INTRODUCCIN

En esta experiencia hemos realizado las reacciones cualitativas de protenas y

aminocidos. Como ya sabes las protenas son de suma importancia ya que estn
presentan actividad biolgica las cuales son muy beneficiosas para los seres
vivos, las protenas tienen una gran variedad de funciones en los seres vivos
participando en todos los procesos biolgicos y constituyendo estructuras
fundamentales de dichos seres vivos.
El estudio de las protenas es una de las principales ramas de la. En este informe
se tendr en cuenta los conceptos bsicos para el estudio de las reacciones
cualitativas de aminocidos y protenas.
El objetivo principal ser ver la presencia de aminocidos dentro de ciertas
protenas como la ovoalbmina y su importancia dentro de los organismos vivos y
su mecanismo de accin a nivel molecular.

RESUMEN
En esta experiencia nuestro objetivo es poder identificar a las protenas y
aminocidos mediantes reacciones cualitativas para lo cual usaremos diferentes
reactivos con los cuales se evidenciara coloracin en la solucin o precipitacin.
Usaremos pruebas como la del reactivo de Biuret para identificar la presencia del
enlace peptdico, la reaccin de ninhidrina, la reaccin Xantoproteica para
identificar aminocidos que contengan anillos aromticos, la reaccin de HopkinsCole para identificar al triptfano, la reaccin de Foly para reconocer aminocidos
que contengan azufre y la prueba de Pauly.
La conclusin a la que se puedo llegar es que mediante estas diferentes reactivos
se pueden identificar varios tipos de aminocidos, siendo estas reacciones
especficas para cierto tipo de aminocidos.

PRINCIPIOS TERICOS
Protenas
Las protenas son compuestos orgnicos de alto peso molecular que contienen
nitrgeno. Hay gran variedad de protenas y cumplen gran variedad de funciones
en los organismos. Expresan la informacin gentica en los seres vivos:
componen las estructuras celulares y hacen posible las reacciones qumicas del
metabolismo celular. En la mayora de los seres vivos (a excepcin de las plantas
que tienen ms celulosa) representan ms de un 50% de su peso en seco. Una
bacteria puede tener cerca de 1000 protenas diferentes, en una clula humana
puede haber 10.000 clases de protenas distintas. Qumicamente son polmeros
de aminocidos, unidos por enlaces covalentes (enlaces peptdicos) y dispuestos
de forma lineal. Las clulas producen protenas con propiedades muy diferentes a
partir de 20 aminocidos.
La hidrlisis cida o enzimtica de una protena produce una mezcla de
aminocidos diferentes, los que pueden identificarse por cromatografa en papel o
capa fina, siendo necesario muchas veces recurrir a la tcnica bidimensional.
Actualmente se conocen unos 100 aminocidos, aislados de sus fuentes
naturales, de los cuales 20 son esenciales. Casi todos ellos son -aminocidos, o
sea que tienen un grupo amino (-NH2 de naturaleza bsica) unido al carbono y
un grupo carboxilo (-COOH de naturaleza cida).
El carbono alfa, al ser asimtrico, puede existir tambin en 2 configuraciones
diferentes, presentndose, al igual que en el caso de los carbohidratos, dos series:
la serie L- que es la ms abundante en la naturaleza y la serie D-. Por la misma
razn, casi todos son ptimamente activos.

Enlace peptdico
Se llama enlace peptdico a la unin de dos aminocidos mediante la prdida de
una molcula de agua entre el grupo amino de un aminocido y el grupo carboxilo
del otro. El resultado es un enlace covalente CO-NH. El enlace peptdico slo
permite formar estructuras lineales, sin ramificaciones, que se denominan
pptidos; estas estructuras son muy estables, pues los enlaces peptdicos son
covalentes. Todos los pptidos tienen un grupo amino en un extremo y un grupo
carboxilo en el otro. La reaccin qumica en que se forma un enlace peptdico se
llama condensacin, y su descomposicin en aminocidos es la hidrlisis.

Propiedades de las protenas

Punto isoelctrico
Se llama Punto Isoelctrico (pI) a aquel pH (caracterstico para cada protena o
aminocido) en el cual la forma neutra o Zwitterion se encuentra presente en la
mxima cantidad. En el pI los aminocidos y protenas son menos solubles, por lo
que su conocimiento es muy til en su aislamiento y purificacin.
Carcter anftero
Tanto los aminocidos como las protenas tienen carcter anftero, propiedad que
deriva de la presencia simultnea de grupos de propiedades opuestas en la
molcula: grupos cidos (-COOH) y bsicos (-NH2). La interaccin (intramolecular)
entre estos grupos (cido-base) origina una forma dipolar llamada tambin sal
interna o Zwitterion. En este estado el aminocido o protena es neutra.
Cualquier variacin en el pH del medio dar lugar a que predomine una de las
cargas y, segn el pH, puede comportarse como cido o como base:

Desnaturalizacin de protenas

Se da este nombre a todo proceso que, sin ruptura o formacin de enlaces

qumicos, produce una modificacin en las propiedades de la protena nativa; es
decir, en este proceso no se alteran los enlaces peptdicos, mantenindose
tambin la secuencia u orden en que estn unidos los aminocidos (la estructura
primaria). Se modifican nicamente el ordenamiento espacial de la cadena
(estructuras secundaria y terciaria) por destruccin de las fuerzas intermoleculares
que mantienen esta disposicin geomtrica. Las protenas desnaturalizadas son
qumicamente ms reactivas y ms fcilmente hidrolizadas por las enzimas. Si se
trata de una protena con actividad biolgica, sta desaparece por la
desnaturalizacin. Para muchas protenas, el aspecto ms visible de su
desnaturalizacin es la disminucin de su solubilidad en agua producindose la
coagulacin. La desnaturalizacin puede realizarse por: accin del calor; por
adicin de cidos o lcalis concentrados y el pH es muy alto (mayor a 10) o muy
bajo (menor a 3). Tambin puede ser producida por algunos solventes orgnicos
como alcohol o cetona. Si la accin de estos agentes es prolongada, el proceso se
hace irreversible, no pudiendo la protena volver a su estado primitivo.

Parte experimental
I. PARTE EXPERIMENTAL

Reaccin de Biuret sobre el Grupo Peptdico:

Curso de la Determinacin
En cuatro tubos de ensayo se coloc las siguientes muestras: solucin
diluida de protena de huevo y

solucin de glicina (aminocido). Se le

aadi dos gotas del reactivo de Biuret obteniendo como resultado una
coloracin morada o violeta (resultado positivo) para todas las muestras
proteicas y un resultado negativo (ausencia de coloracin) para la muestra
de glicina

Reaccin de la Ninhidrina sobre el Grupo Amino

Curso de la Determinacin
En cinco tubos de ensayo se coloc las siguientes muestras: solucin diluida
de protena de huevo , solucin de alanina y - alanina (estos dos
ltimos aminocido).
A estos tubos con muestra se les aadi dos gotas de ninhidrina al 0.5%
obteniendo como resultado una coloracin azul (resultado positivo) para las
muestras de: solucin diluida de protena de huevo, solucin de protena de

carne y alanina, adems, resultado negativo (ausencia de coloracin)

para las muestras de alanina .

Reaccin Xantoproteica sobre el anillo aromtico de aminocidos cclicos

En un tubo de ensayo colocar 5 gotas de protena de huevo, en otro fenilalanina y

en un tercer tubo tirosina.
Luego aadir a cada tubo 3 gotas de cido ntrico concentrado, y hacerlo calentar
hasta ebullicin observamos la coloracin de la solucin, de color amarillo.
Enfriar el contenido de los tubos, luego a cada tubo agregarle por gotas solucin
de hidrxido de sodio hasta que se evidencie cambio total de coloracin, este color
ser anaranjado.

Reaccin de Hopkins-Cole sobre triptfano

En un tubo de ensayo colocar 2 gotas de solucin de triptfano, luego agregarle 6
gotas de cido actico glacial (el cual tiene como impureza el cido glioxilico es
cul es el que reacciona con el triptfano) y calentar cuidadosamente hasta
disolver el precipitado formado, dejar enfriar.
Luego agregar por las paredes del tubo cido sulfrico concentrado, en el cual
notaremos la formacin de un anillo coloreado.

Reaccin de foly sobre aminocidos

dbilmente unido

que contienen azufre

En dos tubos de ensayo colocamos 10 gotas de acetato de plomo y

a cada uno
agregar por gotas hidrxido de sodio hasta la
disolucin del precipitado formado al principio , agregar 5 gotas de
ovoalbmina al primero y al segundo cistena

Reaccin
de aminocidos
nitroprusiato sodio

que

contienen

azufre

con

Curso de determinacin.-en un tubo de ensayo colocamos 5 gotas

de albumina fresca no diluida , en otro solucin de cistena y en
cada uno agregar hidrxido de sodio y hierven por 3 minutos
luego de enfriar la solucin luego
agregar en cada tubo agregar
de 2 a 3 gotas de nitroprusiato de sodio

Prueba

de

pauly
Curso

de

la

determinacin .A un 1 mL de solucin de acido sulfalinico al 1% en acido clorhdrico

al 5 % .se le agrega 2 Ml de solucin de nitrito de potasio al
0.5% , seguidamente agregamos 2 ml de de tirosina al 0.01% y
luego de agitar agregar carbonato de sodio al 10%.

Discusin de resultados
comenzamos

con la

reaccin de Biuret se usa para reconocer el grupo

peptdico, por tanto, sustancias en cuya estructura se halle la presencia de este

darn positivo a esta reaccin (cambio de coloracin a violeta) , por este
motivo era de esperarse que las protenas de huevo den positivo a la reaccin,
debido a que las protenas son compuestos formados por series de
aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos, en el caso de la glicina, la
respuesta a la reaccin ser negativa debido a la glicina es un aminocido, no
forma un enlace peptdico en su estructura y por tanto el reactivo de Biuret no
forma del complejo (por consiguiente no habr cambio en la coloracin de la
solucin).

Reaccin de la Ninhidrina sobre el Grupo Amin

Discusin de Resultado
La reaccin con ninhidrina nos ayuda a diferenciar y (u otros)
aminocidos en su forma libre o como grupo amino y

su presencia en

molculas como las protenas, fundamentndose en la posicin de este

grupo amino. Por tanto podemos decir que tanto en la solucin diluida de
protena de huevo, alanina y prolina

encontramos grupos amino

que dan coloracin azul con la ninhidrina, ahora si bien podemos decir que
en las

muestras de alanina

no se puede descartar totalmente la

ausencia de estos grupos debido a que pueden encontrarse en otra posicin

como en la alanina .

Reaccin Xantoproteica
El resultado positivo en todos los ensayos nos indica la presencia de restos
fenlicos en todas las muestras, se ve en la figura una intensa coloracin en
la muestra de protena de huevo, y desprendimiento de vapores nitrosos en
la muestra de tirosina (esto se da producto del calentamiento), adems de
acuerdo a la intensidad en coloracin de las soluciones podemos decir que
en la protena de huevo hay mayor concentracin de sustancias que
contienen anillo bencnico

Reaccin de Hopkins Cole (Adamkiewicz)

Discusin de Resultado
Esta determinacin es exclusiva del aminocido triptfano y la formacin del
anillo en la solucin indica la formacin de compuesto obtenido por la reaccin
del cido Glioxlico (impureza del acido actico glacial) con el triptfano en
medio de acido sulfrico, este compuesto es el bis-2-triptofanilmetano.

Reaccin de Foly (Folin)

Discusin de Resultado
En tres tubos de ensayo se coloc las siguientes muestras: solucin diluida
de protena de huevoy cisteina. A las muestras se le agreg diez gotas
solucin de acetato de plomo y adems a cada tubo se le aadi gota a
gota una solucin de hidrxido de Sodio esperando la formacin de un
precipitado negro lo que nos indica indirectamente la presencia de azufre
dbilmente ligado a la protena, esto puede darse debido a la presencia de
aminocidos como la cistena y la cistina en la protena, obteniendo como
resultado que solo la protena de huevo da positivo a esta reaccin.

Reaccin de Aminocidos que contienen Azufre con

Nitroprusiato de Sodio

Discusin de Resultados .-A las muestras se le agreg diez gotas de

solucin de hidrxido de Sodio y se lleva a hervir los tubos en bao de agua
durante aproximadamente 3 minutos luego se deja enfriar y se aade 2 gotas
de nitroprusiato de sodio observndose un cambio de coloracin en los tres
tubos siendo el cambio mas notorio en el caso de la protena de huevo el
complejo coloreado puede formarse por la presencia de aminocidos o restos
de cistena, cistina o metionina los cuales presentan enlaces R SH que se
rompen fcilmente por medio de una hidrlisis o por calentamiento.

Reaccin de pauly
Discusin de resultados
Esta reaccin se basa en la capacidad de la histeina aunque en
nuestro caso utilizamos la tirosina en reaccionar con el acido
diazobencelfonico para formar un compuesto de color intenso rojo
guinda.

CONCLUSION

En las reacciones que vimos principalmente

aprendimos a

reconocer Las protenas estn constituidas por aminocidos.

Al realizar las diferentes pruebas con la solucin diluida de

protena de huevo, se pudo comprobar que est en una
protena completa, pues dio positivo a todos los ensayos de
presencia de aminocidos.

En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un

cambio en el estado fsico de la protena, este cambio es
irreversible, aunque tambin sabemos que hay reacciones de
desnaturalizacin que pueden ser reversibles.

En el caso de cuando se hierve la solucin de una protena con

otra sea nitrato y nitrito mercurio, se forma un coagulo o una
coloracin rojo pardo. Se debe al grupo fenlico.

Otra conclusin importante es si a la solucin de la protena se

agrega unas gotas de solucin de sulfato de cobre, aparece una
coloracin violeta, le dan las protenas y polipptidos pero no
los aminocidos y o los dipptido y se debe a la presencia de
enlaces peptdicos.

Y por ultimo

Debido a su carcter anftero, las protenas

reaccionan con los cidos y con las bases los cidos proteicos y
lcalis proteicos son insolubles en agua y en solucin de sales
neutras y se disocian en los cidos y en las bases diluidas, pero
precipitan en medio neutro. Las protenas recuperadas resultan
desnaturalizadas.

Recomendaciones
- Ver que el material de vidrio este limpio y sin
rajadura.
- Preparar y filtrar la solucin de ovoalbmina antes
iniciar la prctica.
- Hacer pruebas para los reactivos que den
interferencia
para
poder
diferenciar
las
coloraciones entre estas con las protenas.
- Usar guantes protectores para reacciones donde
se requiera calentamiento. Estos procesos pueden
conllevar a una proyeccin (salpicadura) de la
muestra y afectar al operario.

- Las pruebas que requieran uso de cidos

concentrados o reactivos voltiles, realizar en
campana extractora y usando lentes.

BIBLIOGRAFA

BIOQUMICA; Lehninger; Cuarta edicin; Ediciones Omega Barcelona

2005; Pginas:
75 - 85.
QUMICA ORGNICA; L.G. Wade, Jr; Quinta edicin; Editorial Pearson
Prentice Hall Madrid 2004; Pgina: 1118.
http://www.biologia.edu.ar/macromoleculas/aminoaci.htm

CUESTIONARIO
1 Cules son los aminocidos bsicos, cidos y
neutros?
De las propiedades de los aminocidos estndar se puede
observar en la tabla el punto isoelctrico (pI) que es El pH
donde la carga neta del aminocido es igual a cero.
Basndose en esta definicin, se puede decir que:
Por encima de este pH, el aminocido tendr carga
negativa (Base)
Por debajo de este pH, tendr carga positiva
(cido).
El pH fisiolgico es aproximadamente 7,00, por lo tanto
se hace la siguiente tabla:

Aminoc
ido
Glicina
Alanina
Prolina
Valina
Leucina
Isoleuci
na
Metionin
a
Fenilala
nina
Tirosina
Triptfa
no
Serina
Treonina
Cistena
Asparag
ina
Glutami
na
Lisina
Histidin
a
Arginina
Ac.
Asprtic
o
Ac.
Glutama
to

Caracterstica
cidoBase
Bsico
Ligeramente
Bsico
Ligeramente
Bsico - Neutro
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
Bsico
cido
Ligeramente cido
- Neutro
cido
Bsico

Se observa que la mayora

de
los
aminocidos
presentan comportamiento
bsico a pH fisiolgico, a
excepcin de la lisina, la
arginina y la histidina que
presentan comportamiento
cido.
2 Cules
son
aminocidos
esenciales?

los

Los
seres
humanos
pueden
sintetizar
aproximadamente
la
mitad
de
los
aminocidos,
que
forman las protenas, el
resto de aminocidos,
denominados
aminocidos
esenciales, han de ser
ingeridos en la dieta.
Los diez aminocidos
esenciales
son
los
siguientes.
- Arginina (Arg)

Bsico

Isoleucina (ILe)

Histidina (His)
- Valina (Val)
-

- Metionina (Met)
- Leucina (Leu)
(Trp)
- Treonina (Thr)
(Phe)

Lisina (Lys)
Triptfano

Fenilalanina

3 Qu aminocidos dan reaccin positiva con el

reactivo de Biuret y por qu?
Cualquier compuesto que contenga grupos carbonilos
unidos por un tomo de nitrgeno da un resultado
positivo.
Con los aminocidos libres, esta reaccin generalmente
da reaccin negativa, a excepcin de los aminocidos
histidina, serina, treonina y asparragina, ya que estos
poseen grupo bsicos que pueden asociarse al in Cu 2+
formando un complejo coloreado de cobre.
Los grupos amino se fijan al in Cprico formando el
complejo coloreado. Esto solo puede llevarse a cabo para
soluciones
acuosas
de
alta
concentracin
de
aminocidos.
4 En qu se fundamentan las
coloracin de los aminocidos?

reacciones

de

Se fundamentan en la fuerte absorbancia de la luz

caracterstica a una determinada longitud de onda de la
mayora de protenas. La molcula de aminocido al
absorber la luz mediante la captacin selectiva de una
longitud de onda, reflejara el color caracterstico para su
inmediata identificacin cualitativa.
Cualquier grupo funcional (o asociacin de grupos)
responsable de la absorcin, generalmente debido a la
presencia de enlaces mltiples conjugados, recibe el

nombre de cromforo. La modificacin de la longitud de

onda o la absorbancia molar podra ser tambin por la
existencia de grupos auxcromos, que son sustituyentes
que no son cromforos en si mismos pero que estn
unidos a grupos cromforos.
Las bandas de absorcin pueden desplazarse hacia
menores frecuencias o mayores longitudes de onda
(desplazamiento batocrmico) o desplazarse hacia
mayores frecuencias o menores longitudes de onda
(desplazamiento hipsocrmico).