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APLICAES DA CLONAGEM

Disciplina: Biotecnologia Farmacutica

Produo de protenas

Cultura em banho: cultura em grandes recipientes a partir dos

quais se extraem as clulas ou o composto de interesse. O meio no
renovvel;
Cultura contnua: cultivam-se clulas num fermentador onde o
meio continuamente extrado e renovado, proporcionando uma
fonte contnua de produto. Este tipo de cultura tem vindo a
substituir a cultura em banho.

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Organismos e Vetores

ORGANISMOS

-E.coli

-Clulas eucariticas

-Animais transgnicos

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Problemas na produo de protenas

recombinantes em E.coli
Gene exgeno:
- pode conter ntrons. A bactria no possui
maquinaria para remoo;
- pode conter sequncias de terminao em E.coli;
- o vis de cdons do gene pode no ser o ideal.

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Problemas na produo de protenas

recombinantes em E.coli
E.coli:
-pode no processar protena corretamente
(alteraes ps-traduo);
-pode no enovelar a protena corretamente
(ligaes dissulfeto) corpos de incluso;
- pode degradar a protena recombinante

VETORES PARA E.coli

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Vetores de expresso em E.coli

Promotor: marca o local de inicio da transcrio.
reconhecido pela subunidade da RNA polimerase;

Ribossome Binding Site (RBS): pequena sequncia de

nucleotdios complementar ao rRNA 16S (regio ShineDelgarno). Esta zona reconhecida pelo ribossoma,
favorecendo a sua ligao e o incio da transcrio alguns
nucleotdios a seguir;
Terminador: local a seguir a um codo stop onde a
transcrio termina. geralmente um sequncia de
nucleotdios capaz de, por complementaridade de bases,
formar uma estrutura em forma de gancho que induz a
dissociao da RNA polimerase.

Vetores de expresso

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O promotor o componente
crtico de um vetor de expresso
-Controla o primeiro estgio da expresso
gnica;
-Determina a frequncia na qual o RNAm
sintetizado.

Quantidade de
protena
recombinante
produzida

Natureza do
promotor

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Regulao da expresso
Promotores fortes e fracos

Induo e represso da expresso

Induo e Represso

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IPTG= isopropiltiogalactosdeo

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CASSETES E FUSES GNICAS

Produo de protenas por

clulas eucariticas
ou
animais transgnicos

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Produo de protenas por

clulas eucariticas
- Fungos e leveduras: Saccharomyces cerevisiae
- Clulas de mamferos

Produo de protenas por animais vivos

Animais Transgnicos

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