MARCO TERICO

Calndula
Calndula officinalis es una planta mundialmente reconocida por sus propiedades
medicinales, antiinflamatoria, cicatrizante, anticancergena, entre otras. Propiedades que se
las confieren los metabolitos secundarios que de ella provienen. Quercetina y kaempferol
son flavonoides sintetizados por C. officinalis, y son eficaces para el tratamiento de alergias,
adems ha sido bien estudiada su eficiencia antioxidante, antiinflamatoria y su efecto
cncer-preventivo (ZABALA,2008).
Reaccin de Shinoda
En la reaccin de Shinoda, el magnesio metlico es oxidado por el cido clorhdrico
concentrado, dando como productos al hidrgeno molecular, que es eliminado en forma de
gas y el cloruro de magnesio, que es el que forma complejos con los flavonoides dando
coloraciones caractersticas. El magnesio divalente, acta sobre el grupo carbonilo de dos
flavonas, produciendo una coloracin roja, este aumento de intensidad es debido a que el
magnesio divalente intensifica la coloracin por estar doblemente coordinado (REYES,
VENEGAS, CHAVEZ, 2010).
Quercetina
La Quercetina es una molcula que forma parte de los Flavenoides no polares. Es el
flavonoide ms abundante y el ms habitual en la dieta humana, destacando por su elevada
actividad antioxidante. A partir de l se obtienen otros flavonoides, como la naringenina o la
rutina.
La geometra que presenta es semiempirica, lo que quiere decir que es determinada por
distintos factores como los momentos dipolares, los potenciales de ionizacin y sus
propiedades espectrales.
La
geometra
que
presenta
es
semiempirica, lo que quiere decir que es
determinada por distintos factores como
los momentos dipolares, los potenciales
de ionizacin y sus propiedades
espectrales (MARTINEZ, 2005).

Reconocimiento de Flavonoides y Taninos

Los Flavonoides son compuesto polifenlicos que se encuentran ampliamente distribuidos
en plantas verdes. Estos compuestos al igual que los compuestos fenlicos precipitan en
presencia de cloruro frrico. Esta respuesta se debe al ataque producido por el Ion cloruro
al hidrgeno del grupo hidroxilo provocando una ruptura de enlace y la unin del grupo
fenxido al hierro (formacin de complejo).
Cloruro frrico (FeCl3)
Cloruro de hierro (III) como catalizador de reacciones de alquilacin de benceno. La prueba
del cloruro frrico es una prueba colorimtrica tradicional para fenoles, que usa una
disolucin al 1 % de cloruro de hierro (III) que ha sido neutralizada con hidrxido sdico
hasta que se forme un leve precipitado de FeO (OH). La sustancia orgnica se disuelve en
agua, metanol o etanol, luego se aade la disolucin neutra de cloruro: se forma un
complejo coloreado transitorio o permanente (normalmente prpura, verde o azul) indica la
presencia de un fenol o enol. Permite reconocer la presencia de compuestos fenlicos y/o
taninos, determina tanto fenoles como taninos. A 0.2 mL de extracto etanlico agregar 1
gota de solucin de cloruro frrico al 0.1 %. Desarrollo de una coloracin rojo-vino,
compuestos fenlicos en general (Barrera, Parra & Cuca, 2014).
Cromatografa en capa delgada (ccd) y revelado:
Los flavonoides aparecen como puntos oscuros contra un fondo verde fluorescente cuando
se observa en luz UV (254nm). En luz UV de 365nm, dependiendo del tipo estructural, los
flavonoides se ven como amarillo oscuro, verde o azul fluorescente, el cual es intensificado
y cambiado por el uso de spray de reactivos. Uno de los ms importantes de esos es el
Reactivo de productos naturales el cual produce una fluorescencia intensa bajo 365nm
despus de rosear con una disolucin al 1% de cido difenilborico -etilamino ester en
metanol. Subsecuentemente rosear con una disolucin 5% de polietilenglicol-4000 (PEG) en
etanol baja los lmites de deteccin desde 10g hasta 2,5g intensificando el
comportamiento fluorescente. Los colores observados en Luz UV 365nm son los siguientes:

Quercetina, miricetina y 3 y 7-O-glicsidos: naranja-amarillo

Kaempferol, isorhamnetin, y sus 3 y 7-O-glicsidos: amarillo-verde.
Luteolin y sus 7-O-glicosidos: naranja
Apigenina y sus 7-O-glicosidos: amarillo-verde

La farmacopea europea declara el anlisis de la huella dactilar de la CCD para la

identificacin de drogas vegetales (yvind, 2006).

Resultados
MUESTRA PROBLEMA: Lirio
MUESTRA PATRN: Flores de calndula
EXTRACIN: En la prctica se realizaron dos extracciones para cada muestra una con
acetato de etilo y Butanol. Se hizo una suspensin de extracto aadindole 15 mL H2O:

EtOH (7:1). A esta disolucin se le hace la respectiva extraccin y se obtiene fase orgnica
y fase acuosa. A la fase orgnica obtenida por extraccin con acetato de etilo, se le realizan
3 pruebas de tubo, dando como resultado lo que se muestra en la tabla 1, 2,3 y 4.

*Prueba con FeCl3. Es positiva si se da una coloracin marrn, verde o azul.

*Prueba de Shinoda (Mg + HCl). Es positiva si se da una coloracin naranja, roja o violeta
*Prueba para leucoantocianidinas. Es positiva si se da un color naranja, rojo o violeta.

CROMATOFRAFA EN CAPA DELGADA (CCD)

Con los extractos obtenidos de las dos fases orgnicas (con acetato de etilo y n-butanol) de
las dos muestras (patrn y problema), se desarroll una cromatografa en capa delgada
junto con una muestra patrn de Quercetina.
Fase mvil: acetato de etilo- cido actico- cido frmico- agua (100:11:11:27)
Agente revelador: NP (reactivo de productos naturales) una solucin de PEG 4000
(polietilenglicol). Se debe asperjar con el reactivo de NP y en seguida con la solucin de
PEG 4000.
Despus de desarrollar la placa y antes de usar los agentes reveladores se lleva a la
cmara de rayos UV a 365 nm. Se marcan las pocas manchas observadas, como lo
muestra la Fig. 1.

Muestra de clculo para hallar el Rf

Rf (d 1)=

d 1 2,4
=
=0,61
3,9 3,9

Rf (d1) = 0,61
Rf (d3) = 0,97
Rf (d4) = 0,97

Rf (d21) = 0,41
Rf (d22) = 0,49
Rf (d23) = 0,82
Rf (d31) = 0,56
Rf (d32) = 0,67
Rf (d33) = 0,97

Rf (d41) = 0,31
Rf (d42) = 0,46
Rf (d43) = 0,54
Rf (d44) = 0,69
Rf (d45) = 0,97
Rf (d5) = 1

Anlisis y Conclusiones
En comparacin con los resultados de Calndula el cual era nuestro patrn, casi todos los
resultados para Lirio spp. (muestra problema) tienen un resultado positivo, los flavonoides
con compuestos que estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, por lo que es era
probable encontrarlos en la muestra; como confirmacin de los resultados se tienen las
placas cromatogrficas, las que nos muestran primero, la diferencia de Rf entre los
extractos de la misma planta pero obtenidas con diferente solvente, evidencia de la
diferencia de polaridad entre los compuestos obtenidos, ya que stos solventes usados para
extraccin presentan diferentes polaridades; segundo en comparacin con el patrn de la
cromatografa en ccs, todas las siembras muestran una mancha con un Rf muy cercano al
que se muestra con la Quercitina (d23, d45, d33 con d5 correspondiente a Quercetina) de
esta manera podemos concluir que el Lirio spp., contiene flavonoides de diferentes
polaridades, comprobndose esto con los ensayos colorimtricos de identificacin y con la
CCD en comparacin con un patrn.

Bibliografa

RUZ REYES, S. G., Arturo, V. C., & GAONA, C. (2010). Identificacin preliminar de
los metabolitos secundarios de los extractos acuosos y etanlicos del fruto y hojas
de Morinda citrifolia L. noni y cuantificacin espectrofotomtrica de los flavonoides
totales. Obtenido de http://revistas.concytec.gob.pe/pdf/scientia/v2n2/a02v2n2.pdf

M.Sc Alejandro Martinez. "FLAVENOIDES". Facultad de Quimica Farmaceutica.

Medellin.
Obtenido
el
18
de
Noviembre
de
<http://farmacia.udea.edu.co/~ff/flavonoides2001.pdf >.
yvind M. Andersen, Markham Kenneth R. FLAVONOIDS,Chemistry, Biochemistry
and Aplications. Taylor&Francis CRC. 2006. p. 13.
ZABALA, M. A. (2008). EVALUACIN DE LA PRODUCCIN DE METABOLITOS
ANTICANCERGENOS A PARTIR DE CLULAS EN SUPENSIN DE Calndula
officinalis. Obtenido de http://www.bdigital.unal.edu.co/6575/1/TESIS.pdf

Barrera, Parra & Cuca. (2014). Caracterizacin qumica del aceite esencial e
identificacin preliminar de metabolitos secundarios en hojas de la especie raputia
heptaphylla (rutaceae). Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias,
Departamento de Qumica, Bogot, Colombia.