Escuela Acadmica Profesional De Ingeniera Agroindustrial

TEMA
Asignatura

: Biotecnologa

Docente

: ing.

Estudiantes :

Yaneth Gonzales Elguera

Mayumi Patio Condori

Miguel Monzon Roque

Dina Aybar Damian

Maribel Pampaaupa Alvites

Abancay-Apurmac
2015

092069
102084
102081
081218
092085

CINTICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

I.
INTRODUCCION
El objetivo de la microbiologa predictiva en sistemas de alimentos consiste en
describir matemticamente el crecimiento, sobrevivencia o muerte de
microorganismos bajo condiciones ambientales especficas. El comportamiento
microbiano se ve afectado por diversos factores intrnsecos y extrnsecos. Sin
embargo, generalmente los ms importantes y los que controlan o definen el
crecimiento o sobrevivencia son: temperatura, pH, y actividad de agua. La
evaluacin de la respuesta microbiana bajo la combinacin de esos factores
permite la descripcin, modelado y prediccin de diferentes situaciones. Las
expresiones matemticas permiten predecir la respuesta microbiana ante
condiciones no evaluadas dentro del intervalo de los niveles de los factores o
variables estudiadas. Los modelos microbianos son una herramienta de vital
importancia ya que proveen de manera rpida, informacin necesaria para la
toma de decisiones, anlisis de riesgos, aseguramiento de la calidad, desarrollo
de productos y procesos, anlisis de datos, planeacin de ensayos de
laboratorio, entre otros (la importancia de estos puntos se explica con detalle en
la revisin bibliogrfica). El modelado microbiano tiene sus inicios hacia 1920
con el estudio cintico de los tratamientos trmicos. Con la llegada de los
computadores el inters por los modelos microbianos creci ya que se facilit el
manejo de los modelos multifactoriales. La respuesta microbiana puede
predecirse con base en la respuesta que se obtiene a un solo factor presente.
Actualmente los modelos predictivos se han venido desarrollando con mayor
intensidad para microorganismos patgenos (especialmente bacterias
causantes de infecciones e intoxicaciones de origen alimentario). Con este
proyecto se pretende ampliar algo ms el conocimiento que se tiene de los
modelos microbianos respecto a la flora deteriorativa, y predecir el
comportamiento de la levadura en productos alimenticios como jugos,
mermeladas, compotas y dems productos azucarados.
II.
OBJETIVOS
Obtener la ecuacin cintica del crecimiento del microorganismo
(levadura), en las diferentes concentraciones con respecto al tiempo.
III. REVISION BIBLIOGRAFICA
3.1. CRECIMIENTO MICROBIANO
El crecimiento microbiano hace referencia al aumento del nmero de
microorganismos a lo largo del tiempo y no al aumento de tamao de un
microorganismo. El aumento del nmero de microorganismos permite la
formacin de colonias o de poblaciones. Es por eso que en microbiologa el
crecimiento se estudia por poblaciones y no en microorganismos individuales.
Las bacterias se reproducen generalmente por fisin binaria. El resultado de la
fisin binaria son dos clulas hijas por cada clula madre, as, una clula se
divide en dos, dos en cuatro y cuatro en ocho y as sucesivamente. Cuando se
siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos
comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el

medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina

hasta que algn nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el
crecimiento se detiene. Tambin puede detenerse el crecimiento por
acumulacin de alguna substancia inhibidora formada por los mismos
microorganismos, pero supngase por ahora que ste no es el caso y que la
primera alternativa es la vlida. Luego hay dos aspectos claramente
diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiomtrico, por el
cual la concentracin final de microorganismos obtenidos depender de la
concentracin y composicin del medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir
con qu velocidad se lleva a cabo el proceso. (Prescott y col .,1999).
La microbiologa predictiva est relacionada con la compleja dinmica del
comportamiento de la poblacin microbiana , tal como fue observado por monod
(1949), el crecimiento de los cultivos bacterianos a pesar de la inmensa
complejidad del fenmeno ,generalmente obedece a leyes relativamente
sencillas, las cuales hacen posible definir ciertas caractersticas cuantitativas del
ciclo del crecimiento, esencialmente las tres constantes del crecimiento:
crecimiento total ,tasa del crecimiento exponencial y crecimiento latente. Estas
definiciones no son puramente arbitrarias y corresponden a elementos
fisiolgicos distintos del ciclo de crecimiento (McMeekin y ros, 2002).
3.2. CURVA DE CRECIMIENTO
La curva de crecimiento de un cultivo microbiano puede ser subdividida en cuatro
partes distintas denominadas fase de latencia, fase exponencial, fase
estacionaria y fase de muerte. De las cuatro fases de la curva de crecimiento,
habitualmente la fase de crecimiento exponencial o logartmico es la que
presenta mayor inters por ser la fase en la que el incremento del nmero de
microorganismos es mximo. Durante esta fase el tiempo de generacin (g) de
los microorganismos (el tiempo que la poblacin de microorganismo necesita
para duplicar su nmero) se mantiene constante.
Grafico 1: curva de crecimiento microbiano

3.2.1. Fase de latencia

La fase de latencia, es el periodo de ajuste que las clulas experimentan al ser

transferidas de un medio al otro antes de iniciar su crecimiento. En esta fase se
producen las enzimas necesarias para que ellos puedan crecer en un nuevo
medio ambiente. En esta fase no hay incremento en el nmero de clulas, pero
hay gran actividad metablica, aumento en el tamao individual de las clulas,
en el contenido proteico, ADN y peso seco de las clulas. (Penfold ,1914).
3.2.2. Fase exponencial o fase logartmica
la fase exponencial o logartmica es aquella durante la cual los microorganismos
crecen y se dividen hasta el nivel mximo posible, en funcin de su potencial
gentico ,tipo de medio y condiciones en que crece .en este periodo hay una
relacin lineal entre el logaritmo del nmero de clulas (o cualquier otra
propiedad medible de la poblacin) y el tiempo .los microorganismos se dividen
y duplican en nmero en intervalos regulares .como cada clula se divide en un
momento ligeramente diferente del resto, la curva de crecimiento aumenta
suavemente, en lugar de realizar discretos saltos.
(Robinson y col .,1998)
3.2.3. Fase estacionaria
La fase estacionaria es resultado del agotamiento de los nutrientes disponibles
o del efecto de acumulacin de productos txicos de metabolismo que tienen
como consecuencia la disminucin de la velocidad del crecimiento .la transicin
entre la fase exponencial y la fase estacionaria se caracteriza por un crecimiento
desequilibrado, durante el cual los diversos componentes celulares son
sintetizados a diferentes velocidades (Buchanan y Solberg ., 1972).
3.2.4. Fase de muerte
La fase de muerte es consecuencia de diversos factores: uno importante es el
agotamiento de las reservas celulares de energa. Al igual que el crecimiento, la
muerte tambin asume una fusin exponencial que puede ser representada por
una disminucin lineal del nmero de las clulas viables a loa largo del tiempo
(Madigan y col ., 1999).

3.3. CINTICA DE LA DEGRADACIN BIOLGICA

Grafico 2: cintica de la degradacin biolgica

La velocidad de acumulacin de biomasa es

X= (biomasa)
=velocidad especfica de crecimiento (generaciones t-1)

3.4. CINTICA DE MONOD (1942)

=

= velocidad especfica de crecimiento (generaciones t-1)

max = velocidad mxima de crecimiento (generaciones t-1)
S = concentracin de sustrato
Ks = constante de velocidad media (velocidad esp. de crecimiento) Constante de
Monod
Posee limitaciones

1) A muy bajas concentraciones de sustratos no va bien (conc. mn. de sust que

no contempla)
2) A muy altas concentraciones de sustratos Ks real es cte.

Y= coeficiente de rendimiento

= +

=
=

/

( )

=
=
=

+
+

Realmente la ecuacin es

= +

b=cte. de declive endgeno (t-1)

3.5. ADAPTABILIDAD Y VARIABILIDAD DE RESPUESTAS MICROBIANAS.
IMPLICACIONES SOBRE LA MICROBIOLOGA Y LA BIOTECNOLOGA
PREDICTIVA
El proceso de adaptacin de los microorganismos a las condiciones del medio
en que se encuentran depende de varios factores como es el caso de la
composicin del medio mismo o del estado fisiolgico de manera distinta en la
prediccin de la cintica de los microorganismos. Dichas respuestas de los
microorganismos a las condiciones de crecimiento pueden ser evidenciadas a
travs de sus parmetros de crecimiento como son el tiempo de latencia, tiempo
de generacin y la velocidad de crecimiento.
3.5.1. Tiempo de latencia
Un fenmeno inherente a la cintica micro0biena es latencia, la cual es
tpicamente observada como la respuesta retarda de la poblacin microbiana
anta (repentino) cambio en el ambiente. La fase de latencia puede producir en
ambos procesos, de crecimiento y de inactivacin (Swinnen y col ., 2004).
En el caso de las condiciones de crecimiento, la fases de latencia es el periodo
de ajuste durante el cual las clulas bacterianas se modifican por si mismas con
el objetivo de sacar ventaja del nuevo ambiente e iniciar el crecimiento
exponencial (Buchanan y Klawitter ,1991).por tanto, durante la fase de latencia

las clulas se adaptan a su nuevo entorno induciendo o reprimiendo la sntesis

y actividad de determinadas enzimas, iniciando la replicacin de su material
gentico, y en el caso de las esporas , diferencindose en clulas
vegetativas(Montville , 2000).
Dado que la tpica curva de crecimiento es de tipo sigmoildal, la duracin de la
fase de latencia puede ser cuantificada como el tiempo obtenido por la
extrapolacin de la tangente en la parte exponencial de la curva de crecimiento,
hacia el nivel del inoculo. Esta definicin est actualmente ms extendida
(Swinnen y col. ,2004).
La duracin del tiempo de latencia suele ser estimado errneamente, esto es
usualmente atribuido al efecto de la historia previa de las clulas.
Robinson y col .,(1998)formalizaron el concepto
dependiente de dos elementos

de tiempo de latencia

La cantidad de trabajo necesario por parte de las clulas para adaptarse

al nuevo ambiente y/o reparar los daos debidos ese cambio.
La proporcin en la que estas reparaciones pueden hacerse.
Debido a la existencia de la multitud de factores anteriormente mencionados que
afectan el comportamiento de la fase de latencia, es difcil obtener predicciones
(Swinnen, 2004).
3.5.2. Tiempo de generacin
El tiempo de generacin es el tiempo necesario para duplicar la poblacin
microbiana (Segn Stanier y col., 1989) se define como el tiempo requerido
para que todo los componentes del cultivo aumenten en un factor de 2.
Durante este periodo de generacin el nmero de clulas y la masa celular se
duplica. El tiempo de generacin vara entre los distintos microorganismos.
Muchas bacterias tienen tiempos de generacin de 1-3horas, conocindose
pocos microorganismos que crezcan muy rpidamente dividindose en menos
de 10minutos.otras tienen tiempos de generacin de varias horas o incluso das
.el tiempo de generacin es til como indicador del estado fisiolgico de una
poblacin celular, y es usado con frecuencia para comprobar el efecto negativo
o positivo de un determinado tratamiento sobre un cultivo microbiano ( Madigan
y col .,1997).
Este tiempo de generacin est directamente relacionado con la velocidad de
crecimiento exponencial, que se define como la pendiente de la curva de
crecimiento logartmico en la fase de crecimiento exponencial. Generalmente,
estos dos parmetros son estimados por el ajuste de los modelos primarios
(Delignette-Muller,1998).

3.5.3. Velocidad de crecimiento

Como ya se ha indicado anteriormente, el crecimiento se define como un
incremento en el nmero de clulas microbianas en una poblacin, lo cal tambin
puede ser medido como un incremento en masa microbiana en este contexto, la
velocidad de crecimiento se define como el cambio en nmero de clulas o masa
celular por unidad de tiempo (Madigan y col .,1999).
Un cultivo microbiano creciendo en equilibrio imita una reaccin autocatalitica de
primer orden, es decir, la velocidad del aumento de bacterias en un tiempo dado
es proporcional al nmero o masa de bacterias presentes durante ese tiempo
(Stanier y col.,1989).
La tasa del crecimiento exponencial se ve influenciada por las condiciones
ambientales (temperatura, composicin del medio), as como por las
caractersticas genticas del microorganismo (Madigan y col .,1997).

3.6. INFLUENCIA DE LOS FACTORES FSICOS, QUMICOS

AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Los alimentos son ecosistemas complejos .los ecosistemas estn constituidos

por el medio ambiente y los organismos que viven en l. El ambiente de un
alimento est constituido por factores intrnsecos inherentes al alimento (el pH,
la actividad de agua y los nutrientes) y factores extrensicos a l (la temperatura,
la composicin del aire o la presencia de otras bacterias) (Montville,2000).
El crecimiento bacteriano est influido notablemente por la naturaleza qumica y
fsica de su ambiente. El conocimiento de estas influencias ambientales permite
controlar el crecimiento microbiano y estudiar la distribucin ecolgica de los
microorganismos. (Prescott y col .,1999).Numerosos factores afectan el
crecimiento de los microorganismos en los alimentos, y , a menudo ,sus
interacciones tienen un efecto significativo sinrgico o antagnico sobre el
crecimiento . Estos interactivos pueden ser muy importantes en los sistemas
alimentarios, en los cuales el crecimiento bacteriano puede verse favorecido o
inhibido por los mltiples ingredientes, condiciones de almacenamiento o
constituyentes alimentarios (Eifert y col .,1996).
3.6.1. Temperatura
El control de la temperatura se encuentra entre los factores ms crticos precisos
para el logro de un suministro alimentario que rena las propiedades sanitarias
y organolpticas correctas. Probablemente sea la temperatura el ms importante
de los factores ambientales que afectan a la viabilidad y el desarrollo microbiano
(ICMSF,1983). El factor que ms influye sobre el efecto de la temperatura en el
crecimiento es la sensibilidad de las reacciones catalizadas por enzimas a

determinadas temperaturas .en condiciones de baja temperatura , un aumento

eleva la velocidad de crecimiento , porque la velocidad de una reaccin
catalizada por enzimas , como de cualquier reaccin qumica casi se duplicara
por cada incremento de 10c.como la velocidad de cada reaccin aumenta ,el
metabolismo en general es ms activo a temperatura altas , y el microorganismo
crece ms rpidamente . a partir de cierto punto ,un mayor incremento de la
temperatura disminuye la velocidad de crecimiento ocasionan daos a los
microorganismos al desnaturalizar las enzimas, las protenas transportadoras y
otras protenas (Prescott y col ., 1999; Montville ,2000).
Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada. Si
consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin de la
temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo
de la cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento
lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se
alcanza la temperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de
esta temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se
produce la muerte celular (Madigan y col .,1997).

3.6.2. Actividad de agua (aw)

La actividad de agua (aw) de una solucin es el 1% de su humedad relativa
(cuando se expresa en %).equivale tambin a la relacin entre la presin de
vapor de solucin (Psol) y la del agua pura (Pagua). La actividad de agua de
una solucin o un slido puede establecerse aislando la muestra en un cmara
y midiendo la humedad relativa despus de que el sistema haya alcanzado el
equilibrio (Prescott y col .,1999).

La actividad de agua esta inversamente relacionada con la presin osmtica. La

mayora de los microorganismos, incluyendo las bacterias patgenas, crecen
ms rpidamente a niveles de aw de 0.995-0.980.la aw de la mayora de los
medios de cultivo utilizados en el laboratorio es de 0.999-0.990. A valores de aw
inferiores a estos, la velocidad de crecimiento y la poblacin estacionaria o la
masa celular final disminuye, y la fase de latencia. A una aw suficientemente
baja, la cual es difcil de definir con precisin, la fase de latencia se hace infinita,
es decir el crecimiento cesa (ICMSF, 1983).
La gran mayora de los microorganismos requiere valores de actividad de agua
muy altos para poder crecer. Los valores mnimos de actividad para diferentes
tipos de microorganismos son, a ttulo orientativo, los siguientes: bacterias
aw>0.90, levaduras aw>0.85, hongos filamentosos aw>0.80.Como puede verse,

los hongos filamentosos son capaces de crecer en substratos con actividad de

agua menor (ms secos) de la que permite el crecimiento de bacterias o de
levaduras. Por esta razn se puede producir deterioro de alimentos de baja
actividad de agua (por ejemplo, el queso o almbares) por mohos (hongos
filamentosos) y no por bacterias. En funcin de su tolerancia a ambientes con
baja aw, los microorganismos que pueden crecer en estas condiciones se
clasifican en halotolerantes, halfilos y xerfilos segn toleren o requieran
condiciones salinas o hipersalinas, respectivamente (Prescott y col ., 1999).
3.6.3. PH
El pH es una medida de la actividad de los iones de hidrogeno de una solucin
que se define como el logaritmo negativo de la concentracin de iones de
hidrogeno (expresado en moles). Es decir, cambio de una unidad de PH
representa un cambio de 10 veces en la concentracin de iones de hidrogeno
.por eso, por ejemplo el vinagre (con un pH aproximado a 2) y el amoniaco
domstico (con un pH aproximado a 11) tienen una diferencia de concentracin
de iones de hidrogeno aproximada a un billn de veces (Madigan y col., 1997).
Cada especie tiene un intervalo definido de pH para su crecimiento y un pH
ptimo para su crecimiento .Aunque los microorganismo crecen a menudo en
medios en un amplio de intervalo pH, su tolerancia tiene un lmite .variaciones
intensas en el pH pueden daar a los microorganismos alterando la membrana
plasmtica o inhibiendo la actividad de las enzimas y protenas transportadoras.
Los cambios en el pH externo pueden modificarse tambin la ionizacin de las
molculas de nutrientes, disminuyendo, por ello, su disponibilidad para el
organismo (Prescott y col.,1999).
El pH interno en la mayora de los microorganismos est en el rango de 6,0 a
8,0. Los rangos de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son,
tambin, distintos. Hay microorganismos acidfilos que pueden vivir a pH=1.0 y
otros alcalfilos que toleran pH=10.0.
3.6.4. Potencial redox
Nos indica la capacidad del substrato para aceptar o donar. Electrones, esto es:
sus caractersticas oxidantes o reductoras. Uno de los factores que intervienen
en el potencial redox, aunque no el nico, es la concentracin de oxgeno (O2).
Hay microorganismos que requieren ambientes oxidantes para crecer, mientras
que otros necesitan ambientes reductores. El metabolismo de ambos tipos de
microorganismos presenta diferencias notables. El requerimiento de condiciones
oxidantes o reductoras no debe confundirse con la necesidad de presencia o
ausencia de oxgeno para que se produzca el crecimiento (Prescott y col .,
1999).

En general, cuando un microorganismo requiere un ambiente oxidante se dice

que desarrolla un metabolismo oxidativo (o respirativo) mientras que los
microorganismos que requieren ambientes reductores (o menos oxidantes)
realizan un metabolismo fermentativo. Un microorganismo es aerobio cuando
necesita oxgeno para vivir y es anaerobio cuando o bien no lo necesita
(anaerobios facultativos como las bacterias entricas, o como Saccharomyces
cerevisiae; o anaerobios aerotolerantes como las bacterias lcticas) o cuando
muere en presencia de oxgeno (anaerobios estrictos como los clostridios)
(Prescott y col ., 1999).
3.6.5. Nutrientes
Los microorganismos requieren para su desarrollo los siguientes elementos:
agua, fuentes de energa, fuente de nitrgeno, vitaminas y otros factores de
crecimiento y minerales. Los hongos tienen las necesidades de agua ms
reducidas, seguidos de las levaduras, bacterias gram negativas y bacterias gram
positivas. Los microorganismos pueden utilizar azcares, alcoholes y
aminocidos como fuente de energa. Algunos de ellos son capaces de emplear
la energa de carbohidratos complejos, como almidones y celulosa, ya que tienen
la capacidad de degradar estos compuestos hasta azcares sencillos. Tambin
las grasas son utilizadas como fuentes de energa, aunque slo un nmero
relativamente pequeo de los microorganismos de los alimentos son capaces de
degradarlos. Los aminocidos constituyen la fuente primaria de nitrgeno para
los organismos heterotrficos. Un gran nmero de otros compuestos
nitrogenados tambin pueden cumplir esta funcin con relacin a las diversas
clases de organismos. Por ejemplo, ciertos microorganismos son capaces de
utilizar nucletidos y aminocidos libres, mientras que otros emplean pptidos y
protenas (McMeekin y Ross, 2002).
En general, la mayora de los microorganismos utilizan compuestos simples
como los aminocidos, antes de tener que desdoblar compuestos ms
complejos, como las protenas de alto peso molecular. Ocurre lo mismo con los
polisacridos y grasas.
3.6.6. Nitrgeno, Azufre y Fsforo
En la sntesis de su material celular los microorganismos utilizan el nitrgeno
principalmente para formar el grupo amino de los aminocidos constituyentes de
las protenas. En algunos casos de simbiosis el nitrgeno fijado por bacterias se
comparte con ciertas plantas (generalmente leguminosas), lo cual permite
aumentar la fertilidad del suelo. El azufre se utiliza generalmente para sintetizar
aminocidos y vitaminas como la timina y la biotina. El fsforo se utiliza en
sntesis de cidos nucleicos y de los fosfolpidos de las membranas celulares.
3.6.7. Oxgeno

Los microorganismos aerobios utilizan el oxgeno molecular con el cual producen

ms energa a partir de los nutrientes. Sin embargo existen microorganismos
anaerobios facultativos que utilizan el oxgeno disponible, pero si no lo hay
pueden crecer mediante procesos de fermentacin o respiracin anaerbica. La
bacteria Escherichia coli muchas levaduras son anaerobios facultativos. Existen
adems los anaerobios obligados para los cuales el oxgeno es perjudicial y por
consiguiente no lo utilizan. En este caso los tomos de oxgeno de sus
componentes celulares los obtiene normalmente del agua. Es comprensible
entonces el uso del in perxido para el control bacteriano ya que en este caso
es una forma txica de oxgeno.
III.

MATERIALES, EQUIPOS

Cuadro1: materiales y equipos utilizados para la determinacin de la cintica de

crecimiento
4.1. MATERIALES

2 Matraz Erlenmeyer de
250ml ,100ml
12 Tubos de ensayo
3 Pipetas de 10ml
Algodn
Gasa
Alcohol 96
Papel aluminio
Papel graff
Pabilo
Tejera
Mechero
Agua destilada 1000ml
Gradilla

4.2. EQUIPO

Autoclave
Incubadora
Refrigeradora
Balanza
analtica

4.3. MUESTRAS
CULTIVO 863

DE

MEDIO

Extracto de levadura 10g

Peptona 10g
Glucosa 20g
Sacarosa 30g
Agua destilada 1000ml

Fuente: Elaborado por estudiantes de la carrera profesional de ingeniera agroindustrial ciclo

2014-II

Material biolgico: saccharomyces cerevisiae

V. METODOLOGA
5.1. Determinacin de biomasa, elaboracin de la curva de crecimiento
1. Preparar los materiales listos para ser esterilizados en autoclave

2. Pesar las muestras de glucosa de 10g, sacarosa 30g, peptona de 10g.

3. preparar el precultivo inoculando levadura saccharomyces cerevisiae
seca aproximadamente 0.5- 1g en 40ml de un medio 863 (glucosa al 2%)
como fuente de carbono.
4. incubar a una temperatura de 60c con agitacin por una noche
5. inocular el 5% del pre cultivo en 150ml de un medio 863(3% de sacarosa).
6. Tomar 5ml del cultivo de acuerdo a las horas indicadas por el docente
encargado
del
curso
por
3
das
en
los
tubos
de
ensayo(9.00am,10.00am,11.00am,12.00pm,3.00pm,6.00pm
;7.00am
,12.00pm,6.00pm;7.00am, 6.00pm)
7. Una vez terminada los once tubos contenidas cada una con 5ml de cultivo
llevar a la centrifuga
8. centrifugar las muestras a 4000rpm por 15min, para separar las clulas
de la levadura; el sobrenadante se guarda en tubos por separado.
9. El precipitado que contena las clulas se re suspende en 5ml de SSF
0.85% y se colocan en tubos tarados en una estufa al vaco de 80c
durante 24 horas hasta que alcanzo un peso constante.
10. Una vez pesadas las 24 horas se obtuvo por deferencia de peso la
cantidad en gramos de la levadura precipitada , la cual se le resto el valor
de un blanco en el cual fue preparado solo con solucin salina fisiolgica
0.85%.

RESULTADOS
los resultados que se encontr en la practica se desarrollaran a continuacin los
clculos son bsicamente para determinar los valores la velocidad de crecimiento y la
constante de saturacin (constante de monod)
para locual se utilizara la siguiente ecuacin
partiendo la de la ecuacin de Michael Menten

[]
[]
==
+ []
+ []

Donde
u= h-1
umax=h-1
Ks=g/l
Para determinacin de los valores de u y ks se trabajo con 4 concentraciones de
sacarosa utilizando como microorganismo sacharomyces cerviseae

Cuadro 2: distribucin de la muestras con las respectivas concentraciones

Muestra

concentracin

30%

10%

40%

20%

Fuente: Elaborado por estudiantes de la carrera profesional de ingeniera agroindustrial ciclo

2014-II

Resultados para la muestra A a 30% de concentracin de sacarosa

Cuadro 3: resultados de la biomasa de la muestra A a las 48 horas
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
14
18
22
24
26
30
40
48

0,008
0,0094
0,0095
0,0095
0,0096
0,0097
0,0098
0,0099
0,01
0,015
0,019
0,02
0,03
0,08
0,12
0,13
0,15
0,18
0,25
0,26

Grafico 3: curva de crecimiento de la muestra A

curva de crecimiento muestra A

0.3

biomasa(g/l)

0.25
0.2
0.15

Series1

0.1
0.05
0
0

10

20

30

40

50

60

tiempo(min)

Ecuacin para determinar la biomasa en un tiempo determinado

=

0

ln ln =
=
Encontrando el valor de u
Grafico 4: curva para determinar valor de u
0.3

y = 0.0084x - 0.0755
R = 0.988

biomasa(g/l)

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0

10

15

20

25

tiempo(min)

30

35

40

45

Del grafico anterior obtenemos u que es igual a la pendiente

Donde =0,0084 remplazando este valor en la ecuacin anterior y x0=0,008
= 0,008 0,0084

Muestra B concentracin de 10%

Cuadro 4: resultados de la biomasa de muestra B a las 48 horas
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
14
18
22
24
26
30
40
48

0,002
0,003
0,003
0,0035
0,004
0,0046
0,008
0,01
0,014
0,014
0,016
0,022
0,03
0,044
0,064
0,076
0,088
0,11
0,164
0,168

Grafico 5: curva de crecimiento de la muestra B

0.18
0.16

Ttulo del eje

0.14
0.12
0.1
0.08

Series1

0.06
0.04
0.02
0
0

10

20

30

Ttulo del eje

40

50

60

 =
Como se hizo en el caso anterior tambin se realizara lo mismo para esta muestra
Determinando valor de u
Grafico 6: curva para determinar valor de u
y = 0.0051x - 0.0445
R = 0.9945

0.18
0.16

biomasa(g/l)

0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0

10

20

30

40

50

tiempo(min)

Resultando el valor de u= 0,0015 h-1 y X0=0,002

Entonces la ecuacin para la biomasa quedara de la siguiente manera
= 0,002 0,0015
MUESTRA C CONCENTRACION 40%
Cuadro 5: resultados de la biomasa para muestra C a las 48 horas
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
14
18
22

0,001
0,002
0,003
0,004
0,005
0,006
0,01
0,012
0,015
0,016
0,019
0,02
0,031
0,11
0,175

24
26
30
40
48

0,21
0,231
0,242
0,25
0,25

Grafico 7: curva de crecimiento para la muestra C

0.3

biomasa(g/l)

0.25
0.2
0.15
Series1

0.1
0.05
0
0

10

20

30

40

50

60

tiempo(min)

Grafico 8: curva para determinar valor de u

0.3

y = 0.0169x - 0.1992
R = 0.9938

biomasa(g/l)

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0

10

15

20

25

30

tiempo(min)

Resultando el valor de u= 0,017 h-1 y X0=0,001

Entonces la ecuacin para la biomasa quedara de la siguiente manera

 = 0,001 0,017
MUESTRA D CONCENTRACION 20%
Cuadro 6: resultados de la biomasa para la muestra D a las 48 horas
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
12
14
18
22
24
26
30
40
48

0,0009
0,001
0,002
0,003
0,004
0,005
0,006
0,01
0,015
0,018
0,019
0,02
0,03
0,068
0,1
0,12
0,13
0,162
0,23
0,241

Grafico 9: curva de crecimiento para la muestra D

0.3

biomasa(g/l)

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0

10

20

30
tiempo(min)

40

50

60

Grafico 10: curva para determinar valor de u

0.25
y = 0.0077x - 0.0706
R = 0.9959

biomasa(g/L)

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0

10

20

30

40

50

tiempo(min)

Resultando el valor de u= 0,007h-1 y X0=0,0009

Entonces la ecuacin para la biomasa quedara de la siguiente manera
= 0,0009 0,007

encontrados los valores de u de cada concentracin ahora determinaremos el

valor de umax y ks
cuadro 7: valores para graficar la curva para el clculo de umax y ks
S
B
D
A
C

u
10
20
30
40

1/S
0,0051
0,0077
0,0084
0,017

0,1
0,05
0,03
0,025

1/u
196,078
129,87
119,048
58,82

Grafico 11: curva para determinar umax y ks

curva para determinar max y ks

y = 1565.4x + 44.423
R = 0.8745

250
200

1/

150

Series1

100

Lineal (Series1)
50
0
0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

1/s

Para encontrar estos valores se har uso de ecuacin de la recta

= . +

= +
y = 1565,4x + 44,423
si x=0
y= 44,423=b
donde

= ,

max=0,023h-1
Y para el clculo de ks

= 1565,4
0,023
Ks=36 g/l

DISCUSIONES
BULOCK, 1987 establece el valor de velocidad mxima de crecimiento para la
saccharomyces cerevisiae 0,45 h-1, el valor encontrado es menor a comparacin de
este resultando 0,0023 h-1
Marison, 1996 determino un valor para la constante de saturacin (Ks) para la
saccharomyces cerevisiae de 25 mg/l (0,025g/l) resultando nuestro valor muy superior
de lo encontrado por Marison resultando 36g/l
CONLUSIONES
Segn los resultados obtenidos en la prctica los valores determinados tanto para la
umax y la constante de saturacin en el primer caso el valor de la velocidad de
crecimiento es muy inferior a lo encontrado por la bibliografa consultada y en el
segundo caso el valor de la constante de saturacin (Ks) resulto muy elevado o
podemos afirmar que el valor determinado por Marison es igual a 25g/l valor que es
cercano al calculado.
Los resultados obtenidos para cada muestra se calcularon sus respectivas ecuaciones
para determinar la biomasa en funcin al tiempo y la biomasa inicial.
De la misma forma para cada concentracin se le realizo su respectiva curva de
crecimiento microbiano observndose que para cada concentracin exista un
crecimiento de biomasa mas que las otras concentraciones

BIBLIOGRAFA
C.G. Sinclair, 1987 department of chemical engineering, university of Manchester
institute of science and technology. PO Box 88

Jhon bulock, 1987. Biotecnologa bsica. Editorial Acribia, S.A

Crecimiento Microbiano (Prescott y col ., 1999). (McMeekin y ros, 2002).
Curva de Crecimiento ; Microbiologa ((Penfold ,1914),(Buchanan y
Solberg ., 1972)
Tiempo de Latencia(Swinnen y col ., 2004),(Montville , 2000), (Swinnen
y col. ,2004).
Tiempo de Generacin (Segn Stanier y col., 1989) ( Madigan y col
.,1997).
Velocidad de Crecimiento(Madigan y col .,1999),( Stanier y col., 1989)
CUESTIONARIO
2. En las fases del crecimiento microbiano o celular . explique la fase de latencia
obtenga una ecuacin para calcular el tiempo lag (tlag).

3. En que consiste la inhibicin del crecimiento microbiano por sustrato, por

producto del metabolismo. Obtenga una ecuacin para calcular la constante de
inhibicin del sustrato.
Efecto de una concentracin de sustrato o producto
Si se aumenta la concentracin inicial de sustrato a niveles altos la velocidad de
crecimiento pueden disminuir debido a la inhibicin por sustrato. Para sustratos como la
glucosa u otros carbohidratos, la mayora de los microorganismos son capaces de
crecer a concentraciones de 100-150 g/lt, pero muy pocos crecern a 300-500 g/lt. Es
decir, a altas concentraciones de azcar o sal se observa la inhibicin por deshidratacin
de los microorganismos debido al fenmeno de osmosis que se da en clulas. Existen
sustratos que a concentraciones bajas favorecen el crecimiento de algunos
microorganismos pero que a altas concentraciones se vuelven inhibidores para los
mismos tales como el fenol, formaldehido o el metanol.
La inhibicin por sustrato generalmente se expresa de la siguiente forma
=

++( )2

Inhibicin por producto

Los productos que alcancen una concentracin suficientemente alta en el medio
pueden inhibir y eventualmente detener su propia produccin. Este fenemo es bien
conocido en la produccin de etanol y limita el grado mximo que puede ser alcanzado
por fermentacin en las bebidas alcohlicas.(C.G. Sinclair, 1987)