Prueba de Milln

R. de Milln: Solucin de mercurio y cido ntrico; contiene nitrato y nitrito de los iones
mercurio (I) y mercurio (II), es decir, Hg2(NO3)2 y Hg(NO2).
El reactivo de Milln reconoci a la tirosina (aminocido neutro) y a la albmina (protena que
contiene a la tirosina entre sus 585 aminocidos) por presentar un grupo hidroxi-fenilo que
posee ninguna sustitucin en la posicin 3 y 5 de su anillo aromtico.
El mecanismo de reaccin se basa en que en presencia de un medio cido (cido ntrico del
reactivo), las protenas se desnaturalizan dando un precipitado blanco, la cual se debe a la
adicin del -N=O. (ver fig.1)

Fig. 1
Dicha adicin sucede en la posicin 3 o 5 y se explica, ya que el grupo -OH aumenta la
densidad electrnica del anillo, donde los pares no compartidos del oxgeno se deslocalizan
hacia el anillo y su densidad electrnica aumenta en la posicin meta (a partir del radical). En
esa posicin hay mayor estabilidad por la fuerte atraccin que sufre el nitrgeno por los
electrones deslocalizados del oxgeno (fig.2). Este mecanismo tambin sucede en la sntesis de
hormonas tiroideas (fig. 3).

Fig. 2

Fig. 3

Luego, debido al calentamiento, el precipitado blanco se vuelve rojo gradualmente por la

reaccin entre el mercurio (I) con el grupo OH de la tirosina (fig. 4). Por eso, solo en el caso
de la albmina se vio un rosado salmn acompaado con un precipitado blanco, lo cual se
explica por la presencia de algunas tirosinas en su cadena peptdica. Pero en el caso de peptonas
(pptidos cortos) o de la presencia nica de tirosinas, se observa una solucin roja por la adicin
del mercurio en todos los compuestos nitrogenados formados.
Fig. 4

La muestra problema 1-AM no present una reaccin positiva ante el reactivo de milln, lo que
significa que no posee ningn radical fenlico y por ende, que no sea tirosina.

Atkins, P. W., & Jones, L. L. (2006). Principios de Qumica. Los caminos del
descubrimiento. Espaa: Editorial Mdica Panamericana. Pg. 693 y 694.

Caro Quispe, R. O., Centeno Saire, F., & Heredia Domenech, J. C. (2008). Reacciones
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Pontificia Universidad Catlica Madre y Maestra. Recuperado el 23 de 11 de 2014, de

http://es.slideshare.net/xolcuc/2da-9na-practica-bioqumica-i

Conclusin
El reactivo de milln solo sirve para reconocer a la tirosina o a sus derivados, ya que es el nico
de los 20 aminocidos principales que posee como radical un grupo fenlico.
Cuestionario
7. Por qu el cido ntrico produce una coloracin amarilla cuando se pone en contacto con un
pedazo de cabello o piel?
Porque ambos poseen queratina, protena que posee 18 aminocidos distintos, de los cuales
resalta el triptfano pero donde tambin se encuentra la tirosina. Ambos, son compuestos que
tienen como radical un grupo bencnico pudiendo reaccionar con el cido ntrico, es decir,
ocurre la reaccin xantoproteica, la cual se caracteriza por dar productos nitrogenados amarillos.
Tambin, en la piel se produce dicha reaccin por presentar albmina en la epidermis.
8. Cmo separara Ud. una mezcla de aminocidos?
Por la diferencia en los puntos isoelctricos de los aminocidos, se podra utilizar la tcnica de
electroforesis. Donde se utiliza una solucin de diferentes aminocidos o protenas, una tira de
papel o de un gel, un amortiguador acuoso con un pH especfico y dos electrodos colocados en
los extremos del papel. La separacin se basa en las distintas velocidades de migracin que
presenta los diferentes aminocidos al aplicar un potencial elctrico, debido a la protonacin o
desprotonacin que sufrieron por estar en un punto isoelctrico diferente al suyo. Por eso, los
aminocidos con cargas positivas (los que ganaron H+) migrarn al electrodo negativo y los de
carga negativa al electrodo positivo.

9. Aplicacin de la reaccin con la ninhidrina en la cromatografa.

La ninhidrina toma el papel de revelador en la cromatografa de capa fina, donde las mezclas de
aminocidos son separadas en placas de capa fina de gel de slica, empleando como fase mvil
butanol: agua: cido actico (4:1:1). Y donde las manchas secas de los aminocidos se detectan
al rociar una solucin de ninhidrina, que produce manchas prpura sobre un fondo ligeramente
amarillento.

Mancilla, C. G., Castrejn, C. R., Rosas, T. M., Blanco, E. Z., & Prez, S. L. (s.f.).
Cromatografa de aminocidos. Universidad del Valle de Mxico, D.F.
http://sidibeauty.blogspot.com/2012/05/composicion-quimica-del-pelo.html
Revisado:
24/11/14
Beyer, Walter. 1987. Manual de Qumica Orgnica. 19 edicin. Editorial Revert.
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McMurry, John. 2008. Qumica orgnica. 7 Edicin. Eitorial Cengage Learning. Mxico.
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