2.4.

- TEST IRWIN
El test de Irwin es un procedimiento observacional sistemtico que se utiliza para
determinar los usos de una sustancia, para desarrollar su espectro de actividad,
para detectar efectos adversos de una nueva sustancia sobre el comportamiento
general y para evaluar la neurotoxicidad (1) .Fue descrito por Irwin en 1968, para
aplicar en ratones, pero rpidamente fue modificado para aplicacin en ratas. (2,3)
Actualmente hace parte de los procedimientos recomendados por la ICH
(International Committee for Harmonization) para la evaluacin de la seguridad
farmacolgica, para detectar efectos adversos de las sustancias sobre el Sistema
Nervioso Central.(4,5)
Los datos obtenidos pueden ayudar a determinar el rango de la dosis para ser
probada en otros estudios de seguridad. Puede proporcionar una orientacin inicial
sobre la indicacin teraputica, mecanismo de accin o funcin fisiolgica
especfica. (1)
Se usa frecuentemente en la fase exploratoria del desarrollo de un medicamento.
Cuando se aplica en las fases iniciales de los estudios permite: encontrar efectos
secundarios de la sustancia sobre el SNC, entender los mecanismos por los cuales
se dan estos efectos, entender parte de la relacin entre la estructura y la actividad
de la sustancia y posiblemente revela algunos efectos teraputicos nuevos.(2)
En fases ms avanzadas, cuando la sustancia est ms caracterizada, el test provee
informacin importante sobre su margen de seguridad .
OBSERVACIONES GENERALES.
Especie, sexo, peso. Sustancia, tiempo de inyeccin, dosis, solvente y ruta.
A los efectos de la sustancia se les da una puntuacin de 0 a 8. La puntuacin se da
en el momento del pico mximo del efecto. La puntuacin de base o las respuestas
normales se valoran en 4. Puntuacin por debajo de 4 son para respuestas
subnormales y por encima de 4 supranormales.
La puntuacin de base para los signos anormales es 0 y la puntuacin mxima es 8.
Para cada tem se establece su puntuacin de base. El perfil est dividido en 3
partes: comportamental, neurolgico y autonmico, con subdivisiones cada uno.
PROCEDIMIENTO:(1,6)
En primer lugar se mide el dimetro de la pupila antes y despus de aplicar la
sustancia, lo que permite establecer rpidamente la actividad de la misma. Si se
desconoce la dosis a usar, la dosis inicial puede ser de 30 mg/kg y a partir de esa se
aplican dosis logartimicamente ms altas o bajas. A este momento ya se puede
establecer si el compuesto es activo y si lo es lo suficiente como para continuar la
investigacin; cul es su actividad principal y si hay actividades secundarias
presentes.
Se plantea as: Se pesan los ratones para agruparlos segn cercana del peso.
Grupo 1: 4 ratones de la misma raza, con una diferencia de peso de 1 gramo o
menos, 2 machos, 2 hembras.
Grupo control. Se requiere una sala de laboratorio tranquila, aislada, a una

temperatura de 72 F ms o menos 1.
Los resultados se registran en una forma para tabular.

Inicialmente los ratones se aclimataron a la sala de pruebas durante al menos 30

minutos.
El equipo de prueba de Irwin (temporizador,
se muestran jar y apoyo, espacio abierto, rejilla, regla, caja de sonidos, palos de
madera, caja Kimwipes) se coloc bajo una campana de flujo laminar. Cada ratn se
coloc primero en el frasco de visin durante cinco (5) minutos y los siguientes
parmetros fueron anotados.
1-Apariencia General - calidad abrigo, bigotes
2-La posicin del cuerpo
3-La actividad espontnea
4-La tasa de respiracin
5-Temblores
6-Twitches
7-Comportamiento extrao
8-Convulsiones
9-Defecacin - nmero de heces en el final de la sesin
Al final del perodo de cinco minutos, el frasco de visin con el ratn en el que fue
trasladado a la arena, donde se desmont el frasco y el ratn lanzado a la arena. El
ratn no fue manejado por el experimentador. Los siguientes parmetros fueron
anotados en la arena en el siguiente orden:
Transfiera la excitacin - durante los 10 primeros segundos
1-La actividad locomotora - nmero de plazas introducidos por los cuatro pies en 30
segundos
2-Cierre palpebral
3-Piloereccin
4-Respuesta de sobresalto - 90 dB de sonido de 30 cm por encima de la arena
Clickbox
5-Modo de andar
6-Elevacin de la pelvis
7-La elevacin de la cola - durante el movimiento hacia adelante
8-Toque de escape - carrera dedo desde arriba
9-Tail pizca - con pinzas 3 cm de la base de la cola
10-La temperatura del cuerpo - hipo o hipertermia

11-Pasividad posicional - Respuesta de lucha para el manejo secuencial por la cola,

el cuello, las patas traseras, o supina celebrada
Entonces el ratn fue recogido por su cola y se mantiene por encima de la arena de
anotar el siguiente conjunto de parmetros:
1-Rizo Trunk
2-Aferramiento extremidades
3-Colocacin Visual - la extensin de las extremidades anteriores, cuando el animal
se redujo en base de la cola desde una altura de 15 cm por encima de una rejilla de
alambre
4-Se aplica al revs horizontales suaves tiran, el ratn se baj y se deja agarrar la
red - La fuerza de agarre
5-Tono de la carrocera - lados de ratn se comprimieron entre el pulgar y el dedo
ndice
6-Pinna rflex (reflejo del pabelln auricular) - ratn fue restringido con suavidad en
la parrilla y la parte proximal de la Cathus interior se toc ligeramente con la punta
de la sonda de alambre fino, se observ retraccin del odo
7-Reflejo de crnea - el ratn fue restringido suavemente en la red y la crnea se
toc ligeramente con el lado de la sonda de alambre fino, se observ una respuesta
parpadeo
8-Toe pizca(dolor patas) - mediados del dgito de la pata trasera se comprime
suavemente lateralmente con unas pinzas finas. Los miembros posteriores son
levantadas clara de la cuadrcula.
9-Maniobra de alambre - el ratn se mantiene por encima del alambre de la
suspensin de la cola y se baja para permitir que los miembros delanteros para
sujetar el alambre horizontal; El ratn se celebr en extensin y se gira alrededor
hasta horizontal y liberado
A continuacin, el ratn fue colocado en la moderacin supina para anotar los
siguientes parmetros en el siguiente orden:
1-La longitud del cuerpo - desde la punta de la nariz a la base de la cola (mm)
2-Color de la piel - superficie plantar y los dgitos de las extremidades anteriores
3-Frecuencia Cardaca - sentida por palpacin debajo del esternn.
4-Tono extremidad - resistencia a la presin de la punta del dedo suavemente sobre
la superficie plantar de izquierda / derecha de la pata trasera
5-Tono abdominal - palpacin del abdomen
6-Lagrimeo
7-Reflejo pupilar
8-Salivacin

9-Morder Provocado - una vara de la clavija se inserta suavemente entre los dientes
en el lado de la boca del animal
10-Irritabilidad
Los tres parmetros finales se califican con el ratn por encima o en la arena:
1-Los reflejos de recuperacin - el ratn se llev a cabo por la cola y tir hacia atrs
en el aire de tal manera que realiza un salto mortal hacia atrs cuando se libera; se
observ la posicin de aterrizaje
2-Contacto reflejo de enderezamiento - el ratn se coloc en un tubo de plstico y al
revs
3-Geotaxis negativo - el ratn se coloc sobre una rejilla horizontal; la cuadrcula
fue levantada a la vertical con el ratn hacia el suelo; se observ el comportamiento
durante 30 segundos
Test de Irwin modificado
Parmetros t de respuesta
(min)
SNC
Actividad motora
Ataxia
Prdida reflejo enderezamiento
Analgesia
Anestesia
Perdida de reflejo corneal
Perdida de reflejo pinneal
Paralisis de patas anteriores
Paralisis de patas traseras
Reaccin de alarma
SNC
Actividad motora
Temblores finos en el cuerpo
Temblores fuertes en el cuerpo
Fasciculaciones
Convulsiones tnicas
Convulsiones mixtas
Reaccin alarma
OJOS
Enoftalmia
Exoftalmia
Ptosis palpebral
Tamao de la pupila
Nistagmus
Lacrimacin
OREJAS
Palidez
Hiperemia
Cianosis
EFECTOS GENERALES
Salivacin
Ereccin de la cola
Piloereccin

15

30

60

Miccin
Diarrea
Priapismo
Signo de Robichaud
Movimiento circular
Temperatura rectal
Respiracin (t en segundos
para 50
respiraciones)
SUBJETIVO
Agresivo
Pasivo
Temeroso
OTRAS OBSERVACIONES
MUERTE/NECROPSIA
BIBLIOGRAFIA
1.- . Roux S, Sabl E, Porsolt R. Primary Observation (Irwin) Test in Rodents for
Assessing Acute Toxicity of a Test Agent and its Effects on Behavior and Physiological Function.
Curr Prot in Pharmac. DOI 10.1002/0471141755.ph1010s27 January, 2005.
2.- Vogel H, Hock F, Mayer D. Safety and Pharmacokinetic Assays. Sprienger-Verlag,
Berlin. Heidelberg New York 2006: 327.
3.- http://www.noldus.com/mb2008/program/Proceedings_Measuring_Behavior_2008_web.pdf
4.- Ron de P, Delaunois A, Hanon E, Lamberty Y, Guyaux M. An Origin inal Method
to Interpret Neurobehavioral Data Generated by the Irwin Test in the Mouse.
Proceedings of Measuring Behavior. Maastricht, The Netherlands. 2008: 326
5.- OECD Environment, Health and Safety Publications Series on Testing and
Assessment. Guidance Notes for Analysis and Evaluation of Repeat-Dose Toxicity
Studies. ENV/JM/MONO. 2008:1.
6.- http://www.taconic.com/wmspage.cfm?parm1=4456
7.-http://www.tufts.edu/sackler/neuroscience/CNR/BehaviorCorePA.pdf