Ciclo

escolar

2014
- 2015

INGENIERA EN BIOTECNOLOGA

NOMBRE DE LA MATERIA:

Gentica Molecular

NOMBRE DEL PROFESOR: Dra. Galdy Hernndez Zrate

NOMBRE DE LOS ALUMNO: Norma Mendoza Gonzlez
Reporte de Mtodos para el mantenimiento y variacin del
material gentico
CUATRIMESTRE: Quinto

GRUPO: A
10 de agosto del 2015

Introduccin
La variacin es esencial en la tcnica del anlisis gentico. Sin variacin gentica
no es posible obtener marcadores ni hacer diseccin gentica.
Existen dos procesos moleculares que generan variacin gentica, la mutacin y la
recombinacin. La primera genera variacin de novo mientras que la segunda
suministra una cantidad ilimitada de nuevas combinaciones genticas a la
poblacin. La migracin entre poblaciones y la introgresin (hibridacin) entre
especies son procesos poblacionales que pueden inyectar nueva variacin en las
poblaciones y especies.
Se distinguen varios niveles de variacin. As, la variacin puede ser fenotpica o
genotpica. La primera puede subdividirse a su vez en morfolgica, fisiolgica y
conductual. Otra forma de clasificar la variacin es en cuantitativa y cualitativa. El
anlisis gentico de la primera es el objeto de la gentica cuantitativa. La variacin
cualitativa es la materia prima del anlisis gentico mendeliano, slo un cuarto de
las

mutaciones

en

Drosophila

parecen

ser

cualitativas,

analizables

mendelianamente. La variacin es tambin esencial en la tcnica del anlisis

gentico. Sin variacin gentica no es posible obtener marcadores ni hacer
diseccin gentica.
Uno de los mtodos de mantenimiento y conservacin, es conocido como
criopreservacin

el

cual

es

un

proceso

en

donde

las

clulas

o tejidos son congelados a muy bajas temperaturas, generalmente entre -80 C y 196 C (el punto de ebullicin del nitrgeno lquido) para disminuir las funciones
vitales de una clula o un organismo y poderlo mantener en condiciones de vida
suspendida por mucho tiempo. A esas temperaturas, cualquier actividad biolgica,
incluidas las reacciones bioqumicas que produciran la muerte de una clula,
quedan efectivamente detenidas.

Variabilidad Gentica
La variabilidad gentica se refiere a la variacin en el material gentico de una
poblacin o especie, e incluye los genomas. Para que la seleccin natural pueda
actuar sobre un carcter, debe haber algo que seleccionar, es decir, varios alelos
para el gen que codifica ese carcter. Adems, cuanta ms variacin haya, ms
evolucin existir. R.A. Fisher demostr matemticamente que cuantos ms alelos
existan para un gen, ms probabilidad hay de que uno de ellos se imponga al resto
(se fije), esto implica que cuanta ms variabilidad gentica exista en una poblacin,
mayor ser el ritmo de la evolucin, esto se conoce como Teorema fundamental de
la seleccin natural de Fisher.
Variacin en el ADN: polimorfismos y mutaciones
La variacin observable en los individuos se debe en gran medida a la variacin
gentica, sobre la que se aade la variacin producida por la influencia del
ambiente. La variacin gentica se debe a la presencia de cambios genticos
heredables a nivel celular (de una clula a sus clulas hijas) que adems son
transmitidos a la siguiente generacin si afectan a la lnea germinal (pero no son
transmitidos si solamente afectan a clulas somticas). Como es sabido, un gen
localizado en un locus puede presentarse en formas diferentes debidas a
variaciones en la secuencia, cada forma alternativa se denomina alelo, y el
porcentaje de individuos de la poblacin que presenta cada alelo se denomina
frecuencia allica. Cuando un locus se presenta, al menos, en dos formas allicas
y la frecuencia allica del alelo ms raro es del 1% o mayor, ese locus se llama
locus polimrfico, y esa variacin se denomina polimorfismo. La variacin interindividual garantiza la adaptacin de una especie a condiciones ambientales
cambiantes, pero los mismos mecanismos que crean esa variacin son tambin
responsables de originar mutaciones ms graves, que en algunos individuos
desencadenan una enfermedad.
En humanos, la variacin entre individuos se genera principalmente de dos
maneras: durante el proceso de reproduccin sexual, la segregacin aleatoria de

los cromosomas de cada progenitor a los gametos producir gametos con distintas
combinaciones de los cromosomas que estaban en la clula diploide original. Para
entender esto es til imaginarse todos los cromosomas de una clula diploide como
la suma de dos conjuntos haploides, el paterno y el materno. As, cada pareja de
cromosomas homlogos consta de un homlogo de origen paterno y otro de origen
materno, cuando los homlogos se separan en la meiosis, no pasan todos los de
origen paterno a una de las clulas hijas, y todos los de origen materno a la otra;
por el contrario, se distribuyen aleatoriamente. Como los homlogos pueden tener
pequeas diferencias en los alelos presentes para algunos genes, el resultado es
que cada gameto lleva una combinacin nica de cromosomas de origen paterno y
materno mezclados. La variabilidad que se puede generar por este sencillo
mecanismo es altsima, porque con 23 parejas de cromosomas el nmero de
combinaciones posibles es igual a 223, lo que es lo mismo 8.388.608. Adems,
en cada meiosis hay intercambio de material gentico por recombinacin entre
cromosomas homlogos, lo que genera todava ms variabilidad gentica. En la
especie humana se ha calculado que se producen unos 55 sobrecruzamientos por
clula, porque ese es el nmero medio de quiasmas que se observan. Esto supone
una media de al menos 2 sobrecruzamientos por par cromosmico, incluidos los
cromosomas sexuales. Es probable que el nmero total de eventos de
recombinacin sea todava mayor al nmero de quiasmas, porque no todas las
recombinaciones producen un sobrecruzamiento (como se ver a continuacin). Por
tanto, el grado de intercambio de material gentico entre cromtidas de
cromosomas homlogos es bastante alto y hace que los cromosomas que
finalmente llegan a un gameto sean ligeramente distintos a los cromosomas que
estaban presentes en la clula inicial. Como resultado de esto, la variabilidad
gentica generada durante la meiosis es alta, y por eso la probabilidad de que dos
individuos tengan dos descendientes genticamente idnticos es prcticamente
nula. Esto es precisamente lo que persigue la reproduccin sexual: generar
descendientes distintos a sus progenitores y distintos entre s. En el siguiente
apartado estudiaremos los aspectos moleculares de este proceso.
Conservacin y mantenimiento del material gentico.

Existen tcnicas que permiten la conservacin y el mantenimiento del material

gentico, en este caso se mencionarn dos muy importantes que son:
Criopreservacin
La criopreservacin es una tcnica que permite mantener a muy bajas temperaturas
(<-130 C), a cualquier conjunto biolgico de clulas por tiempo indefinido, creando
las condiciones necesarias para que conserven la capacidad de sobrevivir despus
de la descongelacin. Tal herramienta tiene amplio potencial para los fines que se
persiguen en la biologa de la conservacin, la ecologa y la acuicultura. En especies
acuticas, la conservacin de gametos y embriones es clave para el desarrollo de
tecnologas de reproduccin asistida porque es posible la no dependencia de los
reproductores para efectuar la fertilizacin artificial fuera de la temporada
reproductiva. Incluso, se puede diagnosticar la condicin patolgica de los gametos,
antes que sean empleados para fertilizacin o se liberen al medio. Adems, el
mantenimiento de los gametos a bajas temperaturas, facilita su transporte a
diferentes unidades de reproduccin en donde el material puede ser utilizado en
programas de seleccin gentica.
Normalmente para preservar una muestra biolgica durante en mayor tiempo
posible sin que pierda su calidad se utiliza nitrgeno lquido. De esta manera
sumergiendo la muestra en nitrgeno lquido se alcanzan temperaturas entre -80 y
-195,79 C (la temperatura de ebullicin del nitrgeno lquido). La utilizacin de helio
lquido permite alcanzar temperaturas incluso menores de hasta -268,93 C
(temperatura de ebullicin del helio), aunque este es mucho ms caro. A esta
temperatura cualquier actividad biolgica, incluida las reacciones bioqumicas que
producen la muerte de los organismos, quedan totalmente detenidos por
congelacin. Las muestras criopreservadas en nitrgeno lquido slo estarn
afectadas por las radiaciones que puedan incidir sobre ellas puesto que la
congelacin impide todo movimiento molecular en la muestra. El problema lo
constituyen el proceso de congelacin previo y la descongelacin posterior que es
lo que afecta gravemente a las muestras por los siguientes motivos:
Formacin de cristales de hielo durante la congelacin del agua

Estos cristales se forman tanto fuera como dentro de la clula y son los cristales
intracelulares los que comportndose como cuchillas cortan las estructuras internas
de la clula, especialmente las membranas.
El hielo es dinmico
El hielo no es inerte, entre los 0 y los -30 el hielo cambia continuamente de
conformacin lo que provoca que se acente el efecto "cuchilla" del mismo.
Debido a estos efectos durante la congelacin se debe evitar la formacin de hielo
intracelular siguiendo una serie de reglas:
Deshidratar la clula. Hay que extraer el agua de la clula y sustituirla por
crioprotectores o criopreservantes que mantengan el equilibrio osmtico. Si la clula
llega al 30% de deshidratacin se alcanza un punto de no retrono, a partir del cual
las condiciones biolgicas son irrecuperables (Merymann, 1968).
Tipos de crioprotectores.
Agentes penetrantes: Crioprotectores con bajo peso molecular, permeables a
travs de la membrana. Desplazan el agua intracelular evitando la formacin de
cristales de hielo. Se utilizan para congelaciones a velocidad lenta.
Agentes no penetrantes: Son crioprotectores con un alto peso molecular, y por lo
tanto no permeables a travs de la membrana. Promueven la rpida deshidratacin
celular. Se utilizan para las congelaciones a velocidades altas. Un ejemplo de ellos
son los azcares: sacarosa, glucosa, trealosa.
Controlar la velocidad de congelacin. Hay que controlar la velocidad de
congelacin para que la formacin de los cristales intracelulares sea lo menos
daina posible. Si la congelacin se produce demasiado rpido se forma el hielo
intracelular y si se da demasiado lento se produce el colapso celular.
Ralentizar el metabolismo celular. Para ello se trabaja a temperatura ambiente o
a 4C.

Descongelacin. Para realizar la descongelacin se debe eliminar rpidamente la

presencia intra y extracelular de los crioprotectores que suelen ser txicos a las
elevadas concentraciones utilizadas. Se debe atemperar de manera correcta la
muestra hasta su temperatura de cultivo.
Como regla general podemos afirmar que aproximadamente el 50% de las clulas
que congelamos no sobrevivirn a la descongelacin. Actualmente se ha logrado
superar esta etapa y de la congelacin se ha pasado a la vitrificacin, de tal forma
que con este nuevo mtodo se consigue que no se creen cristales de hielo y
sobrevivan la prctica totalidad de todas las clulas inmersas en el proceso.
Cada tipo celular debe ser congelado conociendo el perfil biofsico de la clula, el
cual dictar mediante ensayos de permeabilidad y volumen osmticamente inactivo
con diferentes criopreservantes y/o soluciones criopreservantes (mezcla de
crioprotectores

penetrantes

no

penetrantes)

el

mejor

protocolo

de

criopreservacin de esa clula. Es importante asegurar un sistema de seguridad, de

continuidad del nitrgeno lquido y ensayos de control de calidad por medio de
pruebas de viabilidad.
GERMOPLASMA
El germoplasma es el conjunto de genes que se transmite en la reproduccin a la
descendencia por medio de las clulas reproductoras que se fusionan para formar
un individuo nuevo.
El concepto de germoplasma se utiliza comnmente para designar el cuadro
gentico de las especies vegetales silvestres y no las genticamente modificadas
que sean de inters para la agricultura.
Con el fin de conservar este material gentico en cualquiera de sus frmulas
reproductivas (semillas, esquejes, tubrculos, etc) se han establecido en el mundo
los llamados "bancos de germoplasma": su misin consiste en ubicar, recolectar,
conservar y caracterizar el plasma germinal (clulas responsables de la herencia)
de las plantas que, por sus atributos son consideradas de inters prioritario para

beneficio de la humanidad, adems de aportar conocimiento cientfico orientado a

la optimizacin de la conservacin y uso de sus recursos genticos.
Banco de Germoplasma
Las razones para el almacenamiento de semillas en bancos de germoplasma
pueden ser variadas. En el caso de los cultivos destinados a alimento, muchas
plantas tiles que se han desarrollado durante siglos ya no se utiliza para la
produccin agrcola comercial y son cada vez ms raros, por lo que se hace
imprescindible conservarlas antes de su completa desaparicin. El almacenamiento
de semillas tambin las protege contra eventos catastrficos como los desastres
naturales, brotes de una enfermedad o las guerras.
En el rea de los recursos genticos, un banco de germoplasma o banco de semillas
es un lugar destinado a la conservacin de la diversidad gentica de uno o varios
cultivos y sus especies silvestres relacionadas. En muchos casos, no se conservan
semillas sino otros propgulos, tales como tubrculos o races debido a que el
cultivo en cuestin se multiplica slo asexualmente. La conservacin de las semillas
se realiza a bajas temperaturas, de modo de mantener por muchos aos una
adecuada viabilidad de las mismas. Fsicamente, los bancos de germoplasma
consisten en grandes depsitos de sobres de semillas conservados a bajas
temperaturas.

Blibliografa
http://www.researchgate.net/profile/Jose_Madero2/publication/242707051_FUNDA
MENTOS_DE_CRIOPRESERVACIN_Basic_points_in_cryopreservation/links/5521
e7480cf29dcabb0d2f6a.pdf
http://www.quimicaweb.net/Webalumnos/GENETICA%20Y%20HERENCIA/Paginas/14.1.htm
http://www.moodlecchazc.unam.mx/moodleccha/pluginfile.php/15510/mod_resourc
e/content/1/variabilidad%20genetica.pdf