AGENTES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Las enzimas son molculas de protenas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las
reacciones qumicas que tienen lugar en tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la
Energa de Activacin propia de la Reaccin. Pueden presentar tamaos muy variables,
desde 62 aminocidos hasta 2,500 presentes en la sintasa de cidos grasos. Casi todas
las enzimas son mucho ms grandes que los sustratos sobre los que actan y solo una
pequea parte de la enzima est directamente involucrada en la catlisis.
Las enzimas se ven afectadas por factores de su actividad: Cofactores y coenzimas, las
enzimas que requieren cofactores o coenzimas generalmente no se activan hasta que la
molcula se une a una Apoenzima o Holoenzima. La temperatura su efecto sobre la
velocidad de una reaccin enzimtica generalmente muestra dos etapas: Aumento
gradual de la velocidad de la reaccin hasta alcanzar un mximo local, que se conoce
como temperatura ptima; y disminucin progresiva de la velocidad de reaccin debido a
la inactivacin de la enzima por desnaturalizacin trmica. Efecto del pH, los pHs
extremos tambin pueden inactivar a la enzima por desnaturalizacin, por lo que el efecto
del pH es similar al efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin. Efecto de la
concentracin del Sustrato, en la velocidad de una reaccin muestra dos etapas: 1. La
velocidad de la reaccin aumenta gradualmente hasta acercarse a una velocidad mxima.
2. La velocidad se mantiene constante pues todos los centros activos de la molcula de la
enzima han sido ocupados por el sustrato, se dice entonces que se presenta un
comportamiento de saturacin. Efecto de la concentracin de Sustrato, Inhibicin
Enzimtica, ocurre cuando una molcula diferente al sustrato interacta con la enzima,
impidiendo el correcto funcionamiento de esta. Ejms Inhibidores competitivos (Tienen
cierta afinidad con el centro activo) e Inhibidores no competitivos (Generalmente se unen
a un sito diferente del centro activo). Inhibidores como medicamentos, ms de la mitad de
los medicamentos de consumo aprobado y de venta en farmacias actuales son en
realidad inhibidores.

Mecanismos reguladores: la actividad de las enzimas in vivo est regulada por mltiples
mecanismos, que pueden tener un efecto positivo o negativo, segn las necesidades
celulares.

Principales

mecanismos

reguladores:

Clivaje

proteoltico,

modulacin covalente, regulacin de la expresin y degradacin.

MATERIALES
Reactivos:
Sustrato: Sol. Almidn 1% pH 6.9
Enzima: amilasa salival al 10%

alosterismo,

Sol. NaCl 2%
Buffer fosfato 0.1 M (pH4.6)
Buffer fosfato 0.1M (pH6.8)
Buffer fosfato 0.1M (pH9.0)
Cloroformo
Fenol
Sol. Fehling A (CuSO4 + H2SO4)
SOL. Fehling B (tetrato de Na y KNaOH)
HCl 0.05N
Sol. Yodada

Materiales

Gradillas con 9 tubos de ensayo

1 pipeta de 100 ml
1 pipeta de 5ml
1 vaso de precipitacin de 500 ml
Tubos de ensayo
Rotulador de vidrio

PROCEDIMIENTO

REACTIVO
Sol. De

1
1

2
1

3
1

4
1

5
1

6
1.5

7
1

8
1

9
1

1.5
2

1.5
2

1.5
2

1.5
2

1.5
1
2

1.5
2

1.5
1
2

1.5
2

1.5
2

amilasa
salival al
10%
Buffer
fosfato 0.1M
(pH4.6)
Buffer
fosfato 0.1M
(pH6.8)
Buffer
fosfato 0.1M
(pH9.0
NaCl 0.2%
Fenol
Cloroformo
Agua
destilada

Se dej incubar por 5 min, se continu con el incubado por 10 minutos con bao mara
37C los primeros 7 tubos el octavo a 100C y el noveno a 0C, lo mismo para los tiempos
20 y 40. Para realizar la parte 2 se requieren los tiempos 10, 20 y 40.

Para el control a los 10, 20, 40 minutos de incubacin

Reactivo
Incubado

1
0.5

2
0.5

3
0.5

4
0.5

5
0.5

6
0.5

7
0.5

8
0.5

9
0.5

s
HCL

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.05N
Sol.

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Yodada

Control de la actividad enzimtica de los productos formados

Reactivos
Sol

1
0.5

2
0.5

3
0.5

4
0.5

5
0.5

6
0.5

7
0.5

8
0.5

9
0.5

Fehling A
Sol

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Fehling B
Incubado

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

1
Agua

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

destilada
RESULTADOS
Cuadro 1. Actividad enzimtica segn sustrato residual

TUBO
TIEMPO DE
INCUBACIN

CONCENTRACIN DE SUSTRATO (ALMIDN)

10
20

II

III

IV

VI

VIII

IX

No fue el resultado esperado

Semi claro

40

Claro

10

Oscuro

20

mbar semi oscuro

40

claro

10

oscuro

20

mbar claro

40

claro

10

oscuro

20

mbar claro

40

claro

10

+oscuro

20

+ oscuro

40

mbar claro

10

mbar oscuro

20

mbar claro

40

claro

10

oscuro

20

mbar claro

40

claro

10

+ oscuro

20

+ oscuro

40

+ oscuro

10

oscuro

20

mbar oscuro

40

mbar claro

Cuadro2. Actividad enzimtica segn productos formados

Tubo
I
II
III
IV
V
VI
VII
VIII
IX

Reaccin Fehling
+
+
+
+
+
+
+
+
+

Observacin
Verde semi oscuro
Oscuro
Oscuro
Semi oscuro
Semi oscuro
Semi oscuro
Semi oscuro
Semi oscuro
Semi oscuro

DISCUSIN
Segn Scorpes, 1996; Janson & Rydn 1999, las temperaturas bajas en la
enzimas pueden lograr hacer perder la actividad enzimtica, esto sera
momentneamente; entonces a temperaturas altas, la enzima se desnaturaliza,
pero, a un temperatura media (entre unos 30 y 40C) la enzima funciona
adecuadamente.
El pH es otro factor que influye en la manera de accionar de la enzima, pues,
como se menciona en teora, cuando el pH es demasiado acido la enzima
trabajara menos, pero, a comparacin de un pH demasiado alcalino, la enzima
muestra actividad mayor.
Segn Scorpes, 1996; Janson & Rydn, es muy importante en los procesos de
purificacin de enzimas mantener la temperatura baja (0-4C) en todo momento,
con el fin de estabilizar a la enzima y conservar al mximo su actividad, adems
que tambin se inhibe el desarrollo microbiano el cual podra verse afectada.
CONCLUSION
Todos los factores resultos en prctica, se comprob que afectan a la actividad
enzimtica, dcese de temperatura, pH, temperatura de concentracin entre otros.
Se comprob que las elevadas temperaturas desnaturalizan la actividad
enzimtica, la adecuada temperatura esta entre 30 y 40C.
Se evidencio que el pH afecta a la actividad enzimtica, es mejor y mas adecuado
un pH alcalino.

REFERENCIAS BIBIOGRAFICAS
DM Vasudevan Sreekumari S. Kannan Vaidyanathan Texto de Bioquimica EdCuellar Ayala
Solari- Gentica Humana Fundamentos y Aplicaciones- 3ed. Editorial Medica
Panamericana.