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Estimation of kinetic parameters of

Saccharomyces cerevisiae in batch
fermentation during different growth
conditions
DATASET SEPTEMBER 2013

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2 AUTHORS, INCLUDING:
Miguel Alejandro Muoz Flores
Universidad Tecnolgica de Chile
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Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Estimacin de parmetros cinticos de Saccharomyces cerevisiae en sistema de

fermentacin Batch bajo distintas condiciones de crecimiento
Miguel Muoz, Gustavo Catrilaf.
Laboratorio de Ingeniera en fermentaciones, Departamento de Ingeniera en Biotecnologa, rea de
procesos agroindustriales. Universidad Tecnolgica de Chile, Av. Vicua Mackenna 3864 con Camino
Agrcola, Santiago, Chile.

Resumen. Durante el proceso de fermentacin aerobia, se estudiaron los efectos de la temperatura,

pH, medio enriquecido, concentracin de azcares, limitacin de oxgeno, en los parmetros de
crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae en distintas condiciones de cultivo. Para evitar
comenzar con fase lag (>1h), se inici la fermentacin con un cultivo previo al fermentador, por lo
que las levaduras comenzaron la fermentacin tan solo una hora despus de la inoculacin. La
temperatura fue una de las variables ms importantes, sin embargo, los efectos de las
concentraciones de azcares y el pH fueron tambin significativos. Desde el comienzo de la
fermentacin, se utiliz 37C como temperatura ptima para estas levaduras, las cuales despus de
3 horas fueron sometidas a un shock trmico, aumentando en 15C por sobre la temperatura ptima,
llegando a los 52C. Los principales resultados con respecto al shock trmico fueron la disminucin
progresiva de la biomasa a los 20 minutos bajo shock trmico, quedando con una concentracin de
biomasa de 2,1gL-1 despus de 4,5horas de fermentacin, y adems, la determinacin de azcares,
confirm una desaceleracin en el consumo de stos desde el comienzo del shock trmico,
quedando con una concentracin de 0,182gL-1 una vez alcanzadas las 3 horas y 20 minutos de
fermentacin. Adicionalmente, con estos datos, se pudo obtener parmetros cinticos, tales como la
velocidad especfica de crecimiento (0,188h-1) los cuales fueron de gran importancia para entender
el crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae en el proceso de fermentacin aerobia.
Palabras clave: fermentacin aerobia, shock trmico, Saccharomyces cerevisiae, velocidad
especfica de crecimiento ().
Abstract. During the aerobic fermentation process, the effects of temperature, pH, enriched media,
sugar concentrations, oxygen limitations, in the growth parameters of Saccharomyces cerevisiae
under different culture conditions were studied. To avoid starting with lag phase (>1h), the
fermentation started with a culture previous to the fermentator, thus the yeast started the
fermentation just one hour after the inoculation. The temperature was one of the most important
variables, however, the effects of the sugar concentrations and the pH were also significant. From
the begining of the fermentation, 37C were used as optimal temperature for the yeast, which after 3
hours were under heat shock, increasing 15C over the optimal temperature, reaching 52C. The
main results with respect to the heat shock were the progressive decrease of the biomass at the 20
minutes under heat shock, with only 2,1gL-1 of biomass concentration left after 4,5 hours of
fermentation, and also, the sugar determination, confirmed a deceleration in the sugar consumptions
from the begining of the heat shock, with only 0,182gL-1 of concentration left once the 3 hours and
20 minutes of fermentation were reached. Additionally, with the obtained data, kinetic parameters
were obtained, such as the specific growth rate (0,188h-1) which were helpful to understand the
Saccharomyces cerevisiae growth in the aerobic fermentation process.
Key words: aerobic fermentation, heating shock, Saccharomyces cerevisiae, specific growth rate ()

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

1 Introduccin.
Para un cultivo de biomasa ya sea levadura o
bacterias se necesita un reactor o fermentador
la cual ser la herramienta principal para la
produccin de esta. ste provee todas las
condiciones necesarias para el cultivo,
tales como
agitacin,
regulacin
de
temperatura, suministro de oxgeno, entradas
para adicin de nutrientes, control del pH, etc.
Estas diversas condiciones de crecimiento
fueron realizadas por distintos grupos en el
laboratorio, condiciones las cuales se pueden
encontrar los efectos de la temperatura, sub
ptima (o ambiente), temperatura crtica
(shock trmico), concentraciones de azcares,
medios enriquecidos, limitacin de oxgeno,
entre otros.
Por otra parte, cuando se habla de sistemas
de cultivo o, tambin, mtodos de cultivo, se
hace referencia al modo de operar
el biorreactor, en este caso de cultivo en lote o
cultivo Batch. El cultivo Batch es el
crecimiento de microorganismos en un
volumen fijo de nutrientes que continuamente
es alterado hasta su agotamiento por el
crecimiento. Se realiza sin intercambio de
materia con los alrededores. Este sistema
ofrece como principal caracterstica su
simpleza, tanto desde el punto de vista de
equipo necesario como de su operacin. Al
mismo tiempo, esta modalidad de cultivo
presenta limitaciones, como la falta de control
sobre diversos parmetros del cultivo y el
hecho que las clulas se desarrollan en un
estado fisiolgico poco definido y cambiante.
El cultivo que se desea realizar es de la
levadura Saccharomyces cerevisiae, la cual es
una de las ms utilizadas en diversos procesos
de la industria alimenticia, como en las
fermentaciones del vino, en donde tiene un
fuerte papel en el efecto de la calidad y el
sabor final del producto (Arroyo-Lopez et al).

Este microorganismo es mesofilo, por lo que

crece a una temperatura entre 30 y 40 grados
Celsius, siendo la temperatura ptima 37
grados aproximadamente (Paul Held, et. al).
Se obtendr la curva de crecimiento de
biomasa la cual se ocupa el mtodo de peso
seco y turbidimetra para verificar este, se
medir los azucares reductores con el mtodo
de Miller o DNS y a travs de las distintas
ecuaciones utilizadas para este tipo de cultivo,
se conocern los distintos parmetros
cinticos de esta levadura, como velocidad
especifica de crecimiento, rendimiento, etc.
Adems de medir estos parmetros cinticos,
se llevara la levadura a un aumento de
temperatura a 15C sobre la temperatura
ptima, llegando a los 52C y se observar el
comportamiento de esta, el tiempo estimado
en la cual se realizara en la tercera hora.
2 Objetivos
Objetivo general
-

Conocer el efecto de diversas

condiciones de cultivo, tales como
temperatura, la concentracin de
azucares, limitacin de oxgeno, entre
otros, en la cintica de crecimiento de
Saccharomyces cerevisiae.

Objetivos especficos
-

Establecer las condiciones de cultivo

que alterarn significativamente el
crecimiento de la S. cerevisiae.
Realizar el cultivo en las condiciones
escogidas, verificando que solo un
parmetro o condicin sea el que
tenga un efecto significativo en el
crecimiento.
Obtencin de los parmetros cinticos
despus de realizar los cultivos con las
condiciones escogidas.

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Materiales y mtodos
Figura 1: Diagrama de flujo de la metodologa experimental y analtica.

Figura 1: Se puede observar que despus del inicio de la fermentacin comienzan las metodologas analticas de determinacin de la
concentracin de biomasa y de concentracin de azcares. Se decidi hacer toma de muestra cada 30 minutos y despus del shock
trmico cada 10 minutos debido a la disponibilidad de laboratorio el da del prctico. El cultivo finalmente fue realizado en matraz
Erlenmeyer debido a que cuando se debi originalmente iniciar la fermentacin se tuvieron problemas con el reactor.

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Metodologas
Experimental
Medicin de parmetros en biorreactor
mediante software micro CU System.
pH:
Para la medicin de pH primero es necesario
calibrar el electrodo propiamente tal, para ello
se debe ir al men de Calibration, una vez
ah se debe elegir modo manual (manually),
sumergir el electrodo en el buffer de pH 7.0,
esperar el aviso de que la medicin se ha
llevado a cabo, y luego realizar el mismo
procedimiento con el buffer de pH 4.0 o 9.0
dependiendo del rango del proceso. Medir la
temperatura del buffer y hacer click en
TEMP. Ingresar la temperatura medida como
valor de referencia para la calibracin y
confirmar con ok.
Temperatura:
Para el control de la temperatura, es necesario
dirigirse al men de controlador (Controller)
hacer click en TEMP y digitar la temperatura
deseada, en este caso se utiliz una
temperatura de 37C, considerada como
ptima, y luego de 52C para el shock
trmico. Para habilitar el agua de
enfriamiento, se debe hacer click en Therm
fill, para que el suministro de agua fra pueda
llenar el ciclo del termostato.
Aireacin-Oxgeno:
Para controlar la aireacin y/o oxgeno, se
debe ir al men de controlador (Controller) y
hacer click en pO2 controller. Ajustar el
porcentaje de O2 a utilizar, click en ok.
Agitacin:
Para controlar el agitador, se debe ir al men
de controlador (Controller) y hacer click en
STIRR Controller, ingresar un valor de rpm,

habilitar la velocidad de agitacin en modo

automtico y confirmar con ok.
Shock Trmico:
Consideraremos como shock trmico el
aumentar la temperatura por 15C por sbre la
temperatura ptima (37C) para estimar los
parmetros cinticos con crecimiento crptico.
Para ello se elevar la temperatura en el
momento en que la fase exponencial est
llegando a su fin, o al menos se interrumpir
esta. Por estimaciones bibliogrficas, se
realizar el shock trmico cercano a las 3
horas de crecimiento.
Analtica
Determinacin de turbidimetra
Este mtodo se basa principalmente en
la medicin de la cantidad de luz
dispersada o transmitida a travs de un
cultivo bacteriano
Para la determinacin de biomasa con el
mtodo de turbidimetria, se sacaran muestra
del reactos cada 30 min, la cual se harn
diluciones de 1:9 (1 ml de muestra y 9 ml de
agua destilada), la cual se medira en el
espectrofotmetro a 640 nm.
Se realizara un blanco en la cual tendr la
misma dilucin, con 1 ml de medio de cultivo
y 9 ml de agua.
Peso seco
Curva de calibracin
Para la obtencin de biomasa, es necesario
realizar previamente una curva de calibracin,
sta ser realizada por el grupo del cultivo
control.
La curva de calibracin se realiza obteniendo
8 muestras del cultivo cada ciertos intervalos

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

de tiempo, estas muestras de 12 ml cada una

se deben depositar 12 ml en un tubo Falcon,
los cuales deben ser refrigerados para su
posterior utilizacin. Al momento de obtener
el total de muestras, estas deben ser
descongelas y 2 ml deben ser medidos en el
espectrofotmetro
para
registrar
su
absorbancia y los 10 ml restantes de cada
muestras deben ser destinados para obtencin
de biomasa por seco.

10. Registrar masa y restrsela a la masa

del capacho rotulado previamente para
as obtener la masa final.

Para obtencin de biomasa por pes seco se

deben realizar los siguientes pasos:

13. Construir un grfico de concentracin

versus absorbancia.

1. Llevar los 8 tubos con muestra a la

centrifuga por 1 minuto a 5000 rpm
2. Luego retirar el sobrenadante y solo
dejar el pellet
3. Agregar a los tubos agua y re
suspender en un vortex
4. Realizar este procedimiento las veces
que sea necesario, generalmente se
realiza tres veces
5. Hacer recipientes de papel aluminio
(capachos), masar y rotular cada
recipiente
6. Volver a re-suspender y verter el
contenido en un capacho rotulado
7. Llevar los capachos a una estufa a 180
C por 12 horas.
8. Trascurrido el tiempo retirar
capachos e introducirlos en
desecadora para prevenir que
muestras absorban la humedad
ambiente

los
una
las
del

9. Retirar un capacho de la desecadora y

llevarlo a balanza analtica

11. El resultado de masa final dividirlo

por el volumen de la muestra, para as
obtener la concentracin de biomasa
final
12. Realizar el mismo procedimiento con
los recipientes restantes.

Determinacin de Biomasa:
Para la obtencin de biomasa es necesario
realizar el siguiente procedimiento:
1. tomar muestras del cultivo cada
ciertos intervalos de tiempo y
rotularlas de la siguiente forma
muestra 1, muestra 2, etc.
2. cada muestra debe ser llevada al
espectrofotmetro.
3. El espectrofotmetro debe contener
dos blancos, los cuales son dos
cubetas cada una con agua destilada
ubicadas una en el extremo superior y
la otra en el extremo inferior del
recipiente de lectura.
4. Tomar una cubeta limpia y sin rayas,
agregar aproximadamente 1 ml de la
muestra 1 y registrar su absorbancia.
5. Realizar el mismo procedimiento con
todas las muestras.
6. Llevar los valores registrados al
grafico construido con la curva de
calibracin y obtener el valor de
biomasa para cada muestra.

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Determinacin de biomasa por peso seco

Material:

Bioreactor
Procedimiento:

Muestra microbiolgica.
3 tubos Eppendorf (vol. 15 mL).
3 pipetas (vol. 10 mL).
3 propipetas.
Agua destilada.

Previamente a la utilizacin del

Bioreactor para el proceso biolgico,
es necesaria una esterilizacin del
equipo para evitar contaminaciones.
Para esto se debe disponer el reactor a
autoclavado por un perodo de 15
minutos y a una temperatura de
120C.

Estufa.

Mtodo de DNS

Centrfuga.

Elaboracin del reactivo DNS:

Balanza analtica.

Disolver 4g de NaOH en 250ml de agua

destilada ayudado por un agitador magntico
y calentamiento.

Procedimiento:
Tomar 10mL de la muestra inicial, o
problema, y llevarlos a un tubo Eppendorf
previamente masados. Estos tubos se llevan a
una centrfuga por un perodo de 10 minutos
con una velocidad de agitacin de 4000 rpm.
Una vez finalizado el proceso de agitacin, se
elimina el lquido sobrenadante y se rellena la
muestra con agua destilada hasta el volumen
inicial (10 mL), ste proceso se realiza por
triplicado. Una vez realizada la tercera
aforacin se lleva el tubo a la estufa a una
temperatura de 105C por un perodo de 12
horas o hasta que la masa sea constante.
Luego de terminar el secado, se determina la
masa en una balanza analtica.
La biomasa se obtendr con la siguiente
ecuacin:
(

Esterilizacin previa del bioreactor

Materiales:
Autoclave

1. Disolver 75gr de tartrato de

sodio y potasio junto con el
NaOH.
2. Agregar
2,5grcido
dinitrosalisilico poco a poco en
bao termo regulado a 50C.
3. Dejar disolver durante 30min o
hasta que no existan grumos.
4. Filtrar al vaco mediante
membrana.
Elaboracin de la curva de calibracin:
1. Preparar
por
duplicado
soluciones de glucosa anhidra
con
las
siguientes
concentraciones. 0,0 mg/l
(blanco), 0,2 mg/l, 0,4 mg/l,
0,6 mg/l, 0,8 mg/l y 1,0 mg/l.
2. Leer la absorbancia en espectro
fotmetro utilizando 540nm de
longitud de onda.
3. Graficar datos ABS vs
CONCENTRACION.
4. Agregar lnea de tendencia
lineal y obtener la ecuacin del
grfico, Y=mX+b.

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Medicin de un analito:
1. Tomar 2ml de muestra
problema utilizando una micro
pipeta.
2. Centrifugar por 3min a
3000rpm.
3. Colocar 1ml de la muestra en
matraces aforados de 50, 100 y
200 ml y aforar.
4. Se colocara 1ml de las
muestras anteriores en 3 tubos
de ensayo respectivamente.
5. Adicionar 3ml del reactivo
DNS
a
cada
tubo
(procedimiento por triplicado).
6. Paralelamente se debe preparar
un blanco que llevara 1ml de
agua destilada y 3ml de DNS
7. Dejar calentar los tubos de
ensayo a analizar a 100C por
5min y luego dejar enfriar.
8. Aadir 6ml de agua destilada a
cada tubo de ensayo.
9. Llevar a espectrofotmetro de
absorcin molecular y medir a
540nm. (ajustar el auto cero
con el blanco preparado
anteriormente).
*De las 3 diluciones analizadas se optar por
la que este en el rango de absorbancia
establecido (0,200 0,800). El procedimiento
antes descrito se realizara slo con la dilucin
determinada (50 o 100 0 200 ml)
Materiales:

2 Micropipetas de 1000 l
3 pipetas de 10 ml
3 propipetas
10 gotarios
2 Tubos de en ensayo de 5 ml
12 tubos de ensayo de 10 ml
2 Vasos precipitados de 500 ml
1 Matraz aforados de 50, 100 y 200 ml
4 Cubetas de vidrio
1 Mecheros

1 Trpodes
1 Centrifuga
1 Espectrofotmetro UV visible.
1 caja de guantes talla s
Parafilm
2 picetas de agua destilada
1 piceta de alcohol al 70 %
1 termmetro
2 gradillas

Manejo matemtico:
Luego de obtener los resultados del espectro
fotmetro, estos se deben reemplazar en la
ecuacin arrojada por la curva de calibracin:
Y=mX+b ABS=A[X]+B[X]=(ABS-B)/A
Dnde:

ABS: Absorbancia.
A y B: constantes.
[X]: Concentracin.

Diseo del medio de cultivo

Formulacin del medio de cultivo:
Se deben masar los diferentes componentes
del medio segn la tabla con sus
componentes. Luego trasladar los nutrientes a
un matraz, adicionar agua destilada y aforar
hasta 1000mL. El matraz se lleva a
esterilizacin junto con las pipetas a travs del
autoclave a 121C y 1atm por 15 minutos.
Inocular con 10ml del cultivo de
Saccharomyces utilizando las pipetas
graduadas de 10ml previamente esterilizadas.
Para clculo de velocidad especifica de
crecimiento
X=Xo*
5.8 = 3*
= 0.188 h-1

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Td = ln 2/
Td = 3.68 horas

Curva consumo de sustrato

Absorbancia (540 nm)

Tiempo duplicacin de la levadura S.

cerevisiae.

Tabla 1: Diseo de medio de cultivo, medio

definido.
elemento
Glucosa
sulfato de amonio
sulfato de magnesio
fosfato de potasio
cloruro de calcio
cloruro de sodio
sulfato de fierro

gramos
4,0381
1,1295
0,0944
0,2816
0,026
0,0335
0,038

Bibliogrficamente la constante de saturacin

(Ks) para la S. cerevisiae es de 25 mg/l
entonces podemos decir que la velocidad
especifica mxima de crecimiento (max) es
igual a la velocida especifica de crecimiento
() , ya que al ser pequeo el ks de
saccharomyces cerevisiae
se vuelve
prcticamente igual a max.
Discusiones
Discusiones de experimentos globales
La levadura fue expuesta a distintas tipos de
experiencias en las cuales se analizaran sus
resultados a travs de grficos de produccin
de biomasa y consumo de sustrato.
Temperatura crptica
Grfico 1. Curva consumo de sustrato

0,340
0,330
0,320
0,310
0,300
6,8

7,2

7,4

7,6

7,8

8,2

8,4

Concentracin de azcar (g/L)

Grfico 2. Curva concentracin celular

Curva concentracin Celular
0,9
Absorbancia (540 nm)

fuente
C
N
Mg
K
Ca
Na
Fe

0,370
0,360
0,350

0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
4,2416

4,6575

6,2947

6,6929

7,8699

5,9673

4,5159

Concentracin celular (g/L)

En los grficos 1 y 2, se logra apreciar que hay un

crecimiento de biomasa en la cual la levadura crece de
manera exponencial tambin, esta crece a temperatura de 35
C, y al aumentar la temperatura a 50 C (punto 5), hubo una
muerte trmica la cual se ve reflejado en los tres puntos
siguientes.

La clula consumi el sustrato sostenido en el

tiempo, y recin en los puntos 6 y 7 se puede
observar que esta se mantuvo en el tiempo,
esto probablemente significa que en el medio
ya no queda microorganismo existente.
Limitacin de oxigeno
Grfico 3. Consumo
limitacin de oxgeno.

de

sustrato

con

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

En esta experiencia se elimin la aireacin a

las 3 horas desde que se inici la
fermentacin, entonces se muestra que en el
punto 180 que corresponde a las 3 horas, el
sustrato permanece constante en el tiempo, lo
cual se puede concluir que la clula ya no
consume el sustrato ya que esta al no tener
oxgeno, tuvo una muerte celular, por lo tanto
se puede confirmar que esta clula es
netamente aerbica.

Este grafico muestra que al disminuir la

temperatura a 21 C, si bien la levadura no
tuvo crecimiento exponencial notorio, fue
aumentando en el tiempo.
Grfico 7. Consumo de
temperatura sub-ptima.

sustrato

bajo

Medio enriquecido con extracto de levadura

Grfico 4. Biomasa y sustrato en el tiempo.

En esta experiencia se logra apreciar con

exactitud la fase estacionaria, comparados con
otros resultados y un consumo de sustrato al
mismo tiempo, y esto puede confirmar que el
medio enriquecido ayuda a que el
microorganismos tenga un crecimiento
ptimo.

El grafico de sustrato muestra un aumento en

los primeros puntos, y luego un consumo
constante, esto probablemente ocurri por
mala manipulacin operacional, o que la
levadura estaba creciendo de manera
inadecuada, ya que en el grfico de biomasa
muestra un pequeo aumento de biomasa, lo
que no queda claro con exactitud si fue un
crecimiento real.
Medio enriquecido con extracto de levadura
Grfico 8. Curva concentracin celular

curva de de biomasa

Temperatura sub ptima

Absorbancia (640 nm)

Grfico 6. Biomasa con temperatura subptima.

0,08
0,07
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
3

concentracion celuar (g/l)

Los puntos 6 y 7 muestran una fase

estacionaria temprana, comparados con otros
crecimientos, esto probablemente ocurri ya
que el medio que se ocupo fue uno

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Discusin Shock Trmico.

Una vez comenzado el shock trmico, se pudo
apreciar que la concentracin de biomasa
segua aumentando an por sobre los 37C,
esto es debido a que la Saccharomyces
cerevisiae posee un mecanismo de respuesta
al shock trmico (heat shock response, HSR),
el cual le permite seguir creciendo incluso al
llegar a los 42C (Kevin A. Morano et. al).
Esto es debido a que se libera un azcar el
cual permite a las protenas retener su
conformacin nativa a elevadas temperaturas
y suprimir la agregacin de protenas
denaturadas (Mike A. Singer & Susan
Lindquist). De todas formas despus de al
menos 20 minutos creciendo bajo shock
trmico, al ascender la temperatura por sobre
los 42C y finalmente llegar a los 52C se
puede apreciar cmo es que disminuye
considerablemente la cantidad de biomasa, y a
su vez que el consumo de azucares deja de
variar con el tiempo, confirmando la muerte
de gran parte de las levaduras.
Grfico 9. Curva de crecimiento de biomasa
con shock trmico.

Curva biomasa
6
4
g/L

2
0
0

10

15

El
grafico muestra
un crecimiento
exponencial hasta el punto 9, la cual
corresponde al momento del shock trmico,
luego la curva comienza descender
abruptamente ya que la temperatura de ese

momento es de 15 C superior al optimo

(35C), llegando a alcanzar los 50 C
Grfico 10. Analisis de azucares reductores
con shock trmico.

Consumo de sustrato
Concentracin [g/L]

enriquecido, esto tambin pudo haber

favorecido
al
obtener
mayores
concentraciones de biomasa.

1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0

10

Tiempo

El anlisis realizado por medio de DNS,

muestra el consumo celular de azcar, este
muestra un comportamiento normal de
consumo hasta el punto 5 (horas), donde en
ese momento se realiza el shock trmico, y
muestra como del punto 5 hacia delante se
mantiene constante la curva en el tiempo, y
esto se debe a que la celula ya no consume
este.

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Referencias:
1) Paul Held, Monitoring growth of Beer brewing strain of Saccharomyces cerevisiae. Citado
el 8 de septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.biotek.com/assets/tech_resources/SynergyH1_Yeast_Growth_App_Note.pdf
2) Kevin A. Morano, The response to heat shock and oxidative stress in Saccharomyces
cerevisiae. Citado el 9 de septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.genetics.org/content/190/4/1157.full
3) Mike A Singer & Susan Lindquist, Thermotolerance in Saccharomyces cerevisiae: The Yin
and Yang of trehalose. Citado el 12 de septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.cell.com/trends/biotechnology//retrieve/pii/S0167779998012517?_returnURL=h
ttp://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0167779998012517?showall=true
4) Arroyo-Lpez, Effects of temperature, pH and sugar concentration on the growth parameters
of Saccharomyces cerevisiae, S. kudriavzevii and their interspecific hybrid. Citado el 15 de
septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19246112
5) Arjun Singh. Genetic analysis of mutations affecting growth of saccharomyces cerevisiae at
los temperature. Citado el 21 de Septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1213157/