PROCEDIMIENTO OPERATIVO

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TITULO:
PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO Departamento:
PARA LA VALORACIN DEL SULFATO DE GENTAMICINA EN
Garanta de Calidad
COLIRIO
Vigente desde: 25/09/2013
Versin N: 1

CONTENIDO
1.
2.
3.
4.
5.
6.

OBJETIVO
ALCANCE
RESPONSABLES
DEFINICIONES
MUESTRAS
DESCRIPCIN
6.1. MTODO ANALTICO A VALIDAR
6.2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
6.3. DESARROLLO EXPERIMENTAL
6.3.1. SELECTIVIDAD
6.3.2. LINEALIDAD
6.3.3. EXACTITUD
6.3.4. PRECISIN
7. REFERENCIAS

Redactado por:
Victor H. Alvarez Astroa
Cargo:
Int. Ing. Quimica
Firma:
Fecha: 23/09/13

Revisado por
Dra. Silvia Quiroz V.
Cargo:
R. Control de Calidad
Firma:
Fecha: 24/09/13

Aprobado por:
Dra. Betty Paz de Pradel
Cargo:
R. Garanta de Calidad
Firma:
Fecha: 25/09/13

Prxima revisin:

Fecha: 092017

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1. OBJETIVO
Definir los criterios mnimos para llevar a cabo actividades de validacin del
mtodo para la cuantificacin del sulfato de gentamicina por el mtodo
espectrofotomtrico.
2. ALCANCE
Es de aplicacin al mtodo espectrofotomtrico empleado en la cuantificacin
del sulfato de gentamicina en colirio
3. RESPONSABLES
Analista de Validacin
Coordinador de Validacin
Control de Calidad
Director Tcnico
4. DEFINICIONES
ANALITO.- Componente especfico de una muestra a medir en un anlisis.
CRITERIOS DE ACEPTACIN.- Parmetros bajo los cuales el resultado de
una prueba es considerado aceptable.
SELECTIVIDAD.- Es la capacidad de un mtodo analtico para medir
solamente lo que se pretende que se mida.
SESGO.- Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de
prueba con respecto a un valor de referencia aceptado.
CURVA DE CALIBRACIN.- Es la representacin grfica de la seal medida
como una funcin de la cantidad del analito.
INTERVALO DE TRABAJO.- Intrvalo comprendido entre las concentraciones
superior e inferior para las que se ha demostrado que el analito es cuantificado
con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperacin y linealidad.
REPETIBILIDAD.- Grado de concordancia entre resultados analticos
individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes
porciones de una muestra homognea por un solo analista, usando los mismos
instrumentos y mtodo en intrvalos cortos de tiempo.

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PRECISIN INTERMEDIA.- Grado de concordancia entre resultados analticos

individuales cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes
porciones de una muestra homognea por distintos analistas usando el mismo
mtodo en diferentes das.
LMITE DE CUANTIFICACIN.- Es la concentracin mas baja a la cual el
analito puede cuantificarse con una precisin y veracidad aceptables bajo las
condiciones experimentales establecidas.
LMITE DE DETECCIN.- Es la concentracin ms baja a la cual puede
detectarse el analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones
experimentales establecidas.
RESPUESTA ANALTICA.- Lectura obtenida al aplicar un mtodo analtico.
5. MUESTRAS
Las muestras fueron preparadas a escala laboratorio en concentraciones del
80, 90, 100, 110 y 120% de la concentracin de prueba para todos los anlisis
segn la formulacin siguiente para el 100%:
Sulfato de Gentamicina al 60%
Fosfato monosdico
Fosfato disdico
Cloruro de sodio
Cloruro de benzalconio
Agua destilada

0.5 g
0.4 g
0.6 g
0.30 g
0.025 g
100 ml

Tcnica de Preparacin: En un vaso de precipitados, calentar 40 mL de agua a

30 C y disolver uno por uno fosfato monosdico, fosfato disdico, y el cloruro
de sodio (solucin 1).
En 30 ml de agua a temperatura ambiente disolver el sulfato de gentamicina y
agregar a la solucin 1 y enrasar a 100 ml.
Agregar el cloruro de benzalconio a la solucin 1 y medir el pH.
Nota: Para la preparacin de concentracin 80% la cantidad de sulfato de
gentamicina es de 0.4 g y para las preparaciones de 90, 110 y 120% son de
0.45, 0.55 y 0.6 g. Las cantidades de excipientes y la tcnica de preparacin
para todas concentraciones, son las mismas a las descritas en la parte
superior.

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6. DESCRIPCION
6.1 MTODO DE ENSAYO A VALIDAR
El mtodo del ensayo se basa en la espectrofotometra UV-visible del complejo
del sulfato de gentamicina con el p-dimetilaminobenzaldehdo a una longitud de
onda de 407 nm
6.1.1. Procedimiento a validar
6.1.1.2. Preparacin del estndar.- Pesar 10 mg de piracetam en 100 ml de
metanol. Diluir 1 ml de la solucin y llevar a 10 ml con metanol
5.1.1.3. Preparacin de la muestra.- Extraer 1 ml de noopiram inyectable,
disolver en 100 ml de metanol y agitar, de esta solucin madre tomar 1 ml,
vaciar a un matraz de 100 ml y aforar con metanol. Diluir 5 ml de la solucin y
llevar a 10 ml
6.2 EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
6.2.1 EQUIPOS
6.2.1.1 Espectrofotmetro
Marca
Modelo
Modo de lectura
Ancho de banda
Longitud de onda
Espesor de celda
Foco de luz
6.2.1.2. Balanza analtica

Jasco
V-630
Absorbancia
1.5 nm
214 nm
10 mm
Tungsteno D2/WI

Marca
Modelo
Cdigo
Sensibilidad

AND
HR-200
S01MQ0133
0.0001 gr

6.2.1.2. pH-metro
Marca
Modelo

Meter Toledo
HR-200

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Cdigo
Sensibilidad

S 01 MQ C1 40
0.01

Todos los instrumentos fueron previamente calibrados y se extiende el

certificado de calibracin para cada equipo
5.2.2. MATERIALES
5 Matraces aforados de 100 ml.
3 Pipetas Volumtricas de 1 ml
4 Pipetas Volumtricas de 5 ml
Se adjunta los certificados de calibracin desarrollados por metodologa interna
en los anexos para los materiales de vidrio.
5.2.3 REACTIVOS
p-dimetilaminobenzaldehdo
Hidrxido de Sodio 3M
Buffer de pH 4.1 cido actico/acetato
Patrn de trabajo de Sulfato de Gentamicina
5.3 DESARROLLO EXPERIMENTAL
5.3.1. SELECTIVIDAD
Se realizar el anlisis de 6 muestras de Producto terminado con respecto al
patrn de trabajo y se evaluar el porcentaje de discrepancia.
Criterio de aceptacin
Porcentaje de discrepancia entre el producto terminado y el estndar de
referencia debe ser menor a 2%
5.3.2. LINEALIDAD
Realizar la lectura de absorbancia a cinco niveles distintos de concentracin,
cada nivel ser evaluado por triplicado cubriendo un intervalo de 80 a 120% de
la concentracin de prueba; los niveles de concentracin evaluados sern: 24,
27, 30, 33 y 36 mcg/ml de sulfato de gentamicina y se realizar una curva de

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calibracin Concentracin vs Absorbancia, cada nivel evaluado ser realizado

mediante el anlisis de muestras al 80, 90, 100, 110 y 120% de la cantidad
declarada para evitar error de posteriores diluciones
Criterios de Aceptacin
Coeficiente de correlacin r>0.99 (APIC 2000)
Si

t r <t crit ; F cal reg > F tablas

entonces

el

modelo

de

regresin

es

estadsticamente significativo
5.3.3. EXACTITUD
Realizar el anlisis de muestras enriquecidas al 80, 100 y 120% de la
concentracin declarada (240, 300 y 360 mg/ml de sulfato de gentamicina)
mediante preparacin de muestras independientes siendo estos recomendados
por los documentos (ICH Q2R1)
Criterios de aceptacin
Si

t cal< t crit ; Gcal <Gtablas

, entonces el mtodo es exacto

PRECISIN
Dos analistas realizarn la determinacin del contenido de piracetam al 100%
de la concentracin de prueba de la muestra en das distintos y con distinto
material para cada da a partir de la cual se determinar la repetibilidad del
mtodo, y precisin intermedia. (USP36)
Criterio de aceptacin
CV repetibilidad< 6% (AOAC 2002)
CV precisin intermedia< 8% (AOAC 2002)
Como factor de seguridad nosotros tomaremos <4% para ambos casos

Producto:.
.
Lote:...

Analista:
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Principio Activo:..

Concentracin:
Ensayo:.
Mtodo:..
Muestra Primer Segun Tercer OTROS
Tomada a
da
a
Diluci Diluci Diluci
n
n
n

Fecha:

Absorbanc
ia

Concentraci
n en la
muestra

Porcentaje
de
Recuperaci
n

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Clculos y Resultados

REFERENCIAS
Mtodos analticos adecuados a su propsito Centro Nacional de
Metrologa C.E.N.A.E.M. Mxico 1998
Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for
dietary Suplements and Botanicals AOAC 2002
Validacin de Mtodos Analticos, AEFI 2001

Validation of analytical procedures text and methodology ICH Q2 R1

2005