Prova Terica da Prtica de Bioqumica - Resumo

Demonstrao do Efeito Tampo

Solues tampo so aquelas que atenuam a variao de pH, mesmo
quando adicionadas pequenas quantidades de cidos ou bases ou quando
feita a diluio em pequena quantidade de gua. Elas podem ser formadas
por bases ou cidos fracos com seus respectivos sais (base fraca e seu
cido conjugado ou cido fraco e sua base conjugada).
No caso do tampo TRIS HCl, o par conjugado formado pelo TRIS e
o TRIS protonado pelo H+ provindo do HCl, isto , o aceptor de H + e o doador
de H+, respectivamente. Ele se baseia no princpio de Le Chatellier do
equilbrio qumico, em que o agente tamponador sustenta certa faixa de pH
por prover o cido ou base conjugada proporcionalmente ao que est sendo
adicionado. A soluo tampo do sangue, cido carbnico bicarbonato,
tem o mesmo princpio de funcionamento.

Caracterizao de Protenas
1) Ninhidrina: A reao com ninhidrina permite caracterizar a presena de
aminocidos, protenas ou peptdeos pela reao com o grupo amino livre,
formando a Prpura de Ruhemann, de cor arroxeada. Ainda permite
diferenciar a presena de prolina, aminocido que possui uma estrutura
mais rgida que os demais e origina uma cor amarelada com a ninhidrina.
2) Biureto: A reao de biureto permite a quantificao de protenas e
peptdeos em uma amostra, uma vez que origina uma cor lils a violeta em
presena de ligaes peptdicas de tom proporcional sua concentrao. O
biureto reage com ons cpricos em meio alcalino, dando origem a um tom
violceo, o que foi aplicado aos peptdeos e protenas pela semelhana
entre as ligaes amdicas do primeiro com as ligaes peptdicas destes
ltimos.
3) Pauly: A reao de Pauly permite verificar a presena de histidina e tirosina
na amostra, a partir da reao do cido sulfanlico diazotado (reagente de
Pauly) com os grupamentos imidazol da histidina e fenol da tirosina,
produzindo colorao amarela para a primeira e vermelha para a segunda,
ou laranja para ambas.
4) Xantoproteica: A reao xantoproteica permite verificar a presena de
aminocidos aromticos (fenilalanina, triptofano ou tirosina) na amostra
analisada, pelo aparecimento de uma cor alaranjada resultante da formao
de nitrocompostos a partir da adio de HNO 3 e, depois de aquecimento,
amonaco ou hidrxido de amnio, que reagem com seu fenol.
5) Sakaguchi: A reao de Sakaguchi permite a verificao da presena
arginina, a partir da reao do -naftol e do hipoclorito de sdio com o
grupo guanidina da arginina, que origina uma cor vermelha de tom
proporcional sua concentrao.
6) Millon: A reao de Millon permite verificar a presena de tirosina na
amostra, a partir da reao da hidroxila fenlica desse aminocido com o
mercrio presente do reativo de Millon, formando produtos de cor
avermelhada.

7) Enxofre: A reao de enxofre permite verificar a presena de aminocidos

sulfurados, metionina e, principalmente, cistena, a partir da reao de
acetato de chumbo com o enxofre desses aminocidos, formando sulfato de
chumbo, de cor escura amarronzada.
Propriedades das Enzimas
1) Influncia da temperatura: enzimas tm uma temperatura tima em que
sua atividade mxima; quanto mais distante dessa temperatura, mais
inativa ela fica. (afeta Vmx)
2) Influncia do pH: idem ao anterior; a enzima perde sua atividade cataltica
se estiver fora de seu pH timo. (afeta Vmx)
3) Especificidade enzima substrato: a maioria das enzimas reconhece como
substrato apenas compostos que tenham caractersticas especficas, como
tipos de ligao, tipos de cadeia, etc. (K m)
4) Influncia da concentrao do substrato: quanto maior a concentrao do
substrato, mais eficiente se torna a atividade cataltica da enzima, de forma
que aumenta a velocidade da reao catalisada. (afeta V mx)
5) Inibio competitiva: os inibidores so anlogos estruturais do substrato da
enzima, se ligando ao seu stio ativo e impedindo sua ligao com o
substrato e, consequentemente, impedindo a atividade enzimtica. (afeta
Km)
6) Inibio no-competitiva: a atividade da enzima inibida por ligao de um
composto em um stio alostrico, isto , longe de seu stio ativo, com
mudana conformacional da enzima levando perda de afinidade com o
substrato. (afeta Kcat e Vmx).

Hidrlise Enzimtica do Amido

Atividade da -amilase em temperatura e pH timos, e colorao por
iodo ou lugol, que reage com carboidratos de cadeia longa:
Amido (azul escuro turvo)

Amido solvel (azul escuro lmpido)

Amilodextrina (roxo)

Eritrodextrina (avermelhado)

Acrodextrina (amarelado)

Maltose (esverdeado)
Com o reativo de Benedict, a maltose origina um composto alaranjado,
visto que um agente redutor.

Caracterizao de Carboidratos
1) Molish: O teste de Molish permite verificar a presena de quaisquer
carboidratos numa soluo, sendo eles mono, oligo ou polissacardeos,

2)

3)
4)

5)

6)

7)

originando um anel violeta depois da adio de -naftol e de cido sulfrico

em amostras que os contenham. O anel violeta surge a partir da
combinao de furfural ou hidroximetilfurfural (produtos da desidratao de
pentoses e hexoses, respectivamente, pelo cido sulfrico) com o -naftol.
Iodo: O teste de iodo permite diferenciar os polissacardeos de mono e
oligossacardeos, visto que os polissacardeos reagem com o iodo e
originam compostos coloridos, enquanto os carboidratos de cadeia menor
no reagem. Por exemplo, o amido origina a cor azul escura e o glicognio
origina uma cor avermelhada, enquanto a sacarose mantm o amarelo
caracterstico do prprio iodo.
Tollens: diferencia carboidratos redutores e no redutores. Os redutores
formam prata metlica, que adere ao tubo.
Benedict: A reao de Benedict permite diferenciar carboidratos redutores e
no-redutores, visto que os redutores (mono e oligossacardeos, exceto a
sacarose) reduzem o on cprico do reativo de Benedict a xido cuproso,
originando a cor alaranjada. Os no-redutores (polissacardeos e a sacarose)
no apresentam carbono livre que possa sofrer oxidao e reduzir o on
cprico, mantendo a colorao azul caracterstica do reativo de Benedict.
Hidrlise cida: Os oligo e polissacardeos so hidrolisados pelo
aquecimento com um cido forte, como o HCl, separando-se nos
monossacardeos que os compem. Uma reao de Benedict permite
verificar se a hidrlise da sacarose, por exemplo, foi realizada, uma vez que
os monossacardeos resultantes (frutose e glicose) originariam a colorao
avermelhada, ao contrrio do oligossacardeo inicial.
Barfoed: A reao de Barfoed serve para diferenciar monossacardeos e
oligossacardeos, uma vez que os primeiros reagem mais rapidamente com
o on cprico do reativo e so os primeiros em que surge um precipitado
vermelho caracterstico quando comparados aos oligossacardeos.
Selivanoff: O teste de Selivanoff permite diferenciar aldoses e cetoses que,
sob ao de cidos fortes, originam hidroximetilfurfural e furfural,
respectivamente. Com o resorcinol, presente no reativo de Seliwanoff, eles
se condensam e formam um produto vermelho. No entanto, a reao com
cetoses rpida e mais intensa pela maior facilidade de formao do
derivado furfural, enquanto a reao com aldoses, com mesmo tempo de
aquecimento, origina apenas uma colorao amarelada, quando no incolor.

Separao da Casena do Leite

1) Precipitao da casena: ao se adicionar cido actico, altera-se o pH da
soluo. Na medida certa, possvel chegar ao pi (ponto isoeltrico, em que
h equilbrio de cargas) da casena, pH 4,6, em que ela se torna insolvel e
precipita.
2) Solubilidade:
a. gua Insolvel
b. Etanol Insolvel (teoricamente, tem uma parte solvel, mas no visvel a
olho nu)
c. NaOH Solvel (Casena + NaOH Caseinato de sdio)
d. Caseinato de sdio + CaCl2 Caseinato de Clcio Insolvel

Caseinato de sdio + cido Actico Casena Insolvel (retorno ao

pi)
3) Caracterizao de Carboidratos no Soro do Leite:
a. Molish h o aparecimento do anel violeta, uma vez que contm o
carboidrato lactose (glicose + galactose).
b. Benedict h o aparecimento da cor laranja, uma vez que contm o
oligossacardeo redutor lactose.

1)
a.
b.
c.
2)

3)

4)
5)

6)

Caracterizao de Lipdios
Solubilidade:
leo em gua Insolvel
leo em Acetona Solvel
leo em Etanol Parcialmente Solvel (a frio, a quente totalmente
solvel)
Hidrlise Alcalina ou Saponificao: a hidrlise alcalina de um triacilglicerol
produz uma mistura de glicerol e um sal de cidos graxos (formado com a
base utilizada, no caso, um sabo de sdio). Os sabes so anfiflicos ou
anfipticos, apresentando uma grande cadeia hidrocarbonada apolar e um
grupo carboxlico polar. Eles ento tem poder emulsificante, possibilitando a
disperso de gorduras em meio aquoso.
Separao dos cidos Graxos: o sabo de cidos graxos, quando fornecido
de um hidrognio (pelo HCl, no caso), retorna estrutura de cido graxo
insolvel, e trocando com o cido o sdio para formar NaCl.
Neutralizao dos cidos Graxos: inverso da anterior (cido graxo insolvel
fornecido de on sdio, originando novamente sabo de sdio)
Liebermann-Burchard: O teste de Liebermann-Burchard permite verificar a
presena de colesterol em uma amostra e tambm sua dosagem, pois o on
SO3 do cido sulfrico adicionado juntamente com anidrido actico se fixa
na insaturao do anel encontrado na estrutura do colesterol, originando
uma cor verde de tom proporcional sua concentrao na soluo.
Kreis: O teste de Kreis permite a aferio da rancidez de amostras de leo
ou gordura, a partir da reao da floroglucina com os produtos gerados pela
auto-oxidao (oxignio do ar nas insaturaes de seus cidos graxos), que
origina uma cor rsea.