Universidad de concepcin

Facultad de Cs. Biolgicas

Dpto. bioqumica y biologa molecular

Trabajo Prctico N 3:

Glucogenlisis

Nombre Alumno
:
Antonio Guzmn Gutirrez
Colaborador
: Diego
Maldonado Torres
Carrera
:
Qumica y Farmacia.
Grupo
: 01.
Fecha experimento:
06 de
Mayo del 2015.
Fecha de entrega
: 13 de
Mayo del 2015.

INTRODUCCIN
En este informe se ver como a travs de un corte de hgado, se
desempea el proceso de la glucogenolisis y correlacin con la glucosa,
se sabe que el hgado posee un funcin muy importante en el
metabolismo glucidico del organismo animal, por ende el es capaz de
almacenar glucgeno y entregar a la vez glucosa, y as mantener una
glicemia constante.
El proceso que veremos hoy en el laboratorio se llama
glucogenogenesis que conta de que el glucgeno heptico puede
formarse a expensas de glucosa y otros monosacridos, en cambio los
residuos provenientes del metabolismo intermedio de glcidos y
protenas se denomina gluconeogenesis, y por ultimo cuando el
desdoblamiento de glucgeno hasta convertirse en glucosa, recibe el
nombre del glucogenolisis.
Por ende nosotros al extraer el hgado de un animal bien
alimentado y se pone a incubar ya sea de forma de papilla, en un medio
salino apropiado, desprovisto de sustratos, predominara el fenmeno de
glucogenolisis.

OBJETIVOS
Estudiar en cortes de hgado el proceso de glucogenlisis y su
relacin con la aparicin de glucosa.
Formular esquemas para otros tejidos con diferente contenido
enzimtico.

Reactivos:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)
8)
9)

PARTE EXPERIMENTAL

Solucin de Krebs (Isotnica con el plasma sanguneo)

cido tricloroactico 5% (TCA)
Reactivo de Yodo
Tungstato de Sodio 10%
cido sulfrico 2/3 N
Solucin cuprotrtrica alcalina
cido fosfomolbdico-tngstico
Solucin estndar glucgeno 50 mg %
Solucin estndar glucosa 50 mg %

Esquema de trabajo
Incubacin:
A cada tubo se agrega 2ml de solucin de Krebs para su
incubacin a 37C durante tiempos variables de 0, 20 y 40
minutos. Finalizado el tiempo de incubacin de cada tubo, vace el
lquido sobrenadante en una serie de tubos rotulados, una alcuota
de cada tubo se usar para determinar la glucosa liberada y el
hgado para determinar la cantidad de glucgeno.
1) Determinacin cuantitativa de glucgeno heptico
Tubos
Componentes

20

Filtrado (ml)

0.5

4
0

0.5

Patr
n

0.

1.

1.0

Blan
co
-

5
TCA 5% (ml)

1.5

1.5
5

Glicgeno 50 mg% (ml)

Reactivo de yodo (ml)

3.0

3.0

2.
0

3.

1.0
3.0

3.
0

Resultados
Tiempo (min)

Absorbancia

Glucgeno [mg/mL]

0'
20'
40'
Estndar

1,229
0,664
0,345
0,435

1,413
0,763
0,396
0,500

Grfico N1: determinacin cuantitativa de glucgeno heptico

Glucgeno vs Tiempo
1.6
1.4
1.2
1

Concentracin [mg/mL] 0.8

0.6
0.4
0.2
0

10

15

20

25

30

35

40

45

Tiempo [min]

2) determinacin cuantitativa de glucosa liberada al lquido de

incubacin.
Tubos
Componentes

20

40

Agua destilada (ml)

Liquido de incubacin (ml)
H2SO4 2/3 N (ml)
Tungstato de sodio 10% (ml)

7
1
1
1

7
1
1
1

7
1
1
1

Se toma de cada tubo 3ml de filtrado y se colocan en otra serie de tubos

siguiendo el siguiente esquema
Tubos
Componentes

Filtrado (ml)
Agua destilada (ml)

3
-

20

3
-

40 Blanc
o
3
3

Patr
n
2

Solucin de Glucosa 20 mg%

(ml)
Reactivo cuprotrtrico (ml)

Luego estos tubos se colocan a bao mara por 10 minutos. Enfre y

adicione a cada tubo 1ml de reactivo fosfomolbdico y 4 ml de agua
destilada. Se lee la absorbancia en el fotocolormetro a 540 nm.

RESULTADOS
Tiempo
0
20
40
Estndar

Absorbancia
0,127
0,214
0,357
0,508

Glucosa [mg/mL]
0,050
0,084
0,140
0,200

Grfico N2: determinacin cuantitativa de glucosa liberada al lquido de

incubacin.

Glucosa vs Tiempo
0.16
0.14
0.12
0.1

Concentracin [mg/mL] 0.08

0.06
0.04
0.02
0

10 15 20 25 30 35 40 45

Tiempo [min]

EJEMPLO DE CLCULO
-

Para glucgeno en tiempo 0

Absorbancia estandar Concentraci n estandar

=
Absorbancia muestra Concentraci n muestra

[ ]

0,435 0,5
mg
=
X=1,413
1,229 X
mL

CONCLUSIN
Al analizar el grfico de la determinacin de glucosa, se observa
que a medida que transcurre el tiempo la concentracin de glucosa va
aumentando progresivamente, observamos que la concentracin inicial
de glucosa al tiempo cero fue de 0,050 (mg/ml) y al terminar el
experimento fue de 0,140 (mg/ml) ,es decir se produjo glucgenolisis, lo
cual es razonable, ya que se trabaj con una rata bien alimentada , lo
que conlleva a que esta tenga altas reservas de glucosa almacenadas en
el hgado, el cual al ser extrado favoreci el proceso de la glicogenolisis
.
Por el contrario, en el grfico de determinacin de glicgeno se observa
que la concentracin de glucgeno disminuye a medida que transcurre
el tiempo, inicialmente la concentracin fue de 1,412 (mg/ml) y al
finalizar fue de 0,396 (mg/ml) ,ya que al favorecerse el proceso de
glucgenolisis el polmero de glucgeno se degrada por accin de la
enzima glicgeno fosforilasa en molculas de glucosa, o sea disminuye
la concentracin de glucgeno.
El proceso de glicogenolisis se produce dependiendo de las condiciones
fisiolgicas en el organismo y de las condiciones in Vitro a las que es
sometido el tejido en estudio.