MTODOS PARA CONTABILIZAR

POBLACIONES MICROBIANA

Prof. Ernesto Torres

Biol.3105 @ 2014

MTODOS DIRECTOS QUE REQUIEREN

INCUBACIN

Dilucin seriada y conteo de viabilidad en

placas: Se utiliza para estimar el tamao de la
poblacin a base la cantidad de colonias formadas,
luego de haber diluido la muestra y transferirla a
placas con agar.

OBTENCIN CULTIVOS PUROS

La cantidad de colonias obtenidas en un

cultivo puro se expresa en Colony Forming
Units (CFUs)

generalmente hay que diluir el cultivo original

(porque es muy denso o concentrado)

Diluentes: H2O, salina, salina + buffer

(el bufferevita lisis de la clula)

30 - 300 CFU/placa (ideal)

< 30 CFU: contaje estadsticamente invlido
> 300 CFU: interferencia entre las clulas y la
colonia durante el crecimiento

DILUCIN SERIADA

El mtodo de dilucin seriada se utiliza regularmente para

diluir el inculo (o muestra) original, facilitar el conteo de
colonias y obtener resultados confiables; en particular
cuando la muestra contiene una densidad bacterial sobre
300 CFUs.
El mtodo es muy utilizado en el anlisis microbiolgico de
aguas.

Ref. Capuccino & Sherman

(2014) . Microbiology: a
Laboratory Manual. 10th ed.
Pearson

TCNICA POUR PLATE- PROCEDIMIENTO

Transferir el volumen seleccionado de la muestra o de la dilucin que

corresponda.
Depositar la muestra en forma asptica en el centro de la placaPetri.
Vertir el agar lquido (a temperatura templada) poco a poco, haciendo un
movimiento circular para mezclar la muestra con el medio de cultivo.
Incubar las placas en forma invertida.
Si el crecimiento fue el adecuado, se observarn colonias aisladas en toda
la placa. (Contar en las placas que tengan entre 30 300 colonias
aisladas)

TCNICA SPREAD PLATE- PROCEDIMIENTO

Transferir el volumen seleccionado de la muestra o de la dilucin que corresponda.

Depositar la muestra en forma asptica sobre el agar.
Con un asa de cristal (Drygalsky) esparcir el inculo por toda la superficie del agar
de la forma ms homognea posible.
Incubar las placas en forma invertida.
Si el crecimiento fue el adecuado, es decir se observarn colonias aisladas en toda
la placa. (Contar en las placas que tengan entre 30 300 colonias aisladas)

CONTABILIZACIN DE DENSIDAD BACTERIAL

Importante:

El conteo del nmero de colonias en las placas, debe ser

multiplicado por el factor de dilucin para obtener las CFUs /ml de muestra
original.

Mtodo de diluciones seriadas para recuento en placa de colonias (tomado de Tortora et al. 2007).

FRMULA PARA LA CONTABILIDAD DE COLONIAS

CFUs/ml = # colonias x Factor Dilucin

Ej-1:

50 colonias; FD= 1:1x106 (1:1,000,000);

Vol. transferido = 1ml

50 x 1,000,000 = 50,000,000 = 5x107 CFUs/ml

Ej-2: 50 colonias; FD= 1:1x105 (1:100,000);

Vol. transferido = 0.1ml

50 x100,000 = 5,000,000 = 5 clulas x 106/ 0.1ml

= 5,000,000 x 10 = 50,000,000 CFUs/ml
= 5x107 CFUs/ml

CONTABILIZACIN DE DENSIDAD BACTERIAL

Ref. Capuccino & Sherman

(2014) . Microbiology: a
Laboratory Manual. 10th ed.
Pearson