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FACULTAD DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA
MANUAL DE PRÁCTICAS
BIOQUIMICA
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FUENTE: http://quimicoupagu.blogspot.com/
MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA
Practica no. 1
SOLUBILIDAD DE CARBOHIDRATOS
FUNDAMENTO:
Loa carbohidratos son en general mas solubles en agua y solventes inorganicos y
menos solubles o insolubles en solventes inorganicos.
REACTIVOS:
-Agua destilada
-HCl 5%
-NaOH 5%
-Etanol
-Cloroformo
-Carbohidratos
Glucosa
Fructosa
Xilosa
TECNICA:
Colocar aproximadamente 15 mg de cada uno de los carbohidratos en tubos
etiquetados y examine su solubilidad en agua, alcali diluido, acido diluido, etanol y
cloroformo añadiendo 2ml de solvente.
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
FUNDAMENTO:
Cuando se calienta pentosas con HCl concentrado se forma furfural que se
condensa con orcinol (3,5-dihidroxitolueno), en presencia de iones ferricos para
dar un complejo coloreado.
GENERALIDADES:
-Explique que es un monosacárido, oligosacarido y un polisacarido.
-Clasificacion de los monosacáridos en base al numero de atomos de carbono que
poseen
_Escriba las formulas de una triosa, una terrosa, una pentosa y una hexosa.
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MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA
REACTIVOS:
1.- Reactivo de Bial. Disolver 1.5 g de orcinol en 500 ml. De HCl concentrado.
Agregar a esta solucion 20 gotas de FeCl3. Guardar en frasco ambar.
2.- Solucion de carbohidratos:
Glucosa: 1g/100ml
Xilosa: 1g/100ml
TECNICA:
1.- Rotular los tubos de ensaye de 15 x 150 con el nombre del carbohidrato a
probar y el nombre de la prueba (Bial).
2.- Pipetear 1ml de la muestra (sol. de carbohidrato) al tubo de ensaye
correspondiente, y 2.5 ml de reactivo de Bial.
3.- Colocar en baño de agua hirviente hasta la aparicion de color, y sacar
inmediatamente.
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
PRUEBA DE SELIWANOFF
FUNMDAMENTO:
Las cetosas se deshidratan mas rapidamente que las aldosas dando derivados de
furfural que se condensan con resorcinol para formar un compuesto coloreado, por
lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado que ocasionaria la
deshidratación de las aldosas.
GENERALIDADES:
-Explique que es una aldosa y una cetosa
-Escriba la formula de Fisher y de Haworth de una aldosa y una cetosa con
nombres.
REACTIVOS:
1.- Reactivop de Seliwanoff. Disolver 0.7 g de resorcinol en 100 ml de HCl
concentrado. Agregar agitando 100 ml de agua destilada. Guardar en frasco
ambar.
2.- Solucion de fructosa y glucosa 1g/100ml cada uno.
TECNICA:
1.- Rotular los tubos de endsaye con el nombre del carbohidrato y el nombre de la
prueba (Seliwanoff).
2.- Pipetear 2 ml del reactivo de Seliwanoff a cada tubo y añadir 2 gotas del
carbohidrato al tubo de ensaye correspondiente. Calentar en un baño de agua
hirviente hasta la aparicion de color.
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MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
PRUEBA DE YODO
FUNDAMENTO:
El yodo forma complejos coloreados de absorción con los polisacaridos.
GENERALIDADES:
-Enlace glucosidico , como se forma, estructura quimica de uno.
-Describa la estructura quimica de sacarosa, almidon, y glucogeno.
REACTIVOS:
1.- Solucion de yodo (mezclar 2 g de KI y 1 g de yodo , disolver esta mezcla en
agua destilada, completar a 100 ml).
2.- Solucion de
almidon 1g/100ml
sacarosa 1g/100ml
glucosa 1g/100ml
TECNICA:
Colocar en una capsula de porcelana 3 gpotas de solucionn problema y 3 gotas de
yodo, observe los colores.
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
Practica no. 2.
IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS II.
REACCIÓN DE TOLLENS.
REACTIVOS:
GLUCOSA 2%
ARABÍNOSA 2%
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MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA
MALT-OSA 2%
SACAROSA 2%
ALMIDON.
REACTIVO DE TOLLENS:
MEZCLAR 10 mL DE HC1 CONCENTRADO CON 2 Ml DE FLOROGLUCÍNOL AL
2% Y LLEVAR CON AGUA DESTILADA HASTA 18 ml.
TÉCNICA:
1.- COLOCAR EN EL TUBO DE ENSAYO CORRESPONDIENTE 0.5MLDE LAS
SOLUCIONES A PROBAR (GLUCOSA, ARABINOSA, MALTOSA, SACAROSA,
ALMIDON
2.- AGREGAR 1 ML DE REACTIVO DE TQLLENS Y MEZCLAR.
3.- CALENTAR EN UN BAÑO DE AGUA HIRVIENTE POR 3 A 4MIN.
4.- UN COLOR OSCURO ES UNA PRUEBA POSITIVA.
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
REACTIVOS:
GLUCOSA 2%
ARABINOSA2%
MALTOSA 2%
SACAROSA 2%
FRUCTOSA 2°/o
ALMIDÓN 2%
AGUA DESTILADA.
REACTIVO DE FEHLING:
SOLUCIÓN A: PESAR 34.65 g DE SULFATO DE COBREY DISOLVER EN 300 ml
DE AGUA DESTILADA, LLEVAR A 500 ml CON AGUA Y CONSERVAR EN
FRASCO CON TAPÓN DE HULE.
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TÉCNICA:
PREPARACIÓN DEL TESTIGO:
1.- COLOCAR EN UN TUBO DE ENSAYE 2 ml DE AGUA DESTILADA
2.- AGREGAR 0.5 ml DE FEHLING A Y 0.5 ml DE FEHLING B Y MEZCLAR.
3.- CALENTAR EN BAÑO MARÍA A EBULLICIÓN DURANTE 5 MIN.
4.- NO DEBE PRODUCIRSE UN PRECIPITADO ROJO LADRILLO
RESULTADO:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
REACCION DE LA ANTRONA.
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MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA
REACTIVOS:
1.- SOLUCION DE ANTRONA 2 GR/LT EN HCl CONCENTRADO.
2.- SOLUCION DE GLUCOSA 1 GR/100 ML
3.- FRUCTOSA 1 GR/1OO ML.
TECNICA:
1.- APROXIMADAMENTE A 2 ML DE ANTRONA AGREGUE 5 GOTAS DE LA
SOLUCION PROBLEMA, MEZCLAR FUERTEMENTE Y OBSERVAR EL CAMBIO
DE COLOR.
RESULTADO:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
PRACTICA NO. 3.
REACCIÓN DE BENEDICT PARA AZUCARES REDUCTORES
Fundamento:
Esta prueba se basa en la reacción de reducción del cobre de Benedict. La
glucosa y otras sustancias reductoras reducen los iones cúpricos a iones cuprosos
y forman un oxido cuproso rojo. El color azul de Cu++ es negativo para sustancias
reductoras.
Generalidades:
Escriba las fórmulas de la glucosa, la sacarosa y un segmento del almidón (en
forma de alfa amilasa).
Reacción de Fehling.
Consiste en:
1 ml de la solución problema (Hidrolizado)
+
0.5 ml de Fehling A
+
0.5 ml de Fehling B
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MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA
Reactivos:
1. Reactivo de Benedict
2. solución de almidón 2%
3. solución de sacarosa 2%
4. Solución de glucosa a diferentes concentraciones indentificadas como:
Glucosa 1, 2,3 y 4.
Técnica:
Hidrólisis de la Sacarosa
5 ml de sacarosa 2%
+
6 gotas de HCl concentrado
Reacción de Fehling
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+
0.5 ml de Fehling A
+
0.5 ml de Fehling B
Calentar 5 minutos en baño de agua hirviente
Resultados y Observaciones:
Conclusiones:
PRACTICA NO. 4
FERMENTACIÓN DE LA GLUCOSA POR LEVADURAS
(Sacharomyces cereviceae)
FUNDAMENTO:
La glucosa es un carbohidrato fermentable por las levaduras.
REACTIVOS:
Solución de glucosa (1 g en 100 ml)
Reactivo de benedict.
Levadura de panadero seca activa.
TÉCNICA:
1.- En un vaso de precipitado de 25 ml. Pipetee 10 ml de la solución de glucosa y
añada 0.3 g (la punta de una espátula) de levadura. Mezcle perfectamente hasta
que la mezcla sea homogénea. Incube a 37 grados.
Realice una prueba de Benedict a esa mezcla a los 30 min., y a la hora y media de
incubación.
2.- Para verificar que la solución de glucosa es un azúcar reductor, realice una
prueba de Benedict a la solución de glucosa.
INTERPRETACION:
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RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
PRACTICA NO. 5.
DETERMINACIÒN DE GLUCOSA DEL SUERO POR EL METODO DE LA
GLUCOSA OXIDASA.
ANTECEDENTES:
FUNDAMENTO:
GLUCOSA OXIDASA
Peroxidasa
H2O2 + Hidroxibenzoato + 4-Aminoantipirina
Cromógeno Quinoneimina Rojo +H 2º
MATERIAL:
REACTIVOS:
Reactivo de color:
Una solución conteniendo después de reconstitución 0.5125 mml. / L de
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Estándar de glucosa
PRECAUCIONES:
No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con la piel y ojos.
PROCEDIMIENTOS:
CALCULOS Y RESULTADOS
( )
VALORES ESPERADOS
70-105mg. / dL
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OBSERVACIONES:
RESULTADOS:
A= 0.310
B= 0.315
.323 X 90 = 83 mg/dl
.312
RESULTADOS:
CONCLUCIÒN:
PRACTICA NO. 6.
FUNDAMENTO:
Son pruebas que miden la capacidad para metabolizar la glucosa. Las personas
que padecen de diabetes mellitus tienen altos niveles de glucosa en la sangre y
las pruebas de tolerancia a la glucosa son una de las herramientas para
diagnosticarla.
Los métodos más utilizados más comúnmente para evaluar la tolerancia a una
sobrecarga de glucosa pueden ser:
Por tanto, la prueba puede influirse no sólo por aquellos factores vinculados con la
utilización de la glucosa, sino también por los que influyen en su absorción.
INTERPRETACIÓN
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DIBUJOS:
CALCULOS Y RESULTADOS:
CONCLUSIONES:
PRACTICA NO. 7.
DETERMINACIÒN DE GLUCOSA SERIADA.
ANTECEDENTES:
La determinación de la glucosa en fluidos biológicos asido bien documentadas. La
prueba de glucosa pude ser diagnostica mente significativa en diabetes e
hipoglucemia.
MATERIAL:
4 tubo de ensaye de 13/100
1pipeta de 20 microlitros
1 pipeta de 5ml.
REACTIVOS:
Reactivo de color:
Una solución conteniendo después de reconstitución 0.5125 mml. / L de
4-antipirina, 10mmol /L de p- hidrixibenzoato, > 20 000 U/L de glucosa oxidasa,
>1000 U/L peroxidasa (Rábano Picante), buffer y preservativo.
Estándar de glucosa
Una solución acuosa conteniendo 90 ml/dL la glucosa y perceptivos
PROCEDIMIENTOS:
1.-prepare el reactivo de trabajo de glucosa
2.-en tubos separados pipetee 20 microlitros del estándar o del suero a ensayar
3.-añada 2 ml. De reactivo y mezcla.
4.- incube por 10 minutos a 37ºC, y determine la absorbancia del estándar
(A s) y de cada cero (A) a 505 nm. Contra blanco de reactivo.
CALCULOS Y RESULTADOS
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( )
VALORES ESPERADOS
70-105mg. / dL
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
CONCLUCIÒN:
PRACTICA NO.8.
Determinación de proteínas totales.
Principio
++ Álcali
Proteína + Cu complejo de color
Reactivo
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Material
Procedimiento (Manual)
Calibración
Cálculos
Abs = Absorbancia
Abs (Paciente)
-------------------- * concentración del estándar = concentración de proteína g/dl.
Abs (Estándar) g/dL
Valores esperados
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
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CONCLUCIÒN:
PRACTICA NO. 9.
PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA
OBJETIVO
Cuantificación de las proteínas totales y albúmina en el suero.
FUNDAMENTO
Proteina:
La proteína presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio
alcalino, originando un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometría.
Albumina:
La determinación colorimetrica de albumina humana en suero se realiza en un
medio amortiguado, lo cual permite su union por puentes de hidrogeno a
colorantes o indicadores como el verde de bromocresol, tiene la propiedad de
enlazarse específicamente con la albúmina produciendo un cambio de color de
intensidad proporcional a su concentración.
GENERALIDADES
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Valores Normales
METODOLOGIA:
BIURET
VERDE DE BROMOCRESOL
REACTIVOS
PRECAUCIONES:
Los reactivos causan irritacion. Evite el contacto con piel, ojos y ropa. En caso de
contacto, lavese con abundante agua.
CONSERVACIÓN
Almacenados a temperatura ambiente, los reactivos son estables hasta su fecha
de caducidad.
INSTRUMENTOS
Use un espectrofotometro o fotocolorimetro calibrado a 540 y 630nm y un baño
capaz de mantener la temperatura a 37ºC.
MUESTRA
Suero unicamente
MATERIAL
Pipetas automatizadas
Tubos de ensayo
Cronometró
Espectrofotómetro para leer a 630 nm
PROCEDIMIENTO
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Proteínas:
Suero 0.05ml
patron 0.05ml
2.- Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.
3.- Leer la absorbancia (A) del Patrón y de la muestras frente al Blanco a 540 nm.
El color es estable durante al menos 2 horas.
Albúmina
OBSERVACIONES Y RESULTADOS:
CONCLUCIÒN:
Cuestionario.
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PRINCIPIO:
Los trigliceridos en suero son hidrolizados a glicerol y ácidos grasos libres por
acción de la lipasa. En presencia de ATP y glicerol cinasa (GK) el glicerol se
convierte a glicerol-1-fosfato. El glicerol-1-fosfato es despues oxidado por la
enzima glicerol-fosfato oxidasa (GPO) para obtener peroxido de hidrogeno. La
condensacion del peroxido con 4-clorofenol y 4-aminofenazona en presencia de
peroxidasa (POD) produce una quinineimina de color rojo seco el cual se absorbe
a o cerca de 500 nm. La intensidad del complejo coloreado formado es
directamente proporcional a la cantidad de trigliceridos en la muestra.
REACTIVOS:
Buffer de Good (pH 7.3-7.5) 50 mM, 4-clorofenol, ATP 0.5 mM, sal de magnesio 12
mM, 4-aminofenazona 0.3 mM, glicerol cinasa (microbial) > 250 U/L, glicerol-
fosfato oxidasa (microbial) > 200,000 U/L, surfactantes, estabilizadores y
preservativos, incluido azida de sodio (0.1 %).
MATERIAL:
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PROCEDIMIENTO MANUAL:
VALORES ESPERADOS:
44-148 mg/dL. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores
de referencia.
CALCULOS:
OBSERVACIONES Y RESULTADOS:
CONCLUCIÒN:
PRINCIPIO.
col. esterasa
Ésteres de colesterol. colesterol + ac. Grasos
Col. oxidasa
Colesterol + H2O colesterol 3-one + H2O2
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REACTIVOS
4-AAP. 3 mM: colesterol estearasa - 150 u/l ; colesterol oxidasa 150U/l: fenol 15
mM; buffer fosfato pH 6.8; estabilizadores no reactivos y preservativos.
El reactivo esta listo para usarse.
No se debe utilizarse si esta turbio.
INTERFERENCIA
Algunas drogas y sustancia pueden afectar la determinación de colesterol.
Material
• Reactivo de colesterol
• Pipetas automatizadas
• Tubo de ensayo
• Cronometro
• Bloque térmico
• Espectrofotómetro capaz de leer a 500 nm.
PROCEDIMIENTO (MANUAL)
1. identificar los tubos: blanco, estándar. Control, etc.
2. pipetear 1 ml de reactivo en cada tubo. Precalentar a 37°C por lo menos por
5 min.
3. agregar 10 UL de suero a sus respectivos tubos.
4. incubar los tubos por 5 min.
5. ajustar el espectrofotómetro a 500 nm.
6. leer y anotar la absorbancia.
VALORES OBSERVADOS
Colesterol deseable 200 mg/dl
Colesterol alto 240mg/dl
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
CALCULOS
ABS= ABSORVANCIA
Abs. (Estándar)
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS:
CONCLUCIÒN:
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