CARACTERIZACIN FENOTPICA Y ECOFISIOLGICA DE ESPECIES DEL

COMPLEJO Fusarium graminearum (SCHWABE) AISLADAS DE MAIZALES DEL

NOROESTE ARGENTINO
Belizn1, M.M.E.; Parrado2, J. D.; Canteros2, F. H.; Sampietro1, D.A.
1

Facultad de Bioqumica, Qumica y Farmacia Universidad Nacional de Tucumn. Ayacucho 471 (4000).S.M.
de Tucumn. 2IIACS-INTA, Chaar Pozo Leales (4113), Tucumn, Argentina. melybelizan@hotmail.com

Abstract
Fusarium graminearum (Schwave) causes Gibberella ear rot in maize from northwest argentine.
It contaminates the grains with trichothecenes, mainly NIV, DON and their acetylated forms.
Intake of these mycotoxins is potentially toxic for both humans and animals. The morphological
species F. graminearum comprises several phylogenetical species not well characterized at
phenotypic level. We evaluated in vitro the impact of water activity (aw) at several values (0.99;
0.97 and 0,95), Temperature (10C and 25C) and commercial fungicides (azoxystrobin and
propioconazole, 0,5; 15 and 25 g/ml) on mycelial growth and sporulation of strains from these
phylogenetic species isolated in cornfields of northwest argentine . We also determined the
ability of these strains to generate disease on corn genotypes. Our results showed that F.
graminearum sensu estricto (Fgss) colonized maize medium faster than other species at 25C
and aw=0.99. The mycelial growth of Fgss and F. meridionale (Fm) was more affected by
azoxystrobin than F. boothii (Fb), while propioconazole caused the opposite effect. The Fm did
not produce macroconidia under permanent darkness. Cycles of 12 hours light/12 hoursdark
induce sporulation of Fm (3.7x10), Fb (4.3x10) and Fgss (5.9x10). In the conditions
prevailing in the field trial, all strains were pathogenic and equally aggressive on maize ears,
causing a 75-100% of the ear exhibiting the rot disease. However, the in vitro assays suggest
that the phylogenetic species of F. graminearum may have a different behavior in dispersion and
mycelial colonization of its host under specific environmental conditions.

Palabras claves: crecimiento micelial esporulacin - podredumbre de la mazorca Fusarium graminearum - mycelial growth sporulation - ear rot
Introduccin
Fusarium graminearum Schwabe es uno de los principales agentes etiolgicos de la
podredumbre de la mazorca de maz en el noroeste argentino (NOA). Generalmente los
granos afectados presentan una menor densidad que los cariopses normales y en
algunos casos se observa una prdida total de los mismos con la consecuente
disminucin del rendimiento. Sin embargo, el principal dao que provoca este hongo
es la contaminacin de los granos con tricotecenos, comnmente nivalenol (NIV),
deoxinivalenol (DON) y sus formas acetiladas (3-ADON, 15-ADON, o 4-ANIV), cuya
ingestin es potencialmente txica para humanos y animales. Estas sustancias inhiben
la sntesis proteica, y pueden generar inmunosupresin y dermatitis. Las estructuras
moleculares de estos tricotecenos son muy estables, siendo capaces de superar sin
alteraciones los procesos de elaboracin de alimentos y forrajes elaborados a partir de
grano contaminado, razn por la cual son un riesgo a la seguridad alimentaria local y
nacional.
Actualmente se considera F. graminearum un complejo de especies filogenticas
(complejo Fg). Entre ellas, se detect en maz del NOA predominantemente a F.
meridionale productor de NIV y en menor medida a F. boothii productor de DON. El
significado de esta diversidad gentica es ampliamente desconocido. La caracterizacin
fenotpica de la misma puede proveer informacin que evite o minimice el ingreso de
tricotecenos en la cadena agroalimentaria del maz.
Los objetivos de este trabajo fueron: i) evaluar in vitro el impacto de factores
ambientales y fungicidas comerciales sobre el crecimiento micelial y la esporulacin de
cepas de especies filogenticas del complejo F. graminearum aisladas en maizales del

noroeste argentino. ii) determinar la capacidad de las cepas de las especies

filogenticas de generar enfermedad sobre genotipos de maz.
Materiales y mtodos:
Cepas fngicas: 5B Fm (F. meridionale) y 10B Fb (F. boothii) aisladas de maz
(provincia de Tucumn) y 25M Fgss (F. graminearum sensu stricto) aislada de trigo
(provincia de Buenos Aires).
Impacto de factores ambientales y fungicidas comerciales sobre el crecimiento
micelial: El medio maz molido al 2% con 2% de agar se fraccion en alcuotas,
ajustando la actividad de agua (aw) a 0,99; 0,97 y 0,95 con glicerol. Las alcuotas se
autoclavaron (20 min, 120C). Las diluciones de los fungicidas (azoxistrobin o
propiconazol) se agregaron al medio tibio (50C) por separado, obteniendo las
concentraciones de 0,5; 15 y 25 g/ml. Los medios de cultivo se homogeinizaron por
agitacin antes de verter 10 ml en cada caja de Petri de 9 cm de dimetro. Los
tratamientos constaron de 6 cajas de Petri. En la superficie del medio de cada una se
inocul en el centro un disco de 5 mm de dimetro obtenido del margen de una
colonia fngica de 4 das de edad, crecida en medio malta-peptona-agar-sacarosa
(MPAS). Luego, 3 cajas inoculadas de cada tratamiento se incub a 10C y 3 se
sometieron a 25C, durante 20 das. Los controles consistieron en medio maz a las
correspondientes aw y temperaturas mencionadas, sin el agregado de fungicidas.
Diariamente se determin en cada caja dos dimetros de la colonia fngica dispuestos
perpendicularmente entre s. Las mediciones se realizaron hasta que la colonia alcanz
el borde de la caja. La velocidad de crecimiento micelial (mm/da) se calcul por
regresin lineal del radio de las colonias fngicas respecto al tiempo de ensayo.
Ensayos de esporulacin: Se utiliz el medio de cultivo sinttico pobre en
nutrientes agar (SNA). El mismo se esteriliz a 120C durante 20 min. Se colocaron
10 ml en cada caja de Petri de 9 cm de dimetro. Cada caja se inocul con discos de 5
mm de dimetro de micelio de una colonia fngica de 4 das de edad, crecida en
MPAS. Las 6 cajas inoculadas de cada especie filogentica se incubaron a 25C, 3 en
oscuridad permanente y 3 en ciclos de 12 hs luz/12 hs oscuridad durante 14 das. La
esporulacin se determin mediante lavado de la superficie del medio de cultivo de la
caja de Petri con 2 ml de agua destilada estril, contabilizndose los macroconidios en
cmara de Neubauer. La densidad de las suspensiones se expres en
macroconidios/ml.
Ensayo de campo: Se realiz en el Campo Experimental Regional (C.E.R.) de INTA
Leales (Tucumn, Argentina) a 27 12 lat. S, 65 18 long. O y 332 m snm. Los
genotipos de maz ensayados fueron una poblacin susceptible con parentales lnea
52-2 x material templado y una poblacin resistente con parentales lnea 110-8 x
material templado. Se realiz riego suplementario, mantenindose el suelo a
capacidad de campo durante todo el ciclo del cultivo. Las cepas de las especies
filogenticas se cultivaron en 50 ml de medio lquido de Reid durante 7 das bajo luz
oscura (365 nm) a 25C y con agitacin peridica. Los esporas se recuperaron por
filtracin y se prepararon suspensiones de 1-3 10 esporas/ml. La inoculacin de cada
planta se realiz en su espiga primaria, posteriomente a la emergencia de los
estigmas florales. Se inyectaron 2 ml suspensin en el canal de los estigmas de cada
espiga. En las espigas control se inyect 2 ml de agua destilada estril. Luego, cada
espiga inoculada se cubri con una bolsa de papel manteca para generar condiciones
de alta humedad relativa durante 48 hs. En cada parcela se inocularon 2 plantas por
cada especie filogentica. De igual manera se procedi con el control de inoculacin.
La ubicacin de las plantas inoculadas se seleccion al azar. Las mazorcas se
cosecharon en madurez fisiolgica de los granos (contenido de humedad aprox. del
30%), evalundose la severidad de sntomas de acuerdo a la escala propuesta por

Reid y col. (1996), donde: 1 = sin sntomas; 2 = 1- 3%; 3 = 4-10%; 4 = 11-25%; 5

= 26-50%; 6 = 51-75%; y, 7 = 76-100% del rea de la espiga visiblemente afectada
por podredumbre de la mazorca.
Resultados y discusin
A 10C, el crecimiento micelial fue fuertemente inhibido e igualmente afectado en
todas las cepas fngicas. A 25C y aw=0,99 la cepa 25M Fgss coloniz el medio maz
molido con mayor rapidez que las especies restantes. En el tratamiento con
azoxistrobina, la velocidad de crecimiento micelial de 25M Fgss y 5B Fm fue ms
afectada que la de 10B Fb (Fig. 1). Lo inverso se observ en stas especies al ser
expuestas a propiconazol. Sin embargo fue ms efectivo el propiconazol, presentando
mayor superficie de inhibicin en un rango de velocidad de crecimiento de 0 a 2
mm/da en las concentraciones 15 y 25 g/ml.
La produccin de macroconidios de las 3 cepas a 25C fue mayor en la condicin
ciclos de 12 hs luz/ 12 hs oscuridad siendo mayor para 25M Fgss (5,9.10
macroconidios/ml) que para 10B Fb (4,3.10 macroconidios/ml) y 5B Fm (3,7.10
macroconidios/ml). Adems sta ltima no esporul en oscuridad permanente (Fig. 2).
A

Fig. 3. Mapa de contorno que muestra el efecto de azoxistrobina (Azox) (A, C, y E) y

propiconazol (Propic) (B, D y F) adicionado al medio maz molido agar 2 % a diferentes
tratamientos (0; 0,5; 15 y 25 g/ml) en la velocidad de crecimiento

micelial

(mm/da) de 3 cepas del complejo Fg: 25M Fgss ( A y B), 10B Fb (C y D) y 5B Fm (E y

F), a diferentes aw a 25C. A 10 C no se observ crecimiento significativo.

En las condiciones que se presentaron durante el ensayo de campo (temperaturas

entre 12 y 25C, precipitacin acumulada de 330-380 mm y HR mayor al 85%), todas
las cepas inoculadas en las espigas demostraron ser patognicas y mostraron igual
severidad de enfermedad correspondiente al 7 de la escala (75-100% del rea de
mazorca afectada).

Fig. 2. Produccin de macroconidios

de las 3 cepas del complejo Fg (25M
Fgss, 10B Fb y 5B Fm) en ciclos de 12
hs luz oscura/12 hs oscuridad y
oscuridad permamente a 25 C

Fig. 3. (A) Espiga de maz control, (B) infectada con

10B Fb, (C), con 5B Fm y (C) con 25M Fgss
mostrando los sntomas severos de podredumbre
de la mazorca por gibberella.

Conclusiones
Los ensayos in vitro indican que Fusarium graminearum sensu stricto a 25C y en
condiciones de elevada disponibilidad de agua present una velocidad de colonizacin
micelial mayor que la de las restantes especies filogenticas. El crecimiento micelial de
Fusarium boothii present una mayor resistencia a los fungicidas azoxistrobin y
propiconazol, ausente en las restantes especies ensayadas. El mismo fue dependiente
de la disponibilidad de agua. Las 3 especies filogenticas presentaron mayor capacidad
para producir esporas en ciclos de 12 hs luz/ 12 hs oscuridad, adems Fusarium
meridionale no esporul en oscuridad permanente, por lo tanto stos ciclos
favoreceran la produccin de macroconidios. Todas las cepas ensayadas fueron
capaces de producir enfermedad y demostraron ser igualmente agresivas sobre maz.
Sin embargo, los ensayos in vitro sugieren que las especies filogenticas podran
presentar comportamientos discrepantes entre s bajo determinadas condiciones
ambientales.
Citas bibliogrficas
Leslie J.F.; Summerell B.A. (2006). The Fusarium Laboratory Manual. Blackwell Publishing Ltd, Iowa.
Ramrez M.;Chulze S.;Magan N. (2004).Impact of environmental factors and fungicides on growth and
deoxinivalenol production by Fusarium graminearum isolates from Argentinian wheat. Crop Protection
23:117-125.
Reid L. M.; Hamilton R. I. (1996). Screening Maize for Resistance to Gibberella Ear Rot, Research Branch.
Agriculture and Agri-Food Canada.
Sampietro D.,Daz C., Gonzalez V., Vattuone M., Ploper L., Cataln C., Ward T. (2011) Species diversity and
toxigenic potential of Fusarium graminearum complex isolates. Int. J. Food Microbiol. 145: 359 - 364.
Woloshuk, C.; Wise, K. (2010). Diseases of corn Gebberella ear Rot. Purdue extension BP-33-W