INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERA QUMICA E

INDUSTRIAS EXTRACTIVAS
Laboratorio De Qumica de los Hidrocarburos
Reporte de prctica #2-3

Cromatografa en placa fina y columna

Nombre del alumno: Toral Garca Jorge

Mario

Grupo: 2IM09

OBJETIVOS

ALCANCES

Definir el
concepto de
cromatografa y
aplicarlo en la
purificacin de
compuestos .

Documentarse en
conceptos de
mezcla, pureza,
propiedades
fsicas y qumicas
de la materia.

Indicar en que
consiste la
cromatografa
de adsorcin y
la de particin

Leer con
detenimiento el
desarrollo de la
practica

Explicar el
concepto de
polaridad en
cromatografa
Establecer la
relacin y la
diferencia que
existe entre la
cromatografa
en placa fina y
la preparativa
Seleccionar el
disolvente o
mezcla de ellos
para efectuar el
desarrollo de la
cromatografa
Purificar
compuestos
orgnicos

Analizar
cuidadosamente
cada una de las
etapas de la
tcnica de
cromatografa
Consultar la tabla
de toxicidad de
los reactivos y
productos
empleados en el
experimento
Tomar
precauciones
adecuadas y
evitar accidentes.

METAS
Preparar las
placas finas o
cromatoplacas
, y los
aplicadores
Preparar la
cmara
cromatografic
a
Preparar las
muestras
Aplicacin de
las muestras y
desarrollo de
la placa
Revelado de
las placas
Determinacin
del Rf
Interpretacin
de los
resultados.

mediante placas
preparativas
Determinar el Rf
de
las sustancias
separadas

Investigacin bibliogrfica sobre el tema.

Cromatografa:
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de
especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La
cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los
componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y
otra mvil.
En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase
mvil, que puede ser un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se
hace pasar a travs de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija
en una columna o sobre una superficie slida. Las fases se eligen de tal forma que
los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil
y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con ms fuerza
por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los
componentes que unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.
Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.
Cromatografa en capa fina
En la cromatografa en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en una capa
delgada de un adsorbente (como por ejemplo gel de slice, almina o celulosa)
depositada sobre un soporte plano como una placa de vidrio, o una lmina de
aluminio o de plstico.
La CCF es una tcnica analtica y tiene como objetivo el anlisis de una mezcla de
componentes.

El proceso es similar a la cromatografa de papel con la ventaja de que se

desarrolla ms rpidamente, proporciona mejores separaciones y se puede elegir
entre diferentes adsorbentes. La CCF es una tcnica estndar en el laboratorio de
qumica orgnica. Debido a su simplicidad y velocidad, la CCF se utiliza a menudo
para monitorizar las reacciones qumicas y tambin para el anlisis cualitativo de
los productos de una reaccin, puesto que permite conocer de manera rpida y
sencilla cuntos componentes hay en una mezcla
Procedimiento
Una placa de CCF es una lmina de vidrio, metal o plstico recubierta con una
capa delgada de un slido adsorbente (gel de slice o almina). Se deposita una
pequea cantidad de la muestra problema en disolucin en un punto en la parte
inferior de la placa.
Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatogrfica, de forma que slo la
parte inferior de la placa queda sumergida en el lquido. Este lquido o eluyente es
la fase mvil y asciende por la placa de CCF por capilaridad.
A medida que el eluyente pasa por el lugar donde est la mancha de la mezcla
problema se establece un equilibrio entre las molculas de cada uno de los
componentes en la mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en
disolucin.
En principio, los componentes se diferenciarn en solubilidad y en la fuerza de su
adsorcin, de forma que unos componentes se desplazarn ms que otros.
Cuando el eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la cubeta,
se seca, y los componentes separados de la mezcla se visualizan.
Visualizacin de las manchas
Si los compuestos son coloreados se pueden observar las manchas a simple vista.
Si no es as, hay varios mtodos para visualizar las manchas correspondientes a
cada componente de la mezcla.
Utilizar luz ultravioleta (UV254) para observar la placa. Normalmente se adiciona
un colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea fluorescente en
todas partes excepto donde haya una mancha correspondiente a un compuesto
orgnico.
Utilizar reveladores, por ejemplo, vapores de yodo que es un reactivo inespecfico.
Emplear reactivos especficos para desarrollar coloracin en las manchas. Esto se
puede hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolucin que los contenga o
en forma de spray.

Clculo del factor de retencin Rf

Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el valor
de Rf (factor de retencin), o la distancia que cada compuesto se desplaza en la
placa. Cada compuesto tiene un Rf caracterstico que depende del disolvente
empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es independiente del recorrido
del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una
mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente
cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF).

Cromatografa en columna
Es una tcnica de purificacin, puesto que permite aislar los compuestos
deseados de una mezcla.
Procedimiento
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena
con un soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel de
slice (SiO2) y almina (Al2O3))+. La muestra que se quiere separar se deposita
en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el
eluyente (disolvente que constituye la fase mvil) que, por efecto de la gravedad,
hace mover la muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio entre el
soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la
columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecer
interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados a
diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As, de manera similar a
otros tipos de cromatografa, las diferencias en las velocidades de desplazamiento
a travs del medio slido se corresponden con diferencias en los tiempos de
elucin por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la
muestra original, que se recogern en fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los
diferentes componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes
polares compiten ms eficientemente con las molculas polares de una mezcla
por los lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazar
las molculas, incluyendo las ms polares, rpidamente a travs de la columna. Si
el disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca

separacin de los componentes de la mezcla. Si por el contrario el disolvente es

muy apolar, no eluirn los compuestos de la columna. Por lo tanto, la eleccin del
eluyente es crucial para el xito de la cromatografa en columna. A menudo se
utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elucin. La CCF se utiliza para
determinar y elegir el sistema solvente adecuado para cada separacin.
En 1978 se introdujo una versin modificada denominada cromatografa en
columna rpida. La diferencia con la cromatografa en columna tradicional es que
en la tcnica rpida el disolvente se hace atravesar la fase estacionaria aplicando
una presin positiva. Esto hace que las separaciones mejoren en resolucin y se
pueda disminuir el tiempo de elucin, por lo cual constituye un mtodo de eleccin.

Anlisis de los eluatos de la columna

Si los compuestos separados en una cromatografa en columna son coloreados, el
progreso de la separacin se puede monitorizar visualmente. No obstante, a
menudo los compuestos que deben ser aislados suelen ser incoloros. En este
caso, se recogen secuencialmente pequeas fracciones de eluatos en tubos
rotulados y la composicin de cada fraccin se analiza por cromatografa en capa
fina. Una vez identificadas las diferentes fracciones que contienen el mismo
producto, se renen, se elimina el disolvente y se analiza la identidad de los
componentes por mtodos espectroscpicos.

DESARROLLO DE LA PRCTICA
CROMATOGRAFIA EN PLACA
MATERIAL A UTILIZAR:

Aplicadores
Porta objetos (placa) - cromatoplaca
Disolventes (A,B,C)
Placas
Cmara cromatografica- frascos de gerber
Vasos de precipitado (3)

CROMATOGRAFIA EN

1.-preparacion de los aplicadores.

2. se aplican las muestras con los microaplicadores y

se dejan secar

3. PREPARACION DE LAS CAMARAS CROMATOGRAFICAS:

a) se coloca el disolvente en la cmara en la cantidad suficiente y
necesaria para que el nivel del disolvente quede por debajo de las
aplicaciones de las muestras.

4. se sumergen las placas en el disolvente de la

cmara

5. se miden los orgenes del disolvente para poder

hacer la medicin y calcular el Rf

6. se deja correr el disolvente hasta cierta altura, teniendo

cuidado de que el disolvente de la cmara no toque el
origen de las muestras, y que la cmara este totalmente
cerrada.

7. sacar las placas y dejarlas secar, este paso es el revelado de placa

8. las muestras problemas de 3 componentes (3 colorantes)

se separaron con 3 disolventes problema.
9. en base a la separacin de los componentes, se observo la
secuencia de colores, y la determinacin de la polaridad de
los disolventes, y asi decidir cual es el mejor para utilizar en
la cromatografa en columna.

Costo beneficio (con respecto a otros medios de realizacin de la prctica)

Tcnicas cromatogrficas
1. Cromatografa en capa fina.
Por este mtodo se pueden analizar mezclas de aminocidos. La
muestra para anlisis se aplica por medio de un tubo capilar en la superficie
de una capa fina adsorbente en forma de banda, punto o mancha y es
adsorbida en la superficie por la accin de fuerzas electrostticas (Fuerzas
de Van der. Waals, puentes de hidrogeno, efectos inductivos, etc). Los
adsorbentes ms utilizados son gel de silica, alumina, tierra silcea,
celulosa y poliamidas. Como soportes del adsorbente se utilizan laminas o
placas de vidrio, plsticas o metlicas, algunas placas tienen indicador de
fluorescencia : f254 f366.
La placa seca se coloca en el tanque cromatogrfico o cmara, en el cual
debe encontrarse saturado el eluente (Fase Mvil lquida).El eluente
ascender o desplazara por capilaridad en la placa y arrastrar los
componentes a lo largo de sta produciendo manchas que representan a
los componentes, la separacin se da por migracin diferencial, es decir
que la fase mvil arrastra a las substancias apolares y aquellas ms polares
son retenidas por la fase estacionaria dando lugar a la separacin.
Posteriormente se evapora el eluente y la placa se analiza por medio de
mtodos qumicos en el que por inmersin o rociado se obtienen derivados
coloreados o fluorescentes (Adicin de Ninhidrina a aminas, cido sulfrico
para carbonizar compuestos orgnicos, etc), o por medio de mtodos
fsicos pticos utilizando radiacin UV o luz visible.
El anlisis es de tipo cualitativo, semicuantitativo o cuantitativo. En el
primero se hacen comparaciones visuales de color e intensidad y
propiedades UV entre otras. En el semicuantitativo se observa dimetro y
comparacin visual e intensidad del color de la mancha contra manchas
patrones de concentracin conocida. Y en la forma cuantitativa se pueden
realizar medidas de transmisin a travs de la sustancia y medidas de
emisin o medida de luz reflejada desde la sustancia, y espectrofotometra
por fluorescencia.

2. Cromatografa en papel.
El proceso es bsicamente el mismo, solo que se usan tiras de papel
cromatogrfico en el tanque cromatogrfico.
3. Cromatografa en Columna.
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido
de Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el
cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada
en plstico o vidrio. La fase mvil se encuentra formada por la solucin que
lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solucin que sale al final
de la columna se reemplaza constantemente por nueva solucin que se
suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.
La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se
encuentra retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales
que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Las
sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda
total, la separacin, y por tanto la resolucin, aumenta con la longitud de la
columna. La banda individual de cada sustancia puede ensancharse con el
tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la
resolucin.
4. Cromatografa de gases.
Se utiliza para la separacin de sustancias gaseosas. La Fase Mvil es un
Gas (llamado Gas Portador) y la Fase Estacionaria puede ser un slido
(Cromatografa Gas-Slido) o una Pelcula de lquido de alto punto de
ebullicin (Generalmente Polietiln-Glicol o Silicn) recubriendo un slido
inerte (Cromatografa Gas-Lquido).
El cromatgrafo de gases esta constituido normalmente por un suministro y
una entrada del gas portador, un puerto de inyeccin, una columna
normalmente localizada en el interior de una cmara termostatizada
(horno), un detector y un sistema computarizado para analizar, registrar e
imprimir el cromatgrama. La muestra se introduce a travs del sistema de
inyeccin dentro de la columna que es el sitio donde ocurre la separacin.
La columna de aluminio, acero inoxidable, vidrio o tefln contiene la fase
estacionaria slida o lquida y esta sujeta a la superficie por un soporte que
es generalmente de slice.
La fase mvil o gas portador transporta los componentes de la muestra a
travs de la columna, por esta razn debe ser inerte para evitar
interacciones con la muestra o la fase estacionaria, y ser capaz de
minimizar la difusin gaseosa.
Al final de la columna existe el detector que permite la deteccin y
cuantificacin de las sustancias, midiendo conductividad trmica y
electronegatividad de las sustancias eludas. Se produce una seal tipo
elctrico, que posteriormente se amplifica por un registrador grafico o un
integrador permitiendo indicar el momento en que salen de la columna los
componentes. La salida de la sustancia se registra en un cromatgrama
en forma de picos y se determinan medidas como la altura y el rea del

pico.
5. Cromatografa Liquida de alta eficiencia o rendimiento (HPLC).
Es una Cromatografa de alta presin es decir se aplica el flujo a presin
(entre 1500 a 2200 psi). El tamao de partcula es entre 3 y 10 micras, la
longitud de la columna es entre 5 y 25 cm. y requiere de equipo sofisticado.
Se pueden analizar muestras proteicas. La reduccin del tiempo en que la
sustancia se encuentra en el interior de la columna, limita el
ensanchamiento por difusin de las bandas, aumentando por tanto la
resolucin.
El sistema HPLC requiere una mezcladora de solventes, un inyector, y una
bomba que inyecte el lquido a la columna. Generalmente las columnas de
slica requieren alta presin para que el flujo de lquido sea adecuado, la
mezcladora se requiere para variar la proporcin de solvente en la fase
mvil y el inyector permite la aplicacin de la muestra.
A la salida de la columna se coloca un detector generalmente de absorcin
ultravioleta o de fluorescencia y si se desea recuperar las molculas que
eluyen de la columna, se requiere un colector.
En los sistemas modernos el anlisis de la informacin obtenida se realizan
mediante una computadora acoplada al equipo; lo que permite estandarizar
la cromatografa, identificar la naturaleza los picos eludos y cuantificar su
contenido.
Los picos se relacionan segn su "tiempo de retencin" con estndares,
que permiten identificar los aminocidos presentes en la mezcla. La
cantidad relativa de cada uno de ellos se determina calculando el rea la
curva del pico correspondiente.
6. Cromatografa de intercambio inico.
La Fase Estacionaria es una resina de intercambio inico que contiene
grupos cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas
(Cationes o Aniones); la Fase Mvil es generalmente una solucin
amortiguadora de pH. En protenas la cromatografa de intercambio inico
se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga elctrica neta de
las protenas a un valor de pH determinado.
La afinidad de cada protena a los grupos cargados de la columna esta
influenciada por el pH y por la concentracin de iones en solucin
(concentracin salina) que compiten con la protena en la interaccin con la
matriz.
La separacin de la protena de la matriz cargada puede obtenerse
gradualmente cambiando el pH y/o la concentracin salina de la fase mvil,
de tal forma que se genere un gradiente de concentracin.
7. Cromatografa por Permeabilidad en Gel.
Es til para la separacin de protenas. La Cromatografa de exclusin
molecular, tambin llamada de filtracin en gel, separa en funcin de su
tamao. La matriz de la columna esta formada por un polmero
entrecruzado con poros de tamaos determinados.

Las protenas de mayor tamao migran ms deprisa a lo largo de la

columna que las de pequeo tamao, debido a que son demasiado grandes
para introducirse en los poros de las bolas de polmero y por tanto siguen
una ruta ms corta y directa a lo largo de la longitud de la columna. Las
protenas de menor tamao, entran en los poros y su marcha a lo largo de
la columna es ms lenta.
8. Cromatografa de Afinidad.
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas proteicas
por su afinidad o capacidad de unin a un determinado ligando. En este
caso, las protenas que se retienen en la columna son aquellas que se unen
especficamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente
a la matriz de la columna.
Despus de que las protenas que no se unen al ligando son lavadas o
eluidas a travs de la columna, la protena de inters que ha quedado
retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una
solucin que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la
interaccin entre el ligando y la protena.
Respecto a estos mtodos analizados, se siguiere que por costos y complejidad,
que se realice la cromatografa en placa fina, papel o columna, ya que estos tres
mtodos son los ms apropiados para la prctica del laboratorio de qumica de los
hidrocarburos.

Usos y Aplicaciones de la Prctica

El campo de la cromatografa es muy amplio, donde haya productos orgnicos, all
tiene aplicacin la cromatografa, pero como los cromatgrafos, no son baratos,
casi siempre se limitan a empresas muy grandes, transnacionales, o que tengan
una cantidad de produccin enorme por da.
Algunos ejemplos de aplicacin:
1. Determinacin del porcentaje de formacin de la molcula de sntesis, en una
planta de sntesis orgnica.
2. Determinacin de porcentaje de solvente en un producto agroqumico
terminado.
3. determinacin de concentracin de producto activo, en un producto agroqumico
terminado.
4. control de calidad de pureza de solventes, como alcohol etlico anhidro, tolueno,
xileno, benceno, que entran como materias primas a una planta.
5. determinacin del contenido de principio activo de un antitusivo en una planta
de medicamentos.
6. determinacin de concentracin de alcohol benclico, en un producto inyectado
en una fbrica de medicamentos.
7. control de calidad de la pureza de materias primas entrantes a bodega de una
fbrica de productos medicinales, tales como: alcohol etlico al 95%, propilenglicol,
glicerina, alcohol isopropilico, o-toluidina, paracetamol, butanol, octanol,
benzaldehido, acetato de etilo, ter di etlico, alcanfor, y muchos otros.
8. Control de calidad de producto terminado en una fbrica de cosmticos, como
por ejemplo, porcentaje de alcohol en una laca para el cabello, acetona en un
esmalte de uas, colorantes en casi todos los productos elaborados, porcentaje de
control, en las esencias que se utilizan para la confeccin de PERFUMES, all es
muy importante, realizar esta prueba.
9. En fbricas de adhesivos, pegamentos, pinturas, para controlar que el producto
terminado lleve las cantidades indicadas de solventes, humectantes, colorantes,
gomas, resinas, poliuretanos, secantes, rellenantes, esponjantes, suspensores,
emulsificantes.

10. en fbricas de alimentos, para control de calidad de producto terminado y

materias primas, tales como: protenas, sabores, sustancias que dan el olor, o sea
aromatizantes, pues algunos son sintticos, como el olor a pollo, y solo este tiene
variantes, como pollo con barbacoa, pollo frito, pollo asado, determinacin de
colorantes.
11. En la industria petrolera, es un mtodo indispensable, para analizar las
composiciones de casi todos los productos que van saliendo, del cracking, los
tipos de gasolinas, los compuestos orgnicos destinados a sntesis.
12. En el CONTROL de la produccin vincola, tiene infinidad de usos, desde
usarse como una nariz electrnica, para caracterizacin de vinos, de acuerdo a
parmetros previamente establecidos por expertos, concentracin de
componentes, anlisis de aminas, como etanolamina, etilamina, agmatina,
triptamina. Determinacin de ocratoxina-A.

Interpretacin de los espectros:

La placa utilizada con la

solucin A, se puede
observar que hay una
separacin parcial de los
colorantes utilizados, los
espectros revelados nos indican que la solucin
A es una medianamente polar.
La placa utilizada con la solucin B, no se
pueden observar cambios con respecto a la
placa antes de absorber la solucin, la falta de
espectros nos indica que sta solucin no es
polar.
La placa utilizada con la solucin C, se puede
observar que el colorante se corri
completamente en la placa, sin dejar marcas parciales de este, es decir, el
espectro revelado est impreso a lo largo de la placa sin existir variaciones, lo cual
nos indica que sta solucin es completamente polar.
Despus de realizado el anlisis de cada solucin, se utiliz la solucin C
(solucin polar) para observar la separacin del colorante en un gis blanco, el cual
desplaz una mancha amarrilla hasta llegar a la punta de ste.

Conclusiones de la prctica:

Se defini el concepto de cromatografa y se aplic en la purificacin de

compuestos, as como se indic en qu consiste la cromatografa de
adsorcin.
Se estableci la relacin y la diferencia que existe entre la cromatografa en
placa fina y la preparativa, tambin se concret el conocimiento de la
polaridad en una sustancia y su influencia en la cromatografa, el cual nos
dice que la fuerza con que es absorbido un componente depende de la
polaridad de ste, de la actividad del absorbente y de la polaridad de la fase
mvil. En general, cuando ms polar sea un compuesto, es ms fcilmente
absorbida.
Se defini y se entendi el concepto y la determinacin del Rf de las
sustancias separadas
Se desarroll la cromatografa en placa y en columna para poder separar
los colores que contena un colorante.

Conclusin general:
Despus de la realizacin de esta prctica de la interpretacin de los resultados
obtenidos, se concluye que por medio de la cromatografa es posible identificar los
componentes de una mezcla, adems de que se trabaj con soluciones polar, no
polar y medianamente polar, las cuales nos indican que las soluciones polares son
mejores en el empleo de esta prctica para poder observar los espectros y as
calcular el Rf.

Observaciones:
Al realizar la prctica al utilizar las soluciones pudimos notar que la solucin C era
la solucin polar, ya que esta pudo desplazar el colorante de manera uniforme en
la placa cromatogrfica, la solucin B no desplaz nada el colorante, y la Solucin
A lo desplaz dejando pequeas marcas en la placa
El gis al utilizar la solucin C desprendi un pequeo color amarillento que se
desplaz hasta el final
Al realizar la cromatografa en columna y al poner el colorante junto con la
solucin C, el colorante se separ en 3, dos eran tono de azul muy parecidos y
haba uno color morado.

Bibliografa:
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html#simple
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa
http://es.wikipedia.org/wiki/Polaridad_(qu%C3%ADmica)
Hernndez Luna Heliodoro. (2007). 4 edicin, Qumica orgnica experimental a
escala semi micro y fundamentos de la espectroscopia. IPN, Mxico, Pp. 119-133.