minutos de centrifugacin, con ayuda de un gotero se extrajo de los tres tubos de
ensayo, el sobrenadante (la fase superior de la mezcla, la ms liviana) y se coloc en un vaso
qumico.
8. Se verti el cido actico al 5% preparado anteriormente en el vaso qumico y con ayuda de un
policial agitamos constantemente durante 5 minutos hasta observar un precipitado.
9. La mezcla dentro del vaso qumico se reparte nuevamente en 3 tubos de ensayo y se lleva a cabo
otra centrifugacin de 10 minutos a 2500 r.p.m.
10. Colocamos el precipitado en un matraz Erlenmeyer listos para ser utilizado en la mezcla en una
reaccin de hidrlisis.
11. Finalmente, al tener la muestra en el matraz Erlenmeyer se le agregan 15 ml de cido sulfrico al
5% medido con una probeta graduada.
Completamos el paso de preparacin. Al no concluir con la prctica de laboratorio. Los siguientes pasos
sera el posible mtodo de la cual proseguiramos.
Estableceramos nuestro objetivo del segundo proceso que es hidrolizar la nucleoprotena, lo cual se
llevara a cabo los siguientes pasos:
1. El matraz se cierra con un refrigerante de reflujo y despus se hierve con precaucin con el
mechero de Bunsen durante 1 hora.
2. Esperamos a que se enfre y lo filtramos en un embudo, debajo de l se pondr un vaso qumico
para recuperar lo filtrado.
3. Despus de que se haya filtrado la mezcla lo mayor posible, sta estar dispuesto a ser
analizado en la hidrlisis.
Nuestro siguiente objetivo es identificar las protenas sencillas. Lo lograramos con los siguientes pasos:
1. Preparamos dos tubos de ensayo, en el primero se verter 0,5 ml de hidrxido filtrado medidos
con una pipeta graduada, para neutralizarla debemos desprender de 12 a 15 gotas de hidrxido
de sodio al 10% de un gotero, con ayuda de un papel tornasol para medir pH.
2. En el siguiente tubo de ensayo se verter 1 ml de hidrolizado, medidos nuevamente con la pipeta
graduada limpia, con 10 gotas de NaOH, nuevamente con el gotero limpio, aadimos de 0,3 a 1
ml de reactivo Millon (mercurio y cido ntrico) medidos previamente con una pipeta graduada.
Calentamos el tubo de ensayo dentro de un vaso qumico con agua con ayuda del mechero de
Bunsen y esperamos a que la reaccin sea positiva, que debe aparecer como un precipitado de
color rosado o rojo ladrillo.
Posteriormente estableceramos el otro objetivo para nuestro experimento, lo cual sera identificar las
pentosas. Proseguiramos a los siguientes pasos:
1. Preparamos un tubo de ensayo limpio en donde se verter 0,5 ml de hidrolizado medidos
previamente con una pipeta graduada, y lo neutralizaramos con ayuda del papel tornasol para
medir pH.
2. Aadimos 0,5 ml de reactivo de Fehling. Lo agitamos y lo calentamos dentro de un vaso qumico
otra vez con la ayuda de un mechero de bunsen por 5 a 10 minutos. Esperamos la formacin de
un precipitado rojo amarillo de xido cuproso.
Ulteriormente fijamos nuestro siguiente objetivo sera identificar las bases pricas.
1. Agregamos 2 ml del hidrolizado en un tubo de ensayo y por consiguiente con ayuda de otro
papel ph tornasol lo neutralizamos aadiendo de 5 a 6 gotas de amonaco concentrado.
2. Despus le agregamos 0,5 ml de solucin de nitrato medidos con una pipeta graduada de plata
en amoniaco al 3%. Debemos observar la formacin de un precipitado blanco en forma de copos,
stos estarn constituidos de nitrato de plata en amoniaco al 3%.
Finalmente, como ltimo objetivo identificaremos el cido fosfrico. Se lograra al realizar por
consiguiente ste paso:
1. En un tubo de ensayo se verter 2 ml de hidrolizado, lo cual se aadir 3 ml de molibdato de
amonio medidos con una probeta graduada o pipeta graduada y 1 ml de cido ascrbico
medidos con los mismos instrumentos pero limpiados anteriormente. Luego se mezcla con un
policial y se lleva a bao Mara. Se debe observar una coloracin azul que nos indicar la
presencia de fosfatos.
RESULTADOS
Parte I
Durante el experimento se llevaron a cabo varios procesos los cuales produjeron algunos resultados
bastante favorables con respecto a la gua.
Comenzamos con la trituracin de la levadura junto a los tres ingredientes dichos anteriormente y luego
observamos que la levadura se iba haciendo ms fina con el paso del tiempo y desprenda un olor cada
vez ms intenso.
Ms tarde se le agreg [NaOH] hidrxido de sodio con el cual pas a convertirse en una mezcla
pastosa; ya que antes no tena una fase lquida, slo era slida; porque los componentes aadidos eran
slidos y voltiles.
Luego de distribuirse en los tubos de ensayo para centrifugarse, se observaron dos fases de la mezcla,
el sobrenadante (fase lquida visible) y el precipitado (fase slida, parte de levadura y arena de vidrio).
Al agitarse el sobrenadante con el cido actico en un vaso qumico se observ una formacin de
burbujas en donde la mezcla se haca ms homognea, el cual nos tom un poco de tiempo ya que el
sobrenadante tena una forma similar a la clara del huevo y este era bastante difcil de mezclar e
incorporarse, ms tarde paso a la centrfuga nuevamente para obtener un precipitado.
En este caso se observaron dos fases, nuevamente del cual el sobrenadante fue desechado y se
recuper el precipitado para la reaccin de hidrlisis.
Al retirar el sobrenadante del tubo de ensayo, el precipitado estaba tan espeso que no sala con
facilidad del tubo, por lo que debimos adicionar cido sulfrico para hacer una mezcla ms diluida y
poder transferirlo al Erlenmeyer.
Parte II
***Los resultados descritos a continuacin son los posibles resultados de la II parte del laboratorio de
los nucletidos ya que an no se han hecho***
Para hidrolizar las nucleoprotenas se divide la sustancia en varias partes y se hacen varias pruebas,
donde en el primero, se arma un equipo de reflujo donde se coloca la mezcla anterior que fue guardada
y luego fue hervido, dejando una sustancia reducida el cual se dej enfriar y luego se filtr para su
anlisis.
Se utiliz la prueba de Biuret para el anlisis de los pptidos y otra prueba de Millon que se utiliza para
el reconocimiento de la tirosina, ambas dan resultados positivos.
La prueba de Biuret la conocimos en experimentos anteriores y este nos da un color violeta y la prueba
de Millon da un resultado de color amarillo.
Se da otra prueba conocida como Fehling que tambin da positiva a un color amarillo xido, el cual es
utilizado para identificar las pentosas.
En otra prueba utilizando amonaco concentrado y se forma un precipitado blanco en forma de copitas.
Este se da para la identificacin de bases pricas.
Y se da una ltima prueba con el objetivo de identificar el cido fosfrico, en el cual se utiliza molibdato
de amonio y acido ascrbico. Al indicar la presencia del acido fosfrico o fosfatos, este se torna un color
azul.
REACTIVOS QUIMICOS
UTILIZADOS EN LA I PARTE
DISCUSIN
Con los resultados obtenidos; nuestro anlisis de los procesos qumicos que ocurren
nanoscpicamente, podemos explicar que:
I.
El ter ms la arena de vidrio rompe los enlaces de hidrgeno de las macromolculas, para la
posterior desnaturalizacin de las protenas.
II.
El hidrxido de sodio no tiene parte en la reaccin de la primera fase (no se coagula), pero
permite que se realice posteriormente la prueba de Biuret.
III.
IV.
V.
VI.
VII.
La prueba de Biuret, esta reaccin se caracteriza por un color prpura, cuando los iones cpricos
son unidos por los enlaces peptdicos a pH alcalino.
VIII.
La prueba de Millon (parte de mercurio en cido ntrico) lo cual produce nitrato de mercurio el
cual en un medio fuertemente cido reacciona con el OH de la tirosina(aminocido) produciendo
una coloracin roja intensa.
IX.
X.
XI.
El grupo fosfato se identifica por la reaccin para fsforo inorgnico, en medio cido, con el
molibdato da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el cido ascrbico a azul
de molibdeno, todo esto en un bao mara.
Biolgicamente existen seis bases nitrogenadas primordiales, las cuales se clasifican en tres
grupos: bases isoaloxaznicas (derivadas de la estructura de la isoaloxazina), como la flavina (F);
bases pricas o purinas (derivadas de la estructura de la purina), como la adenina (A) y
la guanina (G); y bases pirimidinas (derivadas de la estructura de la pirimidina), como la timina (T),
la citosina (C) y el uracilo (U).