Determinación de Biomasa

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERA
AGROINDUSTRIAL
Alumnos:
Alvarado Yupanqui, Luis Miguel
Tacanga Carhuallay, David
Garca Rosas, Arturo
Docente:
Ing. Guillermo Linares Lujan
Curso:
Biotecnologa de los P.A.I.
Ciclo:
IX A
TRUJILLO PER
2015
[ DETERMINACIN DE BIOMASA ]
16 de abril de 2015
DETERMINACIN DE BIOMASA
Mtodo de Recuento En Cmara De Neubauer, Peso Seco Turbidimetra
I.
INTRODUCCIN
En la agroindustria y en sus aplicaciones es importante conocer el nmero de
microorganismos presentes en una muestra. Este conocimiento puede ser utilizado
en estudio de curvas de crecimiento, anlisis de alimentos, preparaciones de
inculos para fermentacin, etc.
Un parmetro clave en el modelado y monitoreo del funcionamiento de plantas de
agroindustriales dedicadas a procesos de fermentacin, panificacin entre otros en
donde se utilicen inculo es la concentracin de biomasa. Biomasa es un trmino
general que se refiere a los microorganismos presentes en un sistema. Existen
muchas maneras de medir la concentracin de biomasa, como por ejemplo masa,
volumen, extensin linear de filamentos, dispersin de luz, conteo de clulas u
organelos. Existen diferentes mtodos para cuantificar el nmero de
microorganismos o peso (biomasa) de clulas microbianas en un cultivo; los
mtodos pueden ser directos e indirectos.
Entre los directos se puede mencionar a la determinacin de peso seco y el recuento
de clulas en cmara de Neubauer.
La determinacin de peso seco es un mtodo de cuantificacin muy utilizado en
cultivos de gran densidad, sobre todo para hongos y levaduras. Como los cultivos
se someten a varios procesos (filtracin, lavado, secado) se pueden causar prdidas
importantes de biomasa y errores en la cuantificacin. El mtodo de cuenta directa
en cmara tiene la ventaja de ser muy rpido y econmico, aunque no se pueden
distinguir las clulas viables y no viables. Se puede calcular el nmero de
microorganismos en una muestra a partir del volumen de la cmara y de las
diluciones de la muestra que sean necesarias. Sin embargo, tiene el inconveniente
de que la observacin y cuantificacin se dificultan en clulas muy pequeas (1 5
m) o en poblaciones de baja densidad debido al pequeo volumen de muestra que
se utiliza (0.1 0.2 mm3) (Aquiahuati, 2004).
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Entre los indirectos podemos mencionar a Turbidimetra y Nefelometra las cuales

nos permiten obtener aproximadamente la cantidad de biomasa de una muestra.
II.
OBJETIVOS
Determinar la concentracin de clulas por conteo en cmara de Neubauer.

Expresndolas en unidades de clulas/mL.
Determinar la biomasa presente en una solucin de levadura mediante diferentes
mtodos de determinacin de biomasa.
Aprender y conocer los mtodos ms empleados en la determinacin de biomasa.
Comparar estadsticamente los valores de concentracin obtenidos; de manera
general y manera aleatoria, mediante los mtodos de variabilidad y desviacin
estndar.
III.
MARCO TERICO
A) Mtodos directos de determinacin de biomasa: Se basan en el nmero de
clulas o en el peso celular, dentro de estos mtodos podemos distinguir a los
siguientes:
1. Mtodos gravimtricos
1.1 Peso hmedo
Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la
separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. Es una tcnica til para
grandes volmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda
atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad
de lquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de clulas
bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta
entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformacin celular.
Para corregir el peso hmedo se determina la cantidad de lquido que queda retenida
en el espacio intercelular luego de una centrifugacin, para ello se utilizan
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soluciones de polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el

espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.
1.2 Peso seco
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en trminos
de peso seco por unidad de volumen, ya sea como slidos en suspensin totales
(SST) o slidos en suspensin voltiles (SSV). Las clulas se separan del lquido
bien por centrifugacin bien por filtracin. Se expresan en g.m.s/mL.
La principal desventaja de estas tcnicas es que su determinacin incluye no slo
microorganismos activos sino microorganismos muertos, material inerte, polmeros
extracelulares y materia orgnica adsorbida. Adems, no puede aplicarse cuando
los sustratos a degradar son insolubles. Los mtodos gravimtricos son simples,
pero consumen bastante tiempo y son poco reproducibles. A la vez este mtodo este
mtodo los componentes voltiles de las clulas pueden perderse en el secado y
puede existir alguna degradacin. Tambin la muestra seca pude recobrar humedad
durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene humedad relativa alta.
2. Mtodos microscpicos de recuento celular en cmaras

Existen diversos tipos de cmaras para el recuento de microorganismos tales como
la cmara de Neubauer. Thoma, Brker, Ttirk, Fuchs-Rosenthal, Mal assez, Petroff
H ttrser, etc. El recuento de microorganismos se realiza en la cuadrcula central de
la cmara y se multiplica por la profundidad, obtenindose el nmero de
microorganismos por unidad de volumen (nmero de clulas/ml, generalmente).
El recuento de microorganismos en cmaras no es un mtodo muy exacto debido a
las irregularidades en la distribucin de la muestra. Adems, pueden confundirse
las clulas con otras formas orgnicas e inorgnicas existentes en el medio y no
permite distinguir clulas vivas de clulas muertas.
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CMARA DE NEUBAUER
Es un instrumento utilizado en medicina y biologa para realizar el recuento de

clulas en un medio lquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, lquido
cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc. (Ames & Caedo, 2004).
Figura 1.Cmara de Neubauer comercial.
Esta cmara de contaje est adaptada al microscopio de campo claro o al de

contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente
deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un
diamante una cuadrcula de dimensiones conocidas. Se cubre la cmara con un
cubrecmaras que se adhiere por simple tensin superficial.
Luego se introduce el lquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una
dilucin previa con un diluyente, por capilaridad entre la cmara y el cubrecmara;
puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultneamente. Para
contar las clulas se observa el retculo al microscopio con el aumento adecuado y
se cuentan las celulas.
Con base en la cantidad de clulas contadas, conociendo el volumen de lquido que
admite el campo del retculo, se calcula la concentracin de clulas por unidad de
volumen de la muestra lquida inicial.
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La frmula de valoracin del nmero de clulas (vlida universalmente) es la

siguiente: Partculas por mL=(partculas contadas) / (superficie contada (mm) x
profundidad de la cmara(mm) x dilucin) (Castillo, 2004).
En el retculo central, la cmara de Neubauer posee un cuadrado primario que

contiene nueve cuadrados secundarios cada uno de ellos divididos a su vez en 16
cuadrados terciarios, el cuadrado central contiene 25 cuadrados, cada uno de ellos
dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este cuadrado
central se cuentan los hemates, utilizando slo los cuadrados de los bordes del
terciario central y uno de los centrales.
Ventajas
equipo sencillo
rapidez para obtener los resultados
facilidad para observar la morfologa de los microorganismos presentes.
Desventajas
No se diferencian los microorganismos vivos de los muertos,
Es tedioso
No es til para recuento de poblaciones con baja concentracin de bacterias.
No se usa en hifas o mohos.
EL COEFICIENTE DE VARIACIN
Es una medida que se emplea fundamentalmente para:
1. Comparar la variabilidad entre dos grupos de datos referidos a distintos sistemas
de unidades de medida. Por ejemplo, kilogramos y centmetros.
2. Comparar la variabilidad entre dos grupos de datos obtenidos por dos o ms
personas distintas.
3. Comparar dos grupos de datos que tienen distinta media.
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4. Determinar si cierta media es consistente con cierta varianza.

El Coeficiente de Variacin muestral se denota y se define como:
)
(
DESVIACIN ESTNDAR
La desviacin estndar o desviacin tpica es la raz cuadrada de la varianza. Es decir la
raz cuadrada de la media de los cuadrados de las puntuaciones de desviacin. Esta
medida se representa por .
)
= (
As la varianza es la media de los cuadrados de las diferencias entre cada valor de

la variable y la media aritmtica de la distribucin.
Aunque esta frmula es correcta, en la prctica interesa realizar inferencias poblacionales,
por lo que en el denominador en vez de n, se usa n-1 (Correccin de Bessel) Esta ocurre
cuando la media de muestra se utiliza para centrar los datos, en lugar de la media de la
poblacin.
=
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)
=(
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IV.
16 de abril de 2015
MATERIALES Y MTODO
A. Materiales
4.1.1 Materiales biolgicos
Levadura
Agua destilada
4.1.2
Material de laboratorio
Tubos de ensayo
Lminas cubreobjetos
Vaso de precipitacin
Pipeta
4.1.3
Equipos
Microscopio
Balanza electrnica
Cmara de Neubauer
Espectrofotmetro
B. Metodologa
a)
Para determinacin utilizando cmara de Neubauer.
PASO 1. Preparacin de la muestra.

Dependiendo del tipo de muestra a medir, se ha de habr de preparar una muestra
con una concentracin apta para su recuento.
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Figura 2. Preparacin de la muestra.

PASO 2. Introduccin de la muestra en la cmara de Neubauer
Figura 3. Introduccin de la muestra en la cmara de Neubauer
PASO 3. Preparacin y enfoque del microscopio.
Figura 4. Clulas viables para conteo.
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Figura 5. Orden de conteo en zig-zag.
Figura 6.Los sectores de conteo en la cmara de Neubauer.
PASO 4. Clculo de la concentracin.

( ) =
()
b)
Para determinacin de Peso Hmedo
Se tomaron muestras de 5 mL de la solucin inicial y se colocaron en tres

tubos de ensayos previamente pesados.
Luego los tubos son llevados a la centrifuga donde se hacen girar a 4 000
RPM, por un tiempo de 10 minutos.
Luego pasamos a pesar cada tubo de ensayo en la balanza analtica, anotamos
los pesos y luego promediamos.
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c)
Para determinacin de Peso Seco
Se tomaron muestras de 5 mL de la solucin inicial y se colocaron en cuatro

tubos de ensayos previamente pesados.
Los tubos de ensayo son llevados a la centrifuga donde se hacen girar a 4 000
RPM, por un tiempo de 10 minutos.
Luego pasamos a pesar cada tubo de ensayo en la balanza analtica y
anotamos los pesos.
Posteriormente, se llevan los tubos a estufa, a una temperatura de 105 C por
un tiempo promedio de 3 horas.
Pasado el tiempo anotaremos, los pesos y luego pasamos a sacaremos un
promedio.
Las ecuaciones que se determinarn son:
( + ) ( )
=
(= 5)
( + ) ( )
)=
(= 5)
Hallaremos el coeficiente de Variabilidad de las 4 repeticiones.
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MUESTRA ORIGINAL
4 tubos de ensayo previamente

pesados e identificados, para
luego agregar a cada tubo 5 mL de
muestra original.
CENTRIFUGADO
Los tubos pasan por un proceso de

centrifugado a 4000 RPM por un tiempo
de 10 minutos.
ESCURRIDO
Se somete un escurrido para separar las

clulas que fueron sometidas a
centrifugacin. Obteniendo el peso de
muestra hmeda/ mL de muestra original.
ESTUFA
Para la determinar el peso seco la muestra

anterior se somete a un proceso de secado,
colocando dichas muestras a la estufa a
una temperatura de 105C x 3 horas.
Obteniendo el peso de muestra seca/ mL
de muestra original.
Figura 7. Esquema de Mtodo Peso Hmedo y Peso Seco.
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d)
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Turbidimetra
La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a partculas de

una suspensin y cuantifica la luz residual transmitida. Estudios tericos y
experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de
bacterias, independientemente del tamao celular, tienen casi la misma absorbancia
por unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones
diluidas,
la
absorbancia
es
directamente
proporcional
al
peso
seco,
independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin embargo, se

encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o por UFC (Unidad
Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las clulas bacterianas son
diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de microorganismos totales o el
nmero de microorganismos viables de una suspensin bacteriana debe realizarse
una "curva de calibracin" con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es
posible relacionar Absorbancia (Densidad ptica) con el nmero de
microorganismos totales o con UFC.
Figura 8. Absorbancia en funcin de la concentracin celular bacteriana
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K: constante que vara con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del
peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de
la absorbancia (1/W0).
Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco
(g/ml-mg/ml).
La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para
suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una
absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley
de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede
involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de
absorcin.
Figura 9. Absorbancia en funcin del

Peso Seco
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Figura 10. Absorbancia en

funcin del nmero de m.o.s
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Para Determinacin de Turbidimetra
Se prepar una solucin acuosa con levadura, a partir de la cual se procedi

a preparar diluciones ( 1/100, 5/100000, 1/3, 1/10, 1/1, 3/1, M.O )
Con todas las diluciones y muestra original se procedi a colocarlas uno por
uno enceldas para leer la absorbancia en el espectrofotmetro.
Con estos datos se pas a realizar las siguientes graficas absorbancia vs peso
seco, absorbancia vs peso hmedo y absorbancia vs conteo celular.
Figura 11. Metodologa de turbidimetra
5/100000
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1/3
1/1
3/1
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V.
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RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1
MTODOS CMARA DE NEUBAUER
Segn Rodrguez et al (2005), los mtodos para estimar el nmero de

microorganismos medirn la cantidad de clulas. Los mtodos que cuantifican la
cantidad de clulas son tiles principalmente para enumerar organismos como
bacterias o levaduras, mientras los que miden la masa o actividad celular pueden
utilizarse para todos los microorganismos, incluidos los hongos filamentosos, en
los que es difcil cuantificar las clulas individuales. Segn lo expuesto por el autor
en nuestra prctica hicimos el conteo de levaduras por mililitro, para la
determinacin de su biomasa utilizando mtodos directos.
Tabla 1. Nmero de clulas y anlisis estadstico de la muestra analizada
utilizando la Cmara de Neubauer
METDO
CMARA DE NEUBAUER
Clulas Promedio
Concentracin de Levaduras/mL
252.78
6.3 107
Desviacin Estndar
33.481
Coeficiente De Variacin
13.245
Segn Unam (1986), en la tcnica de conteo de clulas hay que tener en cuenta que
en esta tcnica uno de los factores que afecta la observacin de las clulas de
levadura es la correcta dilucin de la muestra empleada se puede decir que si
durante el conteo se observan aproximadamente 69 clulas la muestra se encuentra
muy concentrada, mientas que si se observan menos de 20 clulas, la muestra se
encuentra muy diluida. En nuestra experiencia se observ las clulas sin dificultad
lo que permite obtener un resultado ms confiable.
La concentracin de levaduras (levaduras/mL) encontradas, por el mtodo de
conteo directo en la cmara de Neubauer fue de 6.3x107 Clulas de levaduras/mL.
Los datos encontrados despus del conteo nos arrojan valores promedios de 252.78
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levaduras, con una desviacin estndar de 33.481, por consiguiente un coeficiente

de variacin de 13.245%.
Podemos observar que el coeficiente de variabilidad es
13.245 %
aproximadamente; esto nos indica el grado de variabilidad o dispersin que existe

entre los datos. Segn Nez (1992) si CV es menor o igual que 20% se dice que
el promedio es representativo, o que los datos son homogneos y si el CV es mayor
al 20%, el promedio no es representativo de los datos, o los mismos no son
homogneos, es por ello que afirmamos que los datos son homogneos y el mtodo
de recuento en microscopio utilizando la cmara de Neubauer es adecuado para la
determinacin de biomasa. En nuestro caso tomamos como referencia un CV
menor a 30% para aceptar los datos.
Muoz (2007), el conteo en la cmara de Neubauer debe efectuar en los 25
cuadrantes de la cmara, hasta obtener un nmero de 300 clulas con el fin de tener
una confianza del conteo del 90% en nuestro caso por motivos de tiempo no se
puedo efectuar el conteo de todos estos, se tom datos de 9 de ellos estos datos
pueden verificarse en la tabla de anexos; a pesar de ello se obtuvo un CV aceptable
debido a que todos estos cuadrantes presentaban similar nmero de clulas.
Es importante contar en total 10 cuadrados, cinco en cada cmara, es decir de la
cmara de arriba y la de abajo (Aquiahuati, 2004).
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Tabla 2. Conteo celular de la muestra original y de cada dilucin
Tubos
Diluciones
Concentracin
Conteo Celular
(Cel/mL)
Tubo 1
1/100
5/100000
1/10
1/3
1/1
3/1
Muestra Original
0.01
0.00005
0.1
0.333333333
1
3
-
631944.4444
3159.722222
6319444.444
21064814.81
63194444.44
189583333.3
63194444.44
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Tubo 7
Absorbancia
0.035
0.049
0.374
0.798
1.21
1.511
1.653
2
1.8
1.6
Absorbancia
1.4
1.2
y = 8E-09x + 0.4293
R = 0.5864
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
50000000
100000000
150000000
200000000
Conteo de clulas (Cel/mL)
Figura 12. Relacin de absorbancia vs. Conteo de clulas (Cel/mL)
Segn Rodrguez, et al (2005), nos seala que para que sean visibles las trazas de
turbidez es necesario ms de un milln de clulas por ml., como para ser medida por un
espectrofotmetro. Por lo que la turbidimetra no es un mtodo til para medir la
contaminacin de lquidos para un nmero relativamente pequeo de bacterias y o
levaduras.
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Se comprob en la prctica con xito, en el experimento, ya que tanto la muestra original

analizada como la muestra tienen una cantidad considerable de clulas; adems, todas las
muestras de concentraciones diferentes se leyeron 550 nm de longitud de onda, cercano
a 540 nm, (longitud de onda comnmente utilizada para la determinacin de crecimiento
por el mtodo de turbidimetra en las investigaciones).
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VI.
16 de abril de 2015
CONCLUSIONES
Se determin la biomasa presente en una solucin de levadura utilizando la
cmara de Neubauer y se expres en unidades de clulas/ml obtenindose un
resultado de 6.95x107, con un promedio de 252.78 clulas por cada cuadro de 0,2
mm x 0,2mm y un coeficiente de variabilidad de 13.245 % aproximadamente.
Se aprendi y conoci los mtodos ms empleados en la determinacin de
biomasa.
Se Compar estadsticamente los valores de concentracin obtenidos; de manera
general y manera aleatoria, mediante los mtodos de variabilidad y desviacin
estndar.
VII.
RECOMENDACIONES
Para realizar un recuento en cmara de Neubauer se recomienda agitar bien

la dilucin con el fin de tener una muestra ms homognea y al momento de
colocar la muestra sobre la cmara tener la precaucin para no derramarla
sobre la placa cubreobjetos de tal manera que el conteo sea el adecuado.
Calibrar el espectrofotmetro antes de tomar las medidas, ya que este pudo

haber sido utilizado con otras sustancias en experimentos anteriores.
El llenado en las celdas de Neubauer se debe hacer correctamente para evitar

que se pierda parte de la muestra.
Se recomienda calibrar bien el microscpio, con la finalidad de poder
observar de manera ms clara las levaduras, de esta forma facilitaremos el
conteo de las clulas.
Mirar en el microscpio y contabilizar bien las clulas, las cuales no se
tomarn las clulas que estn en la derecha del cuadro ni las de la parte
inferior del mismo cuadro, ya que ellas formaran parte del siguiente cuadro.
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Una inadecuada distribucin de la muestra sobre la superficie del

portaobjetos puede ocasionar serios errores.
VIII.
BIBLIOGRAFA
Arniz,C., Isac,L. Y Lebrato, J. (2000).Determinacin de la biomasa en procesos
biolgicos. Sevilla.
Aquiahuati M. (2004), Manual de Prcticas: Laboratorio de Microbiologa Celular,
Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, Departamento de
Biotecnologa, 1era Edicin, Pg. 63-68.
Muoz, A. (2007). Microbiologa. Madrid: Editorial Paraninfo.
Nuz, A. (1992). Estadstica Basca para planificacin. Madrid: Siglo XXI
Editores.
Rodrguez, E., Gamboa, M., Hernndez, F. Garca, J. (2005). Bacteriologa
General: Principios y prcticas de laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica.
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16 de abril de 2015
ANEXOS
Clculos para determinar la cantidad de unidades de levaduras/ml:
/ =
/ =
/ =
ING. AGROINDUSTRIAL
252.78 levaduras
0.2 x 0.2 x 0.1 mm3
252.78 levaduras
4 x 103 mm3
63195 levaduras 1000 mm3

x
mm3
1 ml
levaduras
= 6.31 x 107
ml
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ANEXO 1 .Fotos de los pasos a seguir para determinar la biomasa.
Figura 1. Suspensin de levadura en

agua destilada desconocido.
Figura 3. Unas gotas de la muestra

tomada se colocan sobre la cmara de
Neubauer.
Figura 2. Toma de muestra de la

suspensin de levadura.
Figura 4. Observacin en el
microscopio.
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CUESTIONARIO
1. Hacer una comparacin entre el mtodo de cmara de Neubauer y el
mtodo de peso seco.
Cmara de Neubauer
Mtodo de peso seco
- La medicin es directa
- La medicin es indirecta
- Es muy tedioso, y tiene el inconveniente de

que la observacin y cuantificacin se
dificultan en clulas muy pequeas (1 5 m)
o en poblaciones de baja densidad debido al
pequeo volumen de muestra que se utiliza
(0.1 0.2 mm3) (Aquiahuati, 2004).
- Es un mtodo de cuantificacin muy

utilizado en cultivos de gran densidad, sobre
todo para hongos y levaduras.
- El peso seco (contenido de slidos) de las
clulas bacterianas que se encuentran en una
suspensin se obtiene por el secado de un
volumen en un horno a 105C hasta peso
- Tiene la ventaja de ser muy rpido y constante.
econmico, aunque no se pueden distinguir las
clulas viables y no viables.
- Como los cultivos se someten a varios
procesos (filtracin, lavado, secado) se
- No es muy sensible, se necesitan al menos pueden causar prdidas importantes de
106 bacterias/mL para que sean observadas al biomasa y errores en la cuantificacin.
microscopio.
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Entre los indirectos podemos mencionar a Turbidimetra y Nefelometra las cuales

Determinar la concentracin de clulas por conteo en cmara de Neubauer.

soluciones de polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el

2. Mtodos microscpicos de recuento celular en cmaras

Es un instrumento utilizado en medicina y biologa para realizar el recuento de

Figura 1.Cmara de Neubauer comercial.

Esta cmara de contaje est adaptada al microscopio de campo claro o al de

La frmula de valoracin del nmero de clulas (vlida universalmente) es la

En el retculo central, la cmara de Neubauer posee un cuadrado primario que

4. Determinar si cierta media es consistente con cierta varianza.

As la varianza es la media de los cuadrados de las diferencias entre cada valor de

Para determinacin utilizando cmara de Neubauer.

PASO 1. Preparacin de la muestra.

Figura 2. Preparacin de la muestra.

Figura 3. Introduccin de la muestra en la cmara de Neubauer

PASO 3. Preparacin y enfoque del microscopio.

Figura 4. Clulas viables para conteo.

Figura 5. Orden de conteo en zig-zag.

Figura 6.Los sectores de conteo en la cmara de Neubauer.

PASO 4. Clculo de la concentracin.

Para determinacin de Peso Hmedo

Se tomaron muestras de 5 mL de la solucin inicial y se colocaron en tres

Para determinacin de Peso Seco

Se tomaron muestras de 5 mL de la solucin inicial y se colocaron en cuatro

Las ecuaciones que se determinarn son:

Hallaremos el coeficiente de Variabilidad de las 4 repeticiones.

4 tubos de ensayo previamente

Los tubos pasan por un proceso de

Se somete un escurrido para separar las

Para la determinar el peso seco la muestra

Figura 7. Esquema de Mtodo Peso Hmedo y Peso Seco.

La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a partculas de

independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin embargo, se

Figura 8. Absorbancia en funcin de la concentracin celular bacteriana

Figura 9. Absorbancia en funcin del

Figura 10. Absorbancia en

Para Determinacin de Turbidimetra

Se prepar una solucin acuosa con levadura, a partir de la cual se procedi

Figura 11. Metodologa de turbidimetra

MTODOS CMARA DE NEUBAUER

Segn Rodrguez et al (2005), los mtodos para estimar el nmero de

levaduras, con una desviacin estndar de 33.481, por consiguiente un coeficiente

aproximadamente; esto nos indica el grado de variabilidad o dispersin que existe

Tabla 2. Conteo celular de la muestra original y de cada dilucin

Conteo de clulas (Cel/mL)

Figura 12. Relacin de absorbancia vs. Conteo de clulas (Cel/mL)

Se comprob en la prctica con xito, en el experimento, ya que tanto la muestra original

Para realizar un recuento en cmara de Neubauer se recomienda agitar bien

Calibrar el espectrofotmetro antes de tomar las medidas, ya que este pudo

El llenado en las celdas de Neubauer se debe hacer correctamente para evitar

Una inadecuada distribucin de la muestra sobre la superficie del

63195 levaduras 1000 mm3

ANEXO 1 .Fotos de los pasos a seguir para determinar la biomasa.

Figura 1. Suspensin de levadura en

Figura 3. Unas gotas de la muestra

Figura 2. Toma de muestra de la

Mtodo de peso seco

- Es muy tedioso, y tiene el inconveniente de

- Es un mtodo de cuantificacin muy

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