Anlise de DNA por eletroforese em gel

de agarose
Danielson Ramos

Introduo
Antes, os estudos da engenharia de DNA eram monitorados pela
velocidade de sedimentao em gradiente de sacarose;
Hoje, se utiliza a tcnica de eletroforese em gis de agarose e
poliacrilamida, pois so mais simples, rpidas e poder de resoluo
superior.
Princpio da eletroforese: Consiste na migrao e separao de
partculas em uma matriz, submetidas a uma diferena de potencial
eltrico.
A migrao das partculas depende do tamanho e carga, alm da DDP a
que foram submetidas.

 Esquema 1: Eletroforese
Sistema Horizotal

Esquema 2: Eletroforese
Sistema vertical

Parmetros que afetam a migrao do

DNA de fita dupla em gel de agarose
Tamanho da molcula de DNA, concentrao de agarose e
marcadores moleculares;
Conformao do DNA e agentes intercalantes;
Voltagem aplicada;
Tampo de corrida

Protocolo Experimental

Preparo do gel
Eletroforese
Anomalias de migrao mais frequentes
Efeito de extremidades;
Efeito de sobrecarga da amostra;
Contaminao do DNA por sais e protenas.

Cuidados Importantes
Brometo de etdeo: Usar luvas na manipulao e antes de serem descartados,
devem ser descontaminados;

Luz UV: Usar culos e outros Eps;

Agarose: No agitar o erlenmeyer logo aps a fuso (preparo);
Reciclagem do Gel: Descontaminar, estocar em H2O destilada com trocas(15
dias), fundir em microondas, medir o volume e acrescentar o tampo
decorrida, estocar a temperatura ambiente;

Diferentes concentraes de gis na reciclagem, considerar 1%.

Finish