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RELATRIO AULA
PRTICA: CINTICA
MICROBIANA
Discentes: Fulano
Beltrano
Ciclano
Turma: FAN01S1
Professor: MSc. Francisco Neto
Disciplina: Processos Biolgicos
Manaus
2011
CURSO DE FARMCIA
RELATRIO AULA
PRTICA: CINTICA
MICROBIANA
Discentes:
Fulano
Beltrano
Ciclano
Trabalho
apresentado
ao
professor MSc. Francisco
Neto, como requisito para
obteno da nota na disciplina
de Processos Biolgicos.
Bioprocessos
Manaus
2015
Introduo
acompanhado
com
base
na
determinao
da
D.O da
cultura,
Objetivo Geral
O objetivo da aula prtico foi verificar a cintica de crescimento de
Saccharomyces cerevisiae.
Objetivos Especficos
Materiais e Mtodo
Material:
Fpram utilizados na aula prtica autoclave, espectrofotmetro, banho-maria,
balana analtica, agitador magntico, agitador tipo vrtex, pHmetro, micropipeta,
ponteiras, erlenmeyers de 125 mL, bquer de 500 mL, cubetas de 3 mL, basto de vidro,
tubos eppendorf, esptulas, provetas e filtro milipore 22 m.
Reagentes:
Como reagentes utilizamos a levedura seca de panificao, HCl 0,1 M e soluo
DNS.
Meio de Cultivo (pH 5,0):
Glicose (10 g/L), estrato de malte (3 g/L), extrato de levedura (3 g/L), peptona
bacteriolgica (5 g/L).
Procedimento:
1. Pesar os componentes do meio de cultura em um bquer e dissolv-los em gua
destilada utilizando o agitador magntico;
2. Ajustar o pH do meio de cultura com HCl utilizado o pHmetro;
3. Completar o volume utilizando uma proveta;
Anlise de crescimento:
1. Retirar 1 mL de amostra a partir do tempo zero, de 2 em 2 horas;
2. Ler a absorbncia em 600 nm no espectrofotmetro, realizando as diluies
necessrias caso a absorbncia ultrapasse 0,0800.
Concentrao de acares redutores:
1. Adicionar a tubos de ensaio 500 L de amostra previamente filtrada e 500 L de
DNS;
2. Agitar os tubos em agitador tipo vrtex e levar ao banho-maria 100C por 5
minutos;
3. Resfriar a temperatura ambiente e adicionar 5 mL de gua destilada;
4. Ler a absorbncia a 540 nm;
5. A curva padro de glicose foi utilizada para determinar os valores de
concentrao de acares redutores, conforme mostrado na figura 1.
Figura 1
Resultados e Discusso
As fases de crescimento celular so mostradas na figura 2. Para os experimentos
de 1 a 4, visualiza-se a fase lag nas primeiras 2 horas de experimento. Passando as
primeiras 2 horas at a 6 hora percebe-se a fase de multiplicao celular, conhecida
como fase exponencial. A fase de esgotamento dos nutrientes, fase estacionria, quase
no percebida, pois em seguida inicia a fase de morte celular. Isso pode ser explicado
pela rpida capacidade se multiplicar da levedura.
Figura 2
Experimento 1 e 2:
Os experimentos 1 e 2 foram realizados com 100 mL de meio de cultura e 1,0
g/L de levedura com agitao. Os valores de concentrao de clula e substrato, tempo
de duplicao, consumo de substrato e produtividade so mostrados na tabela 1.
Tabela 1
tempo Concentra Concetra
ln
Tempo de
(h)
o de
o de
Concentrao Duplica
Celula
Glicose
de clula (g/l)
o (h)
Consumo Produtivid
de
ade
Substrato
(g/l)
(g/l)
0,47985
10,6585603
1
2
3
4
6
8
0,7343
0,7301
0,9653
1,463
1,2474
0,746
(g /g)
-0,734281724
-0,308837615
-0,314573768
-0,035316345
0,380489122
0,221061385
lnX
t(h)
Figura 3
Apesar do baixo crescimento, a figura 4 mostra que houve um consumo de
glicose pela S. cerevisiae, pois a concentrao de glicose est diminuindo
concomitantemente com o aumento do crescimento celular . A determinao dos acares
redutores totais foi realizada pelo mtodo DNS.
g/L
t(h)
Figura 4
Experimento 3 e 4:
Os experimento 3 e 4 foram realizados com 100 mL de meio de cultura e 2,0 g/L
de levedura com agitao. Como se pode observar na figura 1 o crescimento foi maior.
Isso pode ser justificado devido o aumento da quantidade de levedura no meio. Na
figura 5 mostrado o crescimento exponencial, a velocidade do crescimento
exponencial de 0,1831 h-1.
lnX
t(h)
Figura 5
O tempo de duplicao celular foi de 3, 7856 h e a produtividade foi de 0,1797
conforme mostrado na tabela 2. Esse valores so maiores que dos experimentos 1 e 2 ,
mostrando assim que o aumento na quantidade de levedura no meio melhora a cintica
de crescimento da S. cerevisiae, pois o tempo de duplicao, consumo de substrato e
produtividade aumentaram.
Tabela 2
tempo
(h)
0
2
3
4
6
8
Concentra Concetra
Consumo
ln
Tempo de
o de
o de
de
Produtivid
Concentrao Duplica
Celula
Glicose
Substrato
ade
de clula (g/l)
o (h)
(g/l)
(g/l)
(g/g)
11,9509727
3,7856208 0,04321510
0,8666
-0,14317777
0,179725
6
66
9
1,2803
0,247094425
1,33
0,285178942
1,6002
0,470128621
2,3044
0,834820339
1,21167315
1,3307
0,28570512
2
g/L
t(h)
Figura 6
Experimento 5 e 6:
Os experimento 5 e 6 foram realizados com 50 mL de meio de cultura e 1,0 g/L
de levedura com agitao. Houve ento uma reduo de 50% na quantidade de meio de
g/L
t(h)
Figura 7
Tabela 3
Concentra Concetra
Consumo
ln
Tempo de
tempo
o de
o de
de
Produtivid
Concentrao Duplica
(h)
Celula
Glicose
Substrato
ade
de clula (g/l)
o (h)
(g/l)
(g/l)
(g/g)
11,6007782
0,04205579 0,0573562
0
0,46515
-0,765395345
1
5
5
2
0,756
-0,279713903
3
0,6531
-0,426025022
4
0,8603
-0,150474113
6
0,6986
-0,358676947
0,69027237
8
0,924
-0,079043207
4
Experimento 7 e 8:
g/L
t(h)
Figura 7
Tabela 4
tempo
(h)
0
2
3
4
6
8
Concentra Concetra
Consumo
ln
Tempo de
o de
o de
de
Produtivid
Concentrao Duplica
Celula
Glicose
Substrato
ade
de clula (g/l)
o (h)
(g/l)
(g/l)
(g/g)
9,19669260
0,02458184 0,0263812
0,68985
-0,371281096
7
9
5
0,64505
-0,438427446
0,2996
-1,205307027
0,8484
-0,164403056
0,4837
-0,726290399
0,61108949
0,9009
-0,104361015
4
Concluso
Com a anlise dos dados obtidos pode-se concluir que o desenvolvimento da
S.accharomyces cerevisiae simples, por processos assexuais e, por isso, muito rpido
em condies ambientais favorveis. O crescimento influenciado por vrios fatores
ambientais, destacando-se o alimento e o oxignio. Cada um destes fatores importante
e pode limitar o crescimento, determinando o desenvolvimento da levedura
A elaborao de dados cinticos em forma de grficos facilitam o entendimento
da cintica microbiana, fornecendo dessa maneira parmetros para que diversos microorganismos possam ser utilizados em bioprocessos de mdio a grande porte.
Referencial Bibliogrfico
DE CARVALHO, Giovani B. M.; BENTO, Camila V.; SILVA, Joo B. A.Elementos
Biotecnolgicos Fundamentais no Processo Cervejeiro: 1 parte As Leveduras.
Revista Analytica: Outubro/Novembro 2006, N25.
Endereo Eletrnico: http://www.e-escola.pt/topico.asp?id=235. Acessado em 29 de
Setembro de 2011.