CROMATOGRAFA DE PAPEL EN VINO

1- Objetivo: Determinar cualitativa y cuantitativamente los cidos tartrico y succnico

en la muestra de vino mediante cromatografa sobre papel por comparacin de
soluciones puras de dichos cidos.
2- Fundamento: La cromatografa de papel permite separar los cidos orgnicos
tartrico, mlico, lctico y succnico que se encuentran en el vino, y por comparacin
de soluciones patrones se puede apreciar la existencia de cada uno de los
mencionados.
3- Materiales:
Medio adsorbente: Papel Whatman N1 (circular).
Papel Whatman N1 (tiras longitudinales).
Equipo: caja de Petri, cuba cromatogrfica, pipeta capilar, palillo de madera, probeta.

4- Procedimiento:
A- CROMATOGRAFA LONGITUDINAL
Solvente: 200ml de N-Butanol + 200mg. de Azul Bromofenol, Acido Actico Glacial al
50%, las dos soluciones se mezclan en proporcin de 200 y 100 ml respectivamente.
Preparar el solvente y agregar en la cuba, la que debe quedar tapada para permitir
que los vapores saturen la cmara.
Tomar una tira de papel Whatman N 1, trazar una lnea con lpiz a 3cm del borde
inferior, sobre la cual se siembran las gotas de vino a estudiar con la ayuda de un
capilar.
Con otro capilar colocar 2 gotas de cada solucin testigo y del vino a analizar.
Esperar que seque cada una de las gotas.
Una vez seco el papel, despus de la segunda gota, colocar en la cubeta que contiene
el solvente, mojando tan slo el borde inferior de las hojas.
Tapar la cubeta en forma hermtica.
Una vez que el frente del solvente ha llegado a 3cm del borde superior de la hoja, se
saca el cromatograma, marcar rpidamente el frente del solvente con un lpiz y se
seca en corriente de aire fro y a la sombra para su revelado.
Al revelarlo se muestra de fondo azul y con manchas amarillas.
Efectuar clculos de los Rf.
1

Los cidos del vino se separan en el siguiente orden: en la parte ms baja se fija el
cido tartrico y en la parte superior el cido succnico.

Resultado:

Debido a los problemas difusionales, se

el Rf en un Rf de cabeza que considera el
superior y un Rf de cola que considera el
inferior de la mancha.

desdobla
borde
borde

Muestra

cabeza

cola

Rf cabeza

Rf cola

Ac. tartarico

5,6 cm

4,8 cm

0,32

0,27

Ac. succinico

14,4 cm

13,1 cm

0,81

0,74

Frente de solvente: 17,60 cm

Testigo

cabeza

cola

Rf cabeza

Rf cola

Ac. tartarico

7,7 cm

4,6 cm

0,44

0,26

Ac. succinico

14,5 cm

13,2 cm

0,82

0,75

Frente de solvente: 17,60 cm

B- CROMATOGRAFA CIRCULAR
Preparar el solvente y agregar 25 ml a la caja de Petri. Taparla para permitir que los
vapores saturen la cmara.
Tomar un disco de papel de filtro bien seco y apoyarlo sobre otro papel limpio (tocar
solo en los bordes del disco).
Cargar el capilar con solucin problema y secar por fuera, probar en otro trozo de
papel de filtro hasta lograr una gota que no se extienda demasiado. Sembrar en los
puntos de siembras previamente marcados en el papel y si fuese necesario secar la
gota y volver a sembrar.
Sembrar siguiendo el mismo procedimiento los testigos.
Con palillo: Cortar un trozo de palillo de aproximadamente 1,5 cm y colocarlo en el
centro del disco del papel.
Con hilo: Pasar una aguja con un hilo por el centro del disco de papel sacar la aguja y
dejar aproximadamente 7 cm de hilo.

Colocar el disco entre las dos partes de cajas de Petri, con el palillo suspendido de
modo que la parte astillada o el hilo pesque en el solvente. Dejar el conjunto hasta que
el solvente haya recorrido hasta el borde de la caja, lejos del calor y luz solar directa.
Retirar el papel y marcar rpidamente el frente del solvente con un lpiz.
Resultado:
Medicin de los Rf :
Consideramos el punto de la mancha de ms concentracin (ms intensa coloracin)
para la medicin de manchas, para los clculos de los Rf.
Muestra

medicin

Rf

Ac. tartarico

0,7 cm

0,37

Frente de solvente: 1, 9 cm
Testigo

medicin

Rf

Ac. tartarico

0,8 cm

0,42

Frente de solvente: 1, 9 cm

C- CROMATOGRAFA ELPTICA:
Proceder de la misma manera efectuando un corte de una porcin circular al papel de
filtro y colocar en la caja de Petri de manera que la cola de papel del sector circular
pesque el solvente.
Resultado:
Medicin de los Rf :
Consideramos el punto de la mancha de ms concentracin (ms intensa coloracin)
para la medicin de manchas, para los clculos de los Rf.
Muestra

medicin

Rf

Ac. tartarico

1 cm

0,38

Frente de solvente: 2, 6 cm
Testigo

medicin

Rf

Ac. tartarico

1,4 cm

0,52

Frente de solvente: 2, 7 cm
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CONCLUSIN:
Los valores de Rf obtenidos para testigo y muestra son muy prximos entre s,
por lo que el procedimiento utilizado es bastante satisfactorio para la
separacin e identificacin de cido tartrico y acido succnico mediante
cromatografa longitudinal. En tanto la cromatografa circular y la cromatografa
elptica es observo un poco ms la diferencia, debido a problemas difusionales, y
operativos.