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Trabajo de grado
Director
DR. JAIME BELTRN GUERRA
Codirectora
DR. ZOILA EMILIA CASTAEDA MURCIA
DEDICATORIA
A Dios, por su sabidura y discernimiento durante cada instante; a m hijo Esteban por sus
grandes bendiciones desde el momento que llego a nuestras vidas; a mi esposa Jessica y a
mi familia por su apoyo incondicional.
AGRADECIMIENTOS
RESUMEN.
ABSTRACT
This paper present in a clear the way how getting pieces anatomical diaphanizations with
staining centers of ossification in mice. The development of pieces and help standardize
the technique of anatomical preservation of diafanization according to the proposal made
by the author of the research project required seven phases which were developed at
Universidad Nacional de Colombia. The first step was done in a pig, the second and the
third phase was use not only the protocol from a local university but also from a Latin
American college. The fourth step of the project was perform a fusion of the thecniques
than provide a successful result in the diafanization. The fifth step was done the process in
mice fetuses of 17 days since the coupling. The sixth and seventh stage of the project was
perform a standardized protocol of diaphanization that was implemented in four mice with
satisfactory results.
ndice.
INTRODUCCIN. ............................................................................................................. 12
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ........................................................................ 13
2. OBJETIVOS.................................................................................................................... 14
2.1 OBJETIVO GENERAL ................................................................................................ 14
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS: ....................................................................................... 14
3. JUSTIFICACIN............................................................................................................ 15
4. MARCO DE REFERENCIA .......................................................................................... 16
4.1. ANTECEDENTES MUNDIALES .............................................................................. 16
4.2 ANTECEDENTES LATINOAMERICANOS ............................................................. 17
4.3. ANTECEDENTES NACIONALES ............................................................................ 18
4.4. ANTECEDENTES DE INVESTIGACION ASOCIADOS AL ESTUDIO EN LA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA ............................................................... 20
5. MARCO CONCEPTUAL. .............................................................................................. 21
5.1. DIAFANIZAICIN. .................................................................................................... 21
5.1.1. PROCEDIMIENTOS DE DIAFANIZACIN ......................................................... 21
5.1.1.1. TECNICA DE MACERACION DE DAWSON // SCHULTZ. ............................ 22
5.1.1.2. METODO DE DIAFANIZACION EN PECES..................................................... 23
5.2. REACTIVOS A IMPLEMENTAR EN LA INVESTIGACION ................................. 23
5.2.1 HIDROXIDO DE POTASIO. ................................................................................... 24
5.2.2 GLICERINA ............................................................................................................. 24
5.2.3 ACETONA ................................................................................................................. 24
6. BIOQUIMICA DE COLORANTES EN TEJIDO OSEO Y CARTILAGO A
IMPLEMENTAR EN TECNICA DE DIAFANIZACIN. ............................................... 27
6.1 ROJO DE ALIZARINA ................................................................................................ 27
6.2 AZUL DE ALCIAN. ..................................................................................................... 27
6.3 Embriologia del tejido oseo........................................................................................... 28
6.3.1. Desarrollo del mesodermo lateral. ............................................................................ 28
6.3.2. rganos derivados del mesodermo paraxial (sistema esqueltico) ........................... 29
6.3.3. Histogenia del cartlago ............................................................................................. 30
6.3.4 Histogenia de hueso. .................................................................................................. 30
6.3.5 Osificacion Intramembranosa. ................................................................................... 31
6.3.6 Osificacin intracartilaginosa o endocondral. ............................................................ 31
6.3.7 Desarrollo del esqueleto axial. ................................................................................... 34
6.3.8 Desarrollo del crneo ................................................................................................. 35
6.3.8.1 Neurocrneo cartilaginoso....................................................................................... 35
6.3.8.2 Neurocrneo membranoso....................................................................................... 35
6.3.8.3 Desarrollo de la cabeza sea a partir de arcos faringeos. ........................................ 36
7
ndice de fotografas.
Fotografa 1 y Fotografa 2.................................................................................................. 42
Fotografa 3. Inmersin en KOH y fijacin con alcohol 70% ............................................ 50
Fotografa 4. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,2% .................................... 51
Fotografa 5. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,25% .................................. 51
Fotografa 6. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,35% y 0,45% ................... 52
Fotografa 7. Inmersin en Glicerina pura .......................................................................... 53
Fotografa 8. Inmersin por 15 das y recambio cada 7 das de Glicerina pura. ................. 54
Fotografa 9. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,2% .................................... 55
Fotografa 10. Inmersin en Glicerina pura ........................................................................ 56
Fotografa 11. Marcacin de centros de osificacin con rojo de alizarina primer, tercer,
quinto y sptimo da. .......................................................................................................... 59
Fotografa 12. Aspecto final de marcacin de centros de osificacin. ................................ 59
Fotografa 13. Desmanchado con alcohol al 70% e inmersin en solucin de hidrxido de
potasio. ................................................................................................................................ 59
Fotografa 14. Inmersiones en glicerina pura, alcohol y hidrxido de potasio. .................. 60
Fotografa 15. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,2% .................................. 61
Fotografa 16. Inmersin y recambio de glicerina pura. ..................................................... 62
Fotografa 17. Fijacin en formol al 10% e inmersin en solucin de hidrxido de potasio
10%...................................................................................................................................... 65
Fotografa 18. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 10%. .................................. 66
Fotografa 19. Prdida y retiro de pelo. ............................................................................... 66
Fotografa 20. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 2%. .................................... 67
Fotografa 21. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 2%. .................................... 67
Fotografa 22. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 2%. .................................... 68
Fotografa 23. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 2%. .................................... 68
Fotografa 24. Primera inmersin en glicerina pura. ........................................................... 69
Fotografa 25. Inmersin de solucin de hidrxido de potasio 0,2% . ................................ 70
Fotografa 26. Segunda inmersin en glicerina pura. .......................................................... 70
Fotografa 27. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,4% .................................. 71
Fotografa 28. Tercera inmersin en glicerina pura. ........................................................... 71
Fotografa 29. Pos-marcacin de centros de osificacin. .................................................... 72
Fotografa 30. Inmersion y desmanchado en solucion de hidroxido de potasio 0,45% y
0,5%..................................................................................................................................... 73
Fotografa 31. Inmersion en glicerina pura 10%. ................................................................ 73
Fotografa 32. Fijacion en formol al 10%............75
Fotografa 33. Cinco dias de inmersion en solucion de hidroxido de potasio 2% sin
glicerina. .............................................................................................................................. 76
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11
INTRODUCCIN.
Las tcnicas de preservacin anatmicas son actualmente elementos pedaggicos y
cientficos de evidencia real, cientfica y verificable que permiten a la educacin de las
ciencias de la salud incorporar de manera temprana al estudiante al laboratorio y hacia
enfoques de investigacin que contribuyan a trasformar al estudiante pasivo-receptor en
activo-constructor que permita mejorar la calidad del proceso de enseanza del docente
trasmisor, en un mediador del proceso con el fin de lograr un aprendizaje significativo en
ciencias morfolgicas de seres humanos y otras especies.
12
Cul es la tcnica de diafanizacin que puede ser implementada por docentes para la
enseanza de la morfologa y en la elaboracin de piezas anatmicas de morfognesis sea
de mamferos por parte del estudiante como estudio de correlacin terico-prctico en el
departamento de morfologa de la Universidad Nacional de Colombia?
13
2. OBJETIVOS
14
3. JUSTIFICACIN.
La preservacin de cadveres y especmenes anatmicos es un proceso descrito desde la
antigedad; los egipcios aportaron al conocimiento mdico y de la industria funeraria
usando sustancias qumicas y tcnicas de embalsamar. Actualmente, hay muchas tcnicas
de preservacin anatmica, protocolizadas y con enfoque anatmico estructural.
Particularmente, entre ellas encontramos la tcnica de la diafanizacin, descrita en la
literatura de manera sencilla y puntual que busca explicar cmo transparentar tejidos con
base en la igualacin de los ndices de refraccin de la luz dentro y fuera del tejido, con la
intencin de permitir la visualizacin del tejido seo. Por tal razn, el presente proyecto
tiene como objetivo la generacin de piezas anatmicas preservadas con la tcnica de
diafanizacin, que sirvan como modelo pedaggico claro y costo-efectivo en la
morfognesis sea de mamferos. En el momento, no existen piezas diafanizadas para sus
estudios en el departamento de morfologa de la Facultad de Medicina y la maestra de
morfologa, que permitan la comprensin de la formacin sea en mamferos, que ayuden a
la determinacin de centros de osificacin membranosa y cartilaginosa, permitiendo el
anlisis de la anatoma comparada entre vertebrados y sus implicaciones evolutivas.
(Concha, 2006)
Al finalizar el desarrollo del proyecto de investigacin, se construirn piezas anatmicas
diafanizadas, con base en una tcnica implementada, que dar respuesta a la pregunta del
proyecto de investigacin.
15
4. MARCO DE REFERENCIA
16
Ana Claudia Villegas, Mara De Los ngeles Quiroga y Daniela Cleves de la Universidad
de los Andes, realizaron el proyecto titulado; Diafanizacin: visualizacin del desarrollo
seo en fetos. En l, se muestra cmo la visualizacin del sistema seo, se llev a cabo por
medio de exploracin de dos tcnicas o procedimientos de diafanizacin; la primera fue
tcnica Modificada de Dawson, la cual no tuvo resultados satisfactorios en la obtencin de
transparentacin y result ms costosa y menos efectiva en la transparentacin del
espcimen y visualizacin del sistema seo. La segunda tcnica de diafanizacin fue por
maceracin de Dawson/Schultz, y evidenci resultados en los que se observ cierto grado
del progreso de transparentacin, pero qued inconclusa en lo referente a los centros de
osificacin del sistema seo del embrin. En conclusin, el proyecto muestra que la
diafanizacin es una tcnica morfolgica que se usa en conjunto con la tincin para poder
exponer, visualizar y analizar los centros de osificacin en un feto, antes de llevar a cabo el
proceso y se debe hacer un estudio previo exhaustivo de la tcnica, el procedimiento,
materiales y las condiciones ambientales, para asegurar que el experimento sea exitoso.
(Villegas, Quiroga, & Cleves, 2012)
Carlo Meja realizo diafanizacion e informe titulado Secuencia de aparicin de centros de
osificacin en embriones y fetos bovinos mediante la tcnica de diafanizacin y tincin
sea con alizarina el objetivo general es determinar la secuencia de aparicin de centros de
osificacin en embriones y fetos bovinos mediante la tcnica modificada de Dawson que se
realizo en etapas: fijacin con formol al 5%, deshidratacin con hidrxido de potasio y
etano al 70%, tincin con rojo de alizarina y diafanizacin con hidrxido de potasio diluido
en glicerina, los resultados fueron registrados en tablas que determinan estructuras sea,
edad, longitud y tipo se osificacin (ejemplo: clavcula, 37 das, longitud 2,2 cm y
osificacin membranosa) (Meja, 2013)
19
20
5. MARCO CONCEPTUAL.
5.1. Diafanizacin.
La visualizacin del desarrollo seo en animales o fetos humanos por diafanizacin es una
tcnica conservacin anatmica de los tejidos de un espcimen que se someten a una
despigmentacin, con el fin de estudiar su anatoma del sistema seo. Independientemente
del tipo de mtodo, todos tienen el mismo fundamento, y siguen los siguientes pasos:
primero, se realiza una fijacin del espcimen, con el fin de mantener las clulas con las
propiedades intactas. Esto se logra al estimular la formacin de enlaces cruzados entre las
protenas e inactivar enzimas celulares, para impedir que se presente una autolisis y por
tanto, una degradacin post mortem de los fetos o del espcimen. En segunda instancia,
para poder visualizar y analizar el sistema seo, se transparenta todo el tejido a excepcin
del sistema seo en desarrollo; a este proceso, por el cual una muestra se hace difana o
transparente, mediante tcnicas que igualan los ndices de refraccin de la luz del interior
del rgano con el medio que lo contiene (Concha, 2006), se le conoce como diafanizacin,
sumergindolo en una solucin de hidrxido de potasio (KOH), el cual es miscible, tanto en
alcohol como con el medio de inclusin, y a la vez es bastante corrosivo, ya que realiza una
reaccin de xido-reduccin, deshidratando todos los tejidos. Por ltimo, con el objetivo de
exponer los huesos en desarrollo, la edad del embrin y posibles anomalas seas, los
centros de osificacin se tien con un colorante especfico, comnmente rojo de alizarina.
5.1.1. Procedimientos de diafanizacin.
Actualmente, existen dos procedimientos diferentes de diafanizacion, la primera es la
Tcnica modificada de Dawson que consiste en someter al espcimen a deshidratacin
con alcohol al 70%, inmersin en hidrxido de potasio puro con aclaramiento en hidrxido
de amonio (NH4OH) junto con glicerina pero, segn literatura y antecedentes de
investigacin, no es muy satisfactoria la obtencin de resultados por medio de la tcnica
modificada de Dawson. Por tal razn, en este proyecto se utilizar la tcnica de
diafanizacin por maceracin, llamada Tcnica de Dawson // Schultz
21
23
5.2.2 Glicerina.
El glicerol o glicerina, tambin conocido como glicerina o 1, 2,3 propanotriol, es un
compuesto alcohlico con tres grupos OH (hidroxilos). La palabra glicerol, procede del
griego Glykos, que significa dulce. Posee un aspecto de lquido viscoso, no tiene color,
pero si un caracterstico olor, adems de un sabor dulce. Adems el glicerol es un
compuesto higroscpico, lo que quiere decir que tiene la capacidad de ceder o absorber la
humedad presente en el medio ambiente que lo rodea. Adems es fcilmente soluble en
agua, y se descompone en ebullicin, en la cual entra a una temperatura de 290C. Es un
compuesto lquido si se encuentra a temperatura ambiente (La Gua, 2010). Dentro de la
industria farmacutica, la glicerina USP tiene un papel importante en la produccin de los
siguientes medicamentos: anestsicos, pastillas, grageas, cpsulas, supositorios, productos
para combatir la infeccin de odo, jarabes (como excipiente), disolvente (para iodo, timol,
bromo, cloruro de mercurio, alcaloides, entre otros), antispticos, inhibidores de cambios
enzimticos en procesos de fermentacin de cremas, ungentos y pastas (QuimiNet, 2011).
5.2.3 Acetona
La acetona o propanona es un compuesto qumico de frmula qumica CH3(CO)CH3 del
grupo de las cetonas que se encuentra naturalmente en el medio ambiente a temperatura
ambiente, se presenta como un lquido incoloro de olor caracterstico. Se evapora
24
Reactivo(C
Peligro
Recomendaciones
AS N )
de Clasificacin
manipulacin
de riesgo
Almacenamien
to
Guantes de proteccin,
Recipiente
Hidrxido
mascarilla,
cerrado
no
de
ocular
y Sustancia
expuesto
al
peligrosa
ambiente
potasio
proteccin
(CASN:
Corrosivo
concentraciones
1310-58-3)
e irritante
superiores
a 2%
es
corrosivo.
temperatura
ambiente.
Recipiente
de Irritante
Rojo
No ingerir o inhalar el
alizarina
cutneo,
(CAS
ocular
N:58005)
respiratori
o.
de Sustancia
alcian (CAS no
N:
99-2)
33864- peligrosa
ambiente
temperatura
ambiente.
No se precisan medidas
Azul
cerrado
especiales, en caso de
inhalacin
suministrar Sustancia no
25
no
al
y
agua.
Se
descompo
Glicerol
ne al arder
En
cutneo,
ocular
Sustancia no cerrado
peligrosa
recipiente
temperatura
menor a 60C.
respiratori
o.
Fuente: Elaboracin propia, Septiembre de 2014
26
Alizarina
1,2-dihidroxiantraquinona,
es
uno
de
los
diez
ismeros
27
28
mesodrmicos, en tanto, que el esqueleto apendicular (los huesos de las extremidades con
sus respectivas cinturas) se deriva de la mesnquima del mesodermo de la placa lateral
(somatopleura).
30
31
32
Conociendo la edad precisa en que se fusiona cada epfisis con su difisis y observando el
grado en que lo haya hecho, podemos determinar la edad del individuo como se puede
observar en la tabla 2. El crecimiento del dimetro de un hueso es consecuencia del
depsito de hueso en el periostio, as como de la reabsorcin en la superficie medular. La
velocidad de depsito y reabsorcin estn equilibradas con el fin de regular el grosor del
hueso compacto y el tamao de la cavidad medular. La reorganizacin interna del hueso
contina toda la vida. El desarrollo de los huesos irregulares es semejante al de las epfisis
de los huesos largos. La osificacin comienza de forma central y se extiende en todas las
direcciones. Adems de la osificacin membranosa y endocondral, el tejido condroide
tambin se diferencia a partir del mesnquima y actualmente se acepta que constituye un
factor importante de crecimiento esqueltico (Moore, Persaud, & Torcha, 2013).
MUJERES
HOMBRES
33
del
11 aos
12 aos
13 aos
Epicndilo lateral
Piciforme
Epicndilo lateral
Fusin del leon, isquion y pubis
Fusin de la trclea con el
epicndilo lateral.
14 aos Acromion. Cresta iliaca y trocnter menor, fusin del olecranon,
epfisis superior del radio, cabeza del fmur, cabeza del fmur, distal
de la tibia y peron
16 aos
Fusin de la epfisis inferior
del humero, epicndilo medial,
olecranon y cabeza del radio.
17 aos Fusin de la cabeza del fmur, Fusin del acromion, epfisis
trocnter mayor de la tibia y distal superior del humero, distal del
del peron.
cubito, proximal del peron y
distal del fmur.
18 aos Fusin de la epfisis distal del radio
Fusin de la epfisis proximal
de la tibia.
19 aos
Fusin de la epfisis proximal
del humero, distal del radio y
el fmur, proximal del peron.
20 aos Fusin de la cresta iliaca
21 aos Clavcula, fusin de la tuberosidad Fusin de la tuberosidad
isquitica
isquiatica
Fuente: (Eternod Rodriguez, Osteologia infantil, 2010)
34
conjuntivo denso que forman unas articulaciones fibrosas, las suturas. Existen seis grandes
reas fibrosas en las zonas donde se unen varias suturas. La blandura de los huesos y sus
conexiones laxas en las suturas permiten a la bveda craneal sufrir cambios de forma
durante el nacimiento, denominados amoldamiento. En el amoldamiento del crneo fetal
(adaptacin de la cabeza fetal a la cavidad plvica durante el nacimiento), los huesos
frontales se aplanan, el occipital protruye y un parietal se superpone por encima del otro.
Unos pocos das despus de nacer, la forma de la bveda craneal se normaliza (Moore,
Persaud, & Torcha, 2013).
6.3.8.3 Desarrollo de la cabeza sea a partir de arcos farngeos.
El crneo fetal como por ejemplo la porcin escamosa del hueso temporal, el cigomtico y
maxilar, hueso cigomtico o malar derivan de la prolongacin maxilar del primer arco
farngeo asociado el mesenquima de la prominencia mandibular del primer arco se
condensa alrededor de su cartlago y experimenta osificacin intramembranosa y forma la
mandbula. El extremo dorsal del cartlago del primer arco forma dos huesos del odo
medio: el martillo y el yunque. El extremo dorsal del cartlago del segundo arco da lugar al
estribo del odo medio y a la apfisis estiloides del hueso temporal. Su extremo ventral se
osifica para formar el asta menor y la parte superior del cuerpo del hueso hioides.
Los cartlagos del tercero, cuarto y sexto arcos se forman nicamente en las porciones
ventrales de los arcos. Los cartlagos del tercer arco originan las astas mayores y parte
inferior del cuerpo del hueso hioides. Los cartlagos de los arcos cuarto y sexto se fusionan
para constituir los cartlagos larngeos, con excepcin de la epiglotis (Moore, Persaud, &
Torcha, 2013).
prominencia nasal medial mientras que las partes laterales de la nariz surgen de la
prominencias nasal lateral y la regin geniana o de la mejilla, que se forma por la unin en
las prominencias maxilar y mandibular; en la lnea de contacto entre las prominencias
maxilar y nasal lateral se forma el surco lacrimonasal y constituye el conducto
nasolacrimal. (Moore, Persaud, & Torcha, 2013).
crneo del recin nacido es redondeado y sus huesos son delgados. Al igual que el crneo
fetal, su tamao es grande en proporcin con el resto del esqueleto y la cara es
relativamente pequea en comparacin con la bveda craneal. El pequeo tamao facial se
debe a: el reducido tamao de las mandbulas, la ausencia prcticamente total de senos
paranasales (aire) y el infradesarrollo de los huesos faciales al nacer (Moore, Persaud, &
Torcha, 2013).
6.3.8.6 Crecimiento postnatal del crneo.
Las suturas fibrosas de la bveda craneal del recin nacido permiten el aumento de tamao
del encfalo durante la lactancia y la niez. Este aumento del tamao de la bveda craneal
es mayor durante los dos primeros aos de vida, el perodo de crecimiento posnatal ms
rpido del encfalo. La bveda craneal suele incrementar su capacidad hasta alrededor de
los 16 aos de edad. Despus slo suele aumentar ligeramente de tamao durante tres o
cuatro aos por el engrosamiento de sus huesos. Asimismo, se produce un rpido
crecimiento de la cara y los maxilares que coinciden con el brote de los dientes primarios
(deciduos). Estos cambios faciales son ms notables despus de la aparicin de la denticin
secundaria (permanente).
Existe un crecimiento simultneo de las regiones frontales y faciales asociadas al aumento
de tamao de los senos paranasales. La mayora de estos senos son rudimentarios o no estn
presentes al nacer. Su crecimiento es importante, ya que altera la forma de la cara y aade
resonancia a la voz (Moore, Persaud, & Torcha, 2013).
37
38
39
lugar original de unin de los procesos costales con las vrtebras es sustituido por
articulaciones costovertebrales, articulaciones planas de tipo sinovial (Moore, Persaud, &
Torcha, 2013).
.3.11
40
en casi todos los huesos de las extremidades. Las clavculas inician su osificacin antes que
el resto de los huesos del organismo. Los fmures son los siguientes huesos en mostrar
indicios de osificacin. La primera indicacin de este proceso en el modelo cartilaginoso de
un hueso largo se puede observar en la proximidad de la futura difisis, que constituye el
centro de osificacin primario. Los centros primarios aparecen en momentos distintos en
diferentes huesos, pero la mayora de ellos lo hace entre la semana sptima y duodcima del
desarrollo. Casi todos los centros de osificacin primarios estn presentes al nacimiento. La
parte de hueso que se osifica a partir de un centro primario es su difisis.
Los centros de osificacin secundarios de los huesos de la rodilla se forman en primer
lugar. Los centros del extremo distal del fmur y proximal de la tibia suelen aparecer
durante el ltimo mes de vida intrauterina (34 a 38 semanas despus de la fecundacin). Por
consiguiente, suelen estar presentes al nacer; sin embargo, la mayor parte de los centros de
osificacin secundarios aparecen despus del nacimiento. La parte del hueso osificada a
partir de un centro secundario se denomina epfisis. El hueso formado a partir del centro
primario de las difisis no se fusiona con el originado por los centros secundarios de las
epfisis hasta que el hueso ha alcanzado su longitud adulta. Este retraso permite que
contine el alargamiento del hueso hasta adquirir su tamao final. Durante el crecimiento
seo, una placa de cartlago conocida como placa (de cartlago) epifisiara se sita entre la
difisis y la epfisis.
Esta placa epifisiaria (placa de crecimiento) es sustituida finalmente por el desarrollo de
hueso en cada uno de sus lados, diafisiarios y epifisiarios. Cuando esto ocurre, se
interrumpe el crecimiento del hueso (Moore, Persaud, & Torcha, 2013).
41
7. CONSIDERACIONES TICAS.
El presente proyecto investigativo, tendr en cuenta las implicaciones ticas, con base en la
premisa del respeto por el animal, la vida, el dolor y el sufrimiento, teniendo claro qu se
quiere del animal. Tambin, ser riguroso y respetuoso con la reglamentacin que establece
normas cientficas, tcnicas y administrativas para investigaciones en salud y
experimentacin con animales, (Ministerio de Salud de la Repblica de Colombia., 2010)
con el fin de respetar las disposiciones de la resolucin nmero 8430 de 1993 en el titulo 5
Investigacin biomdicas con animales, y las disposiciones determinadas en la ley 84 de
1989 por la cual se adopta el Estatuto Nacional de Proteccin de los Animales, se crean
contravenciones y se regula lo referente a su procedimiento y competencia. De lo anterior,
y en cumplimiento de las disposiciones, resoluciones y leyes establecidas en nuestro pas,
se obtendrn las ratas para la elaboracin del material docente por el laboratorio de
produccin animal de la Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia de la Universidad
Nacional de Colombia, el cual aplica la eutanasia al roedor(rata) utilizando cmara de CO2
(ver fotografa # 1 y 2), que es un gas seguro, no explosivo, inocuo para las vas
respiratorias, fcil de generar, que no provoca dolor ni estrs y que produce un efecto
anestsico con rpida prdida de conciencia seguido de un efecto eutansico en el animal
(Persia, Vera, Mariani, & Penissi, 2010). Por tanto se utilizar en el presente proyecto de
investigacin un (1) cerdo, siete (7) roedores (ratas) y una (1) rata copulada que ser
sacrificada para obtener de 2 a 3 neonatos aproximadamente. Todo lo anterior y el presente
proyecto de investigacin fue evaluado y aprobado por el comit de tica de la facultad de
medicina el da 26 de junio de 2014 mediante acta de evaluacin No. 076 de 2014 (ver
Anexo C)
Fotografa 1.
Fotografa 2.
42
Los especmenes del proyecto de investigacin son ratones (Mus Musculus) de la colonia
ICR 21, proporcionados por el laboratorio de produccin animal de la Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional de Colombia y un (1) cerdo (Sus
scrofa domestica) sin cabeza como pieza anatmica de prueba preliminar.
8.3. Variables.
Se eligieron como variables caractersticas anatmicas susceptibles de ser observadas,
analizadas y controladas, que se clasificaron de la siguiente manera:
43
9. INSTRUMENTOS.
Para la ejecucin del trabajo de grado se requiri el laboratorio de histo-tecnologia del
departamento de morfologa de la facultada de medicina y la utilizacin de equipos,
materiales e insumos relacionados a continuacin:
9.1 Equipos
Cmara fotogrfica marca Nikon coolpix L320 16 megapixeles zoom full Hd:
Instrumento utilizado para evidenciar el color de la pieza anatmica durante el proceso
de diafanizacin.
Formato para registro del procedimiento de cada una de las fases: en cada fase de la
tcnica se diligenci un formato que identific la tcnica utilizada, el reactivo
empleado, la cantidad de compuesto utilizado, el porcentaje de cada reactivo, la
duracin de cada fase, fecha de inicio y finalizacin del proceso. Durante el mismo se
lleva informe cronolgico escrito tipo diario durante cada semana hasta finalizar la
tcnica por parte del investigador (ver anexo A).
44
9.2 Materiales.
Batas desechables.
Protectores de va area.
Papel higinico
Pipeta.
45
La segunda (2) fase, implementacin de una tcnica en un ratn de 60 das de nacido, con
concentraciones iniciales de KOH al 10% diluido en glicerina tcnica (protocolo de
Universidad de los Andes).
Como tercera (3) fase, se inicia diafanizacin en un ratn de 21 das de nacido con
concentraciones iniciales de 2% segn protocolo chileno.
La cuarta (4) fase, se inicia diafanizacin de un ratn de 13 das de nacido, con base en
experiencias de fases anteriores y resultados positivos en diafanizacin.
La quinta (5) fase, se inicia diafanizacin en fetos ratones, con concentracin inicial de
solucin de hidrxido de potasio a 0.05%.
47
11.
RESULTADOS
OBTENIDOS
DIAFANIZACIN DURANTE CADA FASE.
DE
LAS
TCNICAS
DE
MUESTRA
SEMANA
REACTIVO
CANTIDAD
EMPLEADO
REACTIVO
DEL
FECHA
FECHA
REACTI
INICIO
FINAL
VO
HORA
HORA
1
KOH
1gr
0,1%
1
2
KOH
KOH
1.5gr
O,15%
2,0GR
0,20%
06-05-14
13-05-14
12h
14h
13-05-14
21-05-14
14h
14h
21-05-14
29-05-14
10h
10h
KOH
2,0GR
0,20%
29-05-14
05-06-14
KOH
2,5GR
0,25%
05-06-14
13-06-14
KOH
2,5GR
0,25%
13-06-14
20-06-14
KOH
3,5GR
0,35%
20-06-14
27-06-14
KOH
3,5GR
0,35
27-06-14
04-07-14
48
KOH
4 GR
0,40
04-07-14
10-07-14
10
KOH
4 GR
0,40
10-07-14
22-07-14
11
Glicerina
500cc
100%
22-07-14
30-07-14
12
Glicerina
500cc
100%
30-07-14
04-08-14
13
Glicerina
500cc
100
04-08-14
11-08-14
14
KOH
2gr
0.2%
11-04-14
22-08-14
15
Glicerina
500cc
100%
22-08-14
25-08.14
16
Rojo
100%
25-08-14
02-09-14
de
alizarina..
Rojo
de
alizarina0.6
gr+1000cc
agua estril.
17
Glicerina pura
700cc
100%
02-09-14
05-09-14
18
Alcohol
1000cc
70%
05-09-14
08-09-14
18
KOH
2gr
0.2%
08-09-14
22-09-14
19
KOH
2gr
0.2%
08-09-14
22-09-14
20
Glicerina pura
500cc
100%
22-09-14
01-09-14
21
KOH
2gr
0.2%
01-09-14
15-09-14
22
KOH
2gr
0.2%
15-09-14
24-09-14
23
Glicerina
250
100%
24-09-14
26-09-14
Del anterior cuadro y para dar una evidencia real del resultado obtenido se gener un
control de registro semanal minucioso de acontecimientos relevantes captados
fotogrficamente en relacin con variables definidas durante el diseo metodolgico (color,
diafanizacin de tejido, friabilidad de tejido, centros de osificacin, visualizacin sea y
cartilaginosa) como se evidencia desde las fotografas 3 al 10:
49
50
Fotografa
4.
Inmersin
en
solucin
de
hidrxido
de
potasio
0,2%
Fuente: Elaboracin propia. Semana 4. Se visualiza diafanizacin de tejido en las patas del
espcimen.
Fotografa 5. Inmersin en solucin de hidrxido de potasio 0,25%
51
52
Fuente: Elaboracin propia. Semana 10. Se observa mayor prdida de integridad cutnea,
por tanto se deja inmerso en glicerina pura por una (1) semana para mejorar fijacin e
integridad cutnea. B. Luego una (1) semana de inmersin en glicerina se evidencia
diafanizacin de tejido.
53
54
55
Fuente: Elaboracin propia. Semana 15. A. durante las primeras 24h en glicerina pura se
diafaniza tejido con visualizacin de tejido seo. B. Tres (3) das de inmersin en glicerina
y recambio mejora visualizacin de pelvis y trax.
56
57
Fuente: Elaboracin propia. Semana 16. A. 24 horas de tincin con rojo de alizarina. B. 72
horas de tincin de rojo de alizarina. C. Cinco (5) das de tincin con de rojo de alizarina.
D. sptimo y ltimo da de tincin y primer da de inmersin en glicerina pura
58
Fuente: Elaboracin propia. Semana 18. Se realiza inmersin en alcohol al 70%, por 48h,
para fijacin y retiro de rojo de alizarina en piel y tejido blando. Posterior al segundo da de
inmersin de alcohol, se pone inmerso en KOH al 0,2% por dos semanas
59
60
61
espcimen.
Se logra diafanizar tejido del espcimen, visualizacin y tincin del sistema seo.
Se concluye que el uso de inmersin del espcimen en rojo de alizarina debe ser
menor a siete das.
62
SEM
REACTIVO
CANTIDAD
TRA
ANA
EMPLEADO
REACTIVO
KOH al 99%
FECHA
FECHA
REACTI
INICIO Y
FINAL
VO
HORA
HORA
10%
07-06-14
12-06-14
12h
14h
07-06-14
12-06-14
12h
14h
12-06-14
19-06-14
se toma un volumen de
DEL
375cc.
Glicerina
100%
tcnica
125ml
KOH al 99%
10%
se toma un volumen de
10h
325cc.
GLICERINA
175cc
100%
12-06-14
19-06-14
10%
19-06-14
23-06-14
TECNICA
3
KOH al 99%
se toma un volumen de
10h
325cc
GLICERINA
175cc
100%
19-06-14
23-06-14
10 gr de KOH+500cc
2%
23-06-14
27-06-14
TECNICA
4
KOH al 99%
63
Glicerina
250cc
100%
23-06-14
27-06-14
10 gr de KOH+500cc
2%
27-06-14
11-07-14
100%
27-06-14
11-07-14
2%
11-07-14
29-07-14
100%
08-07-14
29-07-14
29-07-14
05-08-14
tcnica
5y6
250cc
tcnica
7y8
10 gr de KOH+500cc
Agua estril se toma un
volumen de 250cc
KOH al 99%
Glicerina
250cc
tcnica
9
KOH al 99%
10 gr de KOH+500cc
Agua estril se toma un
volumen de 250cc
2%
Glicerina
250cc
100%
29-07-14
05-08-14
500 cc
100
05-08-14
12-08-14
tcnica
10
Glicerina
tecnica
11
KOH 99%
2gr
0.2%
12-08-14
19-08-14
12
KOH 99%
2gr
0.2%
19-08-14
28-08-14
13
Glicerina
500cc
100%
28-08-14
04-09-14
100%
14
KOH
4 gr
0,4%
04-09-14
16-09-14
15
KOH
4gr
0,4%
16-09-14
23-09-14
16
Glicerina
250cc
100%
23-09-14
01-10-14
17
Marcacin
800cc+0,8mg
01-10-14
01-10-14
Hora:
Hora:
16:30h
23:30h
02-10-14
02-10-14
02-10-14
02-10-14
ROJO
DE
rojo
de
alizarina.
ALIZARINA
17
17
Alcohol
al
70%
horas
Agua estril
64
17
KOH
4,5gr
0,4
02-10-14
9-10-14
18
KOH
4,5gr
0,4
09-10-14
16-10-14
19
KOH
4,5gr
0,4
09-10-14
24-10-14
20
KOH
5gr
0,5%
24-10-14
31-10-14
21
Glicerina
250cc
100%
31-10-14
04-10-14
Fuente: Elaboracin propia. Semana 1. Ratn fijado en formol al 10% por 48 horas y al
tercer (3) da se coloca inmerso en una solucin de hidrxido de potasio al 75 % volumen
(KOH 10%,) + 25% de volumen de glicerina tcnica.
65
67
Fuente: Elaboracin propia. Semana 9. Tejido blandos del ratn empiezan a diafanizar y
algunos huesos se observan.
68
Hasta la fotografa 24, se realizaron todos los pasos del protocolo universidad de los Andes,
aunque los resultados no fueron totalmente satisfactorios en diafanizacin pero se observ
que la glicerina junto al hidrxido de potasio a concentracin del 10% aceleran el proceso
corrosin y/o diafanizacin y preservan la piel del espcimen. Las anteriores observaciones
del protocolo de la Universidad de los Andes permitieron concluir que algunos pasos del
proceso de diafanizacin del protocolo se pueden fusionar con los de la fase 1, para obtener
resultados de igual calidad ms rpidamente. Para comprobar lo anterior se continula
diafanizacin de la fase dos con base a los resultados positivos que se evidenciaron en la
fase uno, al diafanizar con KOH a concentraciones no superiores de 0,5% sin glicerina
mezclada, como se observa en las fotografas No 25,26,27 y 28 de la fase 2 de
diafanizacin.
69
70
71
Fuente: Elaboracin propia. Semana 17. Se realiza coloracin de centros de osificacin por
6 horas por medio de inmersin, se lava y se recambia con alcohol al 70% por 6 horas, al
encontrar manchado de piel del espcimen, se transfiere a solucin de hidrxido de potasio
a 0,45%.
72
Fuente: Elaboracin propia. Semana 21. Inmersin y recambio cada 3 das de glicerina
pura con resultados satisfactorios en marcacin de sistema seo y diafanizacin.
73
74
MUEST
SEMAN
REACTIV
CANTIDAD
DEL
RA
REACTIVO
REACTIVO
EMPLEAD
FECHA
INICIO
FECHA
Y
FINAL
HORA
HORA
Formol al 10%
16-06-14
18-06-14
2%
18-06-14
23-06-14
100%
24-06-14
Hasta el da
O
1
Formol
al
100cc
44%
KOH al 99%
20
gr
(KOH)+1000cde
agua estril
Glicerina al
100cc
99%.
de hoy.
Fuente: Elaboracin propia. Semana 1. Fijacin con formol al 10% por 48horas e
inmersin en solucin de hidrxido de potasio 2% sin glicerina.
75
Fuente: Elaboracin propia. Semana 2. Cinco (5) das de inmersin en KOH al 2% sin
glicerina genera corrosin masiva, prdida total de integridad cutnea, muscular y
tendinosa, por tanto se suspendi inmersin de KOH al 2% y se puso inmerso en glicerina
tcnica.
11.3.1 CONCLUSIN FASE TRES: PROTOCOLO UNIVERSIDAD SANTO
TOMAS DE CHILE.
Las concentraciones de hidrxido de potasio por encima de 2% puro sin adicionar glicerina
son sumamente corrosivas en el espcimen. Por tanto, se descarta este tipo protocolo y se
suspende.
76
MUES
SEMAN
REACTIVO
CANTIDAD
TRA
EMPLEADO
REACTIVO
REACTI
INICIO
VO
HORA
HORA
Formal al
1-07-14
3-07-14
10%
03-07-14
08-07-14
100%
03-07-14
08-07-14
10%
08-07-14
23-07-14
100%
08-07-14
23-07-14
10%
08-07-14
23-07-14
100%
08-07-14
23-07-14
Formol al 44%
100cc
DEL
FECHA
FECHA
Y
FINAL
10%
1
(solo
KOH al 99%
50
gr+500cc
cinco(5)
Agua estril se
das)
toma
un
volumen
de
375cc.
Glicerina tcnica
125ml
KOH al 99%
50
gr+500cc
Agua estril se
toma
un
volumen
de
325cc.
GLICERINA
175cc
TCNICA
3
KOH al 99%
50
gr+500cc
Agua estril se
toma
un
volumen
de
325cc
GLICERINA
175cc
TCNICA
77
10
gr
de
23-07-14
31-07-14
23-07-14
31-07-14
31-07-14
07-08-14
KOH+500cc
Agua estril se
KOH al 99%
toma
un
volumen
de
2%
250cc
Glicerina tcnica
250cc
10
100%
gr
de
KOH+500cc
Agua estril se
KOH al 99%
toma
un
volumen
de
2%
250cc
Glicerina tcnica
250cc
100%
31-07-14
07-08-14
KOH
3 gr
0,3%
07-08-14
14-08-14
KOH
3 gr
0,3%
14-08-14
21-08-14
KOH
3 gr
0,3%
21-08-14
28-08-14
KOH
3,5 gr
0,35%
28-08-14
05-09-14
10
KOH
4 gr
0,4%
05-09-14
12-09-14
11
KOH
4 gr
0,4%
12-09-14
19-09-14
12
KOH
4,5gr
0,45%
19-09-14
29-09-14
13
Marcacin ROJO
800cc+0,8mg
01-10-14
01-10-14
DE ALIZARINA
rojo
Hora:
Hora:
alizarina.
16:30h
23:30h
300cc recambio
02-10-14
02-10-14
02-10-14
09-10-14
13
Agua estril
de
c/2h x 8h.
14
KOH
4,5gr
0,45%
78
15
KOH
4,5gr
0,45%
09-10-14
16-10-14
16
GLICERINA
250cc
100%
16-10-14
18-10-14
Fuente: Elaboracin propia. Semana 1. Ratn fijado en formol al 10% por 48 horas y al
tercer (3) da se coloca inmerso en una solucin de hidrxido de potasio al 75 % de
volumen (KOH 10%,) + 25% de volumen de glicerina tcnica.
79
80
81
82
Fuente: Elaboracin propia. Semanas 10, 11 y 12. A. Durante las semana 10 y 11, se
visualiza tejido muscular, mejora la visualizacin de tejido seo. B. al final de la semana
12, el espcimen se visualiza blando, desaparece visualizacin de tejido muscular, y mejora
diafanizacin de tejido seo en especial pelvis y trax
83
Fuente: Elaboracin propia. Semana 13. Coloracin de centros de osificacin con rojo de
alizarina por 6 horas. Luego se sumerge en agua estril, se lava y se recambia cada 2 horas
por 8 horas. Se observ desmanchado y retiro de la alizarina en la casi totalidad de la piel
del espcimen luego se deja inmerso en solucin de hidrxido de potasio a 0,45% por dos
semanas.
Fuente: Elaboracin propia. Semana16. Inmersin con recambio cada 3 das de glicerina
pura con resultados satisfactorios en marcacin de sistema seo y diafanizacin.
85
MUESTR
SEMANA
REACTIV
CANTIDAD
REACTIVO
REACTI
INICIO
VO
HORA
HORA
200cc
10%
4-08-14
6-08-14
EMPLEAD
DEL
FECHA
FECHA
Y
FINAL
O
1
Formol
al
44%
1
KOH
0,5gr
0,05%
6-08-14
13-08-14
KOH
0,5gr
0,05%
13-08-14
20-08-14
KOH
1gr
0,1%
20-08-14
27-08-14
KOH
1gr
0,1%
27-08-14
03-09-14
KOH
1,5gr
0,15%
03-09-14
10-08-14
KOH
1,5gr
0,15%
10-09-14
17-08-14
KOH
2gr
0,2%
17-09-14
23-09-14
KOH
1gr
0,1%
23-09-14
30-09-14
KOH
1gr
0,1%
30-09-14
07-10-14
10
KOH
1gr
0,1%
07-10-14
14-10-14
86
11
KOH
1gr
0,1%
14-10-14
21-10-14
12
KOH
1gr
0,1%
28-10-14
28-10-14
13
Glicerina
50cc
100%
05-10-14
FINAL
DE
LA
TECNICA
87
88
Fuente: Elaboracin propia. Semana 6. Se visualiz tejido seo en los miembros del ratn
y se insina en el trax, se present aumento de la prdida de integridad cutnea, sin ms
cambios significativos. Se cambia solucin de hidrxido de potasio y se aumenta
concentracin a 0,2%.
89
Fuente: Elaboracin propia. Semana 10 y 11. Durante estas dos semanas, se mantuvo la
concentracin de hidrxido de potasio al 0,1% con prdida total en fetos de integridad
cutnea.
90
Fuente: Elaboracin propia. Semana 12. Se dejan inmersos los especmenes en glicerina
pura que se recambia cada 3 das.
91
Durante la fase seis el proceso de diafanizacin se realiza con base a las experiencias
positivas de las fases uno, dos, cuatro y cinco del presente proyectos de investigacin. De lo
anterior se realiza la diafanizacin como se encuentra en la tabla 8 que est a continuacin:
MUESTRA
SEMANA
REACTIVO
CANTIDAD
% DEL
FECHA
FECHA
EMPLEADO
REACTIVO
REACT
INICIO Y
FINAL
IVO
HORA
HORA
Formol al 44%
500cc
10%
29-07-14
01-08-14
KOH al 99%
50
10%
01-08-14
03-08-14
125ml
100%
01-08-14
03-08-14
50
10%
03-08-14
06-08-14
gr+500cc
Agua estril se
toma
un
volumen
de
375cc.
Glicerina
tcnica
1 recambio
KOH al 99%
gr+500cc
por
Agua estril se
turbidez.
toma
un
volumen
de
375cc.
92
Glicerina
125ml
100%
03-08-14
06-08-14
50
10%
06-08-14
11-08-14
175cc
100%
06-08-14
11-08-14
50
10%
11-08-14
14-08-14
175cc
100%
11-08-14
14-08-14
50
10%
14-08-14
21-08-14
175cc
100%
14-08-14
21-08-14
tcnica
2
KOH al 99%
gr+500cc
Agua estril se
toma
un
volumen
de
325cc.
GLICERINA
TECNICA
KOH al 99%
gr+500cc
Agua estril se
toma
un
volumen
de
325cc
GLICERINA
TECNICA
3
KOH al 99%
gr+500cc
Agua estril se
toma
un
volumen
de
325cc
GLICERINA
TECNICA
4
KOH
2 gr
0,3%
21-08-14
28-08-14
KOH
2 gr
0,3%
28-08-14
04-09-14
KOH
3 gr
0,3%
04-09-14
11-09-14
KOH
3 gr
0,3%
11-09-14
18-09-14
KOH
3,5 gr
0,3%
18-09-14
25-09-14
KOH
3,5 gr
0,3%
18-09-14
25-09-14
10
Marcacin
800cc+0,8mg
25-09-14
25-09-14
rojo
Hora:
Hora:
ROJO
DE
de
93
10
ALIZARINA
alizarina.
16:30h
23:30h
Agua estril
300cc
26-09-14
26-09-14
recambio c/2h
x 8h.
10
KOH
4 gr
0,4%
26-09-14
03-10-14
11
Glicerina
250cc
100%
03-10-14
10-10-14
12
Glicerina
250cc
100%
10-10-14
Hasta el da
de hoy.
94
95
96
97
Fuente: Elaboracin propia. Semana 12. Inmersin y recambio de glicerina pura para
mejorar diafanizacin en espcimen.
98
99
RESUL
TADOS
Solucin de hidrxido de
potasio (KOH) en
concentracin no superior
a 0,5% sin glicerina.
Diafanizacin de tejido y
visualizacin de sistema
seo con tincin de
centros de osificacin no
adecuada, manchado y
aspecto muy rojizo del
modelo anatmico.
FASE 2. PROTOCOLO
UNIVERSIDAD DE
LOS ANDES
KOH en concentracin
de 10% y 2% mezclado
con glicerina.
FASE 3. PROTOCOLO
UNIVERSIDAD DE
CHILE
KOH en concentracin
a 2% sin glicerina.
Diafanizacin de tejido
no satisfactorio pero en
menor tiempo, asociado
a mejor tincin de
centros de osificacin
basado en evidencia
experimental.
Se descarta protocolo
sumamente corrosivo en
espcimen.
Diafanizacin no
adecuada.
Tabla 10. Resumen de reactivos y resultado fases 4,5,6 y 7 durante las tcnicas de
diafanizacin.
FASE 4.
EXPERIENCIAS
POSITIVAS FASE 1
Y 2.
REACT
IVOS
RESUL
TADOS
Inicio de KOH a
concentraciones
de
10% con glicerina y
finaliza KOH 0,5% sin
glicerina.
Diafanizacin
satisfactoria y se logra
estandarizar la tincin
de
centros
de
osificacin.
FASE 5.FETOS
RATONES
100
Se diafaniza en 12 semanas
menor que en fases anteriores,
se elabora y replica protocolo de
diafanizacin
basado
en
evidencia real que mejora
eficacia en tiempos y calidad de
diafanizacin.
101
Los resultados obtenidos con esta investigacin deben permitir la utilizacin de la tcnica
de diafanizacion utilizando, el protocolo aqu consignado para ser implementada en el
estudio de la anatoma humana, por consiguiente, se estima que es conveniente la
realizacin de otros estudios posteriores para mejorar el proceso y estandarizar el protocolo
definitivo en esta rea.
102
procedimientos durante la revisin del reactivo (rojo de alizarina) para la marcacin de los
centros de osificacin.
103
14. CRONOGRAMA.
Tabla 11: CRONOGRAMA SEGUNDO SEMESTRE 2013
MESES
AGOSTO
SEPTIEMBRE
OCTUBRE
NOVIEMBRE
DICIEMBRE
SEMANA
ACTIVIDADES
Formulacin
del problema
Revisin
del
marco terico
Aprobacin
propuesta
de
investigacin
Revisin
de
tcnicas
de
diafanizacin.
FEBRERO
MARZO
ABRIL
SEMANA
ACTIVIDADES
Revisin de tcnicas
de diafanizacin
Realizacin
de
inventario
solicitud
de
laboratorio
de
histo-tecnologia.
Compra
de
reactivos.
Compra
de
especmenes.
Prueba preliminar
fase(1)
Protocolo U. Andes
104
MAYO
JUNIO
JULIO
Fase (2)
Protocolo U. Chile
Fase (3)
Diafanizar
segn
experiencias
positivas. Fase (4).
AGOSTO
SEPTIEMBRE
SEMANA
ACTIVIDADES
Prueba
preliminar
fase(1)
Protocolo
U.
de
diafanizacin
segn
experiencias
positivas
de
fases1, 2, 3, 4, 5
en 4 ratones.
Fase (7)
Anlisis
interpretacin
de resultados.
Presentacin de
resultados
informe final.
105
OCTUBRE
NOVIEMBRE
DICIEMBRE
15. PRESUPUESTO.
15.1 PRESUPUESTO GENERAL.
El valor total del proyecto: 1.061.000$ mil pesos Mcte.
Tabla 14: Presupuesto.
RUBROS
VALOR
TALENTO HUMANO
1 Investigador
No aplica
Proporciona
2 Docentes asesores
la
Universidad
Subtotal
$ 0.0
Arrendamiento de laboratorio.
Universidad
Equipos y materiales.
596.000$
Subtotal
596.000$
REACTIVOS QUIMICOS
Hidrxido de potasio, agua destilada, rojo de alizarina,
glicerina, formol, agua destilada, acetona y alcohol 323.000$
etlico.
Subtotal
323.000$
ESPECIMENES
Ratones (Mus Musculos) colonia ICR 21
142.000$
Subtotal
142.000$
GRAN TOTAL
1.061.000$
106
la
RECURSOS
UNIDAD CANTIDAD
1 Investigadores
Mes
2 Docentes asesores
Mes
UNITARIO
TOTAL
VALOR TOTAL
No aplica
Proporciona
la
Universidad
$0.0
CANTIDAD
VALOR
UNITARIO
VALOR TOTAL
ARRENDAMIENTO DE LABORATORIOS
Proporciona la
Anfiteatro y laboratorio de 1
Universidad
histo-tecnologia
/mes
Subtotal
Proporciona
la
Universidad
$0.0
EQUIPOS Y MATERIALES
Frascos de vidrio 5L
5.000
25.000
499.000$
499.000$
22.000$
22.000$
20
40.000$
40.000$
8000$
8000$
Papel higinico
2000$
2000$
coolpix
L320
16 1
megapixeles.
Bascula gramera
Proporciona la Proporciona
Universidad
107
Universidad
la
Universidad
1 caja x 50 unid
Proporciona la Proporciona
Universidad
Protectores de va area
1 caja
Probeta graduada
Pipeta
Subtotal
la
Universidad
la
Universidad
Proporciona la Proporciona
Universidad
la
Universidad
Proporciona la Proporciona
Universidad
la
Universidad
Proporciona la Proporciona
Universidad
la
Universidad
Proporciona la Proporciona
Universidad
Baln aforadox1000
Universidad
Proporciona la Proporciona
Universidad
la
la
Universidad
$596.000
TOTAL
$596.000
ESPECIMENES
RECURSO
Ratn(Mus
CANTIDAD
Musculus)
colonia ICR 21
Ratn(Mus
Musculus)
VALOR
VALOR TOTAL
UNITARIO
9000$
72000$
70000$
70000$
142000$
108
REACTIVOS QUIMICOS
REACTIVO
Hidrxido de potasio 99% en lentejas
por 250mg.
CANTIDAD
VALOR
VALOR
UNITARIO TOTAL
9.000$
36.000$
2500
20.000
20000
60000
FCOx25gr
186.000
186.000
10.000
10.000
11.000
11.000
Proporciona
Proporciona la
la
Universidad
Acetona
1
Universidad
TOTAL
323000$
109
ANEXOS.
Anexo A.
HOJA DE REGISTRO DE DATOS
FORMATO DE REGISTRO DE ESPECIMENES DIAFANIZADO
PROCEDIMIIENTO:________________________________________________
MUESTR
A
SEMANA
REAC
CANTIDA
TIVO
EMPL
REACTIV
EADO
DEL
FECHA
FECHA FINALIZACIN Y
REACTIV
INICIO
HORA
Y
HORA
110
Anexo B.
CONTROL FOTOGRAFICO DE DIAFANIZACIN
PROCEDIMIIENTO: ________________________________________________
SEMANA 1
SEMANA 2
SEMANA 3
SEMANA 4
SEMANA 5
111
Anexo C
COMIT DE ETICA
ACTA DE EVALUACION No 076-14
112
113
16. BIBLIOGRAFA.
Bulfon, M., Carabajal, M., & Porcari, C. (Noviembre de 2012). Diafanizacin y tincin
diferencial de hueso y cartlago en embriones y pequeos vertebrados. H. Rios
(Presidencia), I Jornada Virtual Nacional e Internacional de Educacion e Investigacion en
Ciencias Morfologicas, Cordoba, Argentina.
Carlson, B. M. (2005). Embriologia Humana y Biologia del Desarrollo (pp.173-193).
Espaa: Elsevier.
Concha, I. (2006). Diafanizacion. Universidad Santo Tomas:Unidad de Anatomia
veterinaria. Recuperado de www.anato.cl/global/9-tecanatomicas/diaf/9Agd0001.pps
E-centro. (2013). Alizarina, Historia, Estructura y propiedades, Aplicaciones. Recuperado
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Eternod,
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M.
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Osteologia
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Hidroxido
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file:///C:/Users/JONATHAN/Downloads/hidr%C3%B3xido%20pot%C3%A1sico%20GPS.
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fetos
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gato.
Recuperado
de
de
114
115
116