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BM-13
EXPRESIN GNICA
INTRODUCCIN
La expresin gnica es el proceso mediante el cual la informacin almacenada en el DNA es
usada para dirigir la sntesis de un producto gnico especfico (protenas; RNAr; RNAt).
Este producto gnico es el responsable de llevar a cabo una funcin celular especfica, la que
terminar manifestndose como un rasgo fenotpico adquirido por la clula en la que esta
informacin gentica se expresa.
Sin embargo, el momento en que esta informacin gentica es expresada, se encuentra altamente
regulada por diversos factores (entre ellos, estmulos ambientales, la accin reguladora de
ciertas hormonas, el grado de condensacin de la cromatina, etc.), lo que permite controlar, en
todo momento, la produccin adecuada de protenas, para cuando ellas sean requeridas por el
metabolismo celular.
Durante el proceso de diferenciacin celular, la expresin gnica se regula de modo que ciertos
genes se "encienden" y otros se "apagan", permitiendo a las clulas modificar su contenido
proteico y, por lo tanto, su propio fenotipo, que es el requisito necesario para transformar un
tipo celular en otro diferente, lo que da origen a las distintos tipos celulares que constituyen a un
individuo.
Las mutaciones pueden alterar la informacin almacenada en los genes, originando a partir de
un gen inicial, distintas versiones del mismo (llamadas genes alelos). Estos genes alelos son los
responsables de las variaciones
fenotpicas (diversidad biolgica) que manifiestan las
poblaciones de seres vivos, sobre las que acta el proceso de seleccin natural durante la
evolucin de los seres vivos.
1.
LOS EXPERIMENTOS
MATERIAL GENTICO
QUE
DEMOSTRARON
QUE
EL
DNA
ES
EL
Hacia 1887 los investigadores haban llegado a la conclusin de que la base fsica de la herencia
se hallaba en el ncleo. Se demostr que la cromatina consista en cidos nucleicos y protenas
pero no se saba con certeza cul de las dos sustancias era el material gentico.
Mientras los qumicos procuraban resolver la estructura del DNA, los bilogos trataban de
identificar la fuente de informacin gentica. Se llevaron a cabo experimentos con bacterias y
con virus, que proporcionaron la evidencia fundamental de que el material gentico no era la
protena sino el DNA.
Experimento
Pregunta: un extracto de bacterias muertas
puede transformar genticamente clulas vivas?
El experimento hizo que Griffith llegara a la conclusin de que las bacterias de tipo IIR se
haban transformado de algn modo y haban adquirido la virulencia gentica de las bacterias
muertas de tipo IIIS. Esta transformacin produjo un cambio gentico permanente en las
bacterias, sin embargo Griffith no comprendi la naturaleza de la transformacin y supuso que
alguna sustancia de la cubierta de polisacridos de las bacterias muertas podra explicar el
cambio. A esta sustancia la denomin principio de transformacin.
Experimento
Pregunta: cul es la naturaleza qumica de la
sustancia de transformacin?
Este trabajo les permiti a los cientficos concluir que es el DNA y no la protena la que entra en la
bacteria durante la reproduccin del fago y que solo el DNA se transmite a los fagos de la
progenie.
No obstante, continuaba resultando necesario demostrar cmo un compuesto tan simple poda
almacenar y transmitir tanta informacin. La respuesta la proporcion el progresivo conocimiento
de su estructura. Desde que, en 1953, J. Watson y F. Crick mostraron su modelo de estructura
de doble hlice, que explicaba cmo se poda almacenar y transmitir la informacin gentica,
nadie dud de la funcin y la importancia del DNA.
El DNA es la macromolcula portadora de los genes. Un gen se define como el factor gentico
que contribuye a determinar una caracterstica, las secuencias de ADN que codifica una
molcula de ARN o la secuencia completa del DNA requerida para transcribir y codificar una
molcula de RNA.
Experimento
Pregunta: qu parte del fago el DNA o la protena- sirve como material gentico y se transmite a su progenie?
Figura 3. Experimento de Hershey y Chase para identificar si el material gentico era la protena o el DNA.
2.
CONCEPTO DE GEN
En la actualidad se cuenta con nuevos elementos que permiten precisar algunas definiciones, lo
cual no significa que estos conceptos sean nicos y definitivos, ni que estas concepciones sean las
nicas imperantes.
Los genes tienen diferente longitud y no estn ubicados en forma equidistante. Cada gen es una
porcin de una molcula de DNA y no tiene extremos fsicos. Los genes no son contiguos, sino que
estn separados por regiones no codificantes de DNA. Algunos estn agrupados y otros aislados
en diferentes regiones del cromosoma.
Una de las posibles definiciones de gen corresponde a todo segmento de DNA que se
encuentra luego de un promotor y que puede ser transcrito por una RNA polimerasa y
originar un RNA funcional (mRNA, rRNA, tRNA, snRNA, ribozima y otros tipos de RNA).
Gen Eucarionte
(Unidad de transcripcin)
Exn 1
Exn 2
Exn 3
Exn 4
Promotor
Intrn
2
Termino
Intrn 1
Intrn 3
Figura 4. Representacin de un gen eucariontes y sus componentes bsicos.
Como se observa, muchos genes codifican RNA que nunca se traducen en protenas, como los
tRNA, los rRNA y los RNA que forman parte de los snRNP. As, las definiciones clsicas no se
ajustan a los conocimientos actuales.
Los nuevos procedimientos y modelos de la biologa molecular nos llevan a revisar
constantemente los conceptos y definiciones que alguna vez resultaron tiles. Esto demuestra,
una vez ms, que la biologa molecular, tanto como las otras ramas de la biologa, es una ciencia
que se construye por medio de un proceso de cuestionamiento permanente, formulando
modelos que pueden ser perfectibles. A su vez, es importante considerar que la biologa
molecular brinda un nivel de aproximacin de los fenmenos biolgicos, pero que existen otros
niveles de organizacin que influyen y son influidos por los fenmenos que ocurren a nivel de las
bases moleculares de vida.
Los genes que contienen la informacin que se expresan en la produccin regulada de
enzimas y protenas estructurales permiten controlar las reacciones bioqumicas y la
forma de los organismos.
El material gentico se manifiesta dando forma y funcin a las protenas, y debe replicarse con la
suficiente fidelidad como para asegurar la continuidad de las especies, pero al mismo tiempo
permitir algunos cambios (variaciones) que sirven de sustrato en la evolucin.
3.
4.
F. Crick enunci lo que l llam el dogma central, segn el cual la informacin fluye del DNA a
las protenas en una nica direccin.
DNA
transcripcin
RNA
traduccin
Protenas
As, el genotipo determina el fenotipo, dictando la composicin de las protenas. F. Crick fue
criticado por utilizar el trmino dogma ya que un dogma es algo que no se pone en duda. El
cientfico reconoci ms tarde que debi llamarlo hiptesis central.
Una gran diversidad de experimentos han demostrado que el dogma se cumple, salvo en unas
pocas excepciones. La principal excepcin corresponde a la transcripcin inversa, en la cual la
informacin codificada por ciertos virus que contienen RNA se transcribe al DNA por la accin de la
enzima transcriptasa inversa. Por ello el dogma o hiptesis central hoy se presenta as.
replicacin
DNA
transcripcin
(transcriptasa
RNA
inversa)
8
traduccin
Protenas
Regin promotora
DNA
3
3
5
Sentido de la transcripcin
Desenrollamiento
del DNA
Reenrollamiento
del DNA
cadena de DNA no transcrita
5
3 DNA
5
Figura 5. Representacin del proceso de transcripcin. Observe que la direccin de la trascripcin siempre
es de 5 a 3, es decir, la elongacin o crecimiento de la molcula de RNA es siempre por el extremo 3.
Es importante destacar que los RNA que se sintetizan a partir de un fragmento de hebra molde o
templada de DNA puede terminar como: RNA mensajero, RNA de transferencia y/o RNA
ribosomal; estos dos ltimos no llevan informacin gentica de una protena, pero son
imprescindibles en el proceso de sntesis de ella.
Etapas de la transcripcin:
Se estudi inicialmente en Escherichia coli y el proceso consta de cuatro fases:
A) Iniciacin o ensamblaje de molculas.
B) Elongacin o crecimiento de la molcula de RNA.
C) Terminacin o conclusin de la cadena de RNA.
Post transcripcin.
Maduracin o transformacin del RNA transcrito.
Se har un breve anlisis de cada una de ellas.
A) Iniciacin
La RNA polimerasa se une fuertemente cuando entra en contacto con una secuencia especfica de
DNA, llamada promotor. En el promotor se encuentran dos cortas secuencias situadas entre -35 y
-10 nucletidos del inicio (0) de la transcripcin. La misin de las secuencias promotoras es indicar
dnde se inicia la transcripcin, en cul de las dos hebras del DNA y en qu lugar (Figura 6).
DNA
-35
TTGACA
-10
-
TATATT
Inicio de la transcripcin
Figura 6. Centros promotores y sitio de inicio de la transcripcin en la hebra molde o templado de DNA.
B) Elongacin
Despus de unirse al promotor, la RNA polimerasa abre una regin localizada de la doble hlice,
de forma que expone los nucletidos de ambas cadenas de una pequea zona del DNA. Una de las
dos cadenas expuestas del DNA acta como patrn para el apareamiento de las bases
complementarias y se inicia la formacin de una cadena de RNA. De esta forma, la cadena de
RNA va creciendo nucletido a nucletido en direccin 5 a 3 (Figura 7). El proceso de elongacin
de la cadena contina hasta que la enzima encuentra una segunda secuencia especial del DNA, la
seal de terminacin.
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Cadena no transcrita
Transcripcin
DNA
Cadena transcrita
mRNA
(copia
complementaria
de la cadena de
DNA
transcrita)
mRNA
Transcrito primario
Figura 7. Sntesis de una molcula de mRNA.
C)
Terminacin
Existen diversas seales de terminacin en el DNA molde que son secuencias que desencadenan
la separacin de la enzima RNA polimerasa de la cadena molde y del RNA transcrito.
D) Maduracin
En procariontes el RNA mensajero, antes de terminar el proceso de transcripcin empieza a
ser traducido, por lo tanto no necesita de maduracin, habitualmente son policistrnicos. Los
RNA ribosomal y de transferencia se forman a partir de transcritos primarios. La maduracin
consiste en modificaciones tales como rupturas de la cadena y aadidos de nucletidos (-CCA)
en el extremo terminal 3. Un solo tipo de RNA polimerasa permite transcribir todos los tipos de
RNA y es distinta a las observadas en eucariontes.
En eucariontes cada gen eucariota se transcribe separadamente (monocistrnico), con un
control transcripcional independiente para cada uno. Las clulas eucariontes poseen tres tipos
distintos de RNA polimerasas cada una de los cuales es responsable de la transcripcin de los
diferentes tipos de RNA: La RNA polimerasa I transcribe el rRNA (RNA ribosomal) la RNA
polimerasa II el pre mRNA y algunos snRNAy la polimerasa III el tRNA.
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Los distintos RNA transcritos en los eucariontes presentan una serie de especializaciones no
encontradas en procariontes. A medida que transcurre la transcripcin, las molculas de mRNA,
llamadas transcritos primarios, son modificadas. Esto ocurre antes de que sean transportadas
al citoplasma, que es el sitio donde ocurre la traduccin. Las modificaciones son varias e incluyen:
1.
Adicin del CAP: Un nucletido modificado de guanina (CAP) se aade al extremo 5 del
mensajero. Este proteccin es imprescindible para la unin del mRNA al ribosoma y
protege al mRNA de la degradacin por exonucleasas citoplasmticas.
2.
Poliadenilacin: En el extremo 3 del mRNA hay una secuencia seal (AAUAAA) a la que se
unen factores especficos y la enzima poli-A polimerasa. Esta enzima estimula la escisin en
un sitio ubicado 10 a 35 nucletidos hacia el extremo 3 de la seal. Luego, la enzima
agrega, de a uno, una cola de ribonucletidos de adenina (cola de poli-A) y as se genera el
extremo 3 del mRNA maduro. Esta cola de poli-A, contiene 100-250 nucletidos y parecera
que influyen en la estabilidad y en la capacidad de que los mRNA sean traducidos en el
citoplasma.
3.
5
CAP
Proteccin
5
CAP
Proteccin
Figura 8. Procesamiento del mRNA en eucariontes.
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El proceso de splicing, catalizado por spliceosomas, ocurre solo en organismos eucariotas. Las
secuencias que se eliminan son los intrones, mientras que las secuencias que permanecen y
forman parte del mRNA maduro son los exones.
En muchos casos, un mismo transcrito primario o pre mRNA (RNA heteronuclear) puede ser
procesado por splicing en ms de una forma. Este empalme alternativo permite obtener
molculas de mRNA maduro diferentes a partir de molculas de mRNA inmaduro originalmente
idnticas, lo cual da por resultado polipptidos con distintas funciones; un mismo gen puede
producir una protena en un tejido y otra distinta en otro tejido.
Esto es posible porque algunos genes producen molculas de pre-mRNA que tienen mltiples
patrones de empalme. Se ha observado que estos pre-mRNA presentan un segmento que puede
ser Intrn o Exn. Este procesamiento diferencial del RNA nuclear permite, a las clulas de cada
tejido, producir su propia versin de mRNA correspondiente al gen especfico (Figura 9).
El investigador Thonas R. Cech y sus colaboradores, en los Estados Unidos, estudiando el splicing
del rRNA en un ciliado de agua dulce llamado Tetrahymena, encontraron que en estos organismos
unicelulares eucariontes el propio intrn del rRNA inmaduro acta como catalizador de la escisin
y el empalme, es decir, se produce un empalme autocataltico. Esta secuencia de RNA se pliega
formando una estructura compleja que funciona como enzima, que se ha denominado ribozima.
Se han encontrado otros ejemplos de empalme autocataltico en varios organismos, en RNA
codificados por genes mitocondriales o de cloroplastos, en algunos genes nucleares de eucariontes
unicelulares y en algunos genes de bacterifagos, pero no en eucariontes multicelulares.
De gran importancia es el hecho que los genes eucariontes poseen en su estructura exones
e intrones, situacin no observada en procariontes. El nmero de intrones vara para cada
gen, sin embargo, su nmero aumenta a medida que el organismo es ms complejo y de
reciente evolucin. Se ha propuesto que los intrones promueven la recombinacin gentica
(va crossing-over), y por lo tanto aumentan la velocidad de evolucin (de cambio).
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ACTIVIDAD 1
1.
Cul es el orden del proceso? Anote la letra que corresponda en la lnea de puntos.
1
2.
2... 3
ARN
ARN polimerasa
Sentido de la reaccin?
Al respecto:
Cul es el sentido de la reaccin? Rellene la punta correcta de la flecha.
Las hebras del ADN son antiparalelas. Pinte la hebra que va de 3 a 5
Cul extremo de la doble hlice de ADN se va desenrollando el de su izquierda o el de su
derecha? Justifique
Anote en cada extremo del ARN, cul es el extremo 5 y cul extremo es el 3? Justifique su
respuesta.
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5.
CDIGO GENTICO
16
6.
Subunidad
mayor
Subunidad mayor
ribosomal
Sitio
Sitio
P
E
Subunidad
menor
Sitio
A
Subunidad menor
del ribosoma
17
Sitio de unin
del ARNm
P
Aminocido leucina
A nt ic od n
Codn
3
ARNm
5
Hay 20 enzimas
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B) Elongacin
El proceso de elongacin de la cadena polipeptdica sobre un ribosoma se puede considerar como
un ciclo de tres etapas (Figura 13):
1) El tRNA cargado que se introduce en el sitio A, vaco, quedar cerca de la N-fornilmetioniltfMetRNA, que est localizada en el sitio P.
2) Formacin del primer enlace peptdico cuando la N-formilmetionina del tRNA iniciador se une
al residuo aminoacdico unido al segundo tRNA ubicado en el sitio A. El ribosoma se desplaza
tres nucletidos en direccin del extremo 3 del mRNA, quedando libre un nuevo sitio A.
3) Los procesos citados se repiten de forma sucesiva codn tras codn. Se calcula que se agregan
a la cadena, en promedio, cinco aminocidos por segundo, detenindose la incorporacin
cuando al sitio A llega alguno de los codones de trmino.
C) Terminacin
En esta etapa, el sitio A del ribosoma es abordado por alguno de los codones de trmino y
ocupado por un factor de terminacin, RF en las bacterias y eRF (eucaryotic releasing factor) en
eucariontes. La cadena polipeptdica terminada se libera del ltimo tRNA. Se disocian las subunidades ribosomales y el mRNA, quedando disponibles la subunidades ribosomales para ser
utilizados en una nueva sntesis (Figura 14).
Traduccin y Polirribosomas
Tanto en las clulas procariontes y eucariontes las molculas de mRNA se traducen por la
accin de mltiples ribosomas, las estructura resultante un mRNA con varios ribosomas -se
denomina polirribosma o polisoma. Cada ribosoma se une sucesivamente al sitio que une
ribosomas en el extremo 5 del mensajero y se mueve hacia el extremo 3; el polipptido
asociado con cada ribosoma progresivamente se torna ms largo a medida que el ribosoma
se mueve sobre el mRNA.
En las clulas procariontes la transcripcin y traduccin son simultneas; por tanto, pueden
unirse mltiples ribosomas al extremo 5 del mRNA, mientras que la transcripcin aun est en
proceso en el extremo 3.
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ACTIVIDAD 2
1.
2.
Ribosoma
ARNt
Anticodn
U G G U U U G G C
Codones
Al respecto, conteste:
a)
Cul es el anticodn que posee y el aminocido que trae el ARNt que se est ubicando
en el sitio A?
b)
Cul es el anticodn que posee y el aminocido que trajo el ARNt que est ubicado en
el sitio P?
c)
Cul es el anticodn que posee y el aminocido que trajo el ARNt que est saliendo del
sitio E?
22
7.
Tipo de Sustituciones
Mensaje original
ADN 3 TAC TCA AAC ACG ATA
ARN 5 AUG AGU UUG UGC UAU
Protena
met ser leu
cys tyr
Sustitucin neutra
ADN 3 TAC TCA GAC
ARN 5 AUG AGU CUG
Protena
met ser leu
ACG ATA
UGC UAU
cys tyr
ACG ATA
UGC UAU
cys tyr
Sin sentido
ADN 3 TAC TCA ATC ACG ATA
ARN 5 AUG AGU UAG UGC UAU
Protena met ser Stop
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DELECIN
Mensaje original
ADN 3 TAC TCA AAC ACG ATA
ARN 5 AUG AGU UUG UGC UAU
Protena
met ser leu
cys tyr
C
ADN 3 TAC TCA AA A
ARN 5 AUG AGU UUU
Protena
met ser
phe
CGA TA...
GCU AU
ala
ADICIN
Mensaje original
ADN 3 TAC TCA
AC ACG ATA
ARN 5 AUG AGU UUG UGC UAU
Protena
met ser leu
cys tyr
ADN 3
ARN 5
Protena
TAC TCA
AA CAC GAT ..A
AUG AGU GUU GUG CUA.. U
met ser val
val
leu
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GLOSARIO
Codn (triplete): Secuencia de tres nucletidos en el mRNA que codifica para un aminocido.
Expresin gnica: Proceso por el cual la informacin codificada en los genes se convierte en las
estructuras operacionales presentes en las clulas. Los genes expresados incluyen a aquellos que
han sido transcritos a mRNA y luego traducidos a protenas y aquellos que han sido transcritos a
RNA pero no traducidos a protenas (p.ej. tRNA y rRNA).
Exn: Porcin de una molcula de DNA en eucariontes que codifica parte de un polipptido.
Genes: Unidades hereditarias que conforman los cromosomas. Estos segmentos especficos de
DNA controlan las estructuras y funciones celulares; la unidad funcional de la herencia. Secuencia
de bases de DNA que usualmente codifican para una secuencia polipeptdica de aminocidos.
Insercin: Tipo de mutacin en la cual se intercalan una o ms bases de DNA en una secuencia
de bases de DNA preexistente. Esto produce un corrimiento del marco de lectura en el proceso
de sntesis proteica dando, por lo general, como resultado una protena alterada.
Intrn: La secuencia de bases de DNA en eucariontes que interrumpe la secuencia de un gen que
codifica para una protena, esta secuencia se transcribe al mRNA pero en un proceso de "corte y
empalme" se separa del mismo antes que el mRNA sea traducido a protena.
Mutacin: El cambio de un gen de una forma allica a otra, cambio que resulta heredable.
Modificacin hereditaria del material gentico espontnea o inducida.
Mutgeno: Agente desencadenante de mutaciones.
Polimerasa (DNA o RNA): Enzimas que catalizan la sntesis de cidos nucleicos en base a
templados preexistentes, utilizando ribonucletidos para el RNA y desoxirribonucletidos para el
DNA.
Promotor: Sitio del DNA donde se unir la RNA polimerasa para iniciar la transcripcin.
RNA (cido ribonucleico): cido nucleico formado por una cadena polinucleotdica. Su
nucletido, consiste en una molcula del azcar ribosa, un grupo fosfato, y una de estas cuatro
bases nitrogenadas: adenina, uracilo, citosina y guanina.
RNA mensajero: "Molde" para la sntesis proteica que es copiado de una de las hebras de DNA y
que se traduce en los ribosomas en una secuencia proteica. Se abrevia mRNA.
RNA polimerasa: Complejo enzimtico que cataliza la sntesis de RNA (transcripcin) utilizando
como molde la cadena de una molcula de DNA. En eucariontes existen tres RNA polimerasas: la I
sintetiza rRNA de gran tamao; la II es la que forma al mRNA; y la III se encarga de transcribir
rRNA pequeos y tRNA.
Secuencia de bases: el orden de las bases de los nucletidos en una molcula de DNA.
Traduccin: La sntesis de una protena sobre un "molde" de mRNA, consiste en tres etapas:
iniciacin, elongacin y terminacin.
Transcripcin: sntesis de RNA.
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ARNt.
ARNm.
Protenas.
Solo I
Solo II
Solo III
Solo II y III
I, II y III
ADN
ARN
Protena
2.
duplicacin.
inversin.
traslocacin.
delecin.
insercin.
COMENTARIO:
A pesar de que los diversos tipos de cambio que ocurren a nivel gentico son tratados a partir del
segundo ao de enseanza media y luego el tema se retorna en cuarto ao, desde el punto de
vista molecular, esta pregunta result ser de alta complejidad para los postulantes. Slo un 13%
contest correctamente y el porcentaje de omisin alcanz un 31,55% del total. Ello no, refleja
directamente un desconocimiento sobre este tema, sino ms bien conceptos mal adquiridos o
poco aplicados.
Esta pregunta fue contestada correctamente (clave B) por aquellos postulantes con ms alto
puntaje. El distractor C fue el que atrajo mayor cantidad de postulantes, y fue elegido por el
segundo grupo de ms alto puntaje, lo que denota una posible confusin de los distintos tipos de
cambios que pueden ocurrir a nivel gentico. El distractor D tuvo menor aceptacin dentro del
universo de postulantes, lo cual permite inferir que los postulantes supieron descartar un cambio
o mutacin que involucra una prdida de cierto segmento en una secuencia.
27
3.
Unidades arbitrarias
2
10
Tiempo
De acuerdo con los resultados mostrados en la grfica, es posible inferir correctamente que el
compuesto C
A)
B)
C)
D)
E)
favorece
favorece
inhibe la
inhibe la
inhibe la
la transcripcin.
la duplicacin del ADN.
transcripcin.
traduccin.
sntesis del ADN.