UNIVERSIDAD

AUTNOMA DEL ESTADO

DE MXICO
<<Facultad de Qumica>>
Laboratorio Integral de Farmacologa
Reporte prctica #7:
EFECTO DE LA ADMINISTRACIN DE
PENTOBARBITAL SOBRE EL TIEMPO DE SUEO.

Equipo #2:
Esquivel Daz Olivia Guadalupe.
Jordn Salgado Ana Vernica.
Lagunas Ocampo Emmanuel Ricardo.
Lara Flores Ingrid Berenice.
Meja Paduano Alba.
Fecha de realizacin de la prctica: 14 de octubre de
2014
Fecha de entrega del reporte: 20 de Octubre de
2014.

OBJETIVO:
Demostrar las alteraciones sobre el tiempo de sueo que produce la
administracin previa de dosis pequeas de pentobarbital en ratones.
MARCO TERICO:
Los
barbitricos
son
derivados
del
cido
barbitrico
(2,4,6trioxohexahidropirimidina) o malonilurea, producto sintetizado a partir del cido
malonico y urea. La sustitucin de sus tomos de hidrgeno en la posicin C-5
por diferentes radicales orgnicos da lugar a los diversos barbitricos. Las
distintas sustituciones en C-5 afectan la eficiencia clnica y producen
diferencias en la liposolubiblidad y en la semivida de los diferentes barbitricos.
Mecanismos de accin:
Farmacocintica: cuando se administran por va oral, la absorcin de los
barbitricos es completa, aunque variable y retrasada por la presencia
de alimentos en el estmago. La tasa de absorcin se relaciona con el
grado de liposolubilidad. La distribucin es amplia en todos los tejidos
alcanzando las concentraciones ms elevadas en el cerebro, el hgado,
los riones y el tejido adiposo. Atraviesan la barrera hematoencefalica y
la placenta y se encuentran en la leche materna. Los barbitricos se fijan
escasamente a protenas plasmticas y poseen un bajo volumen de
distribucin. Se metabolizan en el hgado y se excretan por va renal. Se
degradan a travs del sistema enzimtico microsomal heptico P-450. Al
ser inductores de la actividad enzimtica microsomal heptica acelera su
propia degradacin. Este efecto explica la tolerancia y la necesidad de
incrementar las dosis con la administracin crnica. Adems, aceleran el
metabolismo de otros frmacos cuya degradacin esta mediada por este
sistema enzimtico, razn por la cual las dosis de dichos frmacos
deben aumentarse cuando se administran conjuntamente. Las semividas
de los diferentes barbitricos son variables. Se incrementa con la edad,
la enfermedad heptica y la insuficiencia renal grave. La semivida de
todos ellos disminuye con la administracin crnica.
Farmacodinamia: los barbitricos poseen accin sedante, hipntica,
anticonvulsiva y anestsica. La mayora tienen una relacin dosisrespuesta dependiente: las dosis bajas sedan y las altas anestesian.
El mecanismo de accin de los barbitricos implica al complejo receptor GABAreceptor benzodiazepinico-canal de cloro. Los barbitricos intensifican la
actividad del GABA sobre el complejo del receptor GABA-A, incrementando las
acciones inhibidoras de este neurotransmisor. Hay datos que indican que los
barbitricos tambin podran reducir la neurotransmisin excitadora mediada
por el glutamato e inhibir la entrada de iones calcio en las terminaciones
presinpticas, reduciendo la liberacin de neurotransmisores.

Los barbitricos y el alcohol etlico en grandes dosis pueden provocar la

apertura del canal de cloro aun en presencia de GABA endgeno. Esto explica
porque la intoxicacin por barbitricos o alcohol etlico, cada uno por separado,
puede producir parada respiratoria y muerte.1
Su absorcin por va oral, parenteral y rectal es variable; la velocidad de
absorcin aumenta cuando se lo ingiere bien diluido con el estmago vaco.
Los efectos aparecen a partir de los 10 a 150 minutos por va oral o rectal,
levemente ms rpido por va intramuscular y casi al instante por va
intravenosa. La duracin de accin es de 3 a 4 horas. Pertenece a los
barbitricos de accin corta. La tolerancia al pentobarbital se desarrolla tras
dos semanas de administracin continuada, por lo que slo es til para
tratamiento de corto plazo. Se distribuye rpidamente a todos los tejidos y
lquidos corporales y su metabolismo se realiza casi exclusivamente en el
hgado.2
Esta droga es ampliamente utilizada como sedante o hipntica para el
tratamiento del insomnio y como pre-medicacin quirrgica. En dosis
anestsicas por VI el pentobarbital tambin se encuentra indicado para el
control de ciertos sndromes convulsivos. Se piensa que este barbitrico reduce

1 M. Salazar, C. Peralta, F. Pastor. Tratado de psicofarmacologa, bases y

aplicacin clnica. 2 edicin. Editorial Mdica Panamericana, Buenos aires
Madrid. 2009. Pg. 373-375.
2PR vademcum. Pentobarbital. (En lnea). Disponible en:
http://mx.prvademecum.com/droga.php?droga=765. Consultado el 18 de octubre
de 2014.

el flujo sanguneo cerebral y en consecuencia reducira el edema cerebral, la

presin intracraneana o ambos parmetros.3
ANIMAL DE EXPERIMENTACIN:
Dos ratones
MATERIALES
Jaula para el mantenimiento de los ratones
Jeringas de insulina
Algodn
Cronmetro o reloj
Tabla y estuche de diseccin
Desecador
Balanza para animales
Balanza analtica
Matraz volumtrico de 10ml
REACTIVOS
Pentobarbital
Solucin salina
ter
PROCEDIMIENTO

3 Genaro Alfonso. Remington Farmacia. 20 Edicin Tomo I. Editorial. Mdica

Panamericana, Buenos Aires. 2003. Pg. 1682.

Administrar por via

intraperitoneal 0.16ml de
pentobarbital 20ml/kg al
raton problema, y 0.16ml de
solucion salina al raton
testigo durante 5 dias previos
a la practica.

El da de la prctica,
administrar a cada uno de los
ratones una dosis
equivalente, nica de
pentobarbital necesaria para
inducir el estado de sueo (50
mg/Kg). Registrar el tiempo
que tarda el ratn en
quedarse dormido y el tiempo
que permanece dormido,
registrar las diferentes
etapas de anestesia que cursa
el ratn.

Realizar un grfico en el cual

se compare el tiempo de
induccin del sueo y el
tiempo de permanencia de
sueo entre los ratones,
comparando los resultados
promedio mediante una
prueba de t de student. Hacer
lo mismo con los pesos
relativos de los hgados de los
ratones.

Sacrificar a los animales bajo

anestesia con ter y realizar
una necropsia para disecar el
hgado, observar y registrar
la apariencia del rgano y
pesarlo, obtener el peso
relativo del rgano.

Discutir los resultados y

elaborar las conclusiones
correspondientes

RESULTADOS:
Observaciones: En el ratn testigo se observ inicialmente prdida de control
motriz y de la orientacin, as como una ligera agitacin, posteriormente
durante el tiempo de sueo hubo movimientos involuntarios constantes, en los
ltimos 15 minutos movimientos ms agresivos que solo cesaron cuando el
ratn despert, la recuperacin fue poco violenta.
El ratn problema presento prdida de control motriz y desorientacin menores
que el testigo, durante el tiempo de sueo los movimientos involuntarios
tambin estuvieron presentes, la recuperacin fue ms tardada y ms agresiva
tras despertar.

Ratones testigo

Ratn

1
2
3
4
5
6
7
8
Promedio
S
S2

Tiempo
de
induccin
seg
150
160
139
510
349
240
119
113
222.5
140.306807
19686

Tiempo de Peso
sueo seg
ratn
3960
5180
3236
5315
2186
3600
1320
1729
3315.75
1500.08445
2250253.36

12.8
10.6
10.4
11.1
13
11.2
14.7
8.9

del Peso
del Peso
hgado
relativo
0.5338
0.6614
0.76
0.9862
0.4729
0.3125
0.997
0.6025

4.17%
6.24%
7.30%
8.88%
3.63%
2.79%
6.78%
6.76%
5.82%
2.0782
4.3192

Ratones problema

Ratn
1
2
3
4
5
6
7
8
Promedio
S
S2

Tiempo
de
induccin
180
291
454
1800
390
222
1346
669
638.144446
407228.334

Tiempo
de
sueo
1658
330
2490
1200
960
435
1178.83333
808.814049
654,180.1659

Peso
ratn
11.2
10
11.5
10.2
10.6
10
15
9.7

del Peso del Peso

hgado
relativo
0.472
4.21%
0.7777
7.77%
0.8677
7.54%
0.9598
9.41%
0.5818
5.48%
0.5765
5.76%
1.052
7.01%
0.7377
7.6%
6.84%
1.6256
2.6426

Tiempo de induccion del sueo

2000
1800
1600
1400
Raton testigo

1200
Tiempo (seg)

Raton problema

1000
800
600
400
200
0

Eq 1 Eq 2 Eq 3 Eq 4 Eq 5 Eq 6 Eq 7 Eq 8

Nota el ratn problema uno, jams se durmi, durante la prueba.

Como se observa en la grfica en la mayora de los ratones el tiempo de

induccin del sueo es mayor en los ratones problema que en los ratones
testigo, es decir los ratones que no haban sido previamente administrados con
el frmaco presentaron el efecto ms rpido.

Prueba T student.
Tiempo de induccin del sueo
Grados de libertad: 8+7 -2= 13
Ho= M1-M2=0
s=

t=

(222.5669 )(0)
=1.9361
230.61

[ ]

( 81 ) 19686+ ( 71 ) 407228.334 1 1
+ =230.61
8+72
8 7

Considerando un erros de 5%, para una grfica de 2 colas, el valor de t debe

encontrarse entre -2.16 y 2.16., debido a que el valor de t se encuentra dentro

del rango se acepta la hiptesis nula, es decir no hay evidencia significativa en

los datos estadsticos que indique que el valor de las medias no es igual.

Tiempo de sueo
6000
5000
4000
Tiempo (min)

Raton testigo
Raton problema

3000
2000
1000
0

Eq 1 Eq 2 Eq 3 Eq 4 Eq 5 Ea 6 Eq 7 Eq 8

Nota: No se tiene registro de tiempo de sueo para los ratones problema 1 y 5.

En la grfica se muestra que el tiempo de sueo es mucho mayor para los

ratones que no haban sido inyectados anteriormente con el frmaco, que para
los ratones que ya haban sido inyectados.

Prueba T student.
Tiempo de sueo
Grados de libertad: 8+6 -2= 12
Ho= M1-M2=0

s=

t=

(3315.751178.83333 ) (0)
=3.1426
679.96

[ ]

( 81 ) 2250253.36+ ( 61 ) 654,180.166 1 1
+ =679.96
8+ 62
8 6

Considerando un error de 5%, el valor de t debe encontrarse entre -2.179 y

2.179, ya que el valor de t no se encuentra dentro del rango establecido se
rechaza la hiptesis nula, es decir las medias de las 2 poblaciones no son
iguales, por lo que se establece que hay una lata variacin entre el tiempo del
sueo de los ratones problema y el tiempo de sueo de los ratones testigo.

Peso relativo del hgado de los ratones

10.00%
9.00%
8.00%
7.00%

peso relativo en porcentaje

6.00%

Raton testigo

5.00%

Raton problema

4.00%
3.00%
2.00%
1.00%
0.00%

En trminos generales se observa que el peso del hgado del ratn problema
es mayor que el peso del hgado del ratn testigo en todos los equipos.

Prueba t student
Peso relativo de los hgados del ratn
Grados de libertad= 14
Ho : M1-M1=0

s=

[ ]

( 81 ) 4.3192+ ( 81 ) 2.6426 1 1
+ =0.87022
8+ 82
8 8

t=

(5.526.84 ) (0)
=1.5168
0.87022

Considerando un error alfa de 5%, para una grfica de 2 colas, el valor de t

debe estar entre -2.145 y 2.145. Es decir se acepta la hiptesis nula ya que
-2.145 < t < 2.145., es decir la dado que la hiptesis nula estableca que la
diferencia de medias era igual a 0, podemos concluir que no existe evidencia
en contra de que las medias de las dos muestras sean iguales, o bien, no se
han encontrado diferencias estadsticamente significativas, entre la variacin de
los pesos de los ratones testigo y problema.

DISCUSIN DE RESULTADOS:
En la prctica se observ que los ratones que presentaron fueron
administrados previamente con dosis bajas de pentobarbital mostraron un
menor tiempo de la induccin del sueo, y que los ratones que no haban
recibido previamente administracin del frmaco en cuestin presentaron
menor tiempo de induccin del sueo; la prueba t student no permite
comprobar que la diferencia entre los tiempos de induccin de las dos
poblaciones haya sido significativamente mayor, por otro lado, respecto del
tiempo de sueo, se observa una mayor diferencia entre las dos poblaciones,
es decir los ratones previamente inyectados con pentobarbital tienen un tiempo
de sueo significativamente menor que el de los ratones testigo.

Finalmente el peso relativo de los hgados de los ratones es ligeramente menor

para los ratones testigo que para los ratones problema, sin embargo a prueba t
de student establece que no hay una diferencia significativa estadsticamente.

Por ende se puede decir que lo ratones que han sido administrados
previamente presentan una cierta tolerancia a los efectos causados por el
pentobarbital a diferencia de los ratones que no han sido administrados
previamente, el tiempo de induccin de sueo indica que hay una mayor
resistencia a la dosis, y el tiempo de sueo que el efecto y el tiempo de vida
media del frmaco son menor, intuyendo que el organismo ha desarrollado un
proceso de metabolismo del frmaco ms rpido, o bien respuestas
compensadoras de los efectos.

CONCLUSIONES:

Se demostr el desarrollo de tolerancia por el pentobarbital, un barbitrico con

efectos hipnticos, sedantes y anestsicos probando que administraciones de
dosis bajas del frmaco causan una tolerancia a la dosis que normalmente
causa el efecto, en este caso el efecto evaluado fue tiempo de induccin de
sueo y tiempo de sueo.
A su vez se observaron los efectos sedantes del pentobarbital, segn las
observaciones el sujeto administrado presenta prdida del control motriz y de la
orientacin, y a dosis mayores se induce el sueo, hay una recuperacin
violenta y efectos secundarios como movimientos involuntarios.

CUESTIONARIO:
1.- Describa los efectos que producen los barbitricos sobre el Sistema
Nervioso Central:
Los barbituricos a dosis bajas afectan en primer lugar a las partes del cerebro
de mayor complejidad, el neocortex, pero con dosis mayores sus efectos se
extienden a zonas mas inferiores del sistema nervioso central, hasta que
finalmente se deprimen los centros bulbares y la medula espinal. Su accion
inicial es exitadora, debido a que la corteza se libera de una inhibicion que
sobre de ella parece ejercer la formacion reticular. Mas tarde el control
excitatorio cortical de la formacion reticular disminuye y a continuacion se
establece la somnolencia. Los barbituricos originan un desequilibrio entre los
mecanismos cerebrales inhibidores y facilitadores actuando sobre la corteza y
la formacion reticular que son muy susceptibles a estos farmacos. A dosis
mayores bloquean la actividad de la formacion reticular. En el hombre, dosis
bajas determinan una rapida actividad del electroencefalograma, con dosis
mayores aparece somnolencia y sueo con ondas lentas dominantes y la
aparicion de picos de sueo.
Entre las acciones farmacologicas de los barbituricos sobre el sistema nervioso
central destacan las siguientes: sedacion, hipnosis, anestesia general (a dosis
altas), efecto anticonvulsivante, analgesia, efectos sobre el comportamiento,
aparato respiratorio (depresion ligera de respiracion o incremento de esta
depresion dependiendo la dosis), aparato cardiovascular (a dosis bajas puede
producir ligera hipotension y discreta bradicardia), tracto gastrointestinal
(disminucion del tono de la musculatura intestinal y la amplitud de las

contracciones ritmicas) aparato urinario (a concentraciones anestesicas

disminuyen la diuresis), utero (en anestesia intravenosa prolona el parto). 4
2.- Investigue que otros frmacos pueden presentar tolerancia metablica, el
mecanismo a travs del cual se produce y las consecuencias que esto tiene
sobre la actividad farmacolgica del compuesto.
La tolerancia se refiere a la disminucin de los efectos de un frmaco producida
por su consumo crnico; es decir. Para conseguir el mismo efecto que lo que
se daba anteriormente se tiene que aumentar la dosis.
Morfina: Se metaboliza fundamentalmente en el hgado mediante las enzimas
del citocromo P450 2D6, pero tambin se metaboliza parcialmente en el
cerebro y los riones. Los principales metabolitos son el 3-glucurnido, el 6glucurnido y el 3,6-glucurnido. Si se administran dosis muy altas de morfina,
el 3-glucurnido antagoniza los efectos de la morfina produciendo hiperalgesia
y mioclono. Este metabolito es el responsable del desarrollo de tolerancia a la
morfina.5 En una persona que no ha probado morfina, una dosis de 100mg
puede producir efectos sedantes e incluso la muerte, mientras que en una
persona tolerante se pueden consumir 4000mg sin mostrarse sedacin.
Diazepam: La tolerancia se produce por una desensibilizacin de los
receptores GABA y una sensibilizacin incrementada del sistema de
neurotransmisores
excitadores glutamato tales
como
receptores
de
glutamato NMDA. Ocurren como resultado del intento del cuerpo de superar los
efectos del frmaco. Los consumidores crnicos de benzodiacepinas se
pueden hacer muy tolerantes: partiendo de una dosis inicial de 5 a 10mg
pueden llegar a consumir una dosis de 1000mg/da para conseguir los mismos
efectos.
Herona: El mecanismo de accin es en gran parte determinado por el perfil de
la morfina como tpico en un opioide, teniendo una alta afinidad a los
receptores opiceos 2 1. Se da rpidamente tolerancia a la capacidad de
produccin de euforia, pero ms lentamente a los efectos gastrointestinales,
con lo cual se pueden conseguir efectos peligrosos escalando la dosis. La
dosis media pura va de 5-10 mg de herona. Si una persona utiliz los opiceos
durante mucho tiempo, la dosis requerida de drogas puede aumentar hasta 4.2
veces hasta 20-40 mg, la dosis para la administracin crnica puede aumentar
indefinidamente hasta la ocurrencia de muerte por enfermedad o por
complicaciones concomitantes.6

4 Velasco. A, lvarez. F. compendio de psiconeurofarmacologia. 1 edicin.

Ediciones Daz de Santos, S.A. Madrid. Pg. 104-107.
5 VADEMECUM. Morfina. (En lnea) Disponible en:
http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/m061.htm. Consultado el 20 de
octubre de 2014.

3.- Investigue que otras pruebas y mtodos sera necesario realizar, adicionales
al peso del hgado, para demostrar que efectivamente el efecto observado en el
sueo producido por el pentobarbital se debe a una induccin de los sistemas
microsomales presentes en el hgado y describa alguno de ellos.
Enzimas biliares, Fosfatasa alcalina: Localizada en las membranas
microsomales y en las que forman los canalculos biliares de los hepatocitos es
secretada normalmente en bilis y liberada en sangre en respuesta a colestasis
y a la induccin farmacolgica de pentobarbital.

6 Ferrn. N, et al. Farmacologa y Endocrinologa del Comportamiento. 1

edicin. Editorial UOC. Barcelona. 2012. Pg. 46-48.