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B0215606
Mezclar aspticamente un litro de huevo ntegro, evitando la formacin de burbujas de aire y agregar al medio base ya esterilizado y a
una temperatura aproximada de 50 C. Mezclar el huevo y la base
hasta uniformar. Distribuir en tubos estriles y tapar hermticamente. Colocar los mismos en posicin inclinada y coagular a 85-90C
durante 45 minutos.
Caractersticas del producto
Medio de cultivo deshidratado: color verde, homogneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color verde plido, opaco.
Almacenamiento
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 C.
Medio de cultivo preparado a 2-8 C, en la oscuridad.
Procedimiento
Indicaciones sobre la recoleccin y el tratamiento de las
muestras
Realizar un estudio seriado con tres cultivos por cada paciente para
aumentar la posibilidad de aislar al germen y en caso de tratarse de
una micobacteria diferente al Mycobacterium tuberculosis, el estudio seriado permite contar con suficientes aislamientos para considerar a dicha micobacteria como responsable de la enfermedad.
La muestra a analizar tiene que ser representativa, de calidad y
cantidad, es decir provenir de la lesin a estudiar y en cantidad
suficiente.
Sulfato de magnesio..............................................................................................0.24.
Citrato de magnesio.................................................................................................. 0.6.
Asparragina.......................................................................................................................... 3.6.
Harina de papa.................................................................................................................30.0.
Verde de malaquita.................................................................................................... 0.4.
pH final: 4.8 0.2
Instrucciones
Suspender 37,3 g del polvo en 600 ml de agua purificada y agregar
12 ml de glicerina. Calentar agitando continuamente y hervir un
minuto para disolucin total. Distribuir en recipientes apropiados y
esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 50C
aproximadamente.
Mediante tcnica asptica, recolectar la muestra en recipiente estril perfectamente rotulado y conservarla refrigerada hasta su envo al laboratorio.
Esputo: recolectar en un frasco estril todas las expectoraciones
obtenidas durante 12 horas.
Hisopado larngeo: recolectar la muestra mediante el uso de hisopos estriles.
Lavado gstrico, lavado bronquial, aspirado bronquial, lquido cefalorraqudeo, lquido peritoneal, pericardio, lquido sinovial y pus:
recolectar en frasco estril.
Orina: recolectar por separado en frascos estriles la ltima orina
nocturna y la primera orina de la maana. En el laboratorio mezclar
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Siembra
Inocular aproximadamente 0,5 ml por tubo sobre la superficie del
medio de cultivo. Rotar los tubos para lograr una distribucin homognea de la muestra.
Generalmente se siembran dos tubos de Lowenstein Jensen y un
tubo de Stonebrink Medio. Este ltimo contiene piruvato de sodio y
favorece el desarrollo de cepas disgnicas como bacilos isoniazida
resistentes y sobre todo de Mycobacterium bovis que es causal de
algunos casos de enfermedades humanas.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37C.
Observar los cultivos dos veces por semana y registrar el tiempo de
aparicin de las colonias.
Si no se observa desarrollo, incubar hasta 8 semanas.
Importante: incubar los tubos con las tapas flojas, inclinados 5
aproximadamente en bandeja adaptada con varilla de vidrio y extremos ajustados con tubos de goma. Esta posicin evita que el
inculo contacte con la parte superior del tubo.
Controlar a las 72 horas los tubos sembrados. Si el inculo ha sido
absorbido, ajustar las tapas y agrupar los tubos con igual identificacin. Si an estn hmedos, incubar hasta que se sequen y luego
ajustar las tapas.
Interpretacin de los resultados
Observar las caractersticas morfolgicas y la presencia o ausencia de pigmento en las colonias. Tener en cuenta el tiempo que
ha transcurrido desde la inoculacin hasta la observacin de crecimiento.
Los cultivos positivos generalmente se observan entre los 13 y 28
das de incubacin, dependiendo del contenido de bacilos en las
muestras sembradas, mientras que el 3% de las micobacterias suele crecer a los 40 das de incubacin.
La aparicin de colonias color crema, rugosas o cremosas, amarillentas, es indicio de cultivo positivo, el cual ser confirmado realizando la coloracin de Ziehl-Neelsen a un extendido del mismo,
para determinar la presencia de bacilos cido-alcohol resistentes
(BAAR).
De la misma manera se proceder para los cultivos contaminados y
cultivos negativos (cuando no se observen colonias).
La intensidad de positividad se informar segn las normas
latinoamericanas:
Colonias confluentes: positivo (xxx)
Colonias separadas: positivo (xx)
De 20 a 100 colonias: positivo (x)
Menos de 20 colonias: positivo. Informar el recuento obtenido
No se observan colonias: negativo
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CRECIMIENTO
Satisfactorio
ATCC 25177
CONTROL DE ESTERILIDAD
Medio sin inocular
RESULTADO
Sin cambios
Limitaciones
- El crecimiento de Mycobacterium bovis puede estar disminudo
en este medio debido a la presencia de glicerina. Se recomienda
no agregarla a los medios cuando se quiera aislar micobacterias
bovinas. En este caso utilizar el medio Stonebrink.
- Considerar y reportar los resultados negativos luego de 8 semanas de incubacin en aerobiosis, a 35-37 C.
- El medio preparado es color verde plido y puede tener reas de
partculas amarillas debido a los lpidos de la yema de huevo. No
confundir esto con el crecimiento de microorganismos.
- Previo a la inoculacin de la muestra, mantener los tubos bien
cerrados para evitar la contaminacin y desecacin del medio de
cultivo. Tambin porque la presencia de un ambiente hmedo es
necesario para el desarrollo de las micobacterias.
- Mantener el medio de cultivo al abrigo de la luz ya que el verde de
malaquita es fotosensible.
- Todas las muestras durante su recoleccin y/o extraccin deben
mantenerse al abrigo de la luz, refrigeradas, y ser remitidas lo ms
pronto posible al laboratorio. En caso de deshidratacin, agregar
agua purificada estril y no solucin fisiolgica.
- Si los tubos presentan agua de condensacin, es necesario extraerla antes de efectuar la siembra.
Materiales necesarios no provistos
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales segn requerimiento.
Precauciones
- Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o daado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o deterioro, as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Trabajar en ambiente aislado y cerrado. Utilizar bandejas de acero
inoxidable para su fcil desinfeccin con fenol al 5 por ciento, o
alcohol y fuego directo.
- Utilizar guantes, barbijo, anteojos o mscara y ropa protectora
cuando se manipula la muestra y el producto. Las propipetas o pipetas tienen que estar adaptadas con pera de caucho; las pipetas
sea cual fuere el dispositivo que se adapte deben tener colocado
un algodn firme en el extremo superior. Utilizar todos los materiales intervinientes en la tcnica esterilizados en autoclave preferentemente y pipetas en pipetero de metal.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas por el laboratorio. En caso de utilizar centrfugas, deben tener sistemas de bioseguridad que impidan la diseminacin
de aerosoles.
- Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo segn reglamentaciones vigentes.
Referencias
- Lowenstein. E. 1931. Zentralbl. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. Abt. I Orig.120:127.
- Jensen, K.A. 1932. Zentralb. Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr.
Hyg. Abt. I Orig. 125:222.
- Nelles A. 1966. Methodes Simples de Traitement Preliminaire des
Echantillons. Bull. Int. Un. Tuber., 38: 72.
- Cetrngolo Abel. 1971. Diagnostico Bacteriolgico de la Tuberculosis. Reseas de Diagnstico, Publicacin Lepetit, 4: N 8.
-Manual de Bacteriologa de la Tuberculosis. Tcnicas y Procedimientos Bsicos. Washington D. C. OPS. (CD/TB/ST/LAB), 1973.
- Borda Bossana de Texidor D., Texidor C., Domenech de Kwint M.
C., Volpe de Molina E. y Pasquinelli E. 1977. Nuevo Mtodo Sencillo y Econmico para Facilitar el Cultivo del Bacilo Tuberculoso,
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- Borda Bossana de Texidor, Texidor C., Smith de Marchesini L. y
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- Borda Bossana de Texidor D., Texidor C., Domenech de Kwint, M.
C. y Barrera. 1982. Ampliacin de Experiencias con Nuestro Mtodo Sencillo y Econmico para Cultivar al Bacilo Tuberculoso. Incorporacin de Enriquecedores que Aceleran su Crecimiento, Bull.
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- Domenech de Kwint M. C., Borda Bossana de Texidor D., Texidor
C., Gotlieb D. A. Tcnica: Miraglia de Christin S. 1985.Tcnica de
Precipitacin Previa al Cultivo del Bacilo de Koch en Orina. Presen-
SMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNSTICO
IN VITRO
CDIGO N
ELABORADOR
ESTRIL
N DE
DETERMINACINES
LOTE N
FECHA DE
VENCIMIENTO
LMITE DE
TEMPERATURA
INSTRUCCIONES
DE USO
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