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  • Prueba de Leche Tornasolada

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    Karina Fonseca Camero
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    Documento que contiene algunos fundamentos de pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismos

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    di 8
    soc activity py. ‘edly santo pe Sheeane Py. MeCroshey LM, tal bonnie sob Agents Chet este RN, Decnen LLMY. stops om eo icchin Biophys Ata Joke WK, Wile fy, 16 New York, Res 1965;3:197.240 capiTuLo Bey Prueba de leche tornasolada Beer ie Diferenciar os microorganisms sobre la base de sus miliplesreacciones metabslics en un medio con leche, NLOBJETIVO (Véanse también caps. 43 y 44) Medio difereacialutlizado sobre todo para el estudio de microorganismos selectvos, por ejemplo, sgramnegativos no fermentadore,clostidios yenterococos (16) A. Ayudar en la diferenciacion, de especies en especial dentro del género Clostridium (cusdro 23-1) B. La mayoria de las especies de Enterococcus reduce la leche «un olor blanco euando se ula el tor- nasol como aceptor de electrones (19) en presencia de enzima preformada, €. Sireprococeus bovis (cree) de S. equinus (no cree). : 1D. Ayudar en la diferenciacién de ls cepascutineas de Propionibacterium aenes (4) y P.avidum (+) de .granulosum (~) (20) (se procedimientos de prueba altemativs) B Juntocon otras prusbas (esculina, produccién de cfpsula, eaccin en caldo con clorura de soto y ac- tividad sobre los hidratos de carbono arabinosa, melibiosa, rafinosay tehalosa) ayuda en la diferens ciacién de Leuconesto lactis (cidalcodgul) y L. peeudomesenteroides(eidoleodgulo) de L. mesen. terides (—;excepeisn ocasionl)y . citreum (-) (I). BIOQUIMICA La leche tomasolads es un medio diferencia! ulizado para determinar diversas funciones metabsli- ‘cas de un microorganismo: a) fermentacin de la luctos, b)easedliss yc) coagulaciGn de la caseina (6). El tomasolincorporado en la leche indica tanto pH como E (oxidacin-reduceiGn); por eso, el medio puede denotar diversas funciones metablicas. La leche sola contine exclusivamente el hidrato de car bhonolactosa junto con tres protefnas principales: caseina, lactoalbimina y lactoglobulina (4). Por consi _uiente, un microorganismo puede exhbir una o varias propiedades metabslicas en la leche tomasolads, ‘cada una especiica para una especie particular, hecho que ayuda a idetiicaién bacteriana: a fermen ‘acid dela lctosa b) reductin del tornaso,c)formacin de un cadgul, d) peptonizacion (digestion) 1) formacién de gas Fermentacién de Ia lactosa (acidiicacién) El tomasol como indicador de pH es rojo en una solucién Sida (pH 45) y arul en condiciones alea linas (pH 8,3). La leche tomasolada muestra un color azul purpdre (pH 6,8) cuando no estéinoculada, ero si un microorganism ferment la lactosa, produce sobre todo sci dctico, un medio dcido que or ‘ina cambios en el medio aun color rse-rojo. En casiones, el producto final dela fermentacion de Ia 276 Pruebas bloquimicas individuales (Guadro 23-1. Reacciones en leche tomasolada de las especies de Clostridium aisladas con mds frecuencia Digestiontcoagulacin (OC) ccm & pertingons (6S) Coagulaclinvsgeation (cop heemaytoo septum Coaguiacsn (C) Barat noon Govteun beayrcum (45) & rapurteum & cola fae ve) S ramocurn & Shea! Ssrageorum & seherocios gatittomes & Sirctrme ‘ater © Symonsume & ints totum Digestion (0) “igontponse vaabe! timosun © Hlemenane Snape E grea Spina 8 ftom sat nto sporegenes ‘Sin reseciinnegatvo Coa ‘Cena. totum cachearum E ronan & ciate Som o 1). de a pean ste i conquacion.b) ron dea conga sobr a gest c Arte. bar @ ice, papattngene ponte hates € eens an eace yom oseba {nbc Roton Bonn Gr aautos © haere notice C astonish Een eae Bey mytaria, Let. tea on ibe ye rae lectosas el écido butic (3). Cras bacteria formadoras de lealis no fermentan la lactos, pero ac ‘ian sobre las sustancias nitcogenadaspresentesen la leche, lo que ocasiona la Hberacion de aot (@) yen consecuencia origina un BH alcalino evideneao por el color pepura saslade, Lactosa—+ Giuoosa + galacosa eo teen ‘Gucosa—> haan peov [sido bution C0, +H Reduccién del tornasot El tornasol es un indicador de pH (indicador Sido-base) y simulténeamente un indicador de oxida- acidn ycoagulacién "Se separa por la pro- (Clostridium anger 1 dels especies. ‘ico para formar un cen Ia ensima lips sxente @). aalieas 0 una varie «a se tien sfmbo- Prueba de leche tomasolada. 278 A Ingredients (5) ‘Tornaso, ganar 208 ‘hol ssa ico) a 40%, C,H,081 1010 mL B, Método de preparacin dl solvent etanol, 40% 1. Stock: etanol al 95% 2. Céleulos AS requerda/% stock = fantidad requerida 1, 4095 = 100 mL ‘00095 = 42,1 mide tanl al 95% 3, Cantidad deseada de una solucién al 405% ‘100 mL = 42 mde ctapol al 95% levado a 100 mL con agua destiada 1 1,000 mL = 421 ml de etanl al 95% leva a 1.000 mL con agua destlada (©. Método de preparacén'solucion de tornasol ‘Moler el torasol como wn povo fino. Enum frasco de 2L agregar 300 ml. de etanl al 40% y el tonasol moti, Herve min. ‘Con euidad, decantr el sbrenadant (guido) en oto frase de 2L. “Agregar los 500 ml. restantes de eanol al 40% al sedimento en el frasco inci Herve de veo durante 1 min. ‘Com enidado, decantar el sobrenadante ene rasco que contiene la primera porcin de S00 mL de Iiquido hevido 8, Centrifugar el sobrenadantey decantr en una probetagraduada de 1L. ‘9 Ajustarel volumea a 1,00 mi con etanol al 405. 10, Gots a gota, agreger HCI (cdo clrhidrico) 1 N hasta que la solucién se tome prpura _D. Comprobacgn conl de la reaccn de tornasol (5) ervie 10 mde agua desta, Eni. Agregar 1 gota de solucién de torasoly mezelar bien ‘ise prepa6 ce manera apropiad,e] agua se tora malva [La concentracion del indieadortomaso es de alrededor de 2,58 (5) Et tormaso liguen azul) es un producto natural cuya composicin quimica slo se covioce en for- sma para; la principal sustania con propiedades colorantes es un derivado de 7-hidroni2-fenon: Zona con sustituyentes en la posicion 3,6 (14); es similar al indofenol desde el punto de vista esrue tural (11), La azolitmina nos Ia sustancia colorante total de tornasol; el tornasol puede contener ‘varios consituyentes (11) Fl limite de pH del tornasol es 4,8-8,3 (13) y el de a azolitmina, $-8/4.5- 8312, 13). V. MEDIO DE CULTIVO EMPLEADO: MEDIO DE LECHE TORNASOLADA, pH 6,8 (6) Wota: Para prepara el medio con leche lorasolada puede wlizarse leche de vaca fescadesnatadaole- che desnatada dehidratada comercial (2)) s A. Ingredients: tes opciones Con tomsok pH68 +02 . a. Formula | Lose denna, debits 1098 ‘Tas en pao , Se ‘Agua desc 100 at , Formula? Leste desmatade 108 Peptona OE ‘Tint esd de sao HSCH,COON 0.5 tomato 35 ‘Agus desis 1.000 2. Con aolitmina, pH65 +022 280 Prucbas bloquimicas inclviduales Lee dtd pra dian 1g ‘Si deo Noss 7450. . ‘Azolitmina st 08. ‘Age einiaa 100 3. Contrlaret pi; sjustar a 6.8 por el suave agregado demas tomasoloazlitnina, contolando des- puis de cod agregndo. 4 Puede agrepurse una solucién liquid de tomasolen lugar de polvo, Si es ast ehidatar la leche 100 mm o 6 x 50 mm); tubes tapado. by Indculoprovenient de un cultivode 18 24h en agar con sangre deoveja (SBA); indculo gran- de; crecimiento recogido con un ansabactrioldgica, 3. Incubacin: Bloque calemtado a 37C, ler alos 30 min yIuego a cada hora hasta un ttal de 4b 4. Interpretacin 2, Postivo (+): blanco; reducei6n 1. Neativ (=): rsa; produccién de Sido. X. PRECAUCIONES, ‘A La formacion del codgulo simplemente se registra como codgulo (C), No inentar diferencia entre ‘cofguloo cus, BB, La leche tomasolada debe tener un pH de 68. Para asegurarse acerea dela reaccionescorecas que ‘curanenel medio, realizar controes antes del uso general dl meso . La leche homogeneizada no es adecuada para prepararel medio con leche tomasolad (5), Sino se ‘ispone de leche desnatad, colocar Ia leche fresea en el refrigerador (10°C) y deja eposar o-

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