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PEREIRA, RISARALDA
ao 2010
El contenido
didctico
del
curso acadmico:
PROPAGACIN Y
MICROPROPAGACIN DE PLANTAS fue diseado inicialmente en el ao 2005
por el Ingeniero Agrnomo Gabriel Orlando Pardo Rodriguez.
Actualmente, el mdulo es actualizado por el Ingeniero Agrnomo Juan Carlos
Padilla Osorio, del CCAV Eje cafetero, zona Occidente quien es Especialista en
Pedagoga para el Desarrollo del Aprendizaje Autnomo (UNAD) y que
actualmente cursa el doctorado en Desarrollo Sostenible con la Universidad
Catlica de vila, Espaa.
INDICE DE CONTENIDO
10
10
12
13
15
17
Humedad.
La temperatura.
El Oxgeno.
La luz.
19
19
20
21
24
Tipos de latencia.
Mtodos para superar la latencia.
26
28
32
Leccin 6. Vigor.
32
34
34
35
35
Pruebas directas.
Pruebas Indirectas.
Pruebas de vigor recomendadas.
38
38
39
39
40
41
Anlisis de Pureza.
Anlisis de peso.
Anlisis de germinacin
Germinacin por peso.
Valor real
42
44
45
46
46
46
46
Vivero temporal.
Vivero permanente.
Criterios para el establecimiento de un vivero.
49
49
49
49
50
El ambiente de propagacin.
Factores atmosfricos.
Factores edficos.
Factores biticos.
51
51
51
53
54
55
58
Germinadores.
Produccin a raz desnuda.
59
63
65
65
65
66
Mutaciones.
68
69
69
70
72
73
74
74
75
75
75
76
Injerto doble.
Injerto de escudete o yema.
Injerto en T invertida.
78
78
79
80
82
82
83
85
85
85
Injerto ingls.
Injerto de corona.
Injerto de enchapado lateral.
Injerto de aproximacin lateral
Injerto de aproximacin en puente.
89
89
89
90
Acodo areo.
Acodo de punta.
92
92
93
95
95
95
97
97
97
98
99
99
101
101
101
Bulbos.
103
103
Cormos.
105
105
Tubrculos.
106
106
Rizomas.
107
107
107
Seudotallos.
Estolones
108
109
109
109
109
111
113
113
113
Area de preparacin.
Area de lavado y esterilizacin.
7
Area de transferencia.
Area de incubacin.
Area de adaptacin
Equipo y elementos necesarios para el montaje de un laboratorio
113
113
114
114
116
117
123
125
126
129
129
129
129
130
131
131
131
132
Los tejidos.
El rea de trabajo.
133
133
133
Los instrumentos.
El investigador.
134
134
135
El autoclave.
Filtracin.
136
136
136
136
Sin respuestas.
Cultivo infectado.
Oxidacin del explante.
138
138
138
138
Formacin de callo.
Callo ms regeneracin directa.
Vitrificacin.
137
137
137
141
141
141
141
143
144
145
148
148
148
148
Fase de aislamiento.
Fase de inoculacin.
Fase de repicado.
149
149
149
150
152
153
157
BIBLIOGRAFA
158
la
10
11
En las flores masculinas, se producen sobre las anteras, las clulas de polenclulas reproductoras masculinas-, las cuales en el proceso de polinizacin se
trasladarn a las flores femeninas para unirse con los vulos, que son las clulas
reproductivas femeninas, producidas en el saco embrionario. Cada vulo
fecundado tiene la posibilidad de desarrollarse para conformar una semilla y sta a
su vez, puede originar una nueva planta.
12
Entre las angioespermas, las plantas que tienen dos cotiledones se clasifican
como dicotiledoneas
y las que cuentan con un solo cotiledn como
monocotiledoneas. Las gimnospermas pueden tener hasta 15 cotiledones.
La mayora de las semillas consisten en tres porciones: embrin, una planta
miniatura dentro de la semilla; endospermo, reservas almacenadas del alimento
para el embrin creciente; y la cubierta de la semilla (testa), que abarca y protege
el embrin y el endospermo contra el dao, prdida de exceso de agua, y otras
condiciones desfavorables. El embrin tiene unas o ms hojas miniatura de la
semilla (cotiledones), un vstago embrionario (plumula o epicotilo), una raz
embrionaria (radcula), y una hipocotilo, la zona de la transicin entre el vstago
embrionario y raz.
13
14
15
16
Co nt e ni d o d e hume d a d
Ma z ( Z e a ma ys)
30.5%
So ya ( G l ycin e ma x)
50.0%
Re mo l a ch a ( Be t a ssp . )
31.0%
Al g o d n ( G o ssypiu m sp p . )
50-55.0%
Hi g u eri lla ( Ri ci n u s co mu n i s)
32-36.0%
Ar r o z ( O r yza sa ti va )
32-35.0%
32-36.0%
Ma n ( Ar a chi s h yp o ga e a )
50-55.0%
17
W ater absorption by
Las semillas secas en la etapa I (imbibicin) tienen un alto potencial negativo del
agua debido a las caractersticas coloidales de la capa de semilla.
Las superficies de protenas, de la celulosa, del almidn, y de otras sustancias
deben primero hidratarse. La toma o la imbibicin del agua en la etapa I es fsica,
dando por resultado el ablandamiento o ruptura de la cubierta de la semilla y un
aumento en el volumen de la semilla. (ver figura 2)
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T emperatura
T emperatura
mnima (C)
ptima (C)
T emperatura
mxima (C)
Arroz
10-12
30-37
40-42
Ma z
8-10
32-35
40-44
T rigo
3-5
15-31
30-43
Tomate
Soya
20
8
20-35
32
35-40
40
El oxgeno
La mayora de las semillas requiere una fuente adecuada de oxgeno durante la
germinacin. El oxgeno se requiere para el proceso de respiracin que permite
oxidar los almidones, las grasas, y otras reservas de alimento, y su utilizacin es
proporcional a la cantidad de la actividad metablica.
20
As, un medio de germinacin debe ser flojo, friable, y bien aireado. Las semillas
sembradas en suelos pesados pueden germinar mal, especialmente durante
estaciones hmedas , cuando el suelo se satura y carece a menudo del suficiente
oxgeno.
Profundizar la semilla al plantarla es desfavorable porque la fuente del oxgeno
puede ser restringida o puede suceder que las plantas de semillero no puedan
alcanzar la superficie, especialmente si el suelo o el medio es duro.
La luz
Si las condiciones de humedad y temperatura son adecuadas, la mayora de las
semillas germinan en condiciones de oscuridad, particularmente las semillas de la
mayora de las plantas agrcolas.
Otras son inhibidas parcialmente o totalmente por la luz o la requieren para
germinar.
El estudio del efecto de la luz sobre la germinacin se ha mantenido en el primer
plano del inters de los fisilogos y de los ecofisilogos durante mucho tiempo.
Actualmente, la cantidad de informacin disponible en este campo es muy grande.
La fotoinduccin o fotoinhibicin de la germinacin es uno de los casos ms claros
del control de un proceso fisiolgico por un factor ambiental.
No se sabe cuntas especies de plantas superiores presentan semillas
fotoblsticas (germinacin regulada por la luz), ya que la fisiologa de las semillas
de la gran mayora de las plantas no ha sido investigada; sin embargo, existen
evidencias que indican que el porcentaje de especies con semillas fotoblsticas es
particularmente alto entre las plantas anuales.
Las interacciones entre la luz y la temperatura se saben para algunas clases de
semilla. Por ejemplo, la fotosensibilidad puede ser superada alternando altas y
bajas temperaturas.
Son tres las principales bandas del espectro lumnico que tienen accin sobre la
germinacin, y corresponden a la franja de 660 nanmetros (rojo), 730
nanmetros (rojo lejano) y la luz comprendida entre 400 y 500 nanmetros (azul),
aunque con efectos mucho menos claros.
Tanto el rojo como el rojo lejano son absorbidos por un compuesto denominado
fitocromo, que es una cromoprotena que acta como sensor. Este pigmento en su
21
Este tipo de latencia regulada por la luz es muy comn en semillas que
permanecen latentes en la oscuridad, enterradas en el suelo, hasta que son
expuestas a la luz durante las prcticas agrcolas. Cuando estas semillas alcanzan
la superficie del suelo quedan expuestas a la luz y germinan.
En las semillas pequeas la conversin del fitocromo normalmente se realiza a
muy bajas intensidades de luz; sin embargo, la temperatura y el fotoperiodo tienen
influencia directa en el resultado final del proceso, expresado en porcentaje y
velocidad de germinacin.
En ocasiones el proceso fisiolgico que induce la germinacin necesita la luz, y la
germinacin total slo se obtiene cuando la luz y la temperatura actan
22
23
maduracin fisiolgica, y en condiciones ambientales favorables a la germinacin como, por ejemplo, aumento de la humedad por el exceso de lluvias -, semillas sin
bloqueos al crecimiento del embrin podrn germinar en la planta madre.
Cabe resaltar que la mayora de las plantas cultivadas actualmente es
representada por variedades, cultivares e hbridos genticamente mejorados por
procesos de seleccin que eliminaron la dormancia, pues los objetivos de la
agricultura moderna son la rapidez y la uniformidad de la germinacin de la semilla
y de la emergencia de la plntula en campo.
No obstante, existen muchas especies que tienen la supervivencia garantizada por
la dormancia. Lo que varia bastante entre las especies vegetales es el perodo de
duracin de la dormancia, que puede ser de apenas algunos das, de algunos
meses o de varios aos. Inclusive para una misma especie, este perodo puede
variar en funcin del genotipo, del ambiente donde la semilla fue producida y de
otros factores.
Adems, semillas originadas de una misma planta tienen intensidades distintas
de dormancia, para que la germinacin ocurra a lo largo del tiempo, en intervalos
regulares, a medida que la dormancia es superada, aumentando la probabilidad
de supervivencia de los individuos.
De esta forma, el impedimento a la germinacin de la semilla, establecido por la
dormancia, se constituye en una estrategia benfica, por distribuir la germinacin a
lo largo del tiempo y permitir a la especie "escapar" de condiciones adversas al
crecimiento de la plntula.
Se trata, por lo tanto, de un fenmeno que contribuye para que la germinacin de
la semilla ocurra solamente en una poca o estacin favorable al desarrollo de la
plntula, garantizando la supervivencia de la especie.
Principales causas de la dormancia de semillas
Pueden considerarse las siguientes:
a.
Impermeabilidad al agua.
b.
c.
d.
e.
Bloqueos metablicos
f.
Presencia de inhibidores.
g.
Embriones rudimentarios
h.
Las causas por las que no germinan pueden deberse a la existencia de un periodo
cronolgicamente regulado de interrupcin del crecimiento y de disminucin del
metabolismo durante el ciclo vital. sta es una estrategia adaptativa de
supervivencia frente a condiciones ambientales desfavorables que se presenta en
algunos seres vivientes.
En las plantas superiores puede existir latencia o interrupcin del crecimiento en el
tejido meristemtico, por ejemplo en las yemas de crecimiento de las ramas, as
como en las semillas.
El establecimiento de la latencia puede estar regulado por factores hereditarios
que determinan los mecanismos fisiolgicos endgenos de las plantas, los cuales
interactan con factores del ambiente en el que las plantas crecen; esto da lugar,
a la larga, a cambios evolutivos en las plantas.
Entre las condiciones ms importantes del ambiente se encuentran las
variaciones climticas de temperatura y humedad, las variaciones microclimticas
derivadas de aspectos fisiogrficos y biticos, como la calidad espectral de la luz y
el termoperiodo, as como las caractersticas especficas del lugar a las que las
plantas se han adaptado para establecerse y crecer.
Las variaciones micro y macroclimticas, as como las condiciones hormonales y
nutricionales de la planta progenitora tienen gran influencia en el establecimiento
de la latencia de sus semillas durante su desarrollo, por lo cual pueden existir
variaciones entre cosechas de semillas de una especie, segn la poca y el lugar
de produccin.
Tipos de latencia
Latencia innata o endgena
Las semillas viables, especialmente de muchas especies de arboles, pueden no
germinar despus de un tiempo considerable incluso en condiciones en que el
ambiente para la germinacin parece ser ideal.
26
28
Un vaso mecnico pequeo alineado con papel de lija o llenado con arena o
grava puede ser ms prctico para cantidades ms grandes de la semilla . La
cantidad de semillas en el vaso debe ser suficiente permitir que todas las semillas
sean desgastadas.
Figura 7. Escarificacin mecnica
La estratificacin
Corresponde a otro mtodo para superar la latencia y consiste en estimular al
embrin para que pueda desarrollarse utilizando principalmente el manejo del
suelo y de la temperatura.
30
31
33
Son aquellos que simulan las adversidades que la semilla puede encontrar en el
campo , procurando establecer bajo condiciones controladas de laboratorio los
factores desfavorables responsables por la reduccin de la emergencia en el
campo
34
Como ejemplo se puede citar la prueba del fro, las pruebas directas,
son difciles de estandarizar entre laboratorios y tienden a dar
resultados ms variables que las pruebas de g erminacin.
Prueba del Fro
El fundamento terico de esta prueba es que la condicin fra y
hmeda del suelo retarda la act ividad tanto de la semilla como de los
microorganismos del suelo. Sin embargo, como las semillas est n en
desventajas relativament e mayor, sern ms susceptibles al ataque
de microorganismos causantes de pudricin. Las semillas vigorosas
producirn plntulas capaces de resistir el ataque de estos
microorganismos en mayor grado que las semillas dbiles.
Pruebas Indirectas
Los tests indirectos son aquellos que miden determinados atributos fisiologicos de
la semillas que posteriormente se correlaciona con su desempeo en el
campo.
Dentro de estas pruebas indirectas de vigor sobresalen:
1.
2.
Pruebas
fisiolgicas: primero conteo de germinacin, velocidad de
germinacin.
3.
35
Los resultados del ensayo de envejecimiento acelerado se comparan con los del
ensayo de germinacin estndar y en la medida que estos valores sean elevados
y estn prximos podemos decir que el lote posee una buena condicin de vigor.
Por otro lado cuando los valores de ambas pruebas se separen
considerablemente el lote es considerado como de bajo vigor.
Conductividad Elctrica
37
peso semilla
pura
peso total
13,678 g
16,789 g
14,632 g
16,532 g
total
28,31 g
33.321 g
38
Anlisis de peso
Este anlisis muestra el peso de la semilla, usualmente expresado en relacin con
un millar de unidades puras; para facilitar el trabajo, se toman semillas puras , y se
agrupan en 8 muestras o repeticiones, de cien (100) semillas cada una.
Se procede a pesar por separado cada muestra, tomando los valores de cada
grupo para obtener la sumatoria y dividiendo luego por el nmero de muestras
para hallar el promedio, cifra representativa de todo el lote. Una vez hallado el
peso promedio de 100 unidades, se calcula para 1.000, as:
Repeticin
2,684
2,605
2,599
2,789
2,568
2,876
2,556
2,345
total
21,022
forma uniforme, controlando hasta donde sea posible, la temperatura (cuyo nivel,
va de acuerdo al hbitat de cada especie, la luz (que haya suficiente luz,
preferiblemente luz del da) y la humedad (proporcionando un riego diario, bien
dosificado, es decir que las semillas permanezcan hmedas por lo menos hasta el
inicio de la germinacin).
A cada repeticin se le evala el porcentaje de germinacin mediante la siguiente
frmula:
% germinacin =
semillas germinadas
x 100
semillas sembradas
repeticin semilla
sembrada
semilla
germinada
% de
germinacin
100
82
82
100
78
78
100
80
80
100
71
71
total
400
311
% germinacin =
311
x 100
400
% germinacin = 77,75%
Germinacin por peso
Cuando el tamao de la semillas muy pequeo, es ms complejo separar las
semillas de las impurezas, en este caso la evaluacin se hace de la siguiente
manera: se toman 4 rplicas de un gramo cada una con semillas e impurezas y se
siembran.
Cuando ocurre la germinacin, se hace un conteo de las semillas germinadas en
cada rplica y se calcula el promedio para el ensayo. El resultado se expresa en
trminos de plntulas germinadas por unidad de peso, as:
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repeticin
semilla
sembrada
nmero de
semillas
germinadas
1g
25
1g
32
1g
28
1g
22
total
4g
107
96%
% de pureza
85%
Valor real =
85% x 96%
100
Valor real = 81,6 % esto es, el 81,6% de las semillas pueden germinar.
41
Valor real =
89% x 96%
100
germinacin
85,44
100
Para obtener 100 semillas germinadas requiero de sembrar 117,04 semillas, ahora
cono se requieren 25.000 plantas/ Ha incrementando un 10% ms requeriremos
la germinacin de :
25.000 + 25.000 x 10 = 27.500 semillas
100
42
semillas sembradas
100
117,04
27.500
x
X = 27.500 x 117,04/ 100= 32.186 semillas
Ahora teniendo en cuenta que el peso promedio de 1000 semillas es de 48 g,
para 32.186 semillas requerimos de :
Semillas
gramos
1000
32.186
48
x
43
44
INTRODUCCIN
Independientemente del sistema de propagacin los primeros das de vida de la
nueva planta son los ms crticos para su supervivencia. Con el propsito de
lograr que un mayor nmero de plantas sobreviva a esta etapa a fin de que las
plantas puedan ser producidas rpida, eficiente y econmicamente se utilizan
instalaciones especiales denominados viveros en las que se modifican las
condiciones ambientales y se proporcionan las condiciones de crecimiento ms
favorables para que las nuevas plantas continen su desarrollo.
Dependiendo de su finalidad, los viveros se pueden clasificar como temporales o
permanentes.
45
Los viveros deben estar localizados en reas con una buena iluminacin
natural, tanto en el transcurso del da como durante toda la estacin de
crecimiento, as que los viveros debern estar ubicados donde reciban total
radiacin solar durante casi todo el da. Cualquier cantidad de sombra puede
reducir la productividad y aumentar los costos, principalmente si se requiere
proporcionar energa lumnica artificial .Esta situacin se vuelve ms crtica en
los lugares donde existen condiciones permanentes de nubosidad.
Otro aspecto importante se relaciona con las caractersticas del suelo tales
como la acidez del suelo, el contenido de materia orgnica y su disponibilidad
de nutrientes.
47
El sitio para el futuro vivero debe ser abierto y protegido, con un clima lo ms
homogneo posible, donde no se tengan problemas de temperaturas extremas
o fuertes vientos, pero si donde exista un grado de viento moderado para la
ventilacin durante las pocas calurosas.
Cuando el viento es fuerte, puede ser necesario, que ste posea suficientes
abrigos, que restrinjan la accin del viento; en caso de que no existan, se deben
planificar cortinas rompevientos, preferiblemente con rboles de la regin.,
ubicadas a una distancia mnima de 15 metros al vivero evitar el sombreado
excesivo, que pueda afectar el desarrollo de las plantas .
48
50
52
53
54
Ventaja o desventaja
Caracterstica
Desarrollo de plantas
independiente
de
la
calidad del subsuelo
Tiempo de cultivo
Menor tiempo
Crisis de trasplante
Menos severa
Se pueden normalizar y
optimizar las condiciones
de crecimiento
Por
presentar
crecimiento inicial
Se
favorece
supervivencia
y
establecimiento
Costos de produccin
Mayores
mayor
la
el
Las
plantas
a
raz
desnuda presentan una
mayor adecuacin a las
condiciones ambientales.
Germinadores
La semilla en las eras de germinacin puede sembrarse de dos maneras en lneas
o surcos o al voleo.
55
Trasplante
Las semillas que han sido sembradas en los germinadores, permanecen all ,
hasta que se haga necesario su traslado al sitio definitivo o para que pueda
completar su crecimiento y desarrollo en otro sitio definido para el material vegetal.
El objeto del trasplante es disminuir la competencia que existe en la siembra;
aumentar el espacio vital entre las plantas jvenes; desarrollar el sistema
radicular, favorecer el acceso a los elementos nutritivos; formar muchas
ramificaciones radiculares, pues el crecimiento en altura est disminuido, y
posibilitar el transporte y acomodamiento en su lugar.
El trasplante se efecta rpidamente despus de la germinacin, en cuanto se
desarrollan algunas hojas o agujas. Desde cualquier punto de vista es preferible
realizarlo prematuramente, pues as se garantiza una buena recuperacin y se
elimina la posibilidad de la detencin pasajera del crecimiento (crisis del
trasplante); tambin ayuda a colocar verticalmente a la joven raz en la tierra sin
encorvarla y sin que se daen las raicillas.
56
57
58
Cercas
Eras de germinacin
Caminos
61
Sistema de riego
Bodegas
Oficina de administracin
62
Sembrar diez (10) semillas de maz por matera, sembradas a una profundidad de
3cm en cinco (cinco) materas plsticas, utilizando como sustrato arena que debe
permanecer hmeda durante el ensayo.
En el cuadro 1 debe registrarse el porcentaje de germinacin por matera y por da,
donde debe realizar un grfico das porcentaje de germinacin por matera,
mientras en el cuadro 2 debe registrar la informacin solicitada.
Con la informacin obtenida del cuadro 2 de las cinco materas, calcule el
promedio y la desviacin estndar para cada caso.
Cuadro1.
MATERA
% de
No de das donde No de das donde ocurre la
germinacin ha germinado el germinacin de la primera
a los 10 das
50% de las
semilla
semillas
1
2
3
4
5
63
Cuadro 2. (Incluir en las casillas nmero de semillas que germinan cada da).
DIAS A GERMINACION
MATERA
8 9 10
1
2
3
4
5
64
Mantenimiento de clones
65
Razones econmicas.
TIPOS
MUTACION SOMATICA
MUTACION GERMINAL
MUTACIONES CROMOSOMICAS
66
Morfolgicas
Letales
Condicionales
Bioqumicas
De resistencia
Ocurre en tejido somtico
Se mantiene por propagacin
vegetativa
No transmisible sexualmente
Ocurre en clulas sexuales
Se mantiene y estabiliza por
propagacin sexual
Inversin.
QUIMERAS
MUTACIONES GENICAS
67
Duplicacin
Translocacin
Reduccin
Cambio en el nivel de ploida
Tejidos de constitucin gentica
diferente
En ciertos casos afectan nivel de
ploida
Mutacin directa. Cambios de un
nico par de nucletidos.
Mutacin de transicin: Purina
sustituida por otra purina o
pirimidina por otra pirimidina.
Mutacin de transversin :Purina
sustituida por pirimidina o al
contrario.
Mutacin por adicin o delecin de
un par o varios pares de
nucletidos: cambios de fase en
tramos del ADN.
Esta tcnica presenta como ventajas, sobre todo para el cultivo de rboles
frutales y de ornato, que permite utilizar como base del injerto plantas ya
establecidas que sean resistentes a condiciones desfavorables , enfermedades o
plagas , utilizndolas como receptoras de injertos de plantas ms productivas y
con frutos de mejor calidad y mayor produccin.
Adems de acelerar la produccin de frutos, con posibilidades de lograr plantas
homogneas por sus caractersticas de resistencia y produccin.
68
69
71
caractersticas
Plantas de diferente capacidad de
comparativamente con una sin injertar.
desarrollo
Sobre la poca de
floracin
Sobre la productividad
72
Sobre el fruto
Sobre la longevidad
Produccin de patrones
La seleccin adecuada del patrn deriva en una mayor produccin, por ello es
necesario conocer el comportamiento y caractersticas de los mismos.
En trminos generales se distinguen dos tipos de patrones:
74
longitudinal , de poca
Para ubicar la yema se introduce de arriba hacia abajo por el espacio libre
que el corte en T en la corteza del patrn determina, resbalando suavemente
hasta que la yema ajuste por debajo de la corteza del patrn, a la madera de
l.
Injerto en T invertida
El procedimiento de injertacin es similar al proceso anterior , presentndose dos
variaciones , la primer es que el corte transversal de la corteza se realiza en la
parte inferior del corte longitudinal correspondiente y la segunda es que la yema
es empujada de abajo hacia arriba.
76
77
Procedimiento
78
Se deja una porcin de tallo por arriba del chapa , para amarrar el brote y que
pueda tener un crecimiento vertical.
Injerto de hendidura simple
79
Procedimiento
Se corta con unas tijeras de podar el patrn a la altura deseada y se le hace un
corte a lo largo por el centro de unos 6 cm de longitud.
La pa debe tener al menos un ao, el mismo tamao que el patrn, y 2 3
yemas. Si el patrn es de mayor dimetro que la pa, slo pueden estar en
contacto por un lado.
A la pa se le corta un bisel por ambos lados.
Se introduce de tal manera que la corteza del patrn y la de la estaca se toquen
para que el cambium de ambos elementos quede en contacto.
Se ata la unin con cinta de injertar y se encera con pasta o mstic para injertar.
Se pone tambin cera en la punta de la pa.
No se desata hasta que las yemas hayan brotado y midan unos 5-10 cm. Ms
tiempo tampoco es bueno porque puede quedar estrangulado al dificultar el paso
de savia.
Injerto de doble hendidura
Se utiliza sobre relativamente gruesos, prefiriendo la implantacin de dos varetas
siempre que el dimetro del patrn tenga capacidad para ello.
En el caso de que las dos varetas injertadas prendan se realiza posteriormente la
seleccin de la que presente mejores caractersticas, principalmente de vigor.
Figura 19. Injerto de doble hendidura
Procedimiento
Todo el proceso de injertacin, amarre y sellado es similar al de la hendidura
simple, variando solo en el hecho de colocar dos cuas en cada extremo de la
hendidura.
81
Procedimiento
Injerto de corona
Se utiliza , cuando los patrones son de considerable dimetro, principalmente en la
reconstruccin de rboles o para cambiar variedad.
83
En este tipo de injerto las varetas deben ser colocadas entre la corteza y la
madera del patrn.
Figura 22 .Injerto de corona
Procedimiento
En cada corte transversal efectuado sobre una rama gruesa se colocan
varias pas, pero por lo general no deben estar ubicadas a distancias
menores de 5 cm entre s.
En el patrn debe introducirse entre corteza y madera las varetas, afiladas y
adelgazadas por un lado, de tal modo que constituyan un tejido uniforme,
pero de escaso grosor que pueda penetrar sin dificultad entre corteza y
madera, sin romper la corteza.
Para lograr una buena unin se pueden utilizar puntillas de cabeza ancha y
plana de tal manera que penetren en la corteza y la vareta, y ajusten todo a
la madera del patrn y se recubre con cera.
Procedimiento
85
A la vareta que contiene varias yemas, se quitan las hojas cortndolas por
el pecolo, a la vareta se le efecta un corte longitudinal semejante en
forma y longitud al que se hizo en el patrn.
Por el lado contrario a este primer corte se realiza otro pequeo corte
inclinado que se une al primero formando en la base una pequea cua.
86
Procedimiento
Tanto en el patrn como en la vareta, que deben ser dimetros similares,
se realizan cortes longitudinales en la corteza que llegue hasta la madera,
de modo que forman superficies ovaladas iguales.
Estas superficies se ponen en contacto una con la otra, se amarran
fuertemente y se cubren con cera.
Injerto de aproximacin en puente
Se utiliza para revigorizar rboles viejos o con ataques de plagas o enfermedades
que afecten el sistema radical.
Figura 25. Injerto en puente.
Procedimiento
87
88
vecinas deben ser cubiertas por un material que retenga gran cantidad de
humedad como el musgo o en algunos casos espuma que se coloca envolviendo
completamente dicha seccin y formando una masa compacta y completamente
humedecida.
Esta cubierta humedecida a su vez se recubre por polietileno para evitar la prdida
de la humedad, este polietileno se amarra tanto arriba como debajo de la seccin
anular.
Previamente a la realizacin del acodo deben eliminarse las hojas cercanas donde
se realizara el corte. Igualmente es conveniente antes de recubrir con el musgo
aplicar un producto enraizador sobre el corte para facilitar el enraizamiento.
Figura 26. Acodo areo.
Acodo de punta
Es un tipo de acodo poco visual, pero con gran xito en mora y frambuesa,. Estas
plantas emiten ramas muy alargadas, que al ser delgadas son muy flexibles y que
tienden a doblarse hasta el suelo, cuando la punta de las ramas toma una forma
un tanto arqueada se realiza el acodamiento.
El acodamiento se realiza con la apertura de zanjas o agujeros en el suelo, no
muy profundos, en los cuales se entierran las puntas de las ramas.
90
91
92
Acodo en montculo
Este tipo de acodo se emplea en la floricultura, no necesariamente para obtener
plantas de forma directa, sino para propagar patrones vegetativos que
posteriormente sern injertados.
Los pies madre deben tener una certificacin varietal completa sanidad, en una
primera etapa los pies madre estarn sembrados en surcos y cuando estn
establecidos se podarn dejando de cada planta un pedazo de brote arriba de la
superficie del suelo de aproximadamente 30- 40 cm, lo que permitir la emisin de
abundantes brotes.
A estos nuevos brotes se les debe podar y cuando tengan una longitud de 10 cm
se realiza un aparque de tal manera que queden cubiertos hasta la mitad de su
longitud, lo que facilitar la emisin de races si se realiza cuando los brotes son
juveniles. Nuevamente cuando los brotes tengan de 10- 15 cm se realiza un
ltimo aporque, en el cual se cubren las ramas 10cm con el suelo.
Finalmente se separan los brotes enraizados.
93
94
Reducidos Porcentajes
variedades.
de
procedimiento
en
algunas
especies
95
2)La obtencin de ramas de la planta donante debe realizarse por la maana o por
la tarde (antes de las 10 am o despus de las 4 pm), con la finalidad de evitar la
prdida de agua durante las horas de mayor insolacin.
3) Elegir preferiblemente los segmentos basales o centrales de la rama, ya que
normalmente all se encuentran yemas de un estado y edad fisiolgica adecuado
, adems que en la rama es donde se tienen ms reservas alimenticias necesarias
para el desarrollo de las nuevas races.
4) El tamao de los segmentos puede variar entre 10 a 75 cm de longitud, el
criterio adecuado para elegirlo depende de la especie y del tipo de estaca ,
incluyendo por lo menos dos nudos, aunque lo recomendable es de cuatro a seis,
sobre todo cuando los entrenudos son muy cortos. El dimetro de las ramas en
que se realizan los cortes puede ser de 0.5 a 5 centmetros.
5) El corte basal se hace justo abajo de un nudo (sitio donde preferentemente se
forman races adventicias) y el corte superior se realiza de 1.5 a 2.5 cm arriba del
otro nudo.
6) Ya cortados los brotes se marcan con el nmero de la planta donante (nmero
de clon), se introducen lo ms rpidamente posible en bolsas de plstico con
algn material que retenga bastante agua y se cierran para evitar la prdida de
humedad. Deben mantenerse en un sitio fresco y sombreado y en cuanto sea
posible se trasladan al rea de enraizamiento del vivero.
Figura 31. Obtencin de estacas.
96
98
100
Los hijuelos que emiten los bulbos pueden ser separados para la multiplicacin.
Algunas plantas que se reproducen por bulbos son: Narcissus, amaryllis, lilium, ,
tulipa, veltheimia, zephyrantes, etc.
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Tomado de http://3.bp.blogspot.com
105
Rizomas
Son tallos que se desarrollan bajo tierra, normalmente en sentido horizontal.
Presentan varias yemas que pueden ser divididas para la reproduccin. Algunas
plantas que se reproducen por rizoma son: Achimenes, canna y zantedeschia.
Se generan a partir del crecimiento horizontal de un tallo subterrneo, por lo
general ms robusto que el que da origen a un estoln. Las viejas porciones se
degradan y se separan en fragmentos que debern enraizar de manera
independiente.
Este tallo subterrneo presenta hojas escamosas en las axilas, donde se pueden
generar yemas axilares, adems de presentar races adventicias
Una vez formado el vstago principal se da un crecimiento continuo. Cada
estacin de crecimiento presenta un crecimiento simpodial por medio de la yema
axilar o monopodial por medio de la yema terminal.
El rizoma funciona como rgano de almacenamiento de reservas. De esta manera
se propagan especies de importancia econmica, tales como el bamb, la caa de
azcar, el pltano, as como algunos pastos.
Figura 36..Rizoma de pasto y rizoma de Canna indica .
106
Seudobulbos
Consisten en partes engrosadas y areas del tallo que presentan determinadas
especies muy caractersticas, como las orqudeas cattleya.
Son crecimientos tuberosos del tallo completo o de parte de ste o de las ramas.
En las axilas de las escamas de la base de los pseudobulbos se forman vstagos
nuevos o pseudobulbos en serie que conectan segmentos del tallo .
Estolones
Constan de secciones relativamente largas y delgadas de tallos areos
horizontales con entrenudos largos y cortos alternados que generan races
adventicias.
La separacin de estos segmentos enraizados permite el desarrollo de plantas
hijas. La fresa es un ejemplo de las especies que comnmente presentan este tipo
de propagacin .
Figura 37.Estoln de fresa
107
Investigue tres (3) tipos de injertos que realicen en su regin sobre especie
de inters econmico, realizando un diagrama grfico y explicativo del
procedimiento (pasos) de cada una de las tcnicas investigadas.
Investigar cuales son las especies vegetales ms importantes sembradas
en Colombia que son reproducidas por los mtodos de acodo y estaca.
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113
que los balastos queden instalados afuera del cuarto y la regulacin del tiempo de
funcionamiento de las lmparas est controlado por un reloj temporizador.
Area de Adaptacin
Est rea es vital para lograr la adaptacin del material producido in vitro y puede
estar constituida por un invernadero.
Es importante anotar que las reas que conforman el Laboratorio con excepcin
del rea de adaptacin , deben tener pisos lavables en materiales cermicos o de
caucho de alta duracin, as mismo las paredes del laboratorio deben ser blancas,
con pintura lavable de alta resistencia, evitando en las esquinas que formen
ngulos de 90 (esquinas curvas).
Equipos y elementos necesarios para el montaje de un laboratorio
Cuarto de incubacin
Iluminacin fluorescente
Estantera metlica
Termmetro de mximas y mnimas
Reloj temporizador* para la regulacin del fotoperiodo.
Cuarto de siembra
Cmara de flujo laminar
Estante para material de vidrio estril
Area de preparacin de medios
Refrigerador pequeo
Balanza analtica (precisin hasta 0.01 g)
Balanza de precisin ( precisin hasta 0.1 mg)
Phmetro
Destilador de agua
Desionizador
Autoclave
Microondas*
Placa caliente con agitacin magntica
Area de lavado
Lavadero metlico
114
115
116
117
Vitaminas
Si bien todos los medios contienen comnmente vitaminas que in vitro favorecen
el crecimiento de tejidos, hasta el momento la nica vitamina que se considera
necesaria en medios de cultivo es la Tiamina(0.1- 1 mg/L).
Aunque se han sealado efectos benficos del cido pantotenico, la piridoxina, la
riboflavina, y el cido nicotnico.
Agente gelificante
En los medios semislidos o slidos comnmente se utiliza el agar (0.3-1%),
considerndose importante la pureza del mismo, pues sus minerales trazas
pueden alterar la respuesta in vitro.
Hormonas vegetales o reguladores de crecimiento
Los fitoreguladores, fitohormonas, reguladores de crecimiento vegetal, hormonas
de crecimiento vegetal, son compuestos orgnicos sintetizados por las plantas
superiores, que influyen sobre el crecimiento y desarrollo, actan generalmente en
un lugar diferente a donde son producidas y se encuentran presentes y activas en
muy pequeas cantidades.
En el cultivo in vitro , estos compuestos naturales o sintticos juegan un papel
muy importante ya que la clase y concentracin interacta con el genoma de la
planta, siendo responsables de la distribucin de los compuestos que la planta
biosintetiza y determinan el crecimiento relativo de todos los rganos de la planta.
En general los explantes in vitro podran presentar las siguientes necesidades
hormonales:
1.
2.
3.
4.
Auxinas
Kinetina: 6-Furfuril-amino-purina
2ip: 6-Dimetil-amino-purina
BA: 6-Bencil adenina.
BAP: 6-Bencil-adenin- purina.
Zeatina: 6- (4-hidroxi-3 metilbut-2-enilamino) purina.
Adenina.
119
Peso mol
Diluyente
esterilizacin
Concentracin
de
trabajo
(ppm)
2,4D
221
Etanol
AC
0.1-10
5
AC/F
0.001-10
ptimo 0.1-1
AC/F
0.1-10
NaOH 1N
AIA
175.2
Etanol
NaOH 1N
AIB
203.2
Etanol
optimo
NaOH 1N
AIP
189.2
NaOH 1 N
AC/F
0.1-10
ANA
186.2
NaOH 1 N
AC
1-10 optimo 2
2,4,5 T
255.5
Etanol
AC
0.01-5
Citoquinina
Peso mol
Diluyente
esterilizacin
Concentracin
de
trabajo
(ppm)
120
BAP
309.4
Etanol
AC/F
0.1-5
BA
225.3
NaOH 1N
0.01-5
ZEATINA
219.2
NaOH 1N
AC/F
0.01-5
KINETINA
215.2
NaOH 1N
AC/F
0.1-5
Giberelina
Peso mol
Diluyente
esterilizacin
Concentracin
de
trabajo
(ppm)
KGA3
384.5
Agua
AC/F
0.01-5
GA3
346.4
Etanol
AC/F
0.01-5
AC =autoclave; F= filtracin.
Otros compuestos
Existen un tipo variado de compuestos que son incorporados a los medios de
cultivo, sobresaliendo principalmente :
121
Funcin
Nitrgeno
Magnesio
Fsforo
Potasio
Calcio
Azufre
Sntesis de aminocidos
Sodio
Micronutrientes
Molibdeno
Hierro
Manganeso
Funcin
Sntesis de protenas
Oxido-reduccin
Sntesis de Clorofila
Boro
Actividad meristemtica
Cobre
Proceso de lignificacin
Zinc
Cobalto
Cloro
Oxidacin
e
hidrolizacin
compuestos fenlicos
Componente de la vitamina B12
Evolucin del O2 en la fotosntesis
122
de
Constituyentes
White's
NH4NO3
Heller's
-
MS
B5
Nitsch's
1.650,0000
1.900,0000 2.500,0000
KNO3
80,0000
CaCl2.2H2O
75,0000
123
440,0000
150,0000
720,0000
950,0000
-
CaCl2
166,0000
MgSO4.7H2O
737,0000
250,0000
370,0000
250,0000
185,0000
KH2PO4
170,0000
68,0000
K2SO4
(NH4)2SO4
134,0000
Ca(NO3)2.4H2O
288,0000
NaNO3
600,0000
Na2SO4
200,0000
NaH2PO2.H2O
19,0000
125,0000
150,0000
KCl
65,0000
750,0000
KI
0,7500
0,0100
0,8300
0,7500
H3BO3
1,5000
1,0000
6,2000
3,0000
10,0000
MnSO4.4H2O
6,6500
0,1000
22,3000
25,0000
MnSO4.H2O
3,0000
ZnSO4.7H2O
2,9700
1,0000
8,6000
2,0000
10,0000
Zn.Na2.EDTA
Na2MoO4.2H2O
0,2500
0,2500
0,2500
MoO3
0,0001
CuSO4.5H2O
0,0010
0,0300
0,0250
0,0250
0,0250
CoCl2.6H2O
0,0250
0,0250
AlCl3
0,0300
NiCl2.6H2O
0,0300
FeCl3.6H2O
1,0000
FeSO4.7H2O
27,8000
27,8000
27,8000
Na2.EDTA.2H2O
37,3000
37,3000
37,3000
124
Fe2(SO4)3
2,5000
Inositol
100,0000
100,0000
100,0000
Acido
Nicotnico
0,5000
0,5000
1,0000
5,0000
Piridoxina HCl
0,1000
0,5000
1,0000
0,5000
Tiamina HCl
0,1000
0,1000
10,0000
0,5000
Glicina
3,0000
2,0000
2,0000
Acido Flico
0,5000
Biotina
0,0500
Sacarosa
20,0000
30,0000
20,0000
20,0000
pH
5,5
5,7
5,5
125
126
SOLUCION
mg/L
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
NH4NO3
1650
20
100
8,25
KNO3
1900
20
100
9,5
(1)
L de medio mL de
mL de la
requeridos solucin
solucin
stock para 1 stock
L de medio
Peso final
en gramos
MgSO4.7H20
370
1,85
MnSO4.H2O
22.3
0.1115
KH2PO4
170
25
0,85
ZnSO4.7H2O
8.6
0, 043
CuSO4.5H2O
0.025
0,000125
CaCl2.2H2O
440
2,2
CoCl2.H2O
0.025
0,000125
Na2MoO4.2H2O
0.25
25
0,00125
H3BO3
6.2
0.031
KI
0.83
0,00415
Na2.EDTA
37.3
E
0,0746
2
10
FeSO4.7H2O
27.8
0,0556
Tiamina-HCl
0.02
0,00004
Glicina
0.4
F
0, 0008
2
10
Acido nicotnico
0.1
0,0002
Piridoxina
0.1
0,0002
Mioinositol
100
127
10
20
0,2
128
1x 10-6 mg
Ahora tomando como base un litro de medio quedara expresada as:
1x 10-6 mg/L
Teniendo en cuenta que hablamos de una parte por un milln de partes se puede
concluir que:
1 ppm es equivalente a 1 mg/L
Ejercicio de aplicacin
En medio litro de medio se requiere la adicin del producto A en una
concentracin de 50 ppm, Un producto B en una concentracin de 50 mM/L (
peso molar 745) y un producto C en una concentracin de 5M/L ( peso de una
mol 245). Calcular para cada producto la cantidad a pesar .
129
130
132
Tiempo en minutos
121
15-30
140
10-20
160
7-15
160-180
5-10
133
15
75
20
250-500
25
1000
30
1500
35
2000
40
Velocidad.
Destruccin adicional de virus.
Simplicidad
135
137
138
139
Inversin inicial elevada. El coste inicial del cultivo es alto, sobre todo por el
mantenimiento de la planta en condiciones controladas y por las instalaciones
que se necesitan. Esto debe compensarse con una alta produccin de plantas
y con un valor aadido sobre el producto final.
140
141
143
Etapa 3: Enraizamiento
En esta etapa se produce la formacin de races adventicias. En las especies
herbceas es relativamente fcil mientras que en las especies leosas es
complicado por su limitada capacidad rizognica.
El enraizamiento puede realizarse tanto en condiciones in vitro como ex vitro. En
el primer caso pueden emplearse varios tipos de sustratos y reguladores de
crecimiento (auxinas) para promover la rizognesis..
En un medio solidificado con agar, los nutrientes se reducen de 1/2 a 1/4 de la
composicin original, y la sacarosa se reduce a una concentracin final de 1-2%.
El empleo de agar aunque por un lado favorece la rizognesis en forma ms
sincrnica como resultado del contacto ntimo del material con el medio de cultivo ,
por otro lado produce races usualmente delgadas y poco funcionales.
Etapa 4:Endurecimiento
Una planta que se ha originado in vitro difiere en muchos aspectos de las
originadas in vivo. Las plantas cultivadas in vitro tienen generalmente la cutcula
escasamente desarrollada, Las clulas en empalizada tampoco estn muy
desarrolladas, son pequeas y se encuentran en pequeas cantidades.
Debido a la alta humedad (90-100%), Los estomas no son suficientemente
operativos, siempre estn abiertos.
Como consecuencia , cuando se transfiere la planta al suelo, se produce una
transpiracin cuticular extra, ya que la humedad del aire en las condiciones in vivo
es muy baja. As mismo las hojas de una planta producida in vitro son
frecuentemente finas, blandas, y fotosintticamente poco activas, y en
consecuencia mal adaptada a las condiciones que pueden encontrar in vivo,
adems de existir una pobre conexin vascular entre vstagos y races.
Por lo anterior, las plantas producidas in vitro requieren un cierto tiempo para
aconstumbrarse a las condiciones in vivo, de tal manera que quedan
endurecidas para afrontar el medio ambiente.
En esta etapa las plantas enraizadas in vitro o para enraizar in vivo, pero
obtenidas in vitro, se sacan del medio gelatinoso retirando los residuos del medio
adheridas a la planta, siendo sembradas en un sustrato estril contenido en
cmaras de vidrio o plsticas, utilizando como sustratos escoria fina, vermiculita
144
145
146
147
En el laboratorio se presentan tres fases que siempre ocurrirn sin tener en cuenta
el tipo de explante o la metodologa de micropropagacin utilizada , estas son:
Fase de aislamiento
Los explantes deben separarse de la planta donante, esta labor de corte y
separacin del explante se puede realizar sobre una placa de cristal estril,
presentando como desventaja que los instrumentos cortantes pierden rpidamente
su filo, o tambin sobre papel de filtro estril, siempre debe tenerse en cuenta el
tamao de la seccin cortada.
Fase de inoculacin.
Durante la inoculacin o siembra, el tubo o frasco conteniendo el medio de cultivo
slido debe estar en principio en posicin horizontal, pues, esto reduce
fuertemente la posibilidad de contaminacin, sobre todo cuando no se trabaja con
cmara de flujo laminar.
El flameado del cuelo de tubo o frasco es desaconsejable por la entrada de etileno
en el recipiente.
El mtodo de inoculacin sobre medios slidos depende en gran medida del tipo
de explante con que se trabaje, las semillas y embriones se ubican sobre el
medio, al igual que los meristemos; mientras explantes de hojas, yemas,
segmentos nodales, se introducen ligeramente en el medio.
Fase de repicado.
Esta fase involucra principalmente el paso del explante y de la plantula obtenida a
las diferentes etapas de la micropropagacin , o por otra parte al nmero de veces
que separo brotes obtenidos in vitro para aumentar el material propagado.
Pero, puede realizarse adems porque el medio nutritivo esta agotado (se
presentan sntomas de deficiencia) o el medio se seca, o por que el tejido u
rgano ha crecido de tal forma esta ocupando todo el frasco; o por cambios de
coloracin en el medio, o por que se han presentado alteraciones en la estructura
del medio.
148
Aplicaciones
Multiplicacin masiva
Aprovechando el potencial morfogentico que tienen los meristemos, esto es, que
los meristemos estn diferenciados para formar rganos , por lo cual en
condiciones in vitro solo se requiere la elongacin y la formacin de raiz sin que
se presenten alteraciones genticas, y as es posible lograr la produccin y
multiplicacin de diversas especies vegetales.
150
151
Los explantes
Los explantes para el cultivo de meristemos pueden clasificarse como:
Apical dome : cpula meritemtica sin primordios foliares.
Shoot tip: Incluye la regin meristemtica con varios primordios foliares hasta
una longitud de dos centmetros.
152
153
154
155
156
157
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