Evaluación Inocuidad Stevia

Nutricin Hospitalaria
ISSN: 0212-1611
info@nutricinhospitalaria.com
Grupo Aula Mdica
Espaa
Aranda-Gonzlez, Irma; Barbosa-Martn, Enrique; Toraya-Avils, Roco; Segura-Campos, Maira;

Moguel-Ordoez, Yolanda; Betancur-Ancona, David
Evaluacin de la inocuidad de Stevia rebaudiana Bertoni cultivada en el sureste de Mxico como
edulcorante de alimentos
Nutricin Hospitalaria, vol. 30, nm. 3, septiembre-, 2014, pp. 594-601
Grupo Aula Mdica
Madrid, Espaa
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=309232247017
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Nutr Hosp. 2014;30(3):594-601

ISSN 0212-1611 CODEN NUHOEQ
S.V.R. 318
Original /
Alientos uncionales
Evaluacin de la inocuidad de
Stevia reauiana Bertoni cultivada en el
sureste de Mxico como edulcorante de alimentos

1
Irma Aranda-Gonzlez , Enrique Barbosa-Martn , Roco Toraya-Avils , Maira Segura-Campos ,

2
Yolanda Moguel-Ordoez
y David Betancur-Ancona
1*
Facultad de Ingeniera Qumica, Universidad Autnoma de Yucatn, Mrida, Yucatn.
Instituto Nacional de Investigaciones
Forestales, Agrcolas y Pecuarias (INIFAP), Campo experimental Mococh, Mococh, Yucatn. Mxico.
SAFETY ASSESSMENT O F
Resumen
Las hojas de
cientemente
importante
se
Stevia reauiana
han
como
comenzado
edulcorantes.
y sus glucsidos reutilizar
Sin
de
embargo,
existen
tractos y un componente glucsido. El objetivo de este

trabajo fue cuantificar los glucsidos de
S reauiana,
evaluar la citotoxicidad y el efecto de la administracin

aguda y crnica del extracto sobre la glucemia en modelos animales como en humanos. Los glucsidos de los
extracto de las variedades Morita II y Criolla se cuantificaron por HPLC, empleando una columna C18 (250 mm
x 4.6 mm y tamao de partcula de 5
m),
con detector
UV a 210 nm, fase mvil de acetonitrilo/amortiguador

fosfato de sodio 10 mmol/L, pH 2.6 (32:68 v/v). Se realiz
un estudio de citotoxicidad en clulas Vero, una prueba
de tolerancia a la glucosa intraperitoneal y ensayo de
consumo crnico (4 semanas) en un modelo animal de
diabetes y finalmente, se determin el ndice glicmico
(I.G) en individuos sanos. El contenido de glucsidos fue
mayor en la variedad Morita II aunque la CC
bas es >300
50
en am-
g/mL. Las reas bajo la curva de la IPGTT
as como la glucosa en ayuno de los animales no fueron

significativamente diferentes (p>0.05) y el I.G. del extracto fue 11.11%, lo cual lo clasifica como I.G. bajo. El
extracto de
AS FOOD SWEETENER
manera
reportes acerca del efecto antihiperglucemiante de ex-
S reauiana Morita II es de bajo ndice gli-
cmico y, en las dosis evaluadas, no es citotxico ni posee

efecto agudo o crnico sobre la glucemia, lo cual lo hace
un edulcorante inocuo.
STEIA REAUDIANA
BERTONI GROWN IN SOUTHEASTERN MEXICO
Abstract
Stevia reauiana
been
recently
sweeteners.
and
leaves
and
significantly
However,
it
has
their glycosides
used
been
so
have
important
reported
an
as
anti-
hyperglycemic effect of the extract and a glycoside. The

aim of this study was to quantify
S reauiana glycosi-
des, assess cytotoxicity of the extract and its acute and

chronic effect on blood glucose in animal models and
in human. The glycosides of the Morita II and Criolla
extract were quantified by HPLC, using a C18 column
(250 mm x 4.6 mm and particle size of 5 uM) with UV
detection at 210 nm, mobile phase of acetonitrile/sodium phosphate buffer 10 mmol/L, pH 2.6 (32:68 v/v).
Cytotoxicity study was performed in Vero cells, whereas
an intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT) and a
chronic consumption assay (4 weeks) were executed in
an animal model of diabetes; finally the glycemic index
(G.I.) was determined in healthy individuals. The glycoside content is higher in the Morita variety II although
both had a CC
50
>300
g/mL. The areas under the curve
of the IPGTT and fasting glucose of the animals were

not significantly different (p> 0.05) and the I.G. extract
was 11.11 %, which classifies the extract as low I.G. The
extract of S. rebaudiana Morita II has a low glycemic
index and, in the doses tested, is not cytotoxic nor has
(Nutr Hosp. 2014;30:594-601)

DOI:10.3305/nh.2014.30.3.7634
acute or chronic effect on blood sugar, which makes it a

safe sweetener.
(Nutr Hosp. 2014;30:594-601)
Palabras clave: Stevia rebaudiana. Inocuidad. ndice Glicmico. Diabetes Mellitus. Edulcorante.
DOI:10.3305/nh.2014.30.3.7634
Key words: Stevia rebaudiana. Safety. Glycemic Index.
Diabetes Mellitus. Sweetener.
Correspondencia: David Betancur-Ancona.

Facultad de Ingeniera Qumica, Universidad Autnoma de Yucatn.
Perifrico Norte Km. 33.5, Tablaje Catastral 13615.
Col. Chuburna de Hidalgo Inn. Mrida, Yucatn.
C.P. 97203, Mxico.
E-mail: bancona@uady.mx
Recibido: 28-V-2014.
Aceptado: 28-VI-2014.
594
017_7634 Evaluacin de la inocuidad de Stevia rebaudiana Bertoni.indd 594
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Abreviaturas
en Estados Unidos (FDA) otorg el estatus de generalmente reconocido como seguro (GRAS, por sus
AUC: rea bajo la curva.
siglas en ingls) al rebaudisido A para usarse como
CC
edulcorante
: Concentracin citotxica 50.
50
DMEM: Medio basal de Eagle modificado por Dulbecco (Dulbeccos modified Eagles mdium).
no
slo
como
suplemento
en
ese
mismo ao el Comit de Expertos en Alimentacin

FAO/OMS en aditivos alimentarios (JECFA) y Estn-
DO: Densidad ptica.
dares de alimentacin de Australia y Nueva Zelanda
FDA: Administracin de Drogas y Alimentos (Food
(FSANZ) establecieron el consumo diario aceptable
and Drug Administration).

FSANZ:
y
Nueva
Estndares
Zelanda
(ADI por sus siglas en ingls) de 0-4 mg/kg de peso
de
(Food
Alimentos
Standards
de
Australia
Australia
Sin embargo, diversos estudios han demostrado que
seguro
derivado de esteviol presente en el mismo el estevi-
Zealand).
GRAS:
corporal/da de equivalentes molares de esteviol .
New
extractos de S. rebaudiana y al menos un glucsido

Generalmente
reconocido
como
(Generally Recognized as Safe).
sido, tienen capacidad antihiperglucemiante en mo-
HPLC: Cromatografa lquida de alta eficacia (High

performance liquid chromatography).
8-11
delos animales
12,13
y en humanos
Por lo que el objetivo de este trabajo fue determinar
IG: ndice glicmico.
el contenido de glucsidos de S. rebaudiana cultivada
IPGTT: Prueba de tolerancia a la glucosa intraperi-
en Mxico, evaluar la citotoxicidad y el efecto de la
toneal (Intraperitoneal Glucose Tolerance Test).
administracin aguda y crnica del extracto sobre la
JECFA: Comit Mixto FAO/OMS de Expertos en

Aditivos Alimentarios (Joint FAO/WHO Expert Com-
glucosa sangunea tanto en humanos voluntarios como

en modelos animales.
mittee on Food Additives).

SFB: Suero fetal bovino.
Materiales y mtodos
Introduccin
Elaboracin del extracto
Stevia es un gnero de plantas nativas de regiones
Se obtuvo el extracto de hojas de la variedades de
subtropicales y tropicales de Sudamrica y Centro-
Stevia rebaudiana B., denominadas Morita II y Crio-
amrica, de las cuales hay 407 especies. Una de sus
lla, cultivadas en la pennsula de Yucatn, Mxico.
especies es Stevia rebaudiana Bertoni, la cual es co-
Las
~
nocida en guaran como kaa hee (hierba dulce), y
1
hojas
obtenidas
fueron
secadas
la
sombra
pulverizas en molino Willey (Thomas Scientific, NJ,
es la de mayor potencial edulcorante . Los compuestos
E.E.U.U) con malla de 1 mm y almacenadas en frascos
responsables de la propiedad edulcorante de la planta,
de vidrio mbar para protegerlas de la luz solar y hasta
son los glucsidos diterpenos derivados de esteviol.
su uso posterior. Para realizar el extracto se sigui la

4
En las variedades generalmente cultivadas de Ste-
metodologa de Woelwer-Rieck y colaboradores . Se
via, los principales compuestos glucsidos de esteviol
pes 500 mg de hojas de Stevia y se agreg 5 mL de
son cuatro: estevisido, rebaudisido A, dulcsido A y
agua; se calent a bao Mara a 100 C (Cole-Parmer,
rebaudisido C, entre los cuales destacan en cantidad
E.E.U.U.) durante 30 minutos y se dej enfriar a tem-
los primeros dos. El estevisido es 250300 ms dulce
peratura ambiente; posteriormente se centrifug du-
que el azcar aunque con un sabor ligeramente amar-
rante 10 minutos a 2,500 x g a 10 C (Z 300 K, Hermle
go, mientras que el Rebaudisido A tiene mayor capa-
Labortechnik, Alemania); se decant el sobrenadante y
cidad edulcorante (350-450 veces ms que el azcar)
al residuo slido nuevamente se agreg 5 mL de agua
y sin resabio amargo
1,2
. En menor cantidad, se pueden
y se repiti el procedimiento dos veces ms. La fase
encontrar el rebaudisido C y dulcsido A junto con
acuosa obtenida de las tres extracciones se afor en
estevolbisido, rubussido, rebaudisido B, D, E y
un matraz volumtrico de 25 mL, se filtr con papel
1,3,4
filtro y es el que fue empleado para todos los experi-
Los factores que contribuyen a la cantidad y tipo de
mentos. Los extractos empleados para el anlisis por
glucsidos son la variedad de Stevia as como las con-
cromatografa lquida de alta eficacia (HPLC) fueron
diciones climticas y de siembra. Existen variedades
realizados de la misma manera pero con agua grado
de Stevia cuya composicin de estevisidos es distinta
HPLC y filtrados con membrana de 0.45
a las variedades generalmente cultivadas, como es el
ser inyectados en el equipo.
m antes de
caso de una variedad que no contiene Rebaudisido A

ni Rebaudisido C, otra donde el principal componente es Rebaudisido C
y otra denominada Morita que
Cuantificacin de glucsidos por HPLC
fue mejorada para tener 2.5 veces ms Rebaudisido A

6
que estevisido
y es la que se utiliza principalmente
En 2008 la Administracin de Alimentos y Drogas
Evaluacin de la inocuidad de Stevia
Se utiliz la metodologa recomendada por JECFA

(2010) para analizar los extractos de Stevia rebaudia-
como edulcorante.
14
na
. Se utiliz un equipo Agilent serie 100 con una
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595
rebaudiana Bertoni cultivada en el sureste

de Mxico como edulcorante de alimentos
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columna Luna 5
C18(2) 100A (Phenomenex) de 250
Modelo animal de diabetes
mm de longitud, dimetro interno de 4.6 mm y tama-
m, la fase mvil fue una mezcla
Para evaluar el efecto agudo y crnico del extracto
32:68 (v/v) de acetonitrilo y solucin amortiguadora
de S. rebaudiana sobre la glucosa sangunea, se uti-
de fosfato de sodio (10 mmol/L, pH 2.6), con un flu-
lizaron ratas macho Wistar con pesos comprendidos
jo isocrtico de 1 mL/min y detector UV a 210 nm.
entre 250-250 g. Los animales fueron dispuestos de
Los
con
manera individual en jaulas de plstico con rejillas de
el programa Clarity versin 2.7.3.498 (2000-2009).
acero inoxidable, en condiciones de ciclo luz/oscuri-
Para realizar la cuantificacin de los glucsidos en
dad natural, con temperatura constante a 25 C y agua
los extractos se realizaron curvas de calibracin por
ad libitum durante todo el experimento. Los procedi-
triplicado
100,
mientos experimentales fueron aprobados por el Comi-
de los estndares: esteviolbisido
t para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio
o de partcula de 5
resultados
125 y 150
con
cromatogrficos
se
concentraciones
g/mL)
analizaron
(25,
50,
75,
(Chro-
(CCUAL-Facultad de Medicina-Universidad Autno-
(Chroma-
ma de Estado de Morelos) y se realizaron de acuerdo
(Chromadex
a la Norma Oficial Mexicana (NOM-062-ZOO-1999),
ASB-00018228) y rebaudisido B (Chromadex ASB-
Especificaciones Tcnicas para el Cuidado y Uso de
00018227), estevisido (Sigma S3572) y rebaudisido
Animales de Laboratorio
A (Sigma 01432), los cuales se suspendieron en agua
ciones Federales e institucionales. Antes de iniciar el
m y se
procedimiento experimental de induccin de diabetes,
(Chromadex
madex
dex
ASB-00019349),
ASB-00004949),
ASB-00018229),
dulcsido
rebaudisido
rebaudisido
grado HPLC, filtraron con membrana de 0.45
15
as como todas las regula-
los animales fueron aclimatados durante 7 das en jau-
congelaron a -20 C hasta su uso.
las individuales con libre acceso al agua y alimento.

El da anterior a la induccin de diabetes, las ratas
fueron sometidas a 12 horas de ayuno. La induccin
Evaluacin citotxica del extracto
se realiz a travs de la inyeccin de 120 mg/kg de

La actividad citotxica de los extractos se evaluaron
nicotinamida va intraperitoneal y 15 minutos despus
sobre las lneas celular Vero. La lnea fue cultivada en
se les inyect 65 mg/kg de streptozotocina disuelto en
medio de cultivo basal de Eagle modificado por Dul-
buffer de citrato-fosfato 0.1 M, pH 4.5 (i.p.)
becco (DMEM) suplementado con 10% de suero fe-
dos semanas posteriores de la induccin de diabetes
tal bovino (SFB), 10,000 U de penicilina, 10 mg/mL
y posterior a 4 horas de ayuno, la diabetes se determi-
g/mL de anfotericina B. Los
n mediante la medicin de la glucosa en sangre de
cultivos celulares fueron mantenidos en una atmsfera
la punta de la cola y slo se incluyeron en el estudio
con 95% de humedad y 5% de CO
aquellos animales con una glucosa sangunea superior
de estreptomicina y 2.5
a 37 C. El bioen-
sayo se realiz en placas de cultivo celular de 96 pozos

y a cada pozo se le adicion 100
16
. A las
17
a 150 mg/dL
L de medio con 5%
de SFB con una densidad celular de 50,000 clulas/

mL y se incub por 24 h. Al trmino de este tiempo,
el medio fue retirado y se aadi 100
de medio
nuevo sin SFB. Posteriormente, se adicion 100
Evaluacin del efecto agudo sobre la glucosa de

S. rebaudiana Morita II
L de
medio donde previamente se disolvieron los extractos
Para evaluar el efecto agudo sobre la glucosa, se
y finalmente se realizaron las diluciones seriadas eva-
realiz una prueba de tolerancia a la glucosa intra-
g/
peritoneal (IPGTT) en ratas con diabetes. Para ello,
mL. Las placas se incubaron por 48 h y al trmino de
los animales tuvieron ayuno matutino de 4 horas y
este tiempo se desech el medio y las clulas fueron
posteriormente se midi la glucosa en la sangre de la
L de una disolucin de cido tricloroa-
punta de la cola (tiempo 0), utilizando el glucmetro
ctico al 10%, incubndose las placas a 4 C durante
Optimun Exceed (Abbot). Posteriormente, a los ani-
30 min. Seguidamente se retir el sobrenadante y se
males se les administr extracto de Stevia rebaudiana
lundose los extractos en un rango de 300-18.75
fijadas con 50
de una disolucin de sulforodamina
(10 mg/kg) o agua destilada como vehculo y ambos
B (0.1% sulforadamina B en cido actico al 1%) y
grupos recibieron 1g/kg de glucosa va intraperitoneal;
se dej reaccionar durante 15 min. Finalmente se des-
se midi la glucosa a los tiempos 15, 30, 60 y 120 mi-
ech el sobrenadante y se realizaron cuatro lavados
nutos y con los valores de glucosa en los diferentes
con una disolucin de cido actico al 1%. La tincin
tiempos, se calcul el rea bajo la curva (AUC) para
adicion 50
se solubiliz con 100
L de una disolucin de tris-base
ambos grupos.
(10 mM) y se determin la densidad ptica (DO) a 540

nm. La actividad citotxica se determin empleando la
siguiente frmula (DO control-DO extracto/DO con-
Evaluacin del efecto crnico sobre la glucosa de
trol) x 100. Las evaluaciones sobre la lnea celular se
realizaron por cuadriplicado y la concentracin citotxica 50 (CC

Prism 4.
596
) se determin en el programa GraphPad
50
Al da siguiente de la curva de tolerancia a la glucosa

intraperitoneal, se inici el tratamiento crnico con el
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Irma Aranda-Gonzlez y cols.
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extracto de S. rebaudiana. Para ello, se emplearon los
Anlisis estadstico
mismos grupos experimentales formados previamente:

grupo control (ratas con diabetes no tratada) y grupo
La estimacin cuantitativa de los metabolitos en
experimental tratadas con extracto de Stevia rebaudia-
la muestra se hizo con base en el rea bajo el pico
na (500 mg/kg/da). La va de administracin del tra-
utilizando
tamiento con Stevia fue oral a travs de las croquetas
partir de las curvas de regresin lineal de los estn-
de los animales. Al inicio de cada semana y durante 4
dares. Los resultados de los grupos experimentales
semanas se pesaron a los animales y con base en este
se analizaron por medio de prueba t. Las diferen-
peso se elaboraban 7 croquetas de cada animal con la
cias se consideraron significativas con un valor de
dosis correspondiente (1 para cada da); para ello, se
p <0.05.
el
programa
Microsoft
Office
Excel,
pulverizaba las croquetas Teklad Global 18% Protein

Rodent Diet (2018 Harlan) y se aada el extracto en
la concentracin adecuada, se moldeaban las croquetas
Resultados
y se secaban 4 horas en horno a 80 C para lograr una

humedad de 8.25%, similar a la que tena la croqueta
Cuantificacin de glucsidos
originalmente (10.28%). El grupo control recibi las

mismas croquetas pero sin aadir el extracto de Ste-
Se analizaron los extractos de ambas variedades de
via. Diariamente se retiraba el alimento de la jaula y se
S. rebaudiana Bertoni para cuantificar los glucsidos
pona la croqueta que contena la dosis a administrar o
derivados de esteviol presentes en ambas. Cada mues-
una croqueta estndar; una vez consumida la croqueta
tra se analiz por duplicado y se calcul la concentra-
se agregaba alimento ad libitum para el resto del da.
cin a travs de la ecuacin de la recta de regresin
Semanalmente se midi la glucosa en sangre de la pun-
lineal construida con los estndares. Como se observa
ta de la cola posterior a 4 horas de ayuno matutino.
en la tabla I, en la variedad Morita II hay 23.4 g de glucsidos en 100 g de hoja, mientras que en la variedad
Criolla hay slo 16.93 g. El contenido de glucsidos es
Determinacin del ndice glicmico del extracto de
diferente dependiendo de la variedad, con excepcin
del Rebaudisido D que no hubo diferencias significativas (p >0.05). Dado el mayor contenido de glucsi-
El estudio se realiz de acuerdo al mtodo de Granfeldt y Bjorck (1991)
18
, con la participacin de 9 in-
dividuos sanos voluntarios, con edades comprendidas
dos totales en la variedad Morita II, se seleccion esta

variedad para hacer las evaluaciones de la inocuidad
en humanos y modelos animales.
entre 18 y 40 aos. Este estudio fue conducido de

acuerdo con los lineamientos de la Declaracin de
Helsinki (2013) y los participantes dieron su consenti-
Citotoxicidad de los extractos
miento informado para participar.

En primera instancia, a todos los sujetos se le tom
Para ambos extractos de Stevia elaborados con las
una muestra de sangre capilar posterior a 8 horas de
variedades Morita II y Criolla, la Concentracin Cito-
ayuno (tiempo 0). Posteriormente, cada individuo re-
txica 50 sobre clulas Vero fue >300
g/mL.
cibi una porcin de glucosa correspondiente a 50 g

de carbohidratos disponibles (b.s.) que se diluyeron en
100 mL de agua, los sujetos consumieron el total de
la porcin ofrecida en un plazo menor de 15 min y
slo se les permiti tomar 90 mL de agua adicionales
durante toda la prueba. Despus de 30 min de la inges-
Tabla I
Contenido de glucsidos en g/100g de hojas secas de
S. rebaudiana Morita II y Criolla
tin se tom la segunda muestra de sangre (t30) y se

repiti a los 45, 60, 90, 120 y 180 minutos posteriores.
Glucsido
Transcurridos 7 das, se repiti el procedimiento pero

con el extracto de 500 mg de Stevia rebaudiana Morita
II elaborado como se describi previamente.
La glucosa capilar se midi a travs de un glucmetro Optimun Exceed (Abbot). Con los valores de glicemia capilar de cada individuo se calcul el porcen-
Morita II
Criolla
Promedio D.E.
Promedio D.E.
0.74 0.03
Dulcsido A
0.61 0.04
Rebaudisido B
0.65 0.02
0.27 0.01
Rebaudisido C
2.24 0.04
2.05 0.01
0.46 0.00
Rebaudisido D
0.43 0.02
Esteviolbisido
0.35 0.02
0.58 0.01
(AUC), tanto para la glucosa como para el extracto de
Rebaudisido A
15.15 0.2
4.03 0.01
Stevia. El ndice glicmico se determin con la frmu-
Estevisido
3.97 0.003
taje de variacin de la concentracin de glucosa para

los diferentes tiempos, as como el rea bajo la curva
la: IG = AUC Stevia/AUC Glucosa x 100. Se calcul el

promedio de los ndices glicmicos individuales y ste
se report como ndice glicmico del extracto.
8.80 0.14
Los valores estn expresados como media Desviacin estndar.

Letras diferentes en una misma fila denotan que existen diferencias
estadsticamente significativas (p <0.05, prueba t-de Student).
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597

08/09/14 19:21
to de Stevia rebaudiana
Evaluacin del efecto agudo sobre la glucosa
19,20
, as como del estevisido
a dosis tan bajas como 5 mg/kg de peso en ratas con

Las reas bajo la curva de glucosa en la prueba de
diabetes inducida
21
, se evalu la inocuidad en el con-
tolerancia de glucosa intraperitoneal (mg/dL de glu-
sumo crnico del extracto sobre la glucosa sangunea
cosa x 120 min.) fueron en promedio: 37,901.5 para
en un modelo animal de diabetes. Como se observa en
el grupo control y 37,972.6 para el grupo tratado con
la figura 2, no se encontraron diferencias significativas
S. rebaudiana (figura 1). El anlisis estadstico mos-
(p >0.05) entre los grupos en ninguna de las semanas
tr que no hubieron diferencias significativas entre los
evaluadas.
grupos (p = 0.748).
ndice glicmico
Evaluacin del efecto crnico sobre la glucosa
Para el anlisis de los resultados de la evaluacin
Con el antecedente de la evidencia cientfica acerca
del ndice glicmico se elaboraron curvas de variacin
del efecto hipoglucemiante tanto del extracto comple-
de glucosa para el extracto de S. rebaudiana Morita II
550
Control
500
Extracto de S rebaudiana Morita II
450
400
Glucosa (mg/dL)
350
Fig. 1.Curva de tolerancia
300
250
200
a la glucosa intraperitoneal
150
en ratas con diabetes inducida con Streptozotocina.
100
los animales se les administr agua destilada 10 mg/
50
kg extracto de S. rebaudiana
e
inmediatamente
1g/kg
0).
de
Los
despus
glucosa
valores
(tiempo
15
representan
30
60
90
120
T iempo (minutos)
el promedio SEM de cada

grupo (n = 5).
400
Fig.
mo
2.Efecto
crnico
de
del
consu-
extracto
de
Glucosa (mg/dL)
300
200
Control
S. rebaudiana Morita IIII
Stevia sobre la glicemia en

ratas con diabetes. Los valo-
100
res representan el promedio

de glucosa en ayuno SEM
antes
durante
semanas
de tratamiento. No hubieron
diferencias
significativas
0
0
en ninguna de las semanas

evaluadas (p > 0.05, prueba
Semanas de tratamiento
t-Student). (n = 5).
598
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y para la glucosa (estndar). Se observ que los valo-
para cultivos de S. rebaudiana en el sureste de Mxico,
res promedio de la variacin de la glucosa en la curva
no se puede descartar el efecto probable de la tempora-
de tolerancia fue (54.4, 49, 35.6, 16.6, 3.6 y -9.8 %),
da de cultivo o cosecha (relacionados con la radiacin
mientras que para el caso del extracto de Stevia fue
solar y precipitacin pluvial) que pudiera explicar las
(0.8, 4.1, -1.9, -4.3, -5.7, -2.1 %) para los tiempos 30,
diferencias encontradas, sobre todo porque el rango de
45, 60, 90, 120 y 180 minutos, respectivamente (figu-
incremento fue similar (1.71.8%) para ambos gluc-
ra 3). El rea bajo la curva promedio de glucosa (mg/
sidos y en ambas variedades.
dL x 120 min.) fue de 3,903.4 ( 2,150.6 D.E.), mien-
De los glucsidos minoritarios, este es el primer es-
tras que el del extracto fue de 385.1 ( 532.4 D.E.). El
tudio al respecto, no hay reportes previos de varieda-
anlisis estadstico reflej que el rea bajo la curva de
des cultivadas en la Pennsula de Yucatn por lo que se
S. rebaudiana fue significativamente menor que el de
debe recurrir a la literatura internacional. Para el caso
glucosa (p = 0.000097). Con los valores del rea bajo
del Dulcsido A y Rebaudisido C, la concentracin
la curva, se calcul el ndice glicmico del extracto de
encontrada en ambas variedades es similar a lo repor-
Stevia que fue de 11.11 %, lo cual la clasifica como un
tado previamente de 0.4-0.7% y de 1-2%, respectiva4
mente . Se ha reportado una concentracin <0.4% para
ingrediente de bajo ndice glicmico.
el rebaudisido B y el Esteviolbisido aunque sin especificar la variedad

Discusin
1,3,4
, lo que coincide con el rebau-
disido B de la variedad Criolla y el esteviolbisido de

la variedad Morita II, pero no con el esteviolbisido de
Se sabe que no slo la variedad de la planta sino
la variedad Criolla y el rebaudisido B de la variedad
tambin la cantidad de radiacin solar y la densidad de
Morita II, los cuales se encontraron en mayor concen-
cultivo afectan el contenido de glucsidos en la hoja de
tracin a lo reportado. Por otra parte, el rebaudisido
22
S. rebaudiana Bertoni
D encontrado en este trabajo es ligeramente mayor a lo
A nivel internacional se ha reportado concentracio-
reportado anteriormente de <0.4% .
nes de rebaudisido A y de estevisido tan altas como

23
24
y 22%
A pesar de las diferencias en el contenido de los
, dependiendo de la variedad y el lugar
glucsidos minoritarios en ambas variedades de Stevia
de cultivo. Sin embargo en la pennsula de Yucatn el
(4.19% en promedio), la diferencia ms importante es
reporte previo de Rebaudisido A en la variedad Mo-
el contenido de rebaudisido A y estevisido, por lo
rita II es de 9.12% 0.99 mientras que en la varie-
que la eleccin de la variedad depender del uso desti-
61.2%
dad Criolla es de 2.42% 0.08
25
, ambos menores a lo
nado. Se sabe que el estevisido es 250300 veces ms
encontrado en este trabajo. Comparando el contenido
dulce que el azcar aunque con un sabor ligeramente
de estevisido encontrado en este proyecto, con lo re-
amargo, mientras que el Rebaudisido A tiene mayor
portado en la variedad Morita II (2.18 0.40)
25
, resul-
capacidad edulcorante (350-450 veces ms que el az1,2
ta 1.8 veces ms lo encontrado en este estudio que lo
car) y sin resabio amargo
publicado previamente. En la variedad Criolla sucede
pacidad edulcorante la que hace a la variedad Morita II
lo mismo, ya que lo encontrado fue de 8.80 0.14 y
ms adecuada para la industria alimentaria.
lo reportado por Moguel y colaboradores es de 5.09

0.04
25
y es precisamente esta ca-
La administracin aguda de 10mg/kg de Stevia re-
lo que representa 1.7 veces ms. Tomando
baudiana Morita II no tuvo efecto sobre la prueba de
en consideracin que los resultados encontrados son
tolerancia a la glucosa en el modelo de ratas con dia-
comparables nicamente con lo que se ha reportado
betes inducida lo cual coincide con lo reportado por
Porcentaje de variacin en la glucosa (%)
100
80
60
40
GLUCOSA
20
Fig.
3.Curva
de
toleran-
cia a la glucosa y extracto
0
-20
30
45
60
90
120
180
de Stevia rebaudiana Morita

II en individuos sanos. Los
TIEMPO (minutos)
valores
representan
el
pro-
medio SEM de cada grupo
-40
(n = 9).
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599

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Fujita y colaboradores
26
, quienes emplearon ratas Zuc-
alimentos se pueden agrupar en tres categoras: I.G.

30
ker con diabetes y obesidad, va de administracin oral
alto 70, I.G. intermedio 56-69 e I.G. bajo de 0-55
y una dosis mxima de 1g/kg. Las diferencias en la
Diversas investigaciones han postulado que las dietas
metodologa usada en este trabajo y la usada por Fujita
con I.G. alto llevan a un incremento de los niveles
y colaboradores, sugieren que la administracin aguda
de glucosa e insulina srica, lo cual se ha relaciona-
de extracto de S. rebaudiana no tiene efecto antihiper-
do con el desarrollo de patologas cardiovasculares,
glucemiante en la prueba de tolerancia a la glucosa in-
obesidad y cncer, adems de Diabetes Mellitus. Por
dependientemente del modelo animal, dosis o va de
otra parte, tambin existe evidencia suficiente que
administracin.
sugiere que las dietas con bajo I.G. pueden tener un
Por otra parte, se ha reportado que la administracin
papel importante en el tratamiento y la prevencin
crnica de extractos de Stevia va oral a dosis desde
de las enfermedades crnicas antes mencionadas, al
50, 100 mg/kg , 200 400 mg/kg , tienen efecto hipo-
mejorar el perfil lipdico, reducir la protena C reac-
glucemiante en ratas con diabetes inducida con aloxa-
tiva (PCR), contribuir en el control del peso, adems
19,20
no
. Sin embargo, en este trabajo la administracin
de generar niveles adecuados de glucemia postpran31,32
de una dosis an mayor de la reportada, no tuvo efecto
dial
significativo (p >0.05) sobre la glucosa sangunea des-
to de S. rebaudiana se explica por el hecho de que
pus de administrarla durante 4 semanas. En el caso
las enzimas digestivas en el ser humano no pueden
del trabajo realizado por Misra y colaboradores
ellos
. El bajo ndice glicmico que posee el extrac-
degradar el estevisido o el rebaudisido A presentes

33
emplearon el modelo de diabetes inducida con aloxano
en el extracto de Stevia
y un extracto realizado con benceno y acetona donde
(particularmente la familia bacteoidaceae) presente
encontraron una disminucin de la glucosa de ms de
en el ciego s puede hacerlo, removiendo unidades de
300 mg/dL al da 10 del experimento, mientras que
glucosa sucesivamente
34
aunque la flora bacteriana
Dado el bajo ndice glicmico del extracto de S.
usando el mismo modelo de diabetes con aloxano pero
rebaudiana Morita, su inocuidad y su alta capacidad
con un extracto acuoso (extraccin durante 24 horas)
edulcorante, es un producto adecuado para formar par-
la disminucin de glucosa fue menor (80 mg/dL) y
te de una dieta que prevenga la aparicin de enferme-
requiri un mayor lapso de tiempo para lograrse (28
dades crnicas.
el experimento realizado por Kujur y colaboradores
das). Por lo tanto, la diferencia entre lo encontrado

en el presente trabajo y lo reportado por estos autores puede deberse al modelo de diabetes empleado, la
Conclusiones
forma de elaboracin del extracto (polaridad y tiempo

de extraccin) o incluso la concentracin de glucosa
El extracto de Stevia rebaudiana variedad Morita

II cultivada en el sureste de Mxico tiene un bajo n-
inicial antes del tratamiento crnico.

Por otra parte, se ha reportado que 20 mg/kg de es-
dice glicmico y en las dosis evaluadas no present
tevisido es capaz de inducir hipoglucemia en ratas
citotoxicidad, efecto agudo o crnico sobre la glucosa
sanas o con diabetes slo si se administra en forma
sangunea en animales con diabetes, por lo cual lo hace
de bomba subcutnea
27
. A este respecto, la dosis del
extracto de S. rebaudiana (500 mg/kg/da de peso)
un endulzante adecuado e inocuo para poder ser consumido por personas sanas o con diabetes.
evaluada aqu contiene 19.5 mg/kg/da de estevisido

segn lo cuantificado por HPLC pero an as no tuvo
Agradecimientos
efecto hipoglucemiante en ratas con diabetes.

Tomando estos datos en cuenta, se puede considerar
que el modelo de diabetes empleado en este trabajo
fue ms apegado a la realidad clnica, ya que se con-
Los
autores
agradecen
el
financiamiento
otorga-
do por el Programa de Mejoramiento al Profesorado
, la
PROMEP-SEP, a la Fundacin Educacin Superior
cual es el tipo de diabetes que afecta al 90-95% de las
Empresa (FESE), los Fondos Fiscales-INIFAP y a CO-
sidera de diabetes tipo 2 a diferencia del aloxano
28
, cuya administracin
NACyT por la beca proporcionada a Aranda-Gonzlez
habitual de Stevia ser va oral a travs del consumo de
para sus estudios de posgrado. As mismo, a la Unidad
alimentos o infusiones (y por tanto, extracto acuoso) y
de Investigacin Mdica Yucatn, Unidad Mdica de
con una dosis de consumo mucho menor a la evaluada
Alta Especialidad Lic. Ignacio Garca Tllez del Ins-
en este proyecto, que representa casi 30 veces ms de
tituto Mexicano del Seguro Social por los ensayos de
lo permitido como edulcorante que es de 4mg/kg peso
citotoxicidad.
29
personas con esta enfermedad
de glucsidos de esteviol .
Ms an, en la prevencin y control de la diabetes
se usa el concepto de ndice glicmico (I.G.); el cual
es una herramienta que categoriza a los alimentos que
contienen hidratos de carbono en relacin a su capacidad de incrementar los niveles de glucemia (velocidad y magnitud). Con base en su ndice glicmico, los
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601

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Aranda-Gonzlez, Irma; Barbosa-Martn, Enrique; Toraya-Avils, Roco; Segura-Campos, Maira;

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=309232247017

Cmo citar el artculo

Sistema de Informacin Cientfica

Nutr Hosp. 2014;30(3):594-601

Stevia reauiana Bertoni cultivada en el

sureste de Mxico como edulcorante de alimentos

Irma Aranda-Gonzlez , Enrique Barbosa-Martn , Roco Toraya-Avils , Maira Segura-Campos ,

Facultad de Ingeniera Qumica, Universidad Autnoma de Yucatn, Mrida, Yucatn.

Instituto Nacional de Investigaciones

y sus glucsidos reutilizar

tractos y un componente glucsido. El objetivo de este

evaluar la citotoxicidad y el efecto de la administracin

UV a 210 nm, fase mvil de acetonitrilo/amortiguador

g/mL. Las reas bajo la curva de la IPGTT

as como la glucosa en ayuno de los animales no fueron

reportes acerca del efecto antihiperglucemiante de ex-

S reauiana Morita II es de bajo ndice gli-

cmico y, en las dosis evaluadas, no es citotxico ni posee

BERTONI GROWN IN SOUTHEASTERN MEXICO

hyperglycemic effect of the extract and a glycoside. The

des, assess cytotoxicity of the extract and its acute and

g/mL. The areas under the curve

of the IPGTT and fasting glucose of the animals were

(Nutr Hosp. 2014;30:594-601)

acute or chronic effect on blood sugar, which makes it a

Correspondencia: David Betancur-Ancona.

017_7634 Evaluacin de la inocuidad de Stevia rebaudiana Bertoni.indd 594

AUC: rea bajo la curva.

siglas en ingls) al rebaudisido A para usarse como

: Concentracin citotxica 50.

mismo ao el Comit de Expertos en Alimentacin

DO: Densidad ptica.

dares de alimentacin de Australia y Nueva Zelanda

FDA: Administracin de Drogas y Alimentos (Food

(FSANZ) establecieron el consumo diario aceptable

and Drug Administration).

(ADI por sus siglas en ingls) de 0-4 mg/kg de peso

Sin embargo, diversos estudios han demostrado que

derivado de esteviol presente en el mismo el estevi-

corporal/da de equivalentes molares de esteviol .

extractos de S. rebaudiana y al menos un glucsido

(Generally Recognized as Safe).

sido, tienen capacidad antihiperglucemiante en mo-

HPLC: Cromatografa lquida de alta eficacia (High

Por lo que el objetivo de este trabajo fue determinar

IG: ndice glicmico.

el contenido de glucsidos de S. rebaudiana cultivada

IPGTT: Prueba de tolerancia a la glucosa intraperi-

en Mxico, evaluar la citotoxicidad y el efecto de la

toneal (Intraperitoneal Glucose Tolerance Test).

administracin aguda y crnica del extracto sobre la

JECFA: Comit Mixto FAO/OMS de Expertos en

glucosa sangunea tanto en humanos voluntarios como

mittee on Food Additives).

Elaboracin del extracto

Stevia es un gnero de plantas nativas de regiones

Se obtuvo el extracto de hojas de la variedades de

subtropicales y tropicales de Sudamrica y Centro-

Stevia rebaudiana B., denominadas Morita II y Crio-

amrica, de las cuales hay 407 especies. Una de sus

lla, cultivadas en la pennsula de Yucatn, Mxico.

especies es Stevia rebaudiana Bertoni, la cual es co-