Bioqumica

Nombre _______________________________________ Grupo ____________ Fecha __________

PRACTICA No. 1
PROPIEDADES QUMICAS DE LAS PROTENAS
INTRODUCCIN:
Las protenas son compuestos indispensables de las clulas tanto animales como vegetales.
Qumicamente estn conformadas por C, H, O y N, adems pueden contener S, P y otros elementos.
Son de peso molecular alto y por hidrlisis dan aminocidos.
Las protenas dan reacciones coloridas con algunos reactivos; estos colores no son
especficos de las protenas sino de algunos aminocidos que las constituyen. Forman precipitados
con las sales de los metales pesados, con algunos cidos inorgnicos, detergentes y colorantes; lo
que se debe es en parte a la formacin de complejos y en parte a las propiedades de las protenas.
Las protenas son sustancias anfteras por combinarse tanto con cidos como con bases. Algunas
son coagulables por el calor, presencia de cidos o etanol.

OBJETIVO:
Observar detalladamente la formacin de precipitados y el cambio de color en diferentes
soluciones proteicas con la presencia de diferentes reactivos.

MATERIAL
12 Tubos de ensayo
1 Gradilla
1 Vaso de precipitado de 250 ml
1 Mechero Bunsen
1 pinzas para tubo
1 Embudo
1 Agitador
Papel filtro

REACTIVOS
20 ml de HNO3 concentrado
50ml de soluciones proteicas (peptona y polipeptona)
20 ml de sol. NaOH al 25% y 10%
10 ml de sol. CuSO4 al 10%
50 gr de (NH4)2SO4
50 ml de alcohol etlico
10 ml de reactivo de Millon
Papel indicador

PROCEDIMIENTO:
1. REACCIN XANTOPROTEICA
En un tubo para cada muestra colocar 2 ml de solucin proteica, aadir 0.5 ml de HNO 3
concentrado lentamente; despus agregar gota agota solucin de NaOH al 25% hasta que est
alcalino. Dejar reposar la mezcla y observar los cambios ocurridos. Es positiva para aminocidos
aromticos como Fenilalanina, tirosina, triptfano, etc.
2. REACCIN DE BIURET
En un tubo para cada muestra coloca 2 ml de solucin proteica, aada 5 gotas de CuSO4 al 10% y
agite, en seguida aada 1.5 ml de NaOH al 10%, o bien 1.5 ml de reactivo de Biuret. Dejar
reposar y observar los cambios. Esta prueba es positiva para los enlaces peptdico.
3. REACCION DE MILLON
En un tubo para cada muestra colocar 3 ml de cada solucin proteica y aadir 1 ml de reactivo de
Millon y calentar a ebullicin. Anota los cambios. Esta prueba es positiva para el aminocido
tirosina.

Bioqumica

4. REACCION DE COAGULACIN (POR CALOR)

En un tubo para cada muestra coloca 3 ml de solucin proteica y calintala, agrega 5 a 6 ml de
alcohol. Anota los cambios ocurridos. Con esta prueba se determina la estabilidad de las
protenas.
5. SALIFICACIN
Satura 10ml de solucin proteica con (NH4)2SO4 en la forma siguiente: Agrega poco a poco el
sulfato hasta que agites y no se disuelva. Filtra la solucin final.
a) Al precipitado, aplicar la reaccin de Millon.
b) Al filtrado, aplicar la reaccin de Biuret.

OBSERVACIONES:
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RESULTADOS. Realiza la comparacin entre las distintas soluciones

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CUESTIONARIO:
1. En la prueba 1 Quin obtiene mas precipitado y porque?
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2. Comparativamente Cul de las soluciones tiene mayor precipitado en la prueba de Biuret?
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3. Que efecto tiene el (NH4)2 SO4 en las protenas?
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CONCLUSIONES:
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PRACTICA No. 2
DESNATURALIZACIN DE PROTEINAS DE HUEVO
INTRODUCCION:
La desnaturalizacin de una protena es una modificacin de la estructura interna y da lugar a
cambios en las propiedades qumicas, fsicas y biolgicas. Esto puede ocurrir por accin del calor,
fuerzas mecnicas, congelacin entre otras.
Esta desnaturalizacin se debe a que las molculas plegadas y en hlice se rompen los enlaces
puente de hidrogeno y disulfuro, por lo que dice que se desdoblan. En la forma desdoblada puede
tener lugar la coagulacin (agregacin) de las molculas y formar entonces un gel, por calentamiento
prolongado, etc. La protena puede separarse completamente del lquido donde se encuentra
disuelta.
OBJETIVO:
El alumno comprobar las temperaturas de desnaturalizacin de las protenas de huevo,
aplicando varias condiciones.
MATERIAL:
8 Tubos de ensaye
1 Gradilla
1 Tapa de caja de petri
1 Mechero de Bunsen
1 Pinzas para tubo
1 Tripi
1 Tela de alambre
2 Vasos de precipitado de 100 ml
1 Termmetro
1 Vaso de 250 ml (bao mara)
1 Agitador

REACTIVOS:
Agua destilada
Azcar
cido ctrico
Bicarbonato de sodio
2 Huevos

PROCEDIMIENTO:
1.

ESTRUCTURA DEL HUEVO

Romper el huevo cuidando de todo quede sobre la tapa (sin romper la yema), quitar los
fragmentos de cascarn. Comparar la estructura con el dibujo que se expone abajo y reconocer cada
una de las partes que integran el huevo.
Membrana de la yema
albmina espesa

Membrana vitelina

albmina fluida
yema

Bioqumica

2. TEMPERATURAS DE COAGULACIN DE LAS PROTENAS DEL HUEVO

Separa de un huevo la clara y la yema en un vaso de precipitado, colocar una pequea
cantidad de clara en un tubo y calentar suavemente a bao mara en un vaso de precipitado; sujeta el
termmetro dentro del tubo de ensaye; anotar la temperatura en la cual la albmina se coagula (se
pone opaca). Repita lo anterior con la yema. Diferencia la temperatura de ambas.
3. EFECTO DE LA PRESENCIA DE DIVERSOS FACTORES SOBRE LA TEMPERATURA DE
COAGULACION.
A) DILUCION
Diluya a la mitad (1:1) las muestras de clara y de yema en dos tubos de ensaye. Mezclar
suavemente, repetir la prueba 2 y observar el cambio de la temperatura de coagulacin.
B) ADICION DE AZUCAR
Hacer una solucin con 5 gr de azcar en 10 ml de agua, agregar en un tubo clara ms 5 o
6 ml de la solucin, mezclar suavemente. Repite la prueba 2. Para esta prueba hacer una
muestra testigo, esto es colocando la misma cantidad de clara y reemplazar la solucin de
azcar por agua destilada. Anota las temperaturas de coagulacin de ambos tubos.
C) ADICION DE ACIDOS Y BASES (Influencia del pH)
Anotar la temperatura de coagulacin de acuerdo al pH indicado por el maestro, el cual
se logra con la adicin de solucin ya sea cido ctrico o bicarbonato de sodio segn se
requiera para obtener el pH deseado.
OBSERVACIONES
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RESULTADOS:
Grafica los datos de la parte c) de todo el grupo y explica el comportamiento
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CUESTIONARIO:
1. Define las temperaturas de coagulacin de acuerdo a las condiciones.
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2. Explica por que, por que se tiene ese comportamiento.
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3. Explica otros dos factores que alteran las protenas adems de la temperatura
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CONCLUSIONES:
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Bioqumica

PRACTICA No 3
PROPIEDADES QUMICAS DE LOS CARBOHIDRATOS
INTRODUCCIN:
Los carbohidratos existen en abundancia en los reinos animal y vegetal como azcares,
almidones y celulosa. A estas sustancias se les conoce con el nombre de Hidratos de Carbono o
Carbohidratos. De acuerdo con su composicin, tienen la frmula general de CnH2nOn.
Se clasifican como:
MONOSACRIDOS: atendiendo a la funcin qumica caracterstica de cada compuesto los hay
llamados Polihidroxialdehdos y Polihidroxicetonas.
DISACRIDOS: Son de los mas abundantes como es la sacarosa, lactosa, maltosa, etc.
POLISACARIDOS: Son los carbohidratos con mayor peso molecular como el almidn, celulosa y
glicgeno.
OBJETIVO
Comparar las diversas propiedades qumicas de distintos carbohidratos por medio de pruebas
sencillas.
MATERIAL
20 Tubos de ensayo
1 Gradilla
1 Mechero Bunsen
1 Vaso de precipitado de 250 ml
1 Tripie
1 Pinzas para tubo
1 Tela de alambre
1 Agitador

REACTIVOS
8 ml de NaOH al 10%
4 ml de H2SO4 conc
3 ml de AgNO3 al 5%
2 ml de NH4OH conc
5 ml de Fehling A y 5 ml de B
5 ml de Benedict
Carbohidratos: Lactosa, dextrosa, maltosa
* Almidn, *Azcar.

PROCEDIMIENTO:
NOTA: Realiza una agitacin antes de cada calentamiento.
1. En un tubo de ensaye para cada carbohidrato, haga una mezcla de 3 ml de NaOH al 10% y 0.5 gr
(aproximado) del carbohidrato, llevar a ebullicin observando que ocurre desde el principio.
2. En un tubo para cada muestra introduzca 1 gr del carbohidrato y agrega unos 4 ml de H2SO4
concentrado, espera unos minutos. A veces es necesario calentar un poco, sin llegar a ebullicin.
Anota los cambios y gases ocurridos en cada tubo.
3. En un tubo de ensaye para cada muestra colocar 3 ml de AgNO3 y 2 gotas de NaOH, observa. A
continuacin agrega, gota a gota, NH4OH hasta disolucin del precipitado. Aadir 0.5 gr de
carbohidrato agita y coloca en bao mara de 60C por 5 min aprox.. El resultado es positivo
cuando aparece un espejo en las paredes del tubo.
4. Coloca en varios tubos de ensaye 1 ml de solucin de Benedict. Aade 0.2 gr de cada
carbohidrato. Agita y coloca los tubos al mismo tiempo en agua hirviendo durante 3 min. Enfra la
solucin y haz comparaciones.
Observa el precipitado formado, cambio de color no indica reaccin.
5. Coloca en tubos de ensaye 0.5 gr de carbohidratos. Aade 1 ml de Fehling a y 1ml de Fehling
b. Mezcla bien y ponlo a bao mara durante un tiempo. Si cambia a marrn o rojo, la prueba es
positiva. Esta prueba es una reaccin de oxido reduccin donde los alcoholes se oxidan a
aldehdos y cidos.
OBSERVACIONES

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RESULTADOS

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CUESTIONARIO
1. Qu es un azcar reductor?
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2. Cul de las 2 primeras pruebas afecta la estabilidad de los carbohidratos?

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3. Qu carbohidrato da positivo para la prueba del AgNO3 y por que?

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CONCLUSIONES

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PRACTICA No. 4
HIDRLISIS ENZIMATICA DE LPIDOS
INTRODUCCIN:
Las lipasas y las esterasas catalizan la hidrlisis de los enlaces ster que se encuentran en gran
nmero de lpidos saponificables.
Estas enzimas estn ampliamente distribuidas en la naturaleza y son especialmente importante
en el tracto digestivo donde ellas funcionan en la digestin y absorcin de grasas. Debido a que las
grasas no son solubles en agua las enzimas deben actuar en la interfase del lquido y agua.

MATERIAL
4 Matraces
1 Bureta
1 pinzas para bureta
1 Soporte universal
1 Tripie
1 Cuba hidroneumtica
1 Mechero Bunsen
1 Termmetro
1 Embudo
1 Pipeta

REACTIVOS
* Leche homogeneizada
Pancreatina al 1%
NaOH al 0.1 N
Fenolftalena
Alcohol al 96%

PROCEDIMIENTO
1. Coloca 5 ml de leche en cada un de los 3 matraces. Adiciona a cada matraz 1.5 ml de
pancreatina al 1% y colcalos a bao mara de 37C.
2. Despus de 15 min retira el primer matraz del bao mara y adicinale 12.5 ml de alcohol.
Titula enseguida con NaOH al 0.1 N y 3 gotas de fenolftalena.
3. Agita vogorosamente durante la titulacin, ya que la protena precipitada puede enmascarar
los cidos grasos al titular.
4. Debido a que la digestin por la lipasa continua en los otros dos matraces, durante la
titulacin, una vez que se ha titulado el primer matraz, haz lo mismo con los otros siguiendo
los tiempos de 30 y 45 min.
5. Prepara un testigo de la siguiente manera: Coloca en un matraz 5 ml de leche ms 1.5 ml de
pancreatina hervida previamente durante 3 min. Agrega enseguida 12.5 ml de alcohol y 3
gotas de fenolftalena y titula.

NOTA:
A los matraces rstale el gasto del testigo, para tener los datos reales de los cidos grasos de
la leche.

OBSERVACIONES
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RESULTADOS
Realiza una grfica, usando el tiempo de hidrlisis en las abscisas contra el gasto corregido de
NaOH en las ordenadas. Interpreta el comportamiento de la grfica.

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CUESTIONARIO
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Bioqumica

1. Qu efecto tuvo la pancreatina sobre los lpidos?

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2. Por qu los lpidos se pueden titular?
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3. Por qu es necesario que la temperatura se regule?
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CONCLUSIONES
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Bioqumica

PRACTICA No. 5
ACIDEZ EN LPIDOS
INTRODUCCIN:
Se define como el nmero de miligramos de hidrxido de potasio necesario para neutralizar
los cidos libres de un gramo de grasa. Viene dado por la frmula:
I.A. = n x 28 .
n = No de ml de solucin 0.5 de KOH
P
P = Peso de la muestra
I.A = Indice de acidez
En las grasas, la acidez se debe a la hidrlisis que tuvo lugar por distintos mecanismos. Este
factor permite una medicin cuantitativa de la rancidez.
OBJETIVO:
Comparar un aceite nuevo con uno rancio, esto de acuerdo a los cidos grasos presentes.
MATERIAL
5 tubos de ensayo
1 pipeta
1 bao mara
Papel tornasol

REACTIVOS
Alcohol
* Aceite de olivo
* Aceite de resino
* Aceite de almendras
* Aceite de cartamo
* Aceite rancio

PROCEDIMIENTO
1. Colocar 5 ml de aceite en cada tubo, incluyendo el rancio.
2. Aade 1 ml de alcohol y calienta a bao mara.
3. Enfra y coloca un papel tornasol en cada solucin.
4. Observa el cambio de color en los papeles.
OBSERVACIONES
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RESULTADOS
Reporta la diferencia entre los aceites
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Bioqumica

CUESTIONARIO
1. Que grupos funcionales estn presentes en los lpidos?
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2. A que se debe la consistencia de los lpidos?
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3. Qu es el proceso de oxidacin de los lpidos?.
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4. Por qu hay ms cidos grasos en una muestra que en otra? A que se debe?
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CONCLUSIONES
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Bioqumica

BIBLIOGRAFA:
BOHISKI
Bioqumica Fundamental
Ed. Prentice Hall

LEHNINGER
Bioqumica
Ed. Omega

HORTON
Bioqumica
Ed Prentice Hall

PEA, ARROYO, GOMEZ, TAPIA

Bioqumica
Ed. Limusa

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