TECNICAS DE AISLAMIENTO, IDENTIFICACIN, CONSERVACIN Y

PROPAGACION DEMICROORGANISMOS

OBJETIVO; el alumno aprender a elaborar distintos medios de cultivo y a

desarrollar la tcnica de cultivo por estra cruzada para el aislamiento de bacterias.

FUNDAMENTOS
El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente
debido a su tamao microscpico, por lo que es necesario recurrir a medios de
nutritivos artificiales, donde se puedan desarrollar y producir grandes poblaciones,
para manipular y realizar investigaciones. Existe una variedad muy amplia de
medios de cultivo, pero esta ocasin hablaremos de algunos en particular.
Existen diferentes tipos de medios de cultivo, se debe utilizar el medio que cumpla
con las caractersticas para que el microorganismo de inters crezca
adecuadamente por ejemplo, hay medios llamados selectivos, que permiten el
crecimiento de determinadas bacterias e inhiben el desarrollo de otras porque
poseen

una

sustancia

inhibidora.

Algunos

otros

medios,

denominados

diferenciales, son usados para aislar los organismos dentro de una mezcla, por
los caracteres diferenciales que presentan. Suelen ser medios slidos y se basan
en la capacidad de fermentacin de un determinado azcar (Granados, 2003).
Un medio de tipo selectivo y diferencial es e Agar EMB, adecuado para el
crecimiento de Enterobacterias.Est medio es utilizado para la bsqueda y
diferenciacin de bacilos entricos, a partir de muestras clnicas, principalmente,
aguas servidas, y otros materiales.
Est recomendado por la American Public Health Association, para el anlisis
microbiolgico de productos lcteos y alimentos, y por la USP para la realizacin
de los ensayos lmite microbiolgicos.
La frmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine, eliminando
la sacarosa e incrementando la concentracin de lactosa, lo que permite una
mejor diferenciacin de E. coli ( Alfonso, 2003).

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La combinacin utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de
microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y
tambin, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de
lactosa ( Alfonso, 2003).

Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color

azulado-negro, con brillo metlico. Las colonias producidas por microorganismos
no fermentadores de lactosa son incoloras. Algunas bacterias Gram positivas
(cepas de estafilococos, enterococos) y levaduras, pueden crecer, originando
colonias incoloras y puntiformes.
Este medio de cultivo, es til para la orientacin y no confirmacin de especies
bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. producen colonias con
brillo metlico), por lo cual ser necesario realizar pruebas bioqumicas, para la
identificacin de gnero y especie.
Medio preparado: color prpura con tonos verdosos, ligeramente tornasolado con
un precipitado floculento disperso (Welch, 2009).

Agar eosina-azul de metileno.

AGAR SAL Y MANITOL

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La degradacin del manitol con produccin de cido cambia el color del medio, de
rosado a amarillo. La formacin de colonias de estafilococos no patgenos son de
tamao pequeo rodeadas de una zona roja. Los estafilococos patgenos
producen cido del manitol, desarrollan colonias ms grandes rodeadas de una
zona amarilla. Si se agrega a cada litro de medio, una yema de huevo en
condiciones de esterilidad, los estafilococos, que adems de fermentar el manitol
producen lipasa, darn un precipitado amarillento de cidos grasos alrededor de la
colonia. Este fenmeno comprueba la propiedad de coagular el plasma que
presentan

los

estafilococos

patgenos

coagulasa

positivos.

La

elevada

concentracin de cloruro de sodio inhibe a la mayora de las bacterias que son

halo-sensibles y favorecen a los estafilococos halo-resistentes (Pisabarro, 2009).

MATERIAL A USAR
3

Cajas Petri con agar nutritivo.

Cajas Petri con agar de eosina-azul de

metileno.

Cajas Petri con agar para

Estafilococos.
Cajas Petri con medio mnimo de
sales.
Tuvo con agua destilada estril.

Tubos con agar nutritivo.

Mechero.

Asa de inoculacin.

Parrilla de agitacin.

Autoclave.

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18

Papel parafilm

Marcador

Franela

Bitcora

REACTIVOS
Agar nutritivo: peptona de casena, NaCl,
extracto de carne, agar.
Agar eosina-azul de metileno: Peptona
de gelatina, lactosa, sacarosa, K2HPO4,
eosina, azul de metileno.
Agar para estafilococos: extracto de
levadura, peptona, casena, gelatina,
lactosa, D-manitol, NaCl,K2HPO4, agar.
Medio mnimo de sales: glucosa,
(NH4)2SO4, MgSO4.7H2O,
K2HPO4,FeSO4.7H2O.
Bacillus subtilis, Escherichia coli.
Pseudomonas fluorecens.
Streptococcus sp.
Staphylococus aureus.
Klebsiella sp.

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Muestra problema
Alcohol al 70%

RESULTADOS
IDENTIFICACION DE LAS CARACTERISTICAS DE LA FORMA DE
LAS COLONIAS EN CADA CULTIVO

Microorganismo cultivado; Escherichia coli

Medios de cultivo;

A. Nutritivo; presento un color amarillento con superficie

umbilicada, notamos colonias separadas con forma
irregular y filamentosa y tambin con bordes ondulados la
cepa tenia aproximadamente 2 mm de espesor.

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Medio mnimo de sales (MMS);
su morfologa
superficial es plana, con pequeas zonas planoconvexa,
presentan colonias aisladas con forma puntiforme y
fusiforme con bordes redondos. La cepa es de
amarillento con aproximadamente 1 a 2 mm de espesor.

A. Eosina azul de metileno (EMB).

La cepa
presenta una coloracin rosa, sus colonias se
encuentran
separadas
medianas,
circulares,
convexas. Presenta bordes redondeados de 2 a 4
mm de dimetro.

A. Para estafilococos; su crecimiento

este medio de cultivo.

fue inhibido en

Microorganismo cultivado; staphylococcus aureus

Medios de cultivo

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A. Nutritivo;
presenta un color amarillento, con
colonias separadas, su superficie es planoconvexa,
sus pequeas colonias tienen forma puntiforme y
fusiforme con bordes redondeados y con un grosor de
aproximadamente 1 mm.

Medio mnimo de sales (MMS); presentan un color amarillento, su

superficie es plana con colonias aisladas que presentan una forma
circular e irregular con bordes ondulados y con un grosor de 2 mm.

A. Eosina azul de metileno (EMB); la bacteria o

llego a crecer en su totalidad debido a que este
medio de cultivo impide el crecimiento de bacterias
gram positivas y S. aureus es una de ellas.

A. Para estafilococos; presentan un color amarillento

con superficie umbilical, tiene colonias separadas
circulares e irregulares con bordes ondulados y con
un grosos de aproximadamente 3 mm.

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Microorganismo cultivado; Pseudomonas

Medios de cultivo

A. Nutritivo;
creci en forma de anillo, con colonias
brillantes confluentes de borde continuo teniendo una
tonalidad verdosa. Su superficie es acuminada su
morfologa colonial es circular con bordes redondeados.

Medio mnimo de sales (MMS);

Presento un color
amarillento con superficie plana de forma irregular y con
bordes redondeados teniendo un grosor de aproximadamente
2 mm.

A. Eosina azul de metileno (EMB); presenta un color rosado claro

con una superficie plano convexa con forma fusiforme en sus
colonias aisladas y con bordes redondeados con un grosor de 1 a 2
mm.

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Agar para estafilococos; presento un color amarillento
con superficie plana, con forma irregular y bordes
redondeados, con un grosor de 1 mm aproximadamente y
con colonias separadas.

DISCUSION DE RESULTADOS:
La siguiente prctica hace referencia
a las tcnicas de aislamiento de
microorganismos, con las cual podemos conservarlos y llevar a cabo una
identificacin morfolgica de los microorganismos que se inocularon en los
diferentes medios que acabamos de mencionar como por ejemplo fue el agar
nutritivo en el que se prepararon en tubos de ensaye, cuando esto sucedi se
inoculo con los siguientes microorganismos como(E.coli, Saureus ,seupdomonas)
en cada uno y en los cuales
se realizaron para su conservacin con las
siguientes tcnica que fue por cola de ratn, lo que paso es que en este medio de
cultivo con estos tres microorganismos que se inocularon crecieron exitosamente
debido a que a su composicin del agar nutritivo, ya que tiene un alto contenido en
nutrientes ,a comparacin del medio mnimo de sales que se dividi en tres partes
para inocular nuestros tres microorganismos y poder realizar nuestra tcnica de
estra cruzada para su conservacin pero debido a su escaza y muy simple
composicin de nutrientes de este medio no creci ninguno de nuestros
microorganismos. Esto es muy curioso ya que aqu tiene que ver mucho nuestra
tcnica de aislamiento para que nuestro microorganismo se conserve y lo
podamos identificar adems de que tambin tiene que ver al medio que lo
sometas ,esto es distinto a lo que paso en el medio de caldo nutritivo ya que en
este medio se inocularon nuestros tres microorganismos y se realiz la tcnica
cola de ratn para conservarlos pero debido a que en este medio que se realiz
en tubos con rosca solo creci o desarrollo (E.coli,S.aureus)ya que estos no
necesitan de un excesivo requerimiento nutricional aunque creci poco pero tiene
mucho que ver la tcnica que realizas y su composicin del medio , En nuestro
medio mnimo de Eosina azul de metileno se realiz en cada placa se inoculo con
nuestros tres microorganismos para que estos crecieran y se conservaran con
nuestra tcnica de estra cruzada solo, que al revisar no creci nada porque se
supone que este medio es selectivo e inhibe el crecimiento de Gram negativas y
positivas con lo cual nos damos cuenta que con este medio podemos seleccionar

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microorganismos que quieramos,para terminar nuestro siguiente medio es el de
Agar para estafilococos en este tambin se dividi en tres partes y se inoculo los
tres microrganismos y se realiz para aislarlos la siguiente tcnica que es la de
estra cruzada y cuando terminamos esto, obtuvimos como resultado que el nico
microorganismos que iba a crecer es (S.aureus) ya que este medio solo es
selectivo y este asla alas dems microorganismos que no son similares en
conclusin lo que nosotros nos dimos cuenta fue de que los medios mnimos
debido a su distinta composicin y a las diferentes tcnicas para aislar los
microorganismos tienen un distinto ndice de crecimiento de estos ya que no todos
los medios son similares por eso con ello podemos identificar y aislar nuestros
microorganismos o consrvalos de manera eficiente permitiendo una gran facilidad
de manipular nuestros microorganismos.

Conclusin
Esta prctica fue muy interesante y nos ser de gran utilidad en un futuro como
biotecnologos, pues aprendimos una gran variedad de medios de cultivo para
conservacin y/o reproduccin de microorganismos adems de que cada medio
de cultivo posee propiedades qumicas que lo distinguen de los dems. Existen
una gran variedad de microrganismos que podemos cultivar en el laboratorio pero,
no todos crecen bajo las mismas condiciones (pH, nutrientes, temperatura etc.), es
por eso que se han inventado una gran variedad de cultivos, para poder cultivar a
los microorganismos en el laboratorio.