TCNICAS

HISTOLGICA
S

Pasos de la tecnica:
Obtencin del material.
Fijacin.
Inclusin.
Obtencin del corte.
Coloracin .
Montaje final

1)Toma de muestra:
Se toma la muestra de dos formas:
a)

Necropsia: Examen u obtencin de tejido

de un organismo muerto.

b)

Biopsia: Examen u obtencin de un

organismo vivo. Puede ser por incisiones,
sabocado, por puncin y absorcin,
raspado , por trepanacin.

Fijacin
La fijacin debe realizarse lo mas rpido
posible de tomada la muestra , para evitar
procesos de autolisis.
Se pueden clasificar en los siguientes
metodos :
Por inmersin: pequeos trozos del tejido
son sumergidos en el liquido fijador.
Por perfusion : el liquido fijador se aplica por
inyeccion

Los agentes mas usados

son :
Formaldehido al 5% , formol al 10%.
Glutaraldehido al 2.5% , perxido de
Osmio , liquido de helly y fijador de bovin.
Cloruro de mercurio y acido picrico.
Permanganato de potasio.

3) Deshidratacin

Despus de que la muestra ha sido fijada se

elimina el fijador y se deshidrata. Debido a
una gran parte del tejido esta constituido
por agua se aplica soluciones acuosas de
agentes deshidratantes. (alcohol etlico o
acetona)

4) Aclaramiento o diafanizacin:

Luego de deshidratar el tejido , se pasa a

una solucin de una sustancia que es
miscible tanto con el alcohol como con el
medio de inclusin a utilizar (mayormente
con un medio de inclusin en parafina ) .La
sustancia comnmente utilizada es l xileno
o xiliol.

5) Inclusin o
impregnacin :
A fin de que se puedan obtener cortes
suficientemente finos para ser observados
al microscopio, los tejidos tienen que ser
incluidos y envueltos por una sustancia de
consistencia firme. Las sustancias utilizadas
son gelatina y parafina.
Distinguir entre si las clulas superpuestas
en un tejido.

6) Confeccin del bloque :

Consiste en la obtencin de un bloque

solido de tejido mas medio de inclusin ,
mediante el enfriamiento lento ( 10 a 15
C) EL BLOQUE SOLIDO SE LLAMA TACO.

7) Seccin o corte :
Se corta en secciones lo suficientemente
delgadas como para permitir el paso de la
luz. Los preparados para microscopia optica
tienen un grosor de 3 a 5 micrometros que
es realizado por un aparato llamado
microtomo.
Microscopia electrica se requieren corte
mas delgados ( ultrafinos ) de aproxi. De 25
a 100 nm de espesor y de 0.5 nm de lado
medio .

8) Montaje o tincin :
Los bloques se colocan sobre portaobjetos a
los que se les ha agregado una pequea
cantidad de albumina , lo cual acta como
adhesivo , la parafina es un solvente
orgnico, de nuevo se incluye en telecol.
Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en el campo de la
biologa
y
medicina
para
resaltar
estructuras en tejidos biolgicos que van a
ser con la ayuda de diferentes microscopios.

La eosina es un colorante acido y sus

propiedades tintoriales pueden ser
explicadas sobre la base que se sabe acerca
de la accin de las amilinas cidos.
La hematoxilina , aunque no es un colorante
bsico , posee propiedades a las amilinas
bsicas .