ESPERMIOGRAMA

Toma de muestra:
Se recomienda generalmente que se recoja la muestra despus de un periodo de
abstinencia de 3 a 6 das. otros han sugerido que la muestra ms significativa es la que se recoge
despus de un periodo de abstinencia igual al habitual en la pareja a estudiarse.
La muestra debe ser fresca a no ms de 2 3 horas de la toma.
1.-

Examen fsico:
Volumen

3 a 6 mL. pudiendo llegar a 15 mL.

Color

Vara de blanco amarillento o blanco grisceo.

Amarillo:

Pioemia.
Abstinencia sexual prolongada.

Rojizo :

Hemospermia.

Olor

Mohoso, flor de castao, agua de cuba.

Aspecto

:
Heterogneo recin eyaculado u luego de la licuacin se hace
heterogneo.
En un principio es de consistencia gelatinosa (15 a 30 minutos).
Luego se licua formando u lquido translucido.

PH

7,5 a 8,3 (segn Joel); 7,35 a 7,5 (segn Ganong).

Densidad

1,028.

Viscosidad

Normal, 2 a 5 mm.

2.- Examen microscpico:

a) Prueba de vitalidad de los espermatozoides mviles:
Fundamento

La eosina es un colorante que tie slo clulas muertas.

Reactivo

Eosina azul 0,5%.

Tcnica

:
Colocar entre cubre y porta, una gota de semen y una
gota de
colorante y se observa al microscopio, dentro de las 2
primeras horas.

Valor normal

Espermatozoides muertos coloreados de 0 a 5 %.

Espermatozoides vivos inmviles no coloreados hasta

40%.
Espermatozoides vivos mviles no coloreados 60%
ms.
b) Cantidad de espermatozoides:
Reactivo

Reactivo de Macomber y Saunders.

Tcnica

Despus de la licuacin del semen, con una pipeta para

recuento de
glbulos blancos se aspira semen hasta la marca 0,5 y
luego lquido de dilucin hasta la marca 11, Se
homogeniza y se carga la cmara de Neubauer.
Clculo

Para obtener la concentracin de espermios se multiplica

el total de de
espermios contados por 1.000 2.000, segn sea la
dilucin (1:10) (1:20) respectivamente.
Valor normal

Hiperespermia......... 120 300 millones/cm3.

Normoespermia 60 120 millones/cm3.
Hipoespermia 30 60 millones/cm3.

c) Morfologa del espermio:

La morfologa del espermio se valora mediante recuentos diferenciales de los tipos
de espermatozoides morfolgicos normales y anormales de las extensiones teidas. El
semen normal contiene entre un 20% y un 30% de formas anormales.
Reactivo

Tcnica

May Grunwald Giemsa.

1.-

Hacer un extendido con el semen.

2.-

Cubrir el frotis con 15 20 gotas de May Grunwald. Dejar en

3.-

Agregar 15 20 gotas de agua destilada, mezclar y soplar un

minuto. Botar el lquido del frotis.

4.-

Agregar Giemsa diluida (1mL. de agua destilada por 2 gotas de

Giemsa). Dejar en reposo por 15 minutos.

5.-

Lavar con agua destilada o corriente.

6.-

Dejar secar en forma inclinada.

reposo 3 minutos.

3.- Examen bioqumico:

a) Determinacin de la capacidad fecundante:
Muestra

Semen, de no ms de una hora de emitida.

Reactivo

Azul de metilo 0,01%.

Tcnica

:
Reactivos
Colorante
Muestra

Problema
1 mL
1 mL

Testigo
2 mL
--

Se sellan los extremos de los tubos y se colocan a 37C, anotando el tiempo.

-

Se observa cada 5 minutos hasta que comienza la decoloracin

Se continan las observaciones hasta que se produce la decoloracin total.
Se informa tiempo de comienzo de la decoloracin y el tiempo de decoloracin
total.

Valor normal :
minutos, y cuando

La fertilidad ptima de decoloracin se produce en 15 30

es moderada se produce en casi una hora.

Precauciones

Por ser precaria la conservacin del reactivo, debe ser preparada

en el
momento de utilizarla.
b) Determinacin de fructosa:
Mtodo
Fundamento
provocar la

Rae adaptado (Selliwanoff).

Est basada en la reaccin de Selliwanoff, que consiste en

formacin de furfural, que origina con la resorcina una coloracin

rosada.
Reactivos

Solucin de resorcina al 0,1% en alcohol de 95%.

Solucin de HCl al 30%.
Solucin testigo de fructosa.
Solucin madre de fructosa la 1% en solucin saturada de cido benzoico.

L. de onda

520nm.

Tcnica

Se diluye el esperma al 1%.

Sol. de esperma
Agua destilada
Sol. testigo de fructosa
Sol. De resorcina

Problema
2 mL
--2 mL

Blanco
-2 mL
-2 mL

1
--2 mL
2 mL

2
--2 mL
2 mL

3
--2 mL
2 mL

Acido clorhidrico
-

6 mL

6 mL

6 mL

6 mL

6 mL

Se agita y se coloca en bao Mara por 8 minutos a 80C.

Se enfran los tubos y se lee al fotocolormetro. Se hace la comparacin con el
tubo ms prximo, restndoles el valor del blanco.

Valor normal

200 400 mg%.

Determinacin de fosfatasa cida.

Mtodo
Fundamento
liberacin del

Bessey Lowry Brock.

Est basada en la hidrlisis del p-nitrofenilfosfato que produce la

p-nitrofenol, que en medio alcalino desarrolla un color amarillo.
Como la concentracin de fosfatasa en esperma es mucho mayor
que en sangre, la tcnica puede aplicarse afectando diluciones del
lquido seminal.

Muestra

Semen fresco.

L. de onda

450 nm.

Reactivos

Tcnica

Solucin tampn de cido ctrico-citrato de sodio, pH 4,8 0,05 M.

Sustrato tamponado.
NaOH 0,02 N.
P-nitrofenol 5 x 10-4M.
Diluir semen 1:1.000.

Reactivos
Problema Blanco
Sustrato tamponado
1 mL
1 mL
Poner a bao mara por 3 minutos
Dilusin de esperma
0,2 mL
-Incubar a 37C por 30 minutos, retirar.
NaOH 0,02 N
10 mL
10 mL
Dilucin esperma
0,2 mL
0,2 mL
Mezclar por inversin y leer al fotocolormetro.
CURVA DE CALIBRACIN

Se utiliza una solucin Standard de p-nitrofenol 5,0 x 10 -4M

1.-

Diluir 1, 2, 4, 6 y 8 mL. de la solucin standard a 10 mL. con NaOH 0,02 N. Se

tiene as soluciones que tinen respectivamente concentraciones de: 0,05; 0,1; 0,2;
0,4 micromoles de p.nitrofenol por mL.

2.-

Se construye la curva recordando que una concentracin de 0,1 milimol

corrsponde a 167 mUI/L.

Clculo :
El valor de la extincin obtenida transportada a la curva de calibracin nos proporciona la
cantidad de mUI/mL. de la dilucin de esperma. Este valor debe multiplicarse por 1.000 por la
dilucin efectuada.
Valores normales

55.000 137.000
1.000 2.500

mUI/mL.
UKA/mL.

Preparacin de reactivos:
1.-

Eosina azul 0,5%.

2.-

Solucin de Macomber y Saunders.

Bicarbonato de sodio.5 g.
Formol..1 mL.
Agua destilada100 mL.
El formol inmoviliza a los espermatozoos, mientras el bicarbonato permite la
dilucin del moco, facilitando as su observacin.

3.-

May Grunwald- Giemsa.

4.-

Azul de metileno 0,01%.

5.-

Solucin de resorcina al 0,1% en alcohol 95.

6.-

Acido clorhdrico 30%.

7.-

Solucin madre de fructosa 1% en solucin saturada de cido benzoico.

8.-

Solucin tipo de fructosa:

Tipo 1
Tipo 2
Tipo 3
9.-

Solucin
Concentracin de
madre de
fructosa en el
fructosa (mL) esperma (mg%)
0,1
100
0,2
200
0,4
400

Solucin tampn decido ctrico-citrato de sodio pH 4,8 0.05 M.

Acido ctrico.. 9,246 gr.

NaOH 1 N. 88 mL.
HCl 0,1 N.. 60 mL.
Agua destilada c.s.p 1.000 mL.

Se debe controlar el pH antes de aforar con agua destilada.

La solucin es estable algunos meses en refrigeracin.
10.-

Sustrato tamponado:

 P-nitrofenilfosfato disdico hexahidratado.. 204 mg.

Tampn fosfato pH 4,8...................................... 100 mL.
La solucin es estable una semana en refrigeracin.
11.-

NaOH 0,02 N:
NaOH. 0,08 gr.
Agua destilada c.s.p.... 100 mL.

12.-

Solucin estndar de p-nitrofenol 5,0 x 10-4M:

P-nitrofenol 70 mg.
Agua destilada. 1.000 mL.